張柯媛 陳基強(qiáng) 黃艷 盧庭婷

(廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院,廣西 南寧 530021)

乳腺癌是常見(jiàn)的女性惡性腫瘤,一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),2009～2018年女性乳腺癌患病率逐年升高,患病年齡以45～49歲為高發(fā)〔1〕。目前乳腺癌常見(jiàn)治療方法包括手術(shù)治療、內(nèi)分泌治療及化療等,雖然具有一定療效,但仍有部分患者治療后發(fā)生腫瘤進(jìn)展,預(yù)后不佳。研究證實(shí),乳腺癌的發(fā)病與遺傳因素密切相關(guān)〔2〕。細(xì)胞色素氧化代謝酶系19A1亞族(CYP19A1)蛋白質(zhì)可催化雌激素生物合成,且有研究表明,女性乳腺癌患者外周血CYP19A1基因表達(dá)在疾病復(fù)發(fā)中起到重要作用〔3〕。初步推測(cè)CYP19A1基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生、進(jìn)展有關(guān)。本研究就CYP19A1基因上rs4646基因多態(tài)性與乳腺癌患者遺傳易感性、臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年3月至2022年3月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治的112例老年乳腺癌患者作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn):①乳腺癌符合《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2015版)》〔4〕內(nèi)相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);②接受手術(shù)治療,并經(jīng)病理性檢查明確診斷;③乳腺癌腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(TNM)分期〔5〕Ⅰ～Ⅲ期。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他乳腺疾病;②合并其他惡性腫瘤;③接受過(guò)乳腺癌相關(guān)放化療治療;④合并內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病或代謝性疾病;⑤合并高血壓、糖尿病等慢性疾病;⑥合并嚴(yán)重心腦、肝腎功能異常;⑦近期內(nèi)接受過(guò)激素類藥物治療。另選取112例老年乳腺良性病變患者作為對(duì)照組,其中包括乳房纖維腺瘤57例,乳腺內(nèi)乳頭狀瘤21例,乳腺脂肪瘤34例,均符合相關(guān)診斷〔6〕。全部患者簽署知情同意書(shū)。

1.2基線資料、臨床病理特征收集 于兩組入院當(dāng)日收集其年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、絕經(jīng)情況、大量飲酒(每日飲酒量超過(guò)20 g或2 w內(nèi)每日飲酒超過(guò)80 g)。經(jīng)手術(shù)及術(shù)后病理檢查評(píng)估乳腺癌患者臨床病理特征,包括病理類型(浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、非浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌)、TNM分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(陽(yáng)性、陰性);行免疫組化檢驗(yàn),包括雌激素受體(ER)、孕激素(PR)、人表皮生長(zhǎng)因子受體(HER)-2、增殖細(xì)胞相關(guān)抗原(Ki67),各項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性判定依據(jù)參照2013年St Galllen共識(shí)〔7〕。

1.3CYP19A1基因多態(tài)性檢測(cè) 于患者入院當(dāng)日或次日清晨,使用乙二胺四乙酸二鉀抗凝管采集空腹靜脈血5 ml,使用自動(dòng)化核酸提取劑與儀器配套提取基因組DNA,采用Taqman探針實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等位基因技術(shù)測(cè)定rs4646位點(diǎn)基因型,并用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)直接測(cè)序法測(cè)定CYP19A1 rs4646多態(tài)性,引物序列:正向:5′-CATGAAGTGTAGGGTCTATGTAAT-3′,反向:5′-GATCTTTACACACCTCTACACAGT-3′,擴(kuò)增條件:94 ℃ 10 min初變性,95 ℃ 30 s、54.5 ℃ 30 s、72 ℃30 s、72 ℃延伸1 min,共36個(gè)循環(huán),隨后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,并進(jìn)行基因測(cè)序。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS25.0軟件進(jìn)行t、χ2、秩和檢驗(yàn),Logistic回歸分析、χ2Phi系數(shù)檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般資料、CYP19A1基因多態(tài)性比較 觀察組BMI、大量飲酒占比、CYP19A1 r4646位點(diǎn)基因C/C突變占比明顯高于對(duì)照組(P<0.01,P<0.001);組間年齡、絕經(jīng)情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料、CYP19A1基因多態(tài)性比較

2.2CYP19A1基因多態(tài)性與老年乳腺癌患者遺傳易感性的關(guān)系分析 將疾病類型作為因變量(1=乳腺癌,0=乳腺良性病變),將BMI、大量飲酒(有=1,無(wú)=0)、CYP19A1基因多態(tài)性(A/A=1,A/C=2,C/C=3)作為自變量,經(jīng)Logistic回歸分析結(jié)果顯示,BMI偏高、大量飲酒、CYP19A1 r4646位點(diǎn)基因多態(tài)性與老年乳腺癌患者的遺傳易感性有關(guān)(OR>1,P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 CYP19A1基因多態(tài)性與老年乳腺癌患者遺傳易感性的關(guān)系

2.3不同病理特征乳腺癌患者CYP19A1基因多態(tài)性比較 不同TNM分期、ER、PR、HER-2、Ki67表達(dá)的乳腺癌患者CYP19A1基因多態(tài)性比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同病理特征患者CYP19A1基因多態(tài)性比較〔n(%)〕

2.4乳腺癌患者CYP19A1基因多態(tài)性與病理特征的相關(guān)性 CYP19A1基因多態(tài)性與乳腺癌患者TNM分期、ER陽(yáng)性、PR陽(yáng)性、HER-2陽(yáng)性、Ki67陽(yáng)性具有相關(guān)性(Phi=0.293、0.295、0.423、0.294、0.381,均P<0.05)。

3 討 論

乳腺癌發(fā)生于乳腺上皮細(xì)胞,發(fā)病與環(huán)境、生理、心理及基因等因素有關(guān),早期乳腺癌的臨床癥狀并不明顯,大部分患者確診時(shí)已進(jìn)展至中晚期,治療效果及預(yù)后并不理想。弋振營(yíng)等〔8〕研究中,200例乳腺癌患者隨訪3年,總生存率為90.50%,無(wú)病生存率為71.00%,乳腺癌患者的預(yù)后與不同臨床分期、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、絕經(jīng)情況及術(shù)后放化療等密切相關(guān)。

大量飲酒患者由于酒精在體內(nèi)代謝為乙醛,具有一定的致癌性,且酒精可引起機(jī)體葉酸缺乏,并導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化,促進(jìn)氧自由基產(chǎn)生,進(jìn)而增加乳腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)〔9〕。BMI偏高的患者體內(nèi)脂質(zhì)會(huì)參與細(xì)胞膜的構(gòu)成及細(xì)胞膜信號(hào)傳導(dǎo),引起腫瘤相關(guān)的代謝反應(yīng),導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加〔10〕。因此,應(yīng)加強(qiáng)戒酒、控制體質(zhì)量管理等措施,降低乳腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)。但除了常見(jiàn)的增加乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)的因素外,仍需要積極尋找乳腺癌的發(fā)病機(jī)制有關(guān)的遺傳因素,以進(jìn)一步明確乳腺癌的發(fā)生、進(jìn)展,有利于早期診斷、治療。

乳腺癌的發(fā)生機(jī)制與ER、PR密切相關(guān),由于受到ER、PR的DNA二倍體調(diào)控,可導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生,并促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移,影響乳腺癌患者預(yù)后〔11〕。位于染色體15q21.1上的CYP19A1基因是CYP450超家族成員之一,為激素代謝相關(guān)酶,其編碼的CYP450芳香化酶對(duì)雌激素合成具有重要作用,可將雌激素A環(huán)芳香化,將睪酮、雄烯二酮分別轉(zhuǎn)變?yōu)榇贫?、雌?且CYP450數(shù)量活性直接影響雌激素水平〔12〕。因此,推測(cè)CYP19A1基因多態(tài)性可能與乳腺癌患者遺傳易感性有關(guān)。本研究經(jīng)Logistic回歸分析結(jié)果分析原因在于,CYP19A1基因可對(duì)CYP450芳香化酶進(jìn)行編碼,基因的突變會(huì)直接影響該酶的活性與蛋白結(jié)構(gòu),導(dǎo)致CYP450芳香化酶失活,進(jìn)而影響雌二醇分泌,進(jìn)一步增加乳腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)〔13〕。一項(xiàng)文獻(xiàn)指出,CYP19A1基因表達(dá)或CYP450芳香化酶活性增強(qiáng)是增加乳腺癌腫瘤內(nèi)雌激素產(chǎn)生的重要途徑,可促進(jìn)乳腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)及腫瘤的侵襲性〔14〕。

HER-2可調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、凋亡,對(duì)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化具有活性;Ki67是與細(xì)胞周期相關(guān)的增生細(xì)胞核抗原,是腫瘤細(xì)胞增殖的標(biāo)志之一〔15〕。本研究結(jié)果說(shuō)明,CYP19A1基因多態(tài)性與乳腺癌患者臨床病理特征有關(guān)。CYP19A1基因的C等位基因可增強(qiáng)芳香化酶活性,通過(guò)影響患者體內(nèi)雌激素水平及激素的動(dòng)態(tài)平衡,引起正常乳腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞,并且可促進(jìn)ER、PR陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲,導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展〔16,17〕。此外,有研究表明,CYP19A1基因rs4646位點(diǎn)的單核苷酸突變會(huì)影響基于芳香酶抑制劑治療的乳腺癌患者治療效果及不良反應(yīng)的易感性〔18〕。進(jìn)一步說(shuō)明CYP19A1基因多態(tài)性不僅與乳腺癌患者遺傳易感性、臨床病理特征有關(guān),也可作為預(yù)測(cè)乳腺癌患者治療效果、預(yù)后的重要標(biāo)志物。因此,針對(duì)乳腺癌患病高風(fēng)險(xiǎn)人群,可早期檢測(cè)其CYP19A1基因,通過(guò)CYP19A1基因多態(tài)性,評(píng)估其乳腺癌的遺傳易感性,或?qū)YP19A1基因作為早期診斷乳腺癌、評(píng)估疾病進(jìn)展及預(yù)后的重要標(biāo)志物。

綜上,CYP19A1基因多態(tài)性與老年乳腺癌患者遺傳易感性及腫瘤分期、HER-2表達(dá)、Ki67表達(dá)有關(guān),臨床可根據(jù)CYP19A1基因多態(tài)性的分布作為女性乳腺癌的易感基因檢測(cè)位點(diǎn),為早期診斷乳腺癌提供依據(jù)。本研究也存在不足,首先納入患者排除了晚期乳腺癌,且研究對(duì)象均來(lái)自同一醫(yī)院,結(jié)果可能存在偏倚;其次僅針對(duì)CYP19A1基因rs4646位點(diǎn)進(jìn)行研究,未觀察其他基因位點(diǎn)與乳腺癌的關(guān)系;最后未對(duì)CYP19A1基因多態(tài)性與乳腺癌患者治療效果及預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行闡述,未來(lái)仍需要深入研究。