卜文，劉文謙，李彥，劉超，叢源，沈連忠（通信作者）

山東欣博藥物研究有限公司 （山東 臨邑 251500）

α-氰基丙烯酸正丁酯是一種具有抑菌作用的醫(yī)用粘合劑，可在血液、組織液中陰離子的作用下快速聚合固化成膜，產(chǎn)生一層具有高抗拉強度的彈性薄膠膜[1-2]。該膠膜約5～10 d 后可隨角化皮膚逐步脫落[3]?？蹬商亟M織粘合膠的主要成分為α-氰基丙烯酸正丁酯，并添加了少量著色劑和穩(wěn)定劑，適用于接近皮膚表面的封閉，不可用于皮膚亞表層的閉合[4-5]。作為一種新型醫(yī)用膠，康派特組織粘合膠在皮膚上使用的安全性和有效性需要進一步觀察。目前臨床上評價粘合劑安全性、有效性的動物實驗常規(guī)采用大鼠、家兔和犬作為實驗動物[6-17]，關于小型豬的研究較少。小型豬被覆的毛發(fā)緊附于皮下組織，其體表毛發(fā)的疏密、皮膚脂肪層的形態(tài)學和增生動力學、皮膚的血液供給、切口的修復機制等均與人類相似[18]。因此，相對于大鼠、家兔和犬，小型豬的皮膚更適合用于藥物和醫(yī)療器械的有效性、安全性評價[19]?；诖?，本研究探討康派特組織粘合膠粘合巴馬小型豬皮膚切口的有效性，并與Histoacryl 醫(yī)用組織膠水[15-17]進行比較，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物與飼養(yǎng)環(huán)境

實驗動物：購于北京實創(chuàng)世紀小型豬養(yǎng)殖基地[動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2013-0008]的巴馬小型豬（普通級）8 只，雌雄各半，8～9 月齡，體重15.23～21.06 kg。實驗動物質量合格證編號：No.111014000000097。

飼養(yǎng)環(huán)境：山東欣博藥物研究有限公司，山東欣博藥物安全評價研究中心，普通級大動物室（環(huán)境控制：溫度16～26 ℃，濕度40～70%，換氣次數(shù)≥8 次/h，照明時間12 h/12 h 明暗交替）。實驗動物使用許可證號：SYXK（魯）2016-0011。設施使用許可證號：H20150050。飼料購于北京實創(chuàng)世紀小型豬養(yǎng)殖基地，飼料批號：15111803。實驗動物術前禁飼12 h。

本研究已通過本單位實驗動物倫理委員會審查。

1.1.2 供試品

康派特組織粘合膠：北京康派特醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)，國械注準20173023182，批號160415；型號：涂抹LT 型；規(guī)格：0.4 ml/支；性狀：藍色透明液體。

1.1.3 上市對照品

Histoacryl 醫(yī)用組織膠水（Histoacryl Tissue Adhesive）：貝朗醫(yī)療西班牙股份公司生產(chǎn)，國械注進20173026756，批號215272N2；商品名：藍靈；型號：1050044；規(guī)格：0.5 ml/支；性狀：藍色透明液體。

1.1.4 麻醉藥品

戊巴比妥鈉：德國莫克公司生產(chǎn)，商品編號NO.6902100，批號150408，含量99.4%，規(guī)格25 g/瓶。

1.1.5 實驗儀器

TCS-150 電子臺秤（常州牛頓力稱重系統(tǒng)有限公司），CWT7-3 電子天平（常州牛頓力稱重系統(tǒng)有限公司），Tissue-TekTECTM5 組織包埋機（日本櫻花檢驗儀器株式會社），Tissue-TekVIP6 全封閉組織脫水機（日本櫻花檢驗儀器株式會社），JLX-A 型蠟塊修復儀（天津市久圣醫(yī)療電子儀器有限公司），TK-218 型恒溫攤片烤片機（湖北泰維科技實業(yè)有限公司），BX53 雙目顯微鏡（日本奧林巴斯株式會社）。

1.2 方法

1.2.1 分組

選用8 只巴馬小型豬，用TOXSTAT 2006 軟件按性別和體重隨機分為A、B 兩組，每組4 只，雌雄各半。A 組術后1 周剖檢，B 組術后4 周剖檢。

1.2.2 手術方法

采用同體左右側自身對比法。為實驗動物肌內注射3% 戊巴比妥鈉30 mg/kg 進行麻醉，腹部朝下置于手術臺上。剃除背部手術部位毛發(fā)，范圍約15 cm×15 cm。先用75% 乙醇擦拭手術部位，再用聚維酮碘消毒手術部位，然后鋪洞巾。用手術刀在背中線兩側旁開3 cm 處各劃開3 個長3 cm、深1 cm 的切口，切口間距約4 cm，方向與背部中線垂直。左側1、2、3 切口用康派特組織粘合膠粘合，右側1、2、3 切口用Histoacryl 醫(yī)用組織膠水粘合。

1.3 觀察指標

（1）臨床癥狀：于籠旁觀察實驗動物，記錄其臨床表現(xiàn)和特點，包括外觀、體征、行為活動、飲食、對刺激的反應、腺體分泌、呼吸、分泌物、糞便性質、死亡情況，以及切口是否有開裂、滲出和感染等不良反應，2 次/d。（2）體重：用TCS-150 電子臺秤的“預去皮”功能去除稱重籠具的重量后，稱量實驗動物的體重，1 次/周。（3）攝食量：實驗期間，每只實驗動物每日上、下午各喂食（350±5）g 飼料，次日上午記錄飼料剩余量（按照剩余0%、25%、50%、75%、100% 4 擋記錄），1 次/d。（4）切口局部癥狀：每日肉眼觀察切口局部膠體是否可見（膠體明顯可見記“++”，膠體不清楚記“+”，未見明顯膠體記“-”）及切口局部刺激反應（切口的刺激評分方法見表1，每組動物每側12 個切口的平均評分對應的反應類型見表2），1 次/d。（5）剖檢：每只實驗動物肌內注射3%戊巴比妥鈉30 mg/kg 麻醉后，采用頸動脈放血方式安樂死，剖檢動物，大體觀察動物各臟器組織和切口部位有無異常病變，然后取切口局部皮膚和異常臟器組織，用4%甲醛固定，行常規(guī)組織切片鏡檢，并對供試品側和上市對照品側進行刺激性評價，評分標準見表3～4。同時，對切口的纖維組織增生情況進行評分，評分越高表明恢復越好，其評分不計入刺激指數(shù)。

表1 皮膚反應積分系統(tǒng)

表2 刺激強度評價標準

表3 組織反應顯微鏡計分系統(tǒng)評分

表4 刺激指數(shù)

1.4 統(tǒng)計學處理

采用EXCEL 軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，采用TOXSTAT 2006 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以±s 表示，采用t檢驗。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 臨床癥狀

實驗期間，動物切口部位均未見開裂、滲出和感染癥狀，臨床癥狀觀察均未見明顯異常。

2.2 體重

B 組術后21 d 和28 d 的體重均高于術前，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明動物術后體重略有增長，未見明顯并發(fā)癥，見表5。

表5 兩組體重比較（kg，±s）

表5 兩組體重比較（kg，±s）

注：與術前比較，aP<0.05

組別 只數(shù)術前術后7 d術后14 d術后21 d術后28 d A 組422.19±1.47 22.34±1.45 B 組422.06±0.39 22.29±0.37 22.70±0.42 23.31±0.42a 25.05±0.86a

2.3 攝食量

實驗期間，動物均未見剩余飼料。

2.4 切口局部癥狀

2.4.1 膠體狀態(tài)

術后1～4 d 兩側膠體均明顯可見，術后5 d 開始兩側膠體均不清楚；術后21 d 后兩側均未見明顯膠體，見表6。

表6 兩組切口膠體狀態(tài)比較（個）

2.4.2 切口局部刺激反應

實驗期間兩組手術當天兩側切口局部可見輕度紅斑，刺激強度為輕度，術后1 d 開始兩側切口局部均未見明顯刺激性反應，刺激強度為極輕微，見表7。

表7 切口局部刺激反應統(tǒng)計數(shù)據(jù)

2.5 病理學檢查

剖檢：實驗動物各組織臟器及手術部位均為未見明顯大體病理學改變。

組織病理學檢查結果提示，術后1 周兩側切口部位均可見極輕度或輕度的炎癥細胞浸潤、極輕度出血、輕度至中度的纖維組織增生等組織病理學改變，術后4 周可見不同程度組織修復（致密結締組織修復或完全修復），且未見其他明顯組織病理學改變。見圖1～6。

圖1 手術部位炎性細胞浸潤，纖維組織增生（×100） （術后1周，動物編號/組別：M001/ A 組 Histoacryl 醫(yī)用組織膠水）

圖2 手術部位炎性細胞浸潤、纖維組織增生（×100） （術后1周，動物編號/組別：F002/ A 組 康派特組織粘合膠）

圖3 手術部位組織修復（致密結締組織修復） （×100） （術后4周，動物編號/組別：F004/ B 組 Histoacryl 醫(yī)用組織膠水）

圖4 手術部位組織修復（致密結締組織修復） （×100） （術后4周，動物編號/組別：M003/ B 組 康派特組織粘合膠）

圖5 手術部位組織修復（完全修復）（×100）（術后4 周，動物編號/組別：F003/ B 組 Histoacryl 醫(yī)用組織膠水）

圖6 手術部位組織修復（完全修復）（×100）（術后4 周，動物編號/組別：F003/ B 組 康派特組織粘合膠）

根據(jù)組織病理學組織反應評分統(tǒng)計評價結果顯示，術后1 周實驗動物均可見極輕度的皮膚刺激，但康派特組織粘合膠與Histoacryl 醫(yī)用組織膠水涂膠部位兩者差值為0（雄性）或0.3（雌性），刺激反應程度均為無，表明兩者刺激強度無明顯差異，見表8；術后4 周所有動物手術部位均未見有明顯皮膚刺激反應。

表8 刺激評分結果（1 周雄性動物）

表9 刺激評分結果（1 周雌性動物）

表10 刺激評分結果（4 周雄性動物）

表11 刺激評分結果（4 周雌性動物）

3 討論

以往臨床常用的皮膚切口處理方式是縫合，但縫合前需要注射麻醉藥物，縫合后需及時換藥、拆線，操作煩瑣，還有可能增加疼痛和刺激，且切口愈合后會遺留明顯的瘢痕，影響美觀。近年來，隨著醫(yī)療需求多樣性逐漸增加，人們對切口處理方式提出了更高的要求，特別是女性和兒童患者不僅要求切口愈合快速有效、減少疼痛，還要求避免遺留瘢痕[20-22]。近年來出現(xiàn)的一次性使用無菌醫(yī)用敷料貼可在切口皮下縫合后外敷使用，有利于減少換藥步驟，且無須拆線，同時具有淡化瘢痕的作用。但該敷料貼使用前仍需進行皮下縫合，使用后患者活動受限，影響美觀，且需要防止敷料貼開裂脫落?？蹬商亟M織粘合膠克服了傳統(tǒng)縫合法和一次性使用無菌醫(yī)用敷料貼的不足，傷痕較淺、切口邊緣對合良好的切口可在清創(chuàng)后直接使用（無須麻醉），且無須定期換藥，而手術切口可在皮內縫合減輕張力后使用。同時，康派特組織粘合膠的主要化學成分α- 氰基丙烯酸正丁酯具有極強的粘合力，與組織液接觸后迅速發(fā)生聚合反應，5～15 s 即由液體變?yōu)楣腆w，可迅速粘合切口兩側皮膚，并在切口表面形成一層防水保護膜，有效阻擋細菌，防止感染，且使用后無須覆蓋其他敷料。此外，康派特組織粘合膠膠體呈藍色，便于通過視覺控制用量，能有效防止組織膠水進入切口。本研究采用巴馬小型豬皮膚切口模型評價康派特組織粘合膠產(chǎn)品的安全性和有效性，觀察其愈合過程中切口的恢復情況、粘合膠膠體變化、局部組織病理學變化等，并與同類產(chǎn)品Histoacryl 醫(yī)用組織膠水進行比較，評價指標客觀準確，數(shù)據(jù)真實可靠，可以滿足對康派特組織粘合膠產(chǎn)品的非臨床評價要求。

綜上，本試驗條件下，康派特組織粘合膠粘合巴馬小型豬皮膚切口安全有效，且與Histoacryl 醫(yī)用組織膠水比較未見明顯差異。