任武婷

摘? ?要? ?以月季未萌發(fā)的腋芽為外植體，利用組織培養(yǎng)技術(shù)誘導(dǎo)出無菌芽，然后進行增殖，復(fù)壯，生根，煉苗，移栽，能夠在短時間內(nèi)生產(chǎn)出大量品質(zhì)穩(wěn)定、無感染且保持母株優(yōu)良特性的月季種苗，滿足市場需求，優(yōu)化了月季組織培養(yǎng)快繁技術(shù)。

關(guān)鍵詞? ?月季；腋芽；組織培養(yǎng)

月季是薔薇科薔薇屬多年生木本植物，觀賞期長，花色豐富，花朵碩大，帶有濃郁的香味。月季適應(yīng)性強，對土壤條件要求不嚴格，用途廣泛，在園林綠化、節(jié)日用花、城鄉(xiāng)道路旁、家庭小院等都有種植。月季常用的繁殖方法主要有扦插繁殖和壓條繁殖，月季枝條數(shù)量少，而且受季節(jié)影響，冬季修剪下來的枝條不能及時使用，要先沙藏保存，等到春季才可扦插，繁育周期長，生產(chǎn)成本增高。

利用組織培養(yǎng)方法繁育月季，全年都能生產(chǎn)，不受季節(jié)影響，能保持母株的優(yōu)良性狀，又能在短期內(nèi)生產(chǎn)出大批量無毒苗。月季的組織培養(yǎng)外植體主要有莖尖、芽尖、莖節(jié)、普通腋芽、腋芽分生組織等。現(xiàn)將腋芽分生組織快繁技術(shù)總結(jié)如下。

1? ?準(zhǔn)備階段

準(zhǔn)備實驗所用的工具、器具，制備出適宜的培養(yǎng)基并經(jīng)高壓滅菌備用，配置出實驗用的化學(xué)消毒劑（當(dāng)天配制，當(dāng)天用完），準(zhǔn)備一臺體視顯微鏡。

2? ?外植體的選擇及清洗

1）選擇。一般在晴天中午11：00或下午? 3：00前采?。申幱晏觳扇。?。選取生長旺盛、沒有病蟲害、品質(zhì)優(yōu)良、變異小的豐花月季，當(dāng)年新抽嫩枝頂尖部位（長約4 cm）。剪取外植體時工具和手必須消毒，以防感染。最好在沒有開花的月季植株上選取。

2）清洗。采回的外植體進行修整，剪掉葉片、葉柄、莖刺等不需要的部分，在自來水下沖洗10～15分鐘，再用洗衣粉或洗潔精仔細刷洗，用流水沖洗干凈。

3? ?消毒

外植體清洗干凈后，放在消毒過的超凈工作臺上，用無菌的脫脂棉擦拭1遍外植體表面。

75％酒精消毒1分鐘，用無菌水沖洗1次；有效氯2%的NaClO溶液消毒20分鐘，用無菌水沖洗3次。最后加入0.1 mg/L Vc浸泡20分鐘。

4? ?接種及培養(yǎng)條件

刀用酒精燈灼燒滅菌，解剖刀、鑷子的先端在95%的酒精中蘸一下，再用酒精燈灼燒滅菌，置于刀架上冷卻，待用。用鑷子夾住蘸有酒精的脫脂棉點著，對接種盤里外進行灼燒滅菌，滅菌好的接種盤放上濾紙。

把消毒好的外植體放在濾紙上，吸干表面水分，然后放在體視顯微鏡下，在葉腋處拔出分生組織（未萌發(fā)的腋芽）。接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+30 g/L糖，瓊脂6.5 g/L，pH值5.7。每個試管接種1個分生組織，蓋上試管，試管上標(biāo)明編號、日期、品種，培養(yǎng)基名稱，接種人員等，放入培養(yǎng)室進行培養(yǎng)。

培養(yǎng)室溫度25 ℃，光照時間16小時/天，光照強度800～1 000 lx，濕度50%。

接種1周后，在體視顯微鏡下觀察，有無污染（真菌、細菌）、死亡或干枯的分生組織，有則移出。每周在體視顯微鏡下觀察1次，4～6周后，只保留生長旺盛且健康的、仍保持綠色的分生組織。大約兩個月后，芽陸續(xù)長出，觀察芽的生長情況，是否有異常癥狀出現(xiàn)。

5? ?增殖培養(yǎng)

將健康的芽切割下來，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基MS+0.3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA+30 g/L糖，瓊脂4.7 g/L，pH值5.8。

增殖階段改為玻璃瓶，每瓶放3個芽，放置培養(yǎng)室培養(yǎng)，溫度25 ℃，光照時間12小時/天，光照強度1 500 lx。

接種3天后檢查芽感染情況，并及時清理。大約培養(yǎng)20天左右，萌發(fā)出2～3片葉子。兩個月后，月季芽長到一定高度，形成單個芽或多個芽簇狀。剪掉葉片，剪成 1.5 cm長帶有芽（1～2個）的莖段，進行繼代培養(yǎng)。每個月繼代1次，以后每月大約可以5倍的速度繁育，1年內(nèi)就可以形成大量的植株。

檢查增殖過程中穩(wěn)定性，對增殖進行評估， 4～6周進行1次為準(zhǔn)。檢查是否芽過度分化、玻璃化、植株矮化、老齡化、植株發(fā)黃、褐化、壞死、喪失芽分化能力等問題。如果出現(xiàn)上述問題，則要進行培養(yǎng)基調(diào)整。

如果芽過度分化，應(yīng)降低6-BA濃度，如減半添加；減少硝酸銨的添加量，可按1/4 的量使用；減少蔗糖添加量，可由30 g降到20 g；減少每個植株帶芽數(shù)量，從帶2～3個芽減少為只帶1個芽；增加瓊脂添加量。

如果老化，喪失芽分化能力，可增加6-BA濃度，增加蔗糖添加量，減少瓊脂用量，轉(zhuǎn)接時不要分株，整個植株一塊轉(zhuǎn)。

出現(xiàn)以上情況，嘗試重建一個穩(wěn)定的增殖體系。

6? ?復(fù)壯培養(yǎng)

只有當(dāng)增殖體系穩(wěn)定，達到一定的數(shù)量時，才可進行壯苗培養(yǎng)。選取無病菌、 帶3～4片葉、長度約2 cm的芽，轉(zhuǎn)接到壯苗培養(yǎng)基MS+30 g/L糖， 瓊脂4.7 g/L，pH值5.8。壯苗和生根階段每瓶接種16個芽苗，剩余莖段，繼續(xù)接到繼代培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)。

轉(zhuǎn)接后放在光照12小時/天、光照強度? ? ?2 000 lx、溫度26 ℃、濕度50%的培養(yǎng)室進行培養(yǎng)。

7? ?生根培養(yǎng)

月季芽苗生長到一定高度時，選擇健壯無傷口、帶3～4片葉、長度約2 cm的芽（轉(zhuǎn)接時不要傷葉片或莖部）。用消毒過的剪刀剪下來，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基1/4MS+0.1 mg/L NAA+30 g/L糖，瓊脂4.7 g/L，pH值5.8。大約20天左右長出根來，根長約0.5 cm，3～4條，這時把瓶苗移到溫室進行馴化煉苗。

8? ?馴化及移栽

從培養(yǎng)室移到溫室的瓶苗，在移栽前必須進行馴化，需15～20天。先用遮陰網(wǎng)把瓶苗全部蓋住，白天溫度23～27 ℃，晚上20～23 ℃，濕度70%左右，使瓶苗逐漸適應(yīng)溫室環(huán)境。經(jīng)過一段時間的鍛煉，幼苗葉片由嫩綠色變深綠色，萌發(fā)新葉，莖變粗壯，幼苗整體長高，并生出新根，表明幼苗已經(jīng)適應(yīng)外界環(huán)境。選擇陰天或晴天早上移栽。

出瓶前1天，打開瓶塞，蓋上報紙，使瓶內(nèi)濕度與溫室濕度接近，用高錳酸鉀對花盆、苗盤滅菌。準(zhǔn)備好所需的基質(zhì)，堆肥與珍珠巖按比例混合（60 ∶ 40），并用多菌靈消毒備用。

用鑷子從瓶里將幼苗取出，注意不要弄傷葉片和根部。剪掉黃葉，扔掉爛根的、死亡的、一條根的苗，選擇生長健壯，根系發(fā)達、條數(shù)多的幼苗，用純凈水洗掉雜質(zhì)和培養(yǎng)基，放入10%多菌靈溶液中消毒60秒。移栽至120 mm花盆中，基質(zhì)要壓實一些，根系要充分展開，避免根部損傷，深度適中，以免造成幼苗爛根。

栽好后，按品種擺放在苗床上，標(biāo)注品種、日期。幼苗移栽后不能直接澆水，先用噴霧器噴霧，打濕基質(zhì)表面，注意噴霧太多容易造成幼苗腐爛，噴霧不及時，幼苗葉片發(fā)黃、萎蔫、干枯，甚至死亡。天晴溫度高時，要不定時查看幼苗生長情況，根據(jù)實際情況調(diào)整噴霧次數(shù)，光照強要適當(dāng)遮陰。定期噴施殺菌劑，防止病害發(fā)生。