劉海霞,魏小敏,王麗麗,楊玉俠,宋志慧

唐山市婦幼保健院產(chǎn)科,河北唐山 063003

妊娠期糖尿病是一種臨床常見的疾病,主要是指患者在妊娠期出現(xiàn)的糖代謝異?，F(xiàn)象[1],該病容易導(dǎo)致妊娠期發(fā)生不良結(jié)局,嚴重時影響母體和胎兒的生命安全,盡早預(yù)測不良妊娠結(jié)局十分重要[2]。臨床上,可通過對孕婦進行臨床監(jiān)測,研究其血清指標對妊娠結(jié)局的影響,預(yù)測不良結(jié)局發(fā)生的風(fēng)險,從而盡早開展治療,減少妊娠期糖尿病所帶來的風(fēng)險[3],因此,尋找預(yù)測不良妊娠結(jié)局的生物標志物對妊娠期糖尿病孕婦的治療具有重要的作用。微小RNA(miRNA)可以參與細胞的分化及增殖等過程[4],有研究發(fā)現(xiàn)miR-125b-5p表達水平在慢性肝炎中升高,隨著病情的進展,其表達水平在進一步升高[5]。還有研究發(fā)現(xiàn),miR-125b-5p在妊娠期糖尿病患者的血清中異常表達。分泌型卷曲相關(guān)蛋白5(SFRP5)作為調(diào)節(jié)糖脂代謝的一種因子,其在腫瘤及肥胖等疾病中研究相對較多[6],有研究發(fā)現(xiàn),SFRP5通過Wnt信號通路影響機體對胰島素的敏感性,進而影響葡萄糖的代謝[7]。目前,關(guān)于miR-125b-5p和SFRP5在妊娠期糖尿病中的研究較少,因此,本研究主要探討妊娠期糖尿病孕婦血清miR-125b-5p、SFRP5表達與妊娠結(jié)局的相關(guān)性,為臨床治療妊娠期糖尿病及預(yù)測不良妊娠結(jié)局提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2020年1月在本院診治的120例妊娠期糖尿病孕婦作為研究組,年齡22～38歲,孕周24～28周。另選取同期孕檢的健康孕婦118例為對照組,年齡21～37歲,孕周24～28周。記錄研究組孕婦妊娠結(jié)局,根據(jù)是否出現(xiàn)早產(chǎn)、胎兒畸形、胎盤前置等不良結(jié)局將患者分為良好組(76例)和不良組(44例)。納入標準:(1)入組患者符合相關(guān)診斷標準[8];(2)妊娠前無糖尿病及糖尿病家族史;(3)空腹血糖(FPG)≥5.1 mmol/L;(4)無免疫系統(tǒng)等疾病。排除標準:(1)合并重要器官障礙者;(2)合并腫瘤疾病者;(3)多胎妊娠者;(4)妊娠前存在高血壓等疾病者。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準,所有受試者自愿入組并簽署知情同意書。

1.2實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)法檢測血清miR-125b-5p的表達水平 在孕24～28周進行妊娠期糖尿病篩查,對照組和研究組在孕檢和入組當天均在空腹時采集外周靜脈血5 mL,離心10 min(3 000 r/min),離心之后抽取上清液放至-80 ℃冰箱保存待測。按照Trizol試劑盒(上海羽哚生物科技有限公司,貨號:LG-NE0260)說明書操作,提取血清中總RNA,總RNA濃度和純度使用NanoDrop ND-12000分光光度計(美國Thermo公司提供)評估,使用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京康納瑞生物科技有限公司,貨號:R3564)將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,以cDNA為模板,采用qRT-PCR儀(購自美國Bio-Rad公司,型號:CFX384)檢測miR-125b-5p的表達水平,內(nèi)參為U6,引物序列見表1。qRT-PCR反應(yīng)體系共20 μL:cDNA(50 ng/μL)2 μL,SYBR Green Master Mix(2×)(北京博沃爾斯生物科技有限公司,貨號:G3326-01)10 μL,PCR正、反向引物(10 μmol/L)各0.5 μL,加ddH2O至20 μL。反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性15 min,1個循環(huán),然后95 ℃ 15 s變性,65 ℃退火、延伸45 s,共40個循環(huán)。為減小實驗誤差,各樣品重復(fù)3次,使用2-ΔΔCt方法計算miR-125b-5p的相對表達量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測SFRP5水平 采用ELISA試劑盒檢測血清SFRP5水平(貨號:EH3754,武漢菲恩科技有限公司),按照配套說明書進行檢測。

1.4血脂和血糖指標的檢測 采集兩組孕婦入組當天體檢時餐后2 h的靜脈血5 mL,離心10 min(3 000 r/min),置于-80 ℃冰箱保存待檢。采用全自動生化分析儀(思科諾斯生物科技有限公司,貨號:Catalyst One)檢測FBG、餐后2 h血糖(2hFBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),采用全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀(上海透景生命科技股份有限公司,貨號:TESMI i100)檢測空腹胰島素(FINS),胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)則為FBG和FINS的乘積與22.5的比值。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般資料比較 研究組和對照組年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、HDL-C水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),研究組FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C水平高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組一般資料比較

2.2兩組血清miR-125b-5p、SFRP5水平比較 研究組血清miR-125b-5p表達水平高于對照組(P<0.05),血清SFRP5水平低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組血清miR-125b-5p、SFRP5水平比較

2.3血清miR-125b-5p和SFRP5水平與血糖、血脂指標的相關(guān)性分析 血清miR-125b-5p與SFRP5呈負相關(guān)(r=-0.563,P<0.05),血清miR-125b-5p與FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C呈正相關(guān)(r=0.523、0.475、0.587、0.641、0.432、0.510、0.631、0.536,P均<0.05),血清SFRP5與FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈負相關(guān)(r=-0.487、-0.463、-0.576、-0.412、-0.621、-0.569、-0.654、-0.682,P均<0.05)。

2.4不同妊娠結(jié)局孕婦血清miR-125b-5p、SFRP5水平比較 不良組血清miR-125b-5p表達水平高于良好組(P<0.05),血清SFRP5水平低于良好組(P<0.05)。見表4。

表4 不同妊娠結(jié)局孕婦血清miR-125b-5p、SFRP5水平比較

2.5影響妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的因素 以是否發(fā)生妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局為因變量,以miR-125b-5p、SFRP5為自變量進行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,miR-125b-5p高表達、SFRP5低水平、HOMA-IR高及FINS高水平為妊娠期糖尿病患者不良妊娠結(jié)局的危險因素(P<0.05)。見表5。

表5 影響妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的因素

2.6血清miR-125b-5p、SFRP5水平對妊娠期糖尿病患者不良妊娠結(jié)局的預(yù)測價值 miR-125b-5p預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的曲線下面積(AUC)為0.868(95%CI:0.820～0.915),最佳截斷值為2.983,靈敏度為74.12%,特異度為88.32%。SFRP5預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的AUC為0.850(95%CI:0.799～0.902),最佳截斷值為7.465 ng/mL,靈敏度為78.25%,特異度為83.14%。二者聯(lián)合預(yù)測妊娠期糖尿病患者不良妊娠結(jié)局的AUC為0.948(95%CI:0.918～0.977),靈敏度為82.54%,特異度為76.56%。二者聯(lián)合優(yōu)于miR-125b-5p、SFRP5各自單獨預(yù)測(P均<0.05)。見圖1。

圖1 血清miR-125b-5p、SFRP5水平對妊娠期糖尿病患者不良妊娠結(jié)局的預(yù)測價值

FINS預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的AUC為0.766(95%CI:0.707～0.826),最佳截斷值為4.994 mU/L,靈敏度為70.24%,特異度為86.32%。HOMA-IR預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的AUC為0.798(95%CI:0.742～0.855),最佳截斷值為3.107,靈敏度為72.27%,特異度為82.32%。見圖2。

圖2 FINS和HOMA-IR對妊娠期糖尿病患者不良妊娠結(jié)局的預(yù)測價值

3 討 論

妊娠期糖尿病是臨床常見的一種內(nèi)分泌代謝紊亂疾病,機體的葡萄糖耐量出現(xiàn)異常,可能導(dǎo)致早產(chǎn)和畸形胎兒等不良妊娠結(jié)局[9]。隨著社會的進步和人們生活水平的改善,妊娠期糖尿病患者逐年增加,嚴重威脅母嬰生命健康[10]。因此,尋找與妊娠期糖尿病妊娠結(jié)局相關(guān)的標志物,可以指導(dǎo)臨床早期進行干預(yù)以改善妊娠結(jié)局。

miRNA主要由20～25個核苷酸組成的RNA,其參與機體細胞的增殖、分化過程[11],在各種疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用[12],有研究發(fā)現(xiàn),miRNA在糖尿病中發(fā)揮重要的作用,其可調(diào)控機體中內(nèi)源性因子的產(chǎn)生和排出,從而對葡萄糖的攝取和儲存等過程產(chǎn)生影響[13],miR-125b-5p表達上調(diào)可以促進胰島素敏感性,還可以改善2型糖尿病患者肝臟糖脂代謝紊亂[14],研究發(fā)現(xiàn),miR-125b在2型糖尿病患者血清中明顯高于健康者,其表達水平可以輔助評估2型糖尿病患者的情況[15]。常鳳霞等[16]通過檢測乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者血清miR-125b-5p發(fā)現(xiàn),miR-125b-5p表達水平在死亡組中明顯高于生存組,其對于乙型肝炎慢加急性肝衰竭預(yù)后有一定的評估作用。在本研究中,研究組血清miR-125b-5p表達水平高于對照組,與上述研究結(jié)果相似。研究組FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C水平高于對照組,推測妊娠期糖尿病孕婦機體中脂代謝異常會導(dǎo)致胰島素受體降低。進一步分析得知,不良組血清miR-125b-5p表達水平高于良好組,血清miR-125b-5p與FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C呈正相關(guān),推測血清miR-125b-5p表達水平升高會影響孕婦機體中的脂質(zhì)代謝,從而產(chǎn)生胰島素抵抗,說明血清miR-125b-5p表達與妊娠期糖尿病的發(fā)生及不良妊娠結(jié)局密切相關(guān)。

SFRP5可在人體多種組織中出現(xiàn)高表達,其水平升高可以幫助機體脂肪組織的氧化及葡萄糖的攝取[17],SFRP5通常和脂肪的代謝功能異常密切相關(guān),游離脂肪酸水平的不斷升高會導(dǎo)致肝臟中脂類大量沉積,造成各種臟器功能受損,還會使血糖水平升高[18]。SFRP5作為Wnt信號通路的一種拮抗劑,其通路能夠參與機體的多種細胞進程,當其通路出現(xiàn)異常時也會導(dǎo)致機體中脂肪代謝出現(xiàn)異常,使機體對胰島素的敏感性異常[19]。孫東華等[20]的研究發(fā)現(xiàn),妊娠期糖尿病患者SFRP5水平低于健康對照者,SFRP5水平可以預(yù)測妊娠期糖尿病患者的妊娠結(jié)局[21]。在本研究中,研究組血清SFRP5水平與對照組比較明顯降低,進一步分析得知,不良組血清SFRP5水平與良好組比較明顯降低,說明SFRP5水平的降低是胰島素抵抗的特異性表現(xiàn),其水平變化與妊娠期糖尿病的發(fā)展存在一定聯(lián)系。相關(guān)性分析結(jié)果顯示,血清SFRP5與FBG、2hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈負相關(guān),進一步證實SFRP5水平降低可以引起胰島素抵抗,說明監(jiān)測SFRP5可以評估妊娠期糖尿病的發(fā)生,其還與不良妊娠結(jié)局有關(guān)。血清miR-125b-5p、SFRP5呈負相關(guān),說明二者可以共同調(diào)節(jié)妊娠期糖尿病的發(fā)生發(fā)展。

Logistic回歸分析結(jié)果顯示,影響妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的危險因素主要為miR-125b-5p高表達、SFRP5低水平、HOMA-IR高及FINS高水平,說明miR-125b-5p和SFRP5通過參與機體脂類代謝從而影響妊娠期糖尿病孕婦產(chǎn)生胰島素抵抗,影響病情進展。miR-125b-5p預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的AUC為0.868,SFRP5預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的AUC為0.850,二者聯(lián)合預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的AUC為0.948,二者聯(lián)合優(yōu)于miR-125b-5p、SFRP5各自單獨預(yù)測,FINS預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的AUC為0.766,HOMA-IR預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的AUC為0.798,其AUC低于miR-125b-5p和SFRP5二者聯(lián)合檢測,說明miR-125b-5p和SFRP5二者聯(lián)合能更有效地預(yù)測妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的發(fā)生。

綜上所述,妊娠期糖尿病孕婦血清中miR-125b-5p高表達、SFRP5低水平,二者與不良妊娠結(jié)局有關(guān),二者聯(lián)合對妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局有一定的預(yù)測價值。后續(xù)還會進行進一步的深入研究。