王 祥 丁紀(jì)濤 劉 洋

肺癌屬于臨床上常見的惡性腫瘤之一,在所有惡性腫瘤疾病中,肺癌位居死亡率第一位[1]。目前將肺癌病理類型主要劃分為鱗癌、腺癌等。肺癌患者常見臨床癥狀為咳嗽、腹部脹痛等,嚴(yán)重威脅患者的生命安全。目前臨床上常采用手術(shù)、放化療等方式進(jìn)行治療,但是對于晚期患者,無法采用手術(shù)治療,僅能進(jìn)行化療治療。在郝奐伶的研究中[2],研究報道阿帕替尼聯(lián)合常規(guī)三線化療治療晚期肺癌患者,可以有效抑制腫瘤發(fā)展,延長晚期肺癌患者生存時間。脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1/氧化還原因子1(Ape1/Ref-1)屬于多功能蛋白,可以參與多種腫瘤疾病的發(fā)生和發(fā)展,如食管鱗癌[3]、胰腺癌[4]以及骨髓瘤[5]等。目前關(guān)于Ape1/Ref-1蛋白與晚期肺癌之間的關(guān)系研究較少。本次研究主要探討血清Ape1/Ref-1晚期肺癌組織中的表達(dá)及對阿帕替尼聯(lián)合三線化療療效的預(yù)測價值,內(nèi)容如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2017年12月至2019年10月在我院就診的70例晚期肺癌患者病例資料。納入標(biāo)準(zhǔn):本次研究納入的研究對象均符合《CSCO原發(fā)性肺癌診療指南2016》中關(guān)于晚期肺癌疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];入院資料均完整;心、肺等重要臟器功能均正常;均同意接受化療治療;治療依從性較好;均未出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的情況;近半年內(nèi)均未進(jìn)行抗腫瘤治療;均經(jīng)過影像學(xué)、細(xì)胞學(xué)等檢查證實;生存時間均大于3個月。排除標(biāo)準(zhǔn):既往存在消化系統(tǒng)、免疫血液系統(tǒng)等疾病者;病灶組織未進(jìn)行病理學(xué)檢查;拒絕予以化療治療;存在精神心理疾病者;具有化療治療史者;合并其他類型惡性腫瘤疾病者。

采用隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組,即對照組和研究組,均35例。對照組:男性22例,女性13例;年齡40～77歲,平均年齡(55.41±9.32)歲;病理類型:鱗癌21例,腺癌14例;組織學(xué)分化:低分化10例,中分化14例,高分化11例。研究組:男性20例,女性15例;年齡41～78歲,平均年齡(55.36±9.27)歲;病理類型:鱗癌23例,腺癌12例;組織學(xué)分化:低分化9例,中分化16例,高分化10例。兩組患者一般資料進(jìn)行比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。納入的研究對象均同意參加本次研究,已簽署知情同意書,且本研究已通過我院倫理委員會的批準(zhǔn)。分別獲取兩組肺癌組織以及癌旁組織進(jìn)行檢測。

1.2 治療方法

對照組采用常規(guī)三線化療治療。靜脈注射紫杉醇脂質(zhì)體(160 mg/m2)、順鉑(75 mg/m2)、培美曲塞二鈉(500 mg/m2)、多西他賽(75 mg/m2)、卡鉑(350 mg/m2)、吉西他濱(1000 mg/m2),治療療程為6周。

研究組在對照組的基礎(chǔ)上再予以阿帕替尼藥物治療?？诜绞椒?0.25g/次,1次/d,治療療程為6周。

1.3 免疫組織化學(xué)染色法

獲取肺癌組織以及癌旁組織,常規(guī)脫蠟處理,不同梯度濃度的酒精溶液脫水處理,抗原修復(fù),加入比例為1∶800Ape1/Ref-1一抗抗體,孵育過夜,PBS清洗,3次×5 min,再加二抗抗體,孵育,30 min后,PBS清洗,3次×5 min,DAB溶液顯色,自來水清洗,復(fù)染,干燥、封片。Ape1/Ref-1蛋白陽性表達(dá)表示不僅有細(xì)胞核表達(dá),又存在細(xì)胞質(zhì)以及核漿共表達(dá),陽性細(xì)胞數(shù)≥10%,顏色呈現(xiàn)棕黃色或者深棕褐色,無色或淡黃色表示陰性[7]。

1.4 免疫蛋白印跡實驗

獲取上述肺癌組織以及癌旁組織,剪碎,加入PBS溶液清洗,裂解半小時后,取5 μl樣品,再加上樣緩沖溶液,煮沸5 min后,聚丙烯酰胺凝膠電泳,變性,電壓設(shè)為120 V,直至溴酚藍(lán)進(jìn)入底部,取出凝膠,轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上,加入5%脫脂奶粉,于37 ℃封閉1.5 h,再在4 ℃下,加入比例為1∶800的Ape1/Ref-1一抗抗體溶液,再加入二抗抗體,于37 ℃反應(yīng),約1.5 h后,再加入顯色液,GAPDH為內(nèi)參,檢測相對Ape1/Ref-1蛋白相對表達(dá)量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 晚期肺癌及癌旁組織中Ape1/Ref-1蛋白陽性表達(dá)

晚期肺癌組織Ape1/Ref-1蛋白陽性表達(dá)率(91.43%)顯著高于癌旁組織(χ2=33.600,P=0.000),見表1。

表1 晚期肺癌及癌旁組織中Ape1/Ref-1蛋白陽性表達(dá)(例,%)

2.2 兩組晚期肺癌患者化療前后Ape1/Ref-1蛋白表達(dá)

化療前,兩組晚期肺癌患者Ape1/Ref-1蛋白相對表達(dá)量比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);化療后,兩組Ape1/Ref-1蛋白相對表達(dá)量均明顯低于化療前,進(jìn)一步組間比較,研究組Ape1/Ref-1蛋白相對表達(dá)量明顯低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組晚期肺癌患者化療前后Ape1/Ref-1蛋白相對表達(dá)量

2.3 晚期肺癌患者化療3個周期后生存情況

Ape1/Ref-1陰性組生存率(87.50%,35/40)顯著高于Ape1/Ref-1陽性組(60.00%,18/30)(χ2=3.949,P=0.047),研究組累積生存率(91.43%,32/35)顯著高于對照組(31.43%,11/35)(χ2=10.096,P=0.001),見圖1、圖2。

圖1 Ape1/Ref-1陽性組和Ape1/Ref-1陰性組K-M曲線

3 討論

晚期肺癌患者一般采用化療方式治療,可以延長患者生存時間,也有采用靶向治療,可以有效減輕對患者機(jī)體正常細(xì)胞的損傷程度[8]。目前關(guān)于晚期肺癌的治療策略準(zhǔn)確性較低,并且多種生物學(xué)指標(biāo)差異導(dǎo)致晚期肺癌患者對化療敏感性存在一定差異性。晚期肺癌患者經(jīng)過化療治療后,5年生存率低于25%[9]。由此,積極尋找可預(yù)測化療療效的標(biāo)志物具有重要意義。

Ape1/Ref-1屬于一類多功能因子,大量來源于組織細(xì)胞內(nèi),其發(fā)揮作用主要通過對轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原狀態(tài)發(fā)生改變,進(jìn)而影響轉(zhuǎn)錄因子的活性,另外其可作為限速酶,參與DNA堿基切除修復(fù)途徑[10]。越來越多的研究均表明,Ape1/Ref-1蛋白表達(dá)量與DNA修復(fù)活性之間存在一定關(guān)系,在多種腫瘤疾病病理過程中[11-12],Ape1/Ref-1蛋白均存在異常表達(dá)情況,如肝衰竭[13]、中晚期胰腺癌[14]、卵巢癌[15]等。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)與癌旁組織進(jìn)行比較,晚期肺癌組織Ape1/Ref-1蛋白陽性表達(dá)顯著更高,進(jìn)一步提示Ape1/Ref-1蛋白有利于晚期肺癌疾病的診斷。Ape1/Ref-1通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性程度,如c-Fos、c-Jun等,半胱氨酸殘基的氧化還原能力加強(qiáng)后,可以促使上述轉(zhuǎn)錄因子與DNA之間的相互作用能力,從而調(diào)控細(xì)胞增殖、分化等因子的表達(dá),最終促進(jìn)癌癥進(jìn)展。在Guo等[16]的研究中,研究報道Ape1/Ref-1在晚期非小細(xì)胞肺癌組織中明顯高于癌旁組織。

阿帕替尼為一種新型靶分子藥物,可以通過抑制VEGF、PDGFR等,從而抑制相關(guān)傳導(dǎo)信號通路的活性,抑制腫瘤血管的生成,最終抑制腫瘤疾病的發(fā)生和發(fā)展。本次研究結(jié)果顯示與對照組比較,研究組Ape1/Ref-1蛋白相對表達(dá)量明顯下降,雖然對照組經(jīng)常規(guī)三線化療后可顯著降低Ape1/Ref-1蛋白量,但是效果較阿帕替尼聯(lián)合常規(guī)三線化療低。結(jié)果提示阿帕替尼可有效降低Ape1/Ref-1蛋白表達(dá)量,同時也說明Ape1/Ref-1蛋白表達(dá)量越低,說明化療療效越理想。在實際臨床應(yīng)用中,阿帕替尼藥物不良反應(yīng)發(fā)生率較低,安全性高[17]。本次研究進(jìn)一步觀察Ape1/Ref-1+組和Ape1/Ref-1-組生存時間,發(fā)現(xiàn)Ape1/Ref-1-組生存率顯著低于Ape1/Ref-1+組,表明通過檢測Ape1/Ref-1表達(dá)可以預(yù)測患者預(yù)后;同時觀察對照組與研究組患者生存預(yù)后,發(fā)現(xiàn)研究組生存率顯著高于對照組,即使Ape1/Ref-1陽性蛋白表達(dá)高,但經(jīng)有效的化療治療后,也可顯著提高患者生存率。

綜上所述,Ape1/Ref-1在晚期肺癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá),其蛋白表達(dá)越低,表明阿帕替尼聯(lián)合三線化療療效越好,檢測其表達(dá)對患者預(yù)后具有一定預(yù)測作用。但是本次研究也存在局限性,樣本量少,結(jié)果可能存在偏倚性,另外關(guān)于對照組與研究組的生存時間,尚未控制變量,研究結(jié)果的準(zhǔn)確性有待提高。