張佳旭，黃成鳳，朱興龍，周永峰，黃旭龍，文飛燕，郭光鵬，裴 瑾*，吳清華*

基于CRITIC結(jié)合Box-Behnken響應(yīng)面法的厚樸產(chǎn)地趁鮮加工與炮制一體化工藝研究

張佳旭1, 2，黃成鳳1, 2，朱興龍1, 2，周永峰1, 2，黃旭龍1, 2，文飛燕1, 2，郭光鵬3，裴 瑾1, 2*，吳清華1, 2*

1. 西南特色中藥資源國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611137 2. 成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 611137 3. 四川利民中藥飲片責(zé)任有限公司，四川 成都 611330

應(yīng)用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化厚樸產(chǎn)地趁鮮加工與炮制一體化工藝。通過CRITIC法計(jì)算厚樸飲片外觀性狀和主要有效成分厚樸酚、和厚樸酚含量3個(gè)指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)，采用Box-Behnken響應(yīng)面法，以綜合評(píng)分作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察干燥溫度、干燥時(shí)間和切絲寬度3個(gè)因素對(duì)厚樸飲片的影響，優(yōu)化厚樸產(chǎn)地趁鮮加工與炮制一體化工藝。利用CRITIC法確定厚樸飲片外觀性狀、和厚樸酚含量、厚樸酚含量的權(quán)重系數(shù)分別為0.422 1、0.241 0、0.336 9，優(yōu)選的厚樸飲片炮制工藝為厚樸藥材去粗皮后，切7 mm厚的絲裝入內(nèi)膜袋于烘箱內(nèi)40 ℃發(fā)汗16 h后，平鋪在烘箱內(nèi)65 ℃干燥14.5 h。驗(yàn)證結(jié)果與預(yù)測(cè)值之間的RSD為1.76%，說明模型具有良好的預(yù)測(cè)性。優(yōu)化的厚樸產(chǎn)地趁鮮加工與炮制一體化工藝簡(jiǎn)便易行，穩(wěn)定性好，可為以厚樸為代表的“發(fā)汗”類皮類飲片規(guī)范化生產(chǎn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供參考。

厚樸；炮制加工；CRITIC法；Box-Behnken響應(yīng)面法；厚樸酚；和厚樸酚

厚樸為木蘭科厚樸屬植物厚樸Rehd. et Wils.或凹葉厚樸Rehd. et Wils. var.Rehd. etWils.的干燥干皮、根皮及枝皮[1]。厚樸為化濕藥，傳統(tǒng)用于治療痰濕雍肺、胸悶喘咳、梅核氣等癥[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，厚樸具有抗炎、調(diào)節(jié)腸胃運(yùn)動(dòng)、保護(hù)心血管、抗菌、抗腫瘤等作用[3-4]?！吨袊?guó)藥典》2020年版所記載的厚樸藥材的加工方法為厚樸鮮皮陰干，將干皮至沸水中微煮后，堆置陰濕處，“發(fā)汗”至內(nèi)表皮變紫褐色或棕褐色時(shí)，蒸軟，取出，卷成筒狀，干燥。由此可見，在傳統(tǒng)厚樸加工方法中，從藥材到飲片需經(jīng)過多次干燥和水處理，這不僅導(dǎo)致厚樸飲片的生產(chǎn)成本增加、生產(chǎn)效率降低，并且易導(dǎo)致有效成分流失、藥效下降[5-6]。

中藥材產(chǎn)地趁鮮加工與炮制一體化是當(dāng)今研究熱點(diǎn)，應(yīng)用于多種中藥材飲片的產(chǎn)地生產(chǎn)，“一體化”在縮短飲片制作周期、提高有效成分含量和增強(qiáng)藥理活性方面具有重要的實(shí)際意義，已在黃柏[7]、秦皮[8]等多種皮類藥材上證實(shí)其適用性。由于傳統(tǒng)加工方法工序復(fù)雜、生產(chǎn)周期長(zhǎng)，厚樸藥材產(chǎn)地加工多將鮮皮切絲后堆置“發(fā)汗”干燥或鮮皮切絲后直接干燥。該加工方法雖然縮短了生產(chǎn)周期，但由于加工過程受環(huán)境影響較大、加工參數(shù)不可量化等原因?qū)е嘛嬈|(zhì)量不穩(wěn)定，且未經(jīng)過“發(fā)汗”的飲片內(nèi)表皮不變色、有效成分含量低。另一方面，厚樸鮮皮未經(jīng)過去粗皮，干燥后厚樸絲容易出現(xiàn)分層情況，導(dǎo)致運(yùn)輸、貯藏過程飲片易碎。為了提高厚樸藥材中有效成分的利用率，便于縮短藥材生產(chǎn)周期，穩(wěn)定藥材質(zhì)量，本研究基于質(zhì)量源于設(shè)計(jì)（quality by design，QBD）理念[9]，將厚樸產(chǎn)地加工技術(shù)進(jìn)行整合，以采收后直接趁鮮刮去粗皮、切絲發(fā)汗后干燥的方法制備厚樸產(chǎn)地加工與飲片炮制一體化飲片。確定厚樸加工炮制中關(guān)鍵工藝因素為切絲寬度、發(fā)汗溫度、發(fā)汗時(shí)間、干燥溫度和干燥時(shí)間，通過CRITIC法計(jì)算干燥溫度、干燥時(shí)間、外觀性狀等指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)，結(jié)合Box-Behnken響應(yīng)面法[10-12]進(jìn)行模型預(yù)測(cè)，以綜合加權(quán)評(píng)分優(yōu)化厚樸飲片產(chǎn)地一體化加工工藝，確保加工工藝的穩(wěn)定可靠，旨在為其產(chǎn)地一體化加工工藝的規(guī)范化提供數(shù)據(jù)參考，為以厚樸為代表的“發(fā)汗”類皮類飲片的規(guī)范化生產(chǎn)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters 1515型GPC凝膠色譜儀，美國(guó)Waters 公司；YLS16A（pro）型烘干法水分測(cè)定儀，上海天美天平儀器有限公司；YRE2000A型超聲波清洗機(jī)，鞏義市予華儀器有限公司；SKQYJ-500型數(shù)控高速截?cái)嗤鶑?fù)式切片機(jī)、YLS16A（pro）型烘干法水分測(cè)定儀，上海天美天平儀器有限公司；TM750型多功能紅外測(cè)溫儀，深圳市泰克曼電子有限公司；UPT-Ⅱ-20T型優(yōu)普系列超純水器，成都超純科技有限公司。

1.2 材料

厚樸鮮皮于2022年6月份采自四川省成都市大邑縣，選取生長(zhǎng)年限為15年、胸徑36～40 cm的厚樸，以離地2～3 cm向上截取1.3 m的皮部。由成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院裴瑾教授鑒定為木蘭科厚樸屬植物厚樸Rehd. et Wils.的干燥干皮，憑證保存于成都中醫(yī)藥大學(xué)國(guó)家中藥種質(zhì)資源庫(kù)雙十五干燥間。

1.3 試藥

和厚樸酚（批號(hào)CHB210110）、厚樸酚（批號(hào)CHB201102）對(duì)照品均購(gòu)自成都克洛瑪生物公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均＞98%；甲醇為色譜純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 厚樸飲片加工流程

2.1.1 傳統(tǒng)飲片加工流程 取新鮮厚樸干皮，置沸水中微煮后，堆積陰濕處發(fā)汗至內(nèi)表面變紫褐色或棕褐色時(shí)，蒸軟，刮去粗皮，切絲，室外晾曬干燥。

2.1.2 一體化加工飲片 取新鮮厚樸干皮，趁鮮刮去粗皮，掃去雜質(zhì)，切絲，置內(nèi)膜袋中于恒溫烘箱內(nèi)發(fā)汗，發(fā)汗結(jié)束后倒出鋪平至厚度一致，于恒溫烘箱中干燥至水分達(dá)標(biāo)。

2.2 厚樸飲片指標(biāo)成分的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（78∶22）；檢測(cè)波長(zhǎng)為294 nm；體積流量為0.8 mL/min；柱溫為40 ℃；進(jìn)量樣為4 μL?；旌蠈?duì)照品溶液及厚樸飲片樣品溶液的HPLC圖見圖1。

圖1 混合對(duì)照品溶液(A)及厚樸飲片供試品溶液(B)的HPLC圖

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 精確稱取和厚樸酚、厚樸酚對(duì)照品適量，置于10 mL量瓶中，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為和厚樸酚29.00 μg/mL、厚樸酚42.20 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 精確稱取厚樸粉末（過3號(hào)篩）0.2 g，置于具塞錐形瓶中，加甲醇25 mL，搖勻，密封，浸漬24 h，濾過，精密量取濾液5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 將混合對(duì)照品溶液用甲醇稀釋至系列質(zhì)量濃度，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），進(jìn)行線性回歸，得到線性回歸方程分別為和厚樸酚＝4 669.8＋1 613.7，＝0.999 7，厚樸酚＝4 699.3＋2 365.9，＝0.999 8，線性范圍分別為0.116～29.000 μg/mL、0.168 8～42.200 0 μg/mL。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取厚樸供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄各成分的峰面積，計(jì)算和厚樸酚、厚樸酚峰面積的RSD分別為1.29%、1.18%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取供試樣品粉末1份，制備成供試品溶液，室溫下放置，分別在0、3、6、9、12、24 h進(jìn)樣10 μL進(jìn)行分析，測(cè)定各成分的峰面積，計(jì)算和厚樸酚、厚樸酚峰面積的RSD分別為0.79%、0.84%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取供試樣品粉末6份，每份0.2 g，制備成供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10 μL進(jìn)行分析，測(cè)定各成分峰面積，計(jì)算和厚樸酚、厚樸酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為1.64%、1.89%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已測(cè)定和厚樸酚和厚樸酚含量的厚樸飲片供試品6份，每份0.1 g，精密稱定，分別加入飲片中等量的對(duì)照品，按上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得和厚樸酚、厚樸酚的平均加樣回收率分別為100.71%、99.14%，RSD分別為1.32%、1.20%，表明該方法的加樣回收率良好。

2.3 厚樸飲片外觀性狀評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版、《重慶市中藥飲片炮制規(guī)范》（2006年版）對(duì)厚樸飲片性狀描述（內(nèi)表面紫棕色或深褐色，較平滑，具細(xì)密縱紋，劃之顯油痕）及飲片加工生產(chǎn)中的出現(xiàn)的分層現(xiàn)象，以內(nèi)表面顏色、油性、有無分層等為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 厚樸飲片外觀性狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

Table 1 Scoring criteria for appearance traits of Magnoliae OfficinalisCortex decoction pieces

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分值 內(nèi)表面顏色無明顯變化，劃之無油痕，分層飲片占比大于20%0～2 內(nèi)表面顏色稍變深，劃之顯油痕，分層飲片占比大于15%3～5 內(nèi)表面顏色變深，劃之顯油痕，分層飲片占比5%～10%6～8 內(nèi)表面顏色變深，劃之有明顯油痕，分層飲片占比小于5%9～10

評(píng)分時(shí)同檔次中顏色均勻，油性較大的分值高

the color is uniform in the same grade when scoring, and the score with greater oiliness is high

2.4 “發(fā)汗”環(huán)節(jié)工藝參數(shù)的確立

“發(fā)汗”是保障厚樸道地性及藥效的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，厚樸經(jīng)過“發(fā)汗”處理后，其外觀、內(nèi)在成分含量、藥效均發(fā)生改變，但傳統(tǒng)“發(fā)汗”工藝耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，發(fā)汗是否完成依靠經(jīng)驗(yàn)辨別，導(dǎo)致藥材質(zhì)量不穩(wěn)定[12]?；谏a(chǎn)經(jīng)驗(yàn)及已發(fā)表文獻(xiàn)，進(jìn)行“發(fā)汗”工藝的參數(shù)篩選[5,13-14]。

取同一批厚樸鮮藥材適量，刮去粗皮，掃去雜質(zhì)，切制成6 mm厚樸絲，置于內(nèi)膜袋中密封，每袋20 kg，共10袋。9袋待烘房溫度分別達(dá)到40、45、50 ℃時(shí)進(jìn)行發(fā)汗，分別發(fā)汗12、14、16 h，于60 ℃下烘干至水分達(dá)標(biāo)；余下1袋直接于60 ℃下烘干至水分達(dá)標(biāo)。對(duì)10批樣品進(jìn)行外觀性狀評(píng)價(jià)及有效成分含量測(cè)定，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定厚樸“發(fā)汗”環(huán)節(jié)條件。由表2可知，10批厚樸樣品均符合藥典要求的厚樸酚與和厚樸酚的總量不少于1.6%的規(guī)定。且40 ℃-16 h發(fā)汗時(shí)，厚樸飲片的外觀性狀評(píng)分及有效成分含量最高，故選擇40 ℃-16 h為厚樸“發(fā)汗”條件。

2.5 厚樸飲片綜合評(píng)分計(jì)算方法

2.5.1 CRITIC法計(jì)算權(quán)重 為方便賦權(quán)計(jì)算，將外觀性狀、和厚樸酚含量、厚樸酚含量3項(xiàng)指標(biāo)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，采用公式＝(X－min)/(max－min)消除量綱，依據(jù)CRITIC法公式計(jì)算得到外觀性狀、和厚樸酚、厚樸酚含量3個(gè)指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)分別為0.422 1、0.241 0、0.336 9，結(jié)果見表3。

2.5.2 綜合評(píng)分計(jì)算 根據(jù)實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果和CRITIC法計(jì)算的權(quán)重系數(shù)[13]，按照公式綜合評(píng)分（）＝[(外觀性狀評(píng)分/外觀性狀最大值)×0.422 1＋(和厚樸酚含量/和厚樸酚含量最大值)×0.241 0＋(厚樸酚含量/厚樸酚含量最大值)×0.336 9]×100計(jì)算。

表2 10批厚樸樣品不同“發(fā)汗”條件含量測(cè)定結(jié)果

Table 2 Determination results of 10 batches of Magnoliae OfficinalisCortex samples under different “sweating” conditions

實(shí)驗(yàn)號(hào)“發(fā)汗”時(shí)間/h“發(fā)汗”溫度/℃外觀性狀評(píng)分和厚樸酚/%厚樸酚/% 184060.852.64 2124080.932.26 3164091.222.93 484550.762.83 5124570.632.00 6164580.582.40 785050.882.14 8125080.872.18 9165070.541.86 10 (未發(fā)汗)??20.981.92

表3 厚樸飲片中各指標(biāo)權(quán)重系數(shù)

Table 3 Calculation results of weight coefficient of each index in Magnoliae OfficinalisCortex decoction pieces

指標(biāo)變異性沖突性信息量權(quán)重系數(shù) 外觀性狀0.3541.6750.5920.422 1 和厚樸酚0.3071.0990.3380.241 0 厚樸酚0.3461.3660.4730.336 9

2.6 干燥環(huán)節(jié)工藝參數(shù)單因素考察

2.6.1 切絲規(guī)格 《中國(guó)藥典》2020年版四部炮制通則規(guī)定飲片的切絲范圍為2～10 mm，其中2～3 mm為細(xì)絲，5～10 mm為寬絲。藥典對(duì)厚樸切絲寬度沒有明確規(guī)定，而《上海市中藥炮制規(guī)范》規(guī)定切3 mm細(xì)絲，《安徽省中藥飲片炮制規(guī)范》與《陜西省中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定厚樸絲寬3～5 mm，《浙江省中藥炮制規(guī)范》規(guī)定厚樸絲寬4～5 mm，各地方規(guī)定的厚樸切絲標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，介于細(xì)絲與寬絲之間。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇2、4、6、8 mm 4個(gè)切絲規(guī)格進(jìn)行考察。取厚樸鮮藥材適量，刮去粗皮，清除雜質(zhì)，分別切制為約2、4、6、8 mm的絲，分別裝進(jìn)內(nèi)膜袋密封，40 ℃-16 h發(fā)汗后60 ℃干燥至水分達(dá)標(biāo)?？疾觳煌兄埔?guī)格對(duì)厚樸飲片加工的影響。依據(jù)飲片性狀評(píng)分及和厚樸酚、厚樸酚含量測(cè)定結(jié)果，按照CRITIC法計(jì)算綜合評(píng)分，分別為72.03、73.45、79.15、80.33，且2 mm的細(xì)絲經(jīng)過發(fā)汗干燥后易碎，且飲片分層現(xiàn)象嚴(yán)重，因此選擇4、8 mm為后續(xù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的最低最高水平。

2.6.2 干燥溫度 取厚樸鮮藥材適量，刮去粗皮，清除雜質(zhì)，切6 mm的寬絲，分別裝進(jìn)內(nèi)膜袋密封，40 ℃-16 h發(fā)汗后分別在50、60、70、80 ℃干燥至水分達(dá)標(biāo)。依據(jù)飲片性狀評(píng)分及和厚樸酚、厚樸酚含量測(cè)定結(jié)果，按照CRITIC法計(jì)算綜合評(píng)分，分別為79.29、84.20、83.09、77.96。因此選擇60、70 ℃為后續(xù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的最低、最高水平。

2.6.3 干燥時(shí)間 取厚樸鮮藥材適量，刮去粗皮，清除雜質(zhì)，切6 mm的寬絲，分別裝進(jìn)內(nèi)膜袋密封，40 ℃-16 h發(fā)汗后分別在65 ℃下干燥10、12、14、16 h。依據(jù)飲片性狀評(píng)分及和厚樸酚、厚樸酚含量測(cè)定結(jié)果，按照CRITIC法計(jì)算綜合評(píng)分，分別為79.2、79.5、82.7、83.1，并且發(fā)現(xiàn)干燥10 h的樣品含水量為11.18%，不符合《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定的含水量“不得過10%”的要求，因此選擇12、16 h為后續(xù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的最低、最高水平。

2.7 響應(yīng)面優(yōu)化厚樸產(chǎn)地加工一體化工藝參數(shù)

2.7.1 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì) 稱取相同質(zhì)量的同一批厚樸鮮藥材，通過單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定干燥溫度（1）、干燥時(shí)間（2）和切絲寬度（3）的范圍，因素水平見表4。采用Design Expert 10.0.1軟件進(jìn)行3因素3水平17個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的設(shè)計(jì)，其中12個(gè)析因點(diǎn)，5個(gè)中心點(diǎn)。

表4 厚樸干燥Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

Table 4 Experimental design and results of Box-Behnken response surface of Magnoliae OfficinalisCortex drying process

試驗(yàn)號(hào)X1/℃X2/hX3/mm外觀性狀評(píng)分和厚樸酚/%厚樸酚/%綜合評(píng)分試驗(yàn)號(hào)X1/℃X2/hX3/mm外觀性狀評(píng)分和厚樸酚/%厚樸酚/%綜合評(píng)分 160 (?1)12 (?1)6 (0)60.631.8565.70106516490.432.3381.04 270 (+1)12650.902.5175.49116512860.712.4174.62 36016 (+1)690.511.8376.68126516881.002.1987.78 47016680.442.2275.34136514680.812.5688.02 56014 (0)4 (?1)80.771.7577.11146514681.032.4491.62 67014490.501.8876.99156514680.792.6789.06 760148 (+1)60.732.5676.90166514671.042.4687.57 87014880.542.5481.64176514680.802.7189.71 965 (0)12490.591.8478.83

2.7.2 試驗(yàn)結(jié)果與響應(yīng)面分析 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及厚樸飲片樣品外觀性狀見圖2，外觀性狀評(píng)價(jià)結(jié)果、有效成分含量測(cè)定結(jié)果見表4。方差分析結(jié)果見表5。2次多項(xiàng)式方程為＝89.20＋1.641＋3.272＋0.873－2.7812＋1.2213＋2.7423－9.1512－6.7422－1.8932，總模型方程呈極顯著（＜0.000 1），失擬項(xiàng)（＞0.05）不顯著。單因素中2為高度顯著項(xiàng)，1為顯著項(xiàng)。據(jù)值可得，因素貢獻(xiàn)率為2＞1＞3。模型相關(guān)系數(shù)2＝0.981 2擬合良好，決定系數(shù)adj2＝0.957 0，可預(yù)測(cè)93.9%響應(yīng)值，說明該模型可用來預(yù)測(cè)各指標(biāo)的實(shí)際情況[17]。

2.8 最佳工藝預(yù)測(cè)及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

通過軟件繪制各因素對(duì)厚樸飲片綜合評(píng)分的3D效應(yīng)面圖，結(jié)果見圖3。曲面越陡則表明該因素對(duì)響應(yīng)值的影響越大，曲面越平則表明該因素對(duì)響應(yīng)值的影響越小[18-19]，其中，干燥溫度（1）、干燥時(shí)間（2）對(duì)厚樸加工工藝綜合評(píng)分影響較大，形成的3D效應(yīng)面圖較陡峭，切絲寬度（3）影響較小，形成的3D效應(yīng)面圖較平緩。以厚樸飲片綜合評(píng)分最大值為條件，使用軟件擬合得到厚樸干燥最佳工藝參數(shù)為干燥溫度65.36 ℃、干燥時(shí)間14.66 h、切絲寬度6.99 mm，綜合評(píng)分理論值為90.01。根據(jù)操作的可行性將預(yù)測(cè)最佳工藝進(jìn)行調(diào)整，即厚樸干燥最佳溫度為65 ℃、干燥時(shí)間14.5 h、切絲寬度7 mm。取適量厚樸鮮藥材，進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，計(jì)算綜合評(píng)分，結(jié)果見表6。

驗(yàn)證結(jié)果平均綜合評(píng)分88.34，與預(yù)測(cè)值之間的RSD值為1.76%，與預(yù)測(cè)結(jié)果接近，表明該工藝穩(wěn)定性較好。與傳統(tǒng)厚樸加工方法比較，一體化加工飲片有效成分含量較高、外觀性狀評(píng)分較高，這可能是由于傳統(tǒng)加工水處理會(huì)使有效成分流失，堆置發(fā)汗溫度達(dá)不到發(fā)汗要求所導(dǎo)致的[17]。以上結(jié)果表明該工藝切實(shí)可能，可操作性強(qiáng)。

3 討論

3.1 “發(fā)汗”對(duì)厚樸飲片質(zhì)量的影響

“發(fā)汗”是厚樸藥材加工中關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，歷版《中國(guó)藥典》及各地方炮制標(biāo)準(zhǔn)都將其作為提升厚樸飲片質(zhì)量的方法，中藥材經(jīng)發(fā)汗后，不僅有利于縮短干燥時(shí)間，也會(huì)改變藥材外觀質(zhì)量?，F(xiàn)代研究認(rèn)為，在“發(fā)汗”過程中，隨著藥材內(nèi)部溫度的升高，一系列酶促反應(yīng)隨之發(fā)生，使得藥材的外觀性狀與內(nèi)在化學(xué)成分隨之發(fā)生改變[20]。

外觀顏色是判斷中藥飲片質(zhì)量的重要參考指標(biāo)，如厚樸“紫色多潤(rùn)”、玄參“色黑有光澤”、斷續(xù)“斷面墨綠色”以及地黃“斷面棕黑色”等?，F(xiàn)代研究結(jié)果表明，“發(fā)汗”會(huì)影響藥材中酶的活性，酶活性的改變會(huì)引起相應(yīng)化學(xué)成分含量的變化，進(jìn)而使藥材顏色發(fā)生改變[21]。如“發(fā)汗”會(huì)使丹參變紫紅色，這是因?yàn)樵凇鞍l(fā)汗”過程中，顏色較淺的丹參酮等成分在脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)化為顏色較深的丹參酮IIA[22]。有學(xué)者認(rèn)為，在“發(fā)汗”過程中，多酚氧化酶和過氧化物酶以氨基酸類和酚類化合物為底物進(jìn)行酶促褐變，產(chǎn)生大量深色物質(zhì)，致使厚樸藥材顏色變深[23-24]。在本實(shí)驗(yàn)中，盡管采用不同的工藝參數(shù)進(jìn)行“發(fā)汗”，厚樸在“發(fā)汗”后內(nèi)表面顏色均有不同程度的變色，而未“發(fā)汗”飲片幾乎無變色（圖4）。

圖2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)下厚樸飲片樣品外觀性狀

表5 厚樸干燥Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)方差分析

Table 5 Analysis of variance of Box-Behnken response surface test during Magnoliae OfficinalisCortex drying process

方差來源平方和自由度均方差F值P值顯著性方差來源平方和自由度均方差F值P值顯著性 模型785.21987.2540.58＜0.001極顯著X12352.411352.41163.91＜0.001極顯著 X121.39121.399.950.016 1顯著X22191.351191.3589.00＜0.001極顯著 X285.78185.7839.900.000 4極顯著X3214.96114.966.960.033 5顯著 X36.0716.072.820.136 9 殘差15.0572.15 X1X230.97130.9714.410.006 8高度顯著失擬項(xiàng)4.8531.620.630.631 0不顯著 X1X35.9215.922.750.141 0 純誤差10.2042.55 X2X329.94129.9413.930.007 3高度顯著總差800.2616

“發(fā)汗”過程會(huì)使藥材中化學(xué)成分含量產(chǎn)生變化。例如，在丹參中，“發(fā)汗”能夠提高酚酸類成分及菲醌類成分的含量；在玄參中，“發(fā)汗”使哈巴俄苷含量降低，哈巴苷和肉桂酸含量升高。對(duì)于厚樸而言，“發(fā)汗”能夠提高其酚類成分的含量[25]，有研究表明，厚樸“發(fā)汗”時(shí)間越長(zhǎng)[26]，其主要成分厚樸酚、和厚樸酚的含量越高。在本實(shí)驗(yàn)中，也發(fā)現(xiàn)“發(fā)汗”16 h的飲片中厚樸酚、和厚樸酚含量更高，其原因可能是“發(fā)汗”過程中，苷類成分水解為糖苷及酚類化合物，在適宜的溫度下轉(zhuǎn)化為木脂素類（厚樸酚、和厚樸酚）[27]。

圖3 干燥溫度、干燥時(shí)間和切絲寬度對(duì)厚樸飲片綜合評(píng)分影響的3D響應(yīng)面圖

表6 厚樸加工最優(yōu)工藝驗(yàn)證及與傳統(tǒng)加工工藝比較

Table 6 Magnoliae OfficinalisCortex processing optimal process verification and comparison with traditional processing technology

實(shí)驗(yàn)號(hào)外觀性狀/分和厚樸酚/%厚樸酚/%綜合評(píng)分 180.812.5387.76 280.842.6890.47 370.882.7186.79 傳統(tǒng)加工60.492.7173.27

圖4 “發(fā)汗”(A)和“未發(fā)汗”(B) 厚樸飲片外觀

3.2 CRITIC法結(jié)合Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化厚樸一體化加工工藝

厚樸傳統(tǒng)加工方法是先陰干，堆置“發(fā)汗”，然后卷成筒狀干燥切制成厚樸飲片，然而此方法藥材水分含量差異大，受環(huán)境影響大，不利于藥材質(zhì)量的控制，先切絲“發(fā)汗”后干燥的方法效果與效率明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的堆置發(fā)汗與自然晾曬。因此，本研究?jī)?yōu)化了厚樸飲片加工的流程。

本研究基于QbD理念，以現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范為參照，銜接生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)和現(xiàn)行規(guī)范，建立了以和厚樸酚、厚樸酚和外觀性狀評(píng)分為主的綜合評(píng)分體系，綜合評(píng)價(jià)優(yōu)選厚樸一體化加工工藝參數(shù)相對(duì)而言更為合理，避免了單一指標(biāo)的片面性。采用多指標(biāo)綜合評(píng)分研究時(shí)，各指標(biāo)的選擇及各指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)分配會(huì)直接影響結(jié)果的可靠性。本研究通過查閱文獻(xiàn)及觀察厚樸飲片生產(chǎn)過程中的問題，以厚樸飲片外觀評(píng)分為基礎(chǔ)，結(jié)合代表性成分和厚樸酚以及厚樸酚含量，采取CRITIC法給各指標(biāo)賦權(quán)，采用綜合評(píng)分方法評(píng)價(jià)厚樸一體化加工工藝，研究過程既避免主觀權(quán)重的隨意性，又兼顧決策人的主觀判斷和待評(píng)價(jià)對(duì)象各指標(biāo)的內(nèi)在聯(lián)系，全面反映了飲片加工過程中工藝參數(shù)的實(shí)際情況。

試驗(yàn)確定以干燥溫度、干燥時(shí)間、切絲寬度作為關(guān)鍵工藝參數(shù)，采用單因素實(shí)驗(yàn)確定各因素水平，進(jìn)一步采用Box-Behnken響應(yīng)面法對(duì)厚樸炮制工藝進(jìn)行優(yōu)化，所建立的模型2＝0.981 2，模型擬合良好，表面能夠預(yù)測(cè)厚樸飲片綜合評(píng)分與干燥溫度、干燥時(shí)間和切絲寬度之間的變化關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示干燥時(shí)間為高度顯著因素，干燥溫度為顯著因素，3個(gè)因素對(duì)綜合評(píng)分的影響由強(qiáng)到弱為干燥時(shí)間＞干燥溫度＞切絲寬度。綜合分析所得厚樸產(chǎn)地加工一體化工藝條件為厚樸鮮皮切7 mm厚的絲裝入內(nèi)膜袋于烘箱內(nèi)40 ℃發(fā)汗16 h后，平鋪在烘箱內(nèi)65 ℃干燥14.5 h，厚樸飲片綜合評(píng)分平均值為88.34，與理論預(yù)測(cè)值差異較小，表明響應(yīng)面優(yōu)化厚樸飲片加工的工藝方法穩(wěn)定可行。

3.3 對(duì)“發(fā)汗”類皮類飲片生產(chǎn)的建議

對(duì)于“發(fā)汗”皮類藥材而言，由于價(jià)格低廉、生產(chǎn)量大、生產(chǎn)程序復(fù)雜，且經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間堆置“發(fā)汗”，易導(dǎo)致藥材受潮變質(zhì)、發(fā)霉腐爛，因此，針對(duì)“發(fā)汗”類皮類飲片生產(chǎn)，應(yīng)采取以下措施：①采收后及時(shí)加工，避免長(zhǎng)時(shí)間堆置導(dǎo)致藥材受潮發(fā)霉；②優(yōu)化生產(chǎn)環(huán)節(jié)，除去不必要的環(huán)節(jié)或改變加工順序以提高生產(chǎn)效率；③嚴(yán)格控制加工溫度，確保加工時(shí)間適宜，盡可能降低環(huán)境因素影響，以確保發(fā)汗類皮類飲片的有效成分不受破壞。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Research on integration of fresh processing and processing process oforigin based on CRITIC combined with Box-Behnken response surface method

ZHANG Jia-xu1, 2, HUANG Cheng-feng1, 2, ZHU Xing-long1, 2, ZHOU Yong-feng1, 2, HUANG Xu-long1, 2, WEN Fei-yan1, 2, GUO Guang-peng3,PEI Jin1, 2, WU Qing-hua1, 2

1. State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, China 2. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China 3. Sichuan Limin TCM Decoction Piece Liability Co., Ltd., Chengdu 611330, China

To optimize the integration of fresh processing and processing process of Houpo () production area by star point design-response surface method.The weighting coefficients of the appearance properties, and the main active ingredient, magnolol, and honokiol content ofdecoction pieces were calculated by CRITIC method, and the Box-Behnken response surface method was used to investigate the effect of drying temperature, drying time and shredding width on the comprehensive score ofdecoction pieces, and the integration of fresh processing and processing process ofwas optimized.The weight coefficients of CRITIC method was used to determine the appearance properties, magnolol content and honokiol content, which were 0.422 1, 0.241 0 and 0.336 9, respectively. The preferred processing process ofdecoction pieces was to remove the raw bark ofmedicinal materials, cut 7 mm thick silk, put it into an inner film bag in an oven and sweat at 40 ℃ for 16 h, then spread it in the oven and dry at 65 ℃ for 14.5 h. The RSD between the validation results and the predicted values is 1.76%, indicating that the model has good predictability.The optimized integration of fresh processing and processing process ofis simple and stable, which can provide reference for standardized production and quality standards of “sweating” skin decoction pieces represented by.

Rehd. et Wils.; preparation process; CRITIC method; Box-Behnken response surface method; magnolol; honokiol

R283.6

A

0253 - 2670(2023)17 - 5560 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.17.010

2023-02-27

四川省科技計(jì)劃重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目（2020YFN0152）；四川省科技廳重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（重大科技專項(xiàng)）社會(huì)發(fā)展領(lǐng)域重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目（2022YFS0582）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)及人才支持計(jì)劃項(xiàng)目（ZYYCXTD-D-202209）；成都中醫(yī)藥大學(xué)杏林學(xué)者青基人才專項(xiàng)（QJRC2022034）

張佳旭（1999—），男，碩士研究生，主要從事中藥資源品種、品質(zhì)研究。Tel: 15531265816 E-mail: zhangjiaxu99@163.com

裴 瑾，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥資源品種、品質(zhì)研究。E-mail: peixjin@163.com

吳清華，講師，主要從事中藥資源品種、品質(zhì)研究。E-mail: 20122051@cdutcm.edu.cn

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]