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動物DNA 分型及其在法醫(yī)學(xué)中的研究進展

2023-08-18 03:03:35高紅艷劉光甫吳建陳鵬宇
法醫(yī)學(xué)雜志 2023年2期
關(guān)鍵詞:基因座法醫(yī)學(xué)分型

高紅艷,劉光甫,吳建,陳鵬宇

1.平頂山學(xué)院醫(yī)學(xué)院,河南 平頂山 467000;2.重慶市人口和計劃生育科學(xué)技術(shù)研究院,重慶 400020;3.遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院,貴州 遵義 563000

隨著分子生物學(xué)及DNA 檢測技術(shù)的發(fā)展,非人源DNA 分析作為傳統(tǒng)法醫(yī)DNA 分析的補充,拓寬了法醫(yī)DNA 分析技術(shù)的應(yīng)用范圍,便于全面利用各種生物物證,提高在案件偵破過程中提供線索和證據(jù)的能力。非人源DNA 的檢測和鑒定日益成為法醫(yī)學(xué)研究的熱點,對各類動物、植物、微生物的非人源DNA 研究日漸增多。動物與人類活動關(guān)系最為密切,動物DNA 分型在各類非人源DNA 相關(guān)案件偵破中發(fā)揮的作用最為突出,是法醫(yī)學(xué)非人源DNA 分析的主要內(nèi)容。

動物DNA 分型,技術(shù)的發(fā)展經(jīng)歷了從形態(tài)學(xué)檢測到顯微鏡檢驗、理化檢驗、蛋白分析和免疫學(xué)鑒定等表達產(chǎn)物水平的檢測方法[1],盡管這些方法具有直觀、簡便且價格低廉的優(yōu)勢,但是受限于鑒別能力的嚴重不足,難以滿足實際應(yīng)用的需求。伴隨著PCR技術(shù)的誕生以及多樣化的DNA 檢測技術(shù)的發(fā)展,檢測DNA 分子標(biāo)記成為最具有應(yīng)用價值的技術(shù)方法,展現(xiàn)出以往的遺傳標(biāo)記分析無法比擬的優(yōu)勢。動物DNA 分型技術(shù)具有高效、準(zhǔn)確、高識別力的特點,可以進行物種鑒定、個體識別、親緣分析等,甚至可以對嚴重腐敗、降解、污染等傳統(tǒng)鑒定技術(shù)束手無策的檢材進行鑒定,可以應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)的多種場景,是目前最為可靠且有效的動物鑒定方法[2]。

動物DNA 分型及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用與人類DNA 分型應(yīng)用的要求和特征有諸多一致之處,主要表現(xiàn)在DNA分型的原理和方法、分型結(jié)果證據(jù)意義的評估。然而,動物DNA 相對于人類DNA 的應(yīng)用要少得多,這也導(dǎo)致其在分型技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化、基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫建設(shè)以及證據(jù)價值評估方法等方面有諸多不完善之處,在實際應(yīng)用中面臨挑戰(zhàn)和爭議,需要進一步加以完善和解決。因此,本文就動物DNA 分型在法醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的相關(guān)內(nèi)容進行綜述。

1 動物DNA 分型技術(shù)

隨著2001 年人類基因組計劃的順利完成,動物基因組計劃也取得了相應(yīng)進展,基因組數(shù)據(jù)日益增多[3]。其中,美國于2003 年首次公布了與人類關(guān)系最為密切的犬的基因組序列草圖[4],其他常見的家養(yǎng)動物(如馬、貓、牛和豬)的基因組圖譜也相繼繪制完成。此外,法庭科學(xué)中可能涉及的珍稀野生保護動物(如大熊貓、藏羚、揚子鱷和東北虎等),也已陸續(xù)獲得相應(yīng)的基因組數(shù)據(jù),便于進行各種分子生物學(xué)的研究。

DNA 序列分析是對DNA 一級結(jié)構(gòu)的分析,簡稱為DNA 測序。如經(jīng)典的Sanger 雙脫氧鏈終止法和二代測序,在探索生命奧秘、準(zhǔn)確獲取生物遺傳信息中發(fā)揮著重要的作用。姚瑞[5]采用高通量測序技術(shù)鑒定了30 種大型底棲動物,對生物多樣性的維護與規(guī)劃起到了非常重要的參考作用。目前,動物DNA 分型與人的DNA 分型方法基本類同,在核DNA 和mtDNA 水平上,通過對不同類型的遺傳標(biāo)記進行分型檢測,為案件提供線索和證據(jù)。這些遺傳標(biāo)記主要包括STR、SNP、InDel 和微單體型。不同的遺傳標(biāo)記,結(jié)合不同的檢測方法,在法醫(yī)學(xué)中展現(xiàn)出不同的應(yīng)用價值[6]。

1.1 STR 分析

與人類DNA 分析一樣,STR 基因座也是動物DNA 分析中應(yīng)用最為廣泛的長度多態(tài)性遺傳標(biāo)記[7]。2011 年國際法醫(yī)遺傳學(xué)會(International Society for Forensic Genetics,ISFG)為規(guī)范法醫(yī)遺傳學(xué)調(diào)查中使用動物DNA,提出了13 條建議,包括樣本的收集、目標(biāo)序列的驗證、遺傳標(biāo)記的選擇、引物序列的篩選、種內(nèi)和種間特異性的驗證、重復(fù)性試驗等[8]。ISFG 還提出,動物STR 分型采用與人STR 分型一致的法醫(yī)物證公認的理論與技術(shù),如以重復(fù)次數(shù)命名等位基因、STR 基因座篩選時首選四核苷酸重復(fù)的序列、使用等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)品(ladder)作為命名參照,同時需要有研究群體的遺傳結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)作為證據(jù)評估的基礎(chǔ),并考慮多種假設(shè)、采用似然比方法評估證據(jù)權(quán)重等。ISFG還強調(diào)了常規(guī)開展動物DNA 檢驗的實驗室應(yīng)進行相應(yīng)的資格認證,我國公安部于2019 年發(fā)布了《法庭科學(xué) 犬DNA 實驗室檢驗規(guī)范》(GA/T 1703—2019),規(guī)定了法庭科學(xué)犬DNA 實驗室檢驗應(yīng)遵守的基本要求,為我國從事法庭科學(xué)犬DNA 檢驗的實驗室提供了基本的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

對于動物STR 分型的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用,同樣采用個體識別率(discrimination power,DP)和非父排除率(probability of exclusion,PE)為指標(biāo)評價遺傳標(biāo)記在個體識別和親權(quán)鑒定中的系統(tǒng)效能。一般情況下,遺傳標(biāo)記的數(shù)量越多,遺傳標(biāo)記組合在群體中出現(xiàn)重復(fù)的概率越小,個體識別能力就越強[9]。針對狗[10]、貓[11]、馬[12]、牛[13]、熊[14]、鳥[15]等動物的個體識別和親權(quán)鑒定,目前已篩選出若干STR 基因座并建立了相應(yīng)的法醫(yī)DNA 分型體系和數(shù)據(jù)庫。其中,與人類關(guān)系最為密切的幾種家養(yǎng)動物中,狗的STR 遺傳標(biāo)記多達67 個,包括66 個常染色體STR 基因座(REN285G14、REN112I02、REN172C02、REN143K19、FH2890、CO2.466、FH3895、REN157C08、C03.445、FH2732、FH2776、REN160J02、REN92G21、REN285I23、CO5.414、FH2752、REN37H09、REN87M11、REN286L19、REN204K13、CO8.373、CO8.618、C09.173、C09.474、FH2885、C10.781、REN73F08、REN154G10、REN164B05、C11.873、REN208M20、REN94K11、REN286P03、C13.758、C14.866、FH3802、REN06C11、REN144M10、REN85N14、C17.402、REN50B03、REN112G10、FH2783、REN91I14、REN274F18、FH3109、FH3069、REN107H05、FH3078、C23.277、REN181K04、REN106I06、FH3083、REN87O21、C27.436、FH2782、REN239K24、FH3082、REN51C16、FH3053、FH3060、REN314H10、REN112C08、REN106I07、FH2708和VWFX)和1 個性染色體STR 基因座(Amelogenin);貓的STR遺傳標(biāo)記有31個(FCA176、FCA723、FCA084、FCA764、FCA139、FCA105、FCA102、FCA322、FCA823、FCA700、FCA275、FCA356、FCA848、FCA391、FCA736、FCA1056、FCA480、FCA310、FCA1390、FCA920、FCA1239、FCA221、FCA976、FCA742、FCA987、FCA096、FCA085、FCA1014、FCA1015、FCA1016、FCA1315);牛和馬的STR 遺傳標(biāo)記分別為16 個(TGLA227、BM2113、TGLA53、ETH10、SPS115、TGLA126、TGLA122、INRA23、ETH3、ETH225、BM1824、BM1862、BM720、BMc701、BM2934、BM861)和17 個(AHT4、AHT5、ASB2、ASB17、ASB23、HMS2、HMS3、HMS6、HMS7、HTG4、HTG10、VHL20、CA425、HMS1、HTG6、HTG7和LEX3),可達到法醫(yī)物證檢驗要求的個體識別率和非父排除率。

自1996 年起,美國Applied Biosystems 公司開始生產(chǎn)用于犬類研究的含有10 個STR 基因座的商品化熒光標(biāo)記試劑盒,隨后又繼續(xù)研發(fā)包含有貓、牛、馬等動物STR 基因座的個體識別試劑盒[16]。但是,動物STR 分型體系的研發(fā)及應(yīng)用遠遠不及人類STR 分型成熟,在基因座的選擇、樣本的收集、高質(zhì)量基因組數(shù)據(jù)的可獲得性以及經(jīng)費支持等方面仍有待提高。

1.2 SNP 分析

SNP 是指單個核苷酸變異而呈現(xiàn)出序列多態(tài)性的遺傳標(biāo)記。與STR 基因座相比,雖然SNP 位點的信息量較小,但因其在基因組中含量豐富、分布密集,具有突變率低、檢測自動化程度高、適用于高度降解DNA 樣本等優(yōu)勢,被認為是繼STR 后最有潛力的第三代遺傳標(biāo)記[17]。

對動物SNP 的研究,VERSCHEURE 等[18]通過對346 只犬的26 個SNP 位點進行統(tǒng)計分析,計算得出的非父排除率可達到97%。日本學(xué)者TOZAKI 等[19]利用全基因組SNP 基因型數(shù)據(jù),比較了32 個國際馬品種、8 個日本本土馬品種和日本純種馬品種的遺傳多樣性,從遺傳多態(tài)性和期望雜合度來看,除北海道外,日本本土馬品種的多樣性相對較低;而系統(tǒng)發(fā)育和聚類分析結(jié)果表明,不同品種馬之間的關(guān)系很大程度上反映了其在日本的地理分布,為推測群體遺傳關(guān)系和進化提供了參考數(shù)據(jù)。BA 等[20]使用雙酶切限制性位點關(guān)聯(lián)DNA 測序(double digest restriction-site associated DNA sequencing,ddRAD-seq)技術(shù)在42 只無關(guān)梅花鹿中共檢出96 188 個SNP 位點,分析發(fā)現(xiàn),大多數(shù)位點存在雜合子缺失和期望雜合度值較低的現(xiàn)象,可能與動物近親交配和Wahlund 效應(yīng)(即當(dāng)一個群體被隔離為多個亞群后,亞群的雜合子比例低于總?cè)后w處于Hardy-Weinberg 平衡時的雜合子比例)有關(guān)。使用SNP 深入研究梅花鹿的遺傳多樣性,對梅花鹿的遺傳管理具有重要意義,同時也為特殊種群的資源培育提供了有效的依據(jù)。

1.3 InDel分析

InDel 是由于DNA 片段的插入或缺失而形成的長度多態(tài)性遺傳標(biāo)記,和SNP 一樣,屬于二等位基因遺傳標(biāo)記。InDel 由于其自身擴增片段短,因而對于陳舊、降解的生物檢材有特殊的應(yīng)用價值。

在動物InDel 研究中,袁文華[21]收集了381 只犬科個體,通過分析和研究家犬馴化過程中群體InDel結(jié)構(gòu)變異的遺傳進化特征,鑒別出了在家犬馴化過程中受到人工選擇作用而發(fā)生快速進化的InDel 候選基因NOCT(nocturnin)和髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP),為深入理解家犬的種族起源、馴化歷史以及其他家養(yǎng)動物的進化機制研究提供了新的數(shù)據(jù),也為臨床研究人畜共患病的分子機制提供了參考依據(jù)。薛蕾[22]對3 個群體12 只山羊個體的全基因組InDel 位點進行分析,結(jié)果顯示,平均每只個體高質(zhì)量的InDel位點為334 151個;rs668795676和rs657996810位點為大足黑山羊群體特有,rs669452874 位點為內(nèi)蒙古絨山羊群體特有;在rs669452874 位點上,山羊的體質(zhì)量和胸部深度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。GAO 等[23]在陜北白絨山羊群體中,在海馬豐富轉(zhuǎn)錄物1(hippocampus abundant transcript 1,HIAT1)基因的第一個內(nèi)含子中選擇了一個15 bp 的插入位點(rs665862918),研究結(jié)果顯示,rs665862918 位點在不同羊群的胸部寬度、胸部深度、心臟周長、身體長度等指標(biāo)中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。進一步分析發(fā)現(xiàn),rs665862918位點的插入/插入型個體的生長性狀表現(xiàn)優(yōu)于插入/缺失型或缺失/缺失型個體。這些結(jié)果證實了HIAT1基因與山羊體型的相關(guān)性,rs665862918位點作為山羊生長性狀的潛在分子標(biāo)記,有望應(yīng)用于山羊優(yōu)良品種的開發(fā)。

1.4 mtDNA 分析

當(dāng)細胞核DNA 量不足或降解嚴重而無法進行分型時,可以使用mtDNA 進行分析[24]。法醫(yī)學(xué)動物DNA分析中針對mtDNA 最成熟和廣泛的應(yīng)用之一,是通過DNA 條形碼技術(shù)進行物種鑒定。DNA 條形碼技術(shù)是利用生物體內(nèi)一段標(biāo)準(zhǔn)DNA 序列作為標(biāo)記來實現(xiàn)準(zhǔn)確、快速和自動化的物種鑒定方法,理想的DNA 條形碼應(yīng)滿足以下3 個條件[25]:(1)具備足夠的種間變異性,并能夠穩(wěn)定遺傳的基因序列,以區(qū)分不同的物種;(2)具有高度保守的DNA 序列區(qū)域,便于通用引物的設(shè)計;(3)目標(biāo)DNA 區(qū)域足夠短(300~800 bp),便于降解DNA 的擴增。此外,還可使用mtDNA 對動物進行系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建,探討其祖先來源[26]。

2001 年,COX[26]首次提出了DNA 條形碼的初步使用方案,隨后,對DNA 條形碼的研究在不同領(lǐng)域獲得了迅猛的發(fā)展。目前,生命條形碼聯(lián)盟(Consortium for the Barcode of Life,CBOL)建立了DNA 條形碼數(shù)據(jù)庫,便于以DNA 序列為檢測對象的物種鑒定,極大地增強了人類了解、監(jiān)測和使用生物多樣性資源的能力,在生命科學(xué)、法醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等多個領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景[27]。

但是,由于mtDNA 多態(tài)性較低、母系遺傳、存在異質(zhì)性和分析技術(shù)繁瑣等問題,一般只在涉及低拷貝核基因組DNA 的樣本(無毛囊的毛發(fā)、骨頭、糞便等)、降解檢材無法進行STR 分型或者分型失敗時才需進行mtDNA 分型,與STR 直接認定的分析結(jié)果相比,mtDNA 分析的法醫(yī)學(xué)價值主要在于排除[28]。

2 動物DNA 分析在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

2.1 案件的無聲證人

據(jù)統(tǒng)計,我國養(yǎng)狗與養(yǎng)貓的人數(shù)占比分別為46.1%和30.7%,且年增長速度保持在10%以上[29]。因此,動物與人類之間有著非常密切的關(guān)系,在各類涉及動物的案件中,理論上可以通過動物毛發(fā)、咬痕、排泄物等生物成分,建立動物-案犯與案發(fā)現(xiàn)場之間的聯(lián)系,如嫌疑人可能攜帶受害人寵物的毛發(fā),也可能將自己寵物的毛發(fā)留在案發(fā)現(xiàn)場。根據(jù)一項模擬犯罪的研究[30],竊賊從受害者家里可攜帶數(shù)百根狗或貓的毛發(fā),這些毛發(fā)在案件中可以作為無聲的證人發(fā)揮作用。

2.2 動物襲擊案件

家養(yǎng)寵物致人傷害甚至死亡的案例屢見不鮮,根據(jù)我國疾控中心發(fā)布的中國狂犬病防治現(xiàn)狀,我國每年被狗或貓咬傷的人有上千萬[31]。在動物襲擊案件中,可提取被咬人咬痕處動物的唾液DNA 進行檢驗,從而判定動物主人的責(zé)任,在鑒定實踐中發(fā)揮作用[32]。

2.3 野生動物保護

目前,野生動物走私與軍火走私、毒品走私并列為三大非法交易[33]。野生動物的非法貿(mào)易不僅破壞了生物多樣性,促使許多珍稀動物瀕臨滅絕,同時可以導(dǎo)致外來入侵物種破壞當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)平衡,甚至一些野生動物攜帶的病毒向人類蔓延,威脅到人類公共安全[34]。在野生動物保護活動中,物種鑒定、地域溯源、死因分析等是必須解決的首要問題,也是立案偵查的依據(jù),能夠為刑事訴訟提供科學(xué)依據(jù)。目前,采用DNA分子標(biāo)記技術(shù)對動物種屬、動物損傷、動物痕跡等信息進行鑒定,已成為一種可靠、有效的方法,在野生動物保護法的執(zhí)行中起到關(guān)鍵作用。目前,我國對犀牛角、象牙、瀕危蛇類等基于DNA 條形碼技術(shù)的多種物種鑒定取得了快速發(fā)展[35]。但從整體來看,我國尚未形成規(guī)范化的體系研究,限制了法醫(yī)動物學(xué)研究的發(fā)展和進步。

2.4 動物的親子鑒定

隨著動物繁殖代數(shù)的增加,會在基因水平發(fā)生可累積的突變。在DNA序列上的差異,可采用醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)等方法對個體和親代的遺傳關(guān)系進行分析,以此進行動物的親子鑒定。除了動物個體和親代的毛發(fā)、毛色、體型等形態(tài)學(xué)標(biāo)記,使用DNA 分子標(biāo)記,可準(zhǔn)確地反映物種之間親緣關(guān)系的遠近[36]。動物親子鑒定最常用的遺傳標(biāo)記為STR。對動物進行親子鑒定,國外研究相較于國內(nèi)早且規(guī)范和成熟。LUIKART等[37]在1999 年使用22 個STR 位點對山羊進行親子鑒定,結(jié)果顯示,3 種山羊的累積非父排除率均大于0.999 9。ZHAO等[38]在2020年使用15個STR位點對老虎進行分析,結(jié)果顯示,累積非父排除率和累積個體識別率分別達到0.999 999 472 和0.999 999 999 999 5。

2.5 其他應(yīng)用

除了法庭科學(xué)中與偵查訴訟有關(guān)的案件,動物DNA 分析技術(shù)也可用于非訴訟的場景,如應(yīng)用于興奮劑調(diào)查中賽馬的個體識別[39]、良種篩選及優(yōu)育[40]、功能基因定位[41]、遺傳疾病檢測[42]、群體結(jié)構(gòu)和遺傳關(guān)系分析[43]以及克隆動物的身份鑒定[44]等。

3 動物DNA 分型面臨的挑戰(zhàn)

動物DNA 分型技術(shù)的起步很早,但是相對人類DNA 的應(yīng)用仍比較少,在法醫(yī)學(xué)實際應(yīng)用中尚存在多方面的不足和挑戰(zhàn)。因此,動物DNA 分析在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用還需要進一步研究和完善。

3.1 動物DNA 分型技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化

人類DNA 分型技術(shù)已相當(dāng)成熟和規(guī)范,參照人類DNA 分型技術(shù)標(biāo)準(zhǔn),ISFG 已于2011 年對動物DNA的法醫(yī)學(xué)鑒定提出了相關(guān)建議[8],但是分型標(biāo)準(zhǔn)仍未確定,很多常規(guī)實驗室難以完成此類特殊樣本的檢測和分型,且有很多動物核心序列未公布,基因座的定位和判讀也受到一定程度的制約。在數(shù)據(jù)共享、基因座優(yōu)化、分型標(biāo)準(zhǔn)化等方面,仍需法醫(yī)工作者不斷探索和研究。

3.2 動物DNA 數(shù)據(jù)庫的建立

目前國外已有一些小型動物DNA 數(shù)據(jù)庫,政府也累積了一些動物DNA 案例,但是要滿足日益增多的案件需求,需要的是更龐大的數(shù)據(jù)庫[45]。部分動物,尤其是瀕危野生物種,存在采樣困難、數(shù)據(jù)誤差大等問題,難以準(zhǔn)確計算相關(guān)的法醫(yī)學(xué)參數(shù)并進行DNA分型結(jié)果的證據(jù)價值評估。為了解決野外采樣DNA難以持久保存的困難,2013年,CAMACHO-SANCHEZ等[46]對野外生物取樣進行了研究,結(jié)果表明,在現(xiàn)場低溫保存以確保DNA 或RNA 穩(wěn)定性的效果并不滿意,樣本只能保存1 周左右,而使用核酸保存緩沖液(nucleic acid preservation buffer,NAP),樣本至少可以保存2 個月。高質(zhì)量的樣本是獲得高質(zhì)量遺傳數(shù)據(jù)的關(guān)鍵,動物DNA 數(shù)據(jù)庫的建立也需要在保證樣本質(zhì)量的前提下開展。近期,STRBase(SRD-130)數(shù)據(jù)庫(http://www.cstl.nist.gov/biotech/strbase/)除了人類STR 數(shù)據(jù),還收集了貓、狗、牛、馬等動物的STR 數(shù)據(jù),便于實驗室間的數(shù)據(jù)共享,其他實驗室的分型數(shù)據(jù)也可以繼續(xù)上傳至該數(shù)據(jù)庫,促進了動物STR 分型技術(shù)的進一步發(fā)展和標(biāo)準(zhǔn)化流程的制定,也為法醫(yī)動物DNA 分型進行實驗室序列化比對和種群識別提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支撐。中國動物藥材DNA 條形碼數(shù)據(jù)庫[47]首次構(gòu)建了統(tǒng)一的中國動物藥材DNA 條形碼數(shù)據(jù)庫,對動物藥材鑒定、資源可持續(xù)利用和瀕危物種保護均有重要意義。

3.3 動物DNA 分析的證據(jù)效能評估

與人類相比,動物具有雜交、回交和近交等特殊的繁殖方式[48],會對基因座多態(tài)性的群體分布造成很大影響,在進行證據(jù)價值評估時,亞群之間的差異[49]、基因座連鎖不平衡[50]、基因遷移等問題也需要關(guān)注。在法醫(yī)學(xué)中,使用共祖系數(shù)[51]對來源于同一種群的兩個個體進行遺傳學(xué)圖譜比對時,這兩個個體具有相同的祖先即擁有同一等位基因的機會稱為Fst或者θ。在人群中,F(xiàn)st的范圍是0.01~0.03[52]。當(dāng)群體數(shù)量足夠多時,擁有同一祖先的機會是非常小的,但是在非人類種群中情況有所不同,特別是在被隔離的小的野生動物種群、被馴養(yǎng)的動物種群、分布比較局限或者多配偶的動物種群中,擁有同一祖先的情況是非常普遍的[53]。因此,在證據(jù)效能評估時,選擇Fst值小的遺傳標(biāo)記進行個體識別,選擇Fst值大的遺傳標(biāo)記進行祖先推斷。雖然在大多數(shù)情況下,個體或物種的DNA鑒定并不困難,但是相同的起源、密集的近親繁殖和遺傳漂變[54]使得界定物種品種或地理種群要困難得多,尤其是對于形態(tài)特征的遺傳變異[55]導(dǎo)致的復(fù)雜性狀背后的遺傳學(xué)理論目前仍處于探索階段。

總之,動物DNA 分析與人類DNA 鑒定有許多相似性,應(yīng)用也日益廣泛,目前已陸續(xù)報道了相關(guān)數(shù)據(jù)和案例,但是開展動物DNA 分型的法醫(yī)學(xué)實驗室仍然較少,法庭對其證據(jù)效能的信任度并不高,有時在數(shù)據(jù)分析、動物出庭作證、寵物主人認定等方面還會產(chǎn)生爭議。此外,動物DNA 分析應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)實踐時,需要注意的問題也較多,如動物可能的近親繁殖或遺傳漂變對遺傳標(biāo)記多態(tài)性程度的影響,流浪動物難以追蹤以及特別稀缺物種的數(shù)據(jù)不足等復(fù)雜問題。與人類DNA 分型相比,動物DNA 分型技術(shù)在標(biāo)準(zhǔn)化、DNA 數(shù)據(jù)庫建設(shè)、DNA 分析證據(jù)效能評估等方面仍需進一步完善和研究。隨著動物DNA 分型技術(shù)的不斷發(fā)展和成熟以及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用所需的上述基礎(chǔ)工作的不斷推進,動物DNA 分型勢必將在更為廣泛的鑒定實踐中發(fā)揮越來越重要的作用。

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