◎ 李 蕙

（臨淄區(qū)檢驗檢測中心，山東 淄博 255400）

由于儀器創(chuàng)新和色譜技術(shù)的改進，液相色譜技術(shù)在靈敏度、分離度和速度等方面實現(xiàn)了快速的發(fā)展和進步[1]。超高效液相色譜技術(shù)是在高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用的基礎(chǔ)上，進一步提高了測控性能和指標(biāo)，設(shè)計了承受能力更高的壓力裝置（色譜柱填充的小顆粒為1.7 μm，承受的流動相在15 000 psi），進一步提高了檢測的靈敏度和反應(yīng)時間[2]。目前，超高效液相色譜技術(shù)的應(yīng)用場景正逐步得到擴展，特別是在醫(yī)藥學(xué)、化學(xué)工業(yè)和生物技術(shù)、食品領(lǐng)域、環(huán)境領(lǐng)域等得到了廣泛使用[3]。近年來，不少國家對超高效液相色譜技術(shù)進行了探索，特別是在生命領(lǐng)域的研究更為深入，這也推動了超高效液相色譜技術(shù)的進一步創(chuàng)新。

1 超高效液相色譜的基本概念與技術(shù)特點

1.1 基本概念

超高效液相色譜技術(shù)是以范德米特方程（HETP=AdP+B/v+CdP2v）作為理論基礎(chǔ)（HETP為理論塔板高度；A為渦流擴散系數(shù)；dP為填料粒徑；B為分子徑向擴散系數(shù)；C為傳質(zhì)因子；v為流動相線速度）。由該方程可得到顆粒度越小柱效越高；每個顆粒度尺寸有自己的最佳柱效流速；更小的顆粒度使最高柱效點向更高流速（線速度）方向移動，而且有更寬的線速度范圍，所以降低顆粒度可提高柱效，也可提高速度。但是當(dāng)固定相的粒度很小時，且維持最佳的線性速度時，高效液相色譜具備的快速分離和高效率的特點才會顯示出來。因此，超高效液相色譜分析要達到最佳使用效果，除了柱內(nèi)填充的顆粒小于2 μm 外，還需要具備以下幾個條件，即提供快速的檢測器、高壓溶劑輸送單元、快速自動進樣器、控制系統(tǒng)和色譜系統(tǒng)等，這些將會使超高效液相色譜技術(shù)更為完善。

1.2 技術(shù)特點

1.2.1 高效色譜柱

色譜柱中裝填的固定相的粒度對于色譜柱的性能至關(guān)重要。采用雜化顆粒技術(shù)能夠合成新型的耐高壓、全多孔球形反相固定相。運用新設(shè)計的篩板和裝填技術(shù)，能夠制備高效能的色譜柱。由于采用1.7 μm 顆粒，具備較高的優(yōu)越性，而且還可以將柱長縮短原來柱長的1/3，也就是5 μm 顆粒色譜柱，效能也比原來提高了3 倍，既能夠加快分離速度，還能將分離效能提高70%以上，而且峰容量和色譜柱也更窄。因此，超高效液相色譜技術(shù)在分析速度、效率和靈敏度上要比高效液相色譜技術(shù)更高效。

1.2.2 超高壓輸液泵

該輸液泵裝備了獨立的柱塞驅(qū)動，并且還裝置了能夠?qū)崿F(xiàn)4 種溶劑速度自由切換的二元高壓梯度泵，能夠為柱長10 cm 的固定相色譜柱提供1.0 mL·min-1的流速，而且耐高壓能力達到105 MPa。在很寬的壓力范圍內(nèi)，溶劑輸送系統(tǒng)能夠很好地彌補因為工作導(dǎo)致的溶劑壓縮性變化，從而維系流速的穩(wěn)定性。通過系統(tǒng)集成改進的高敏度真空脫氣技術(shù)，可以推動進樣器內(nèi)的流動相溶劑脫氣條件達到最高的試驗條件。

2 超高效液相色譜技術(shù)在雞蛋獸藥分析領(lǐng)域的應(yīng)用

2.1 藥物成分分析與研究

超高效液相色譜技術(shù)具備高通量、速度快、靈敏度高等特點，常常和串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)、新型四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)技術(shù)等聯(lián)用來進行常規(guī)分析。當(dāng)超高效液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用時，能夠加快代謝產(chǎn)物離子化的效率。相比于高效液相色譜技術(shù)，超高效液相色譜技術(shù)具備更高的檢測靈敏度，即使低濃度的代謝產(chǎn)物也能夠被檢測出來。

超高效液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物篩選中的應(yīng)用表明，在高通量藥物篩選上，超高效液相色譜技術(shù)的應(yīng)用更深入、前景更廣闊，能夠大幅度縮短應(yīng)用時間，提高靈敏度以及將生物樣品不純帶來的分析干擾降到最低程度。MENSCH 等[3]在超高效液相色譜技術(shù)和串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用的條件下，可以檢測出包括咖啡因在內(nèi)的多種化合物。這種方法的檢測限在0.61 ～12.00 nmol·L-1，并且處理量的速度提高了4 倍，增加了靈敏度，可以應(yīng)用在早期的藥物篩選中。HAVLíKOVá 等[4]將高效液相色譜技術(shù)替換為超高效液相色譜技術(shù)，對氟氫可的松等4 種藥物成分進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超高效液相色譜技術(shù)分析速度是高效液相色譜技術(shù)的3 ～9 倍。

中藥的成分比較復(fù)雜，超高效液相色譜技術(shù)與質(zhì)譜聯(lián)用，能夠分析復(fù)雜的中藥成分，并且還具有高通量、靈敏度高和準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢，在中獸藥研發(fā)和推廣上發(fā)揮了重要的作用。武為寶等[5]采用高效液相色譜技術(shù)對丹參中的藥用成分，包括降鼠尾草氧化物、二氫丹參酮Ⅰ和丹參酮Ⅰ在內(nèi)的5 種脂溶性成分進行了重點分析，發(fā)現(xiàn)在根及根莖中，這5種成分比較相近。曹悅等[6]采用超高效液相色譜技術(shù)對龍膽藥材中的獐芽菜苦苷和龍膽苦苷的含量進行了測定。結(jié)果表明，龍膽苦苷的含量為56.75 ～86.61 mg·g-1，遠(yuǎn)高于《中國藥典》規(guī)定；獐牙菜苦苷的含量在3.27 ～5.52 mg·g-1。楊俊等[7]利用超高效液色譜-蒸發(fā)光散法對黃芪甲苷進行測定，保留時間控制在2.1 min，出峰時間控制在12 min，能夠很好地解決黃芪甲苷無法測定問題。

2.2 獸藥殘留檢測

近些年來獸藥殘留問題頻發(fā)，并且難以有效解決，其不僅對人們的身體健康造成負(fù)面影響，還長期困擾著畜禽產(chǎn)品的出口，導(dǎo)致畜禽產(chǎn)品出口受阻。近年來，不少學(xué)者在超高效液色譜技術(shù)檢測獸藥領(lǐng)域進行了相關(guān)探索，取得了大量的研究成果。李文杰等[8]利用UPLC-MS/MS 法對11 種喹諾酮類藥物在蝦產(chǎn)品中的殘留進行了抽樣分析，再利用C18色譜柱進行分離，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些藥物的檢出限均達到0.01 μg·kg-1，綜合回收率甚至超過100%，最高能達到102%；而且相對偏差也能夠達到1.6%～9.9%。該種方法具備簡便、靈敏度高且快速等特征，適用性非常廣。同樣，黃子敬等[9]應(yīng)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對7 種磺胺類、3 種喹諾酮類及4 種硝基咪唑類獸藥在畜禽肉中的殘留進行了測定，綜合應(yīng)用效果較好。同樣，李杏翠等[10]采用UPLC-MS/MS 法對畜禽產(chǎn)品中3 種磺胺的殘留量進行了檢測，效果非常靈敏。陳德瑩等[11]采取超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對獸藥中的三聚氰胺殘留量進行了測定。研究發(fā)現(xiàn)具備三聚氰胺分離狀態(tài)良好且檢測線性度好等特點，該方法回收率在80.23%～96.52%，檢測線均小于2 ng·mL-1。該種方法處理程序簡單，適宜于食品中低含量三聚氰胺的測定。

3 問題與展望

超高效液相色譜技術(shù)具有靈敏、快速等無可比擬的優(yōu)點，這為雞蛋獸藥的研發(fā)和檢測等提供了新的平臺載體和思路。盡管優(yōu)點較多，但是超高效液相色譜技術(shù)在實際應(yīng)用中還存在一些問題和局限性，在一些關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)上還需要改善和突破。超高效液相色譜技術(shù)超高通量的樣品分析能力的提升，大幅度提升了樣品的批處理效率，但樣品前處理環(huán)節(jié)消耗時間較長，成為制約藥品檢測分析周期的一個明顯的瓶頸[12]。因此，縮短樣品前處理時長也成為需要解決的一大難題。目前，1.7 μm 顆粒度色譜柱的壓力已經(jīng)達到103.4 MPa，這種情況下如果降低顆粒度，將會使色譜柱的反壓呈現(xiàn)幾何級數(shù)倍增[13]。因此，當(dāng)前狀態(tài)下，通過降低色譜柱的顆粒度來提高色譜儀的分析效率已經(jīng)不可實現(xiàn)，毛細(xì)管柱和檢測芯片技術(shù)的應(yīng)用成為液相色譜分析新的發(fā)展方向[14]。對于高效液相色譜技術(shù)來說，要想在雞蛋獸藥檢測中進一步提高應(yīng)用價值，還需要提高峰面積的重復(fù)性。另外，由于國外一些國家已經(jīng)壟斷了高效液相色譜的關(guān)鍵技術(shù)，使得儀器設(shè)備和試劑耗材等非常昂貴，實驗室需投入的資金量較大，這也為該項技術(shù)在獸藥研發(fā)和檢測領(lǐng)域的推廣造成了成本性的障礙因素。因此，研發(fā)適合我國的超高效液相色譜設(shè)備和耗材，降低成本，也成為當(dāng)前國內(nèi)超高效液相色譜技術(shù)開發(fā)和應(yīng)用的關(guān)鍵因素之一。

4 結(jié)語

目前，超高效液相色譜技術(shù)在農(nóng)產(chǎn)品檢測中應(yīng)用較為廣泛，具有檢測靈敏、速度快等特點。隨著人們對農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量的要求越來越高，其在農(nóng)產(chǎn)品檢測領(lǐng)域?qū)⒕邆涓訌V闊的使用空間。