胡文舉 孫玲利

（1．鄭州信息科技職業(yè)學院，河南 鄭州 450046；2．河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學院，河南 鄭州 451450）

抗菌肽（antimicrobial peptide，AMP）又稱宿主防御肽，是一種在各類生物中廣泛存在的多分子小肽[1]，具有廣譜抗菌[2]、抗病毒[3]、調(diào)節(jié)免疫[4-5]等生物學功能。肉雞養(yǎng)殖逐步呈現(xiàn)規(guī)模化、集約化，因此在養(yǎng)殖過程中對飼養(yǎng)管理水平、養(yǎng)殖環(huán)境及日糧品質(zhì)要求逐步提升，尤其禁止使用飼用抗生素后肉雞養(yǎng)殖面臨極大挑戰(zhàn)[6]。鄭雪玥等[7]研究表明，200 mg/kg AMP可改善麻黃雞生長性能和腸道組織形態(tài)。固始雞是我國優(yōu)良的地方雞品種之一，飼養(yǎng)周期長、肉質(zhì)鮮美，具有較大的養(yǎng)殖前景，但目前關于抗菌肽在固始雞養(yǎng)殖中的應用研究較為缺乏。本試驗在固始雞日糧中添加AMP，觀察其對固始雞生長性能、血清抗氧化、免疫及腸道微生物的影響，為AMP在固始雞養(yǎng)殖中的應用與研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與材料

試驗動物為30 日齡、平均體重約為290 g 且健康的固始雞，購自河南三高農(nóng)牧股份有限公司。本研究使用的AMP 主要成分為天蠶素，購自湖南泰仁藥業(yè)有限公司，有效物質(zhì)含量為99%。

1.2 試驗設計

試驗在本校動物養(yǎng)殖基地進行，將200 只試驗雞隨機分為4 組，每組5 個重復，每個重復10 只雞，對照組為基礎日糧，試驗組分別在基礎日糧中添加50、100、200 mg/kg AMP?；A日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗雞轉(zhuǎn)入試驗場地后對進行5 d預飼喂，正式試驗期60 d。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗開始前15 d對場地進行消毒。試驗雞使用籠養(yǎng)方式。試驗期間雞自由飲水和采食，每日7：30、11：30、17：30飼喂，并統(tǒng)計飼料采食量和試驗雞的健康狀況。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生長性能

正式試驗開始及結(jié)束對試驗雞空腹（禁食12 h）稱重。試驗結(jié)束，統(tǒng)計各重復總采食量，計算平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.4.2 血清抗氧化與免疫指標

在各重復中挑選1 只接近該組平均體重的試驗雞，翅靜脈采血液約5 mL 置于抗凝血管中，靜置5 min，3 000 r/min離心10 min，獲取上清液，-20 ℃保存以，使用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測定血清抗氧化指標和免疫指標。

血清抗氧化指標包括：總抗氧化能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）。血清免疫指標包括：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A （IgA)、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-2 （IL-2）、白細胞介素-6（IL-6）及白細胞介素-10（IL-10）。

1.4.3 腸道微生物數(shù)量

采血后，試驗雞頸部放血致死，獲取1.5 g盲腸內(nèi)容物置于無菌離心管，分別使用MRS、EMB、SS、KF 鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基分別培養(yǎng)乳酸菌、大腸桿菌、沙門氏菌、鏈球菌并計數(shù)，以lgCFU/g計。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0 軟件進行單因素方差分析，LSD法進行多重比較。結(jié)果以“平均值±標準誤”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 AMP對固始雞生長性能的影響（見表2）

由表2可知，與對照組相比，各試驗組固始雞末重、平均日增重顯著升高（P＜0.05），料重比顯著降低（P＜0.05）；200 mg/kg 組固始雞平均日采食量顯著提高（P＜0.05）。

2.2 AMP對固始雞血清抗氧化指標的影響（見表3）

表3 AMP對固始雞血清抗氧化指標的影響

由表3 可知，與對照組相比，200 mg/kg 組固始雞血清T-AOC 顯著高于對照組（P＜0.05），各試驗組固始雞血清GSH-Px活性顯著提高（P＜0.05），MDA含量顯著下降（P＜0.05）。

2.3 AMP對固始雞血清免疫指標的影響（見表4）

表4 AMP對固始雞血清免疫指標的影響

由表4 可知，與對照組相比，各試驗組固始雞血清IgG 和IgA 含量均顯著升高（P＜0.05），TNF-α 和IL-6 含量顯著下降（P＜0.05），血清IL-10 含量顯著提高（P＜0.05）；200 mg/kg 組固始雞血清IL-2 含量顯著降低（P＜0.05）。

2.4 AMP對固始雞腸道菌群數(shù)量的影響（見表5）

表5 AMP對固始雞腸道菌群數(shù)量的影響 單位：lgCFU/g

由表5 可知，各組固始雞盲腸大腸桿菌數(shù)量隨著AMP添加量升高呈顯著下降趨勢（P＜0.05）。與對照組相比，200 mg/kg 組固始雞盲腸乳酸桿菌數(shù)量顯著提高（P＜0.05）， 沙門氏菌數(shù)量顯著降低（P＜0.05）；100 mg/kg 組、200 mg/kg 組固始雞盲腸鏈球菌數(shù)量顯著降低（P＜0.05）。

3 討論

3.1 AMP對固始雞生長性能的影響

李棟等[8]研究表明，與對照組相比，抗生素組（200 mg/kg 恩拉霉素）、400 mg/kg 組、600 mg/kg 組肉雞平均日增重分別提高了4.57%、3.40%和5.40%，末重分別增加了4.47%、3.31%、4.60%；抗生素組和600 mg/kg組肉雞料重比分別降低了3.03%和3.64%。蔡興等[9]在Cobb 500 肉雞基礎日糧中添加400、500 mg/kg AMP，肉雞平均日增重分別提高了17.83%和20.15%，料重比下降了16.16%和17.68%，存活率上升了7.0%和8.7%。Xie等[10]在AA 肉雞日糧中分別添加200 mg/kg 不同來源的混合AMP（ABP1 組）、100 mg/kg AMP + 50 mg/kg 植物精油（ABP2 組），ABP1 組和ABP2 組料重比下降約4.06%和4.57%。本研究結(jié)果顯示，AMP 能夠提高固始雞試驗末重、平均日增重、平均日采食量，降低料重比，表明AMP在日糧中添加可以促進固始雞生長性能。綜合上述研究結(jié)果，AMP 可作為新型飼料添加劑用于促進肉雞生長。

3.2 AMP對固始雞抗氧化能力的影響

T-AOC 是衡量機體整體抗氧化能力的重要指標，GSH-Px 活性反映了機體清除自由基及衍生物的能力，CAT可以催化過氧化氫分解避免細胞遭受損傷[11]。MDA是體內(nèi)脂類氧化產(chǎn)物，其含量可反映機體內(nèi)部氧化反應程度[12]。研究認為，AMP 抗氧化的作用機制與抗氧化活性肽作用機制類似。如抗菌肽在細胞質(zhì)或細胞核中可結(jié)合CK2 蛋白，通過磷酸化作用特異性介導轉(zhuǎn)錄因子，使細胞內(nèi)自由基的生成受到抑制[13]。AMP 還可以通過其內(nèi)部結(jié)構(gòu)域螯合金屬離子，避免金屬離子對氧化反應產(chǎn)生催化作用以降低機體氧化反應程度[14]。楊海濤[15]研究表明，日糧中添加500 mg/kg AMP 可顯著增強21 日齡和42 日齡肉雞血清和肝臟GSH-Px 和SOD 活性。劉夢雪等[16]在蛋雞日糧中添加100、200、400 mg/kg AMP，發(fā)現(xiàn)各試驗組蛋雞T-AOC顯著上升且MDA含量顯著下降，200 mg/kg 組和400 mg/kg 組肉雞血清GSH-Px 和SOD 活性顯著上升，與李棟等[8]和蔡興等[9]的研究結(jié)果相似。本研究認為，日糧中添加AMP后，固始雞T-AOC和GSH-Px活性顯著上升，MDA 含量顯著下降，表明AMP 可以提高雞體內(nèi)抗氧化能力。

3.3 AMP對固始雞免疫功能的影響

血清免疫球蛋白含量與機體主動免疫能力強弱有關[17]。細胞因子在體內(nèi)炎癥反應通路中具有重要作用，TNF-α、IL-2、IL-6常被認為與炎癥發(fā)生有關，而IL-10屬于抑炎因子[18]。劉夢雪等[16]研究表明，日糧中添加400 mg/kg AMP可提高蛋雞血清IgG、IgA、IgM的含量。陳偉松等[19]研究認為，日糧中添加300 mg/kg AMP 或300 mg/kg AMP + 0.1%酸化劑能夠提高肉雞平均日增重，降低料重比，顯著提高肉雞血清IgA 和IgG 含量。卜華超[18]使用鼠傷寒沙門氏菌對肉雞進行攻毒，之后在基礎日糧中添加500、1 000、1 500 mg/kg AMP進行飼喂，與對照組相比，14～28 日齡，日糧中添加AMP 可提高肉雞血清IgA和IgM含量，且1 000 mg/kg組和1 500 mg/kg組肉雞血清IL-10 含量顯著上升。目前研究認為，AMP 可通過促進免疫細胞增殖、提高動物抗感染能力、調(diào)節(jié)細胞因子活性和抑制過度炎癥反應等途徑提高動物機體免疫能力[20]。本研究結(jié)果表明，日糧中添加AMP可有效提高血清免疫球蛋白和抗炎因子的含量，降低促炎因子的含量，與上述研究結(jié)果基本一致。

3.4 AMP對固始雞腸道菌群的影響

腸道菌群對動物腸道功能與結(jié)構(gòu)具有重要影響，是動物健康發(fā)育的重要因素之一。帶正電荷的AMP可與帶負電荷的病菌細胞壁（膜）接觸，影響磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性以抑制病菌活性和增殖；部分AMP可進入病菌細胞內(nèi)部，通過氫鍵堆積影響蛋白合成或誘導細菌自溶酶合成而導致病菌死亡[21]。劉夢雪[22]研究表明，100 mg/kg AMP 可以增加擬桿菌屬、瘤胃球菌科、厚壁菌門的表達豐度，200、400 mg/kg AMP 可顯著提高擬桿菌門、互養(yǎng)菌門、理研菌科RC9 等豐度。喬恒鑫等[23]研究表明，肉雞日糧中添加2.0%的AMP粗提物可降低糞便中大腸桿菌數(shù)量（降低18%），同時糞便中乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量分別提高了6.7%和12.3%。本研究結(jié)果與上述研究基本一致，表明日糧中添加AMP可改善肉雞腸道中微生物結(jié)構(gòu)。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，日糧中添加AMP可提高固始雞生長性能、免疫力與抗氧化能力，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，建議在固始雞日糧中添加200 mg/kg AMP。