雒曉玲

（山西省檢驗(yàn)檢測中心（山西省標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量技術(shù)研究院），山西太原 030012）

蕎麥中總黃酮含量的測定是衡量蕎麥質(zhì)量的重要指標(biāo)之一[1]。分光光度法作為食品檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)測定蕎麥及其制品中總黃酮含量的常規(guī)方法，對其進(jìn)行不確定度評(píng)定，分析影響檢測結(jié)果的主要因素十分必要[2]。本研究參照《蕎麥及其制品中總黃酮含量的測定》（NY/T 1295—2007）[3]測定蕎麥粉中總黃酮含量（以蘆丁為對照品），依據(jù)《測量不確定度評(píng)定與表示》（JJF 1059.1—2012）[4]中規(guī)定的方法程序?qū)ζ洳淮_定度進(jìn)行分析和評(píng)定。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蕎麥粉（500 g/袋），購自某糧油商店；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%），壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；三氯化鋁（分析純），上海埃彼化學(xué)試劑有限公司；乙酸鉀（分析純），宜興阿拉丁化工貿(mào)易有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

721G 可見分光光度計(jì)，上海儀電控股（集團(tuán)）公司；AL104 電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；SHA-B 恒溫水浴振蕩器，常州金壇恒豐儀器制造有限公司等。

1.3 測定方法步驟

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制。準(zhǔn)確稱取0.050 0 g 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL 燒杯中，加入甲醇水溶液（7+3）溶解，轉(zhuǎn)移入1 000 mL 容量瓶中，用甲醇水溶液（7+3）稀釋并定容，配制成0.050 0 mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

（2）工 作 曲 線 繪 制。 準(zhǔn) 確 吸 取0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL 和4.00 mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL 容量瓶，分別加入2 mL 三氯化鋁（0.1 mol·L-1）溶液、3 mL 乙酸鉀（1 mol·L-1）溶液，加入甲醇并定容至刻度，配制成蘆丁濃度分別為0 0..0 01 001 0 205 mmgg··mmLL--11、、00.0.0 1 0520500mmg·gm·mLL-1-1和、00..002005 0000 mmgg··mmLL--11、的標(biāo)準(zhǔn)工作系列。室溫下放置0.5 h 后，使用分光光度計(jì)在波長λ=420 nm 處測定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)系列濃度值為橫坐標(biāo)，測得吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 試樣溶液制備

準(zhǔn)確稱取0.400 0 （g精確至0.000 1 g）蕎麥粉試樣置于具塞三角瓶中，加入30 mL 甲醇水溶液（7+3），蓋緊瓶塞后放入65 ℃的恒溫水浴振蕩器中以160 r·min-1的頻率振搖2 h，趁熱過濾至50 mL 容量瓶中，再用甲醇水溶液（7+3）洗滌濾紙與殘?jiān)?，將濾液并入容量瓶中，并用甲醇水溶液（7+3）定容，搖勻后待測。

1.3.3 待測試液測定

準(zhǔn)確吸取1.0 mL 待測試液于10 mL 容量瓶中，分別加入2 mL 三氯化鋁（0.1 mol·L-1）溶液、3 mL 乙酸鉀（1 mol·L-1）溶液，加入甲醇并定容至刻度，搖勻，室溫下放置0.5 h，置于4 000 r·min-1的離心機(jī)中離心10 min，使用分光光度計(jì)在波長λ=420 nm 處測得吸光值，計(jì)算得待測試液中的總黃酮濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度分析

2.1.1 數(shù)學(xué)模型建立

蕎麥粉中總黃酮含量的計(jì)算公式為

式中：w為蕎麥粉中總黃酮含量，g/100 g；C為待測試液中總黃酮濃度，mg·mL-1；V為待測試液體積，mL；D為試樣總稀釋倍數(shù)，D=500；H為試樣水分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，測得H=12.40；m為稱樣量，g。

2.1.2 不確定度來源

結(jié)合方法測定步驟和建立的數(shù)學(xué)模型，可確定該試驗(yàn)過程中可能引入的不確定度來源：標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入的不確定度（包括標(biāo)準(zhǔn)品賦值、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液及標(biāo)準(zhǔn)系列配制）；試樣溶液制備及測定引入的不確定度（包括試樣稱量、試液移取及定容等）；標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度及重復(fù)測定引入的不確定度。

2.2 不確定度分量評(píng)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入的不確定度分量urel(c)

（1）標(biāo)準(zhǔn)品賦值。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的編號(hào)為710100-100 mg，批號(hào)為23040089，標(biāo)準(zhǔn)品證書中的相對擴(kuò)展不確定度為U=kurel(p)=0.008（k=2），由此其產(chǎn)生的相對不確定度為urel(p)=0.004。

（2）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制過程。稱取0.050 0 g 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品使用AL104 電子天平，由檢定證書上得到其線性允差為0.1 mg，假設(shè)為三角分布，故標(biāo)準(zhǔn)不確定度為g，相對不確定度為。定容使用1 000 mL 單標(biāo)線容量瓶（A 級(jí)），根據(jù)《常用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG196—2006）[5]，20 ℃時(shí)實(shí)驗(yàn)中所用各種A級(jí)玻璃量器的不確定度分量按矩形分布，取。假設(shè)實(shí)驗(yàn)溫差為±5℃，水膨脹系數(shù)為2.10×10-4/℃，溫差變化引入的不確定度按照矩形分布計(jì)算，取，結(jié)果見表1。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制產(chǎn)生的相對不確定度分量為。

表1 玻璃量器引入的相對不確定度

（3）標(biāo) 準(zhǔn) 系 列 配 制 過 程。 吸 取0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液使用1 mL 分度吸量管（A 級(jí)），吸取2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液使用5 mL 分度吸量管（A 級(jí)），定容使用10 mL 單標(biāo)線容量瓶（A 級(jí)）。玻璃量器各自引入的相對不確定度見表1，其中，，。為避免重復(fù)評(píng)定，多次使用的玻璃量器只計(jì)算1 次，標(biāo)準(zhǔn)系列配制產(chǎn)生的相對不確定度分量為

2.2.2 試液制備及測定引入的不確定度分量urel(x)

（1）試樣溶液制備過程。稱取0.400 0 g 蕎麥粉試樣使用AL104 電子天平，其線性允差為0.1 mg，假設(shè)為三角分布，標(biāo)準(zhǔn)不確定度為， 相對不確定度為。定容使用50 mL 單標(biāo)線容量瓶（A 級(jí)），各自引入的相對不確定度見表1，該過程產(chǎn)生的相對不確定度分量為

（2）待測試液測定過程。吸取1.0 mL 待測試液使用1 mL 分度吸量管（A 級(jí)），定容使用10 mL 單標(biāo)線容量瓶（A 級(jí)），各自引入的相對不確定度見表1，該過程產(chǎn)生的相對不確定度分量為

由此，試液制備測定過程產(chǎn)生的不確定度分量

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度分量urel(q)

將配制的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)系列溶液重復(fù)測定3 次，檢測數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)于表2，用最小二乘法擬合線性回歸方程，蘆丁質(zhì)量濃度在0.001 25 ～0.020 00 mg·mL-1時(shí)，I=35.956C+0.006 1，b=35.956，a=0.006 1。該過程產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算公式為

式中：n為標(biāo)準(zhǔn)系列測定次數(shù)，n=18；P為蕎麥粉試樣測定次數(shù)，P=6。蕎麥粉試樣中總黃酮測定平均值為0.33 g/100 g，代入2.1.1 數(shù)學(xué)模型中，計(jì)算得C=0.00231 mg·mL-1，標(biāo)準(zhǔn)系列溶液平均濃度為，，，SR=0.00883。由此可得，u(q)=0.000152，相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel(q)=。

2.2.4 重復(fù)測定引入的不確定度分量urel(s)

將購自某糧油商店的蕎麥粉試樣在期間精密度條件下（重復(fù)測定6 次，結(jié)果分別為0.32 g/100 g、0.33 g/100 g、0.32 g/100 g、0.34 g/100 g、0.32 g/100 g 和0.35 g/100g，測定平均值為0.33 g/100 g，標(biāo)準(zhǔn)偏差s為0.012 65。該過程的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為，產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量。

2.3 合成不確定度和擴(kuò)展不確定度評(píng)定

2.3.1 合成不確定度

按方和根公式計(jì)算得

2.3.2 擴(kuò)展不確定度

取包含因子k=2，近似95%置信概率，總黃酮含量的測量擴(kuò)展不確定度U=ku=0.02 g/100 g。

2.4 測量不確定度結(jié)果

分光光度法測定蕎麥粉中總黃酮含量的測量不確定度結(jié)果為（0.33±0.02）g/100 g，k=2，P=95%。

3 結(jié)論

通過對分光光度法測定蕎麥粉中總黃酮含量的不確定度分析評(píng)定與計(jì)算合成，試驗(yàn)過程中產(chǎn)生不確定度各分量的影響順序大小為標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合＞重復(fù)測定＞標(biāo)準(zhǔn)溶液配制＞試樣制備檢測?？梢娫诶砘?xiàng)目檢驗(yàn)中人為操作因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響較大，食品檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)應(yīng)加強(qiáng)對一線檢驗(yàn)人員的專業(yè)培訓(xùn)，從事理化檢驗(yàn)項(xiàng)目的人員也需重視基礎(chǔ)操作技能水平的提升，以提高檢驗(yàn)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。