林淑儀，楊愛君，何 瑛，梁俊健，林木娣，黃浩杰

（廣東燕塘乳業(yè)股份有限公司，廣東廣州 510700）

75%酒精是一種廣泛使用的常規(guī)消毒劑[1]，具有很強的滲透能力，可穿透細胞膜，進入細菌內部，凝固蛋白質，從而起到殺菌的作用。酒精濃度過高或過低都會對殺菌消毒效果產生影響，酒精濃度越高，脫水能力越強，使蛋白質凝固的作用也就越強。當過高濃度的酒精與細菌接觸時，菌體表面會迅速凝固，形成一層包膜，阻止酒精繼續(xù)向菌體內部滲透，導致細菌不能被徹底殺死。如果濃度太低，酒精含水量太高，單位體積內乙醇分子含量太少，雖然可以滲透進入細菌內部，但不能將其體內的蛋白質凝固，不足以徹底殺滅細菌。綜合以上兩點，兼顧殺菌消毒能力和滲透性，70%～75%的酒精可以使菌體蛋白質脫水、變性、沉淀，不會使菌體形成包膜，而且酒精可以不斷地深入菌體內部，作用于菌體內所有的蛋白質，最后殺死細菌，殺菌比較徹底。

食品加工企業(yè)通常直接購買75%食品級酒精或用95%的食用酒精稀釋成75%酒精作消毒劑使用，75%的酒精穿透能力、作用速度最佳，但酒精具有揮發(fā)性，在使用一段時間后，酒精的消毒作用就會減弱，貯存環(huán)境的溫度直接影響酒精的揮發(fā)速度，對酒精的“有效期”影響明顯[2-4]。本文將75%酒精分別放在6 ℃、25 ℃和35 ℃的環(huán)境中存放30 d，模擬冬天室內工作間、恒溫潔凈車間和夏天室內工作間的工作場所溫度，觀察75%酒精濃度的揮發(fā)速度和消毒效果的變化。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗微生物以金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）作為細菌繁殖體中化膿性球菌的代表，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；大腸桿菌（ATCC 25922）作為細菌繁殖體中腸道菌的代表，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；95%的食用酒精，廣西金源生化集團；緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂、結晶紫中性紅膽鹽培養(yǎng)基，北京陸橋技術股份有限公司。

1.2 儀器與設備

溫度測量儀，德圖儀器國際貿易（上海）有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海延翌儀器儀表有限公司；酒精計（量程在0%～100%）。

1.3 試驗方法

1.3.1 75%酒精的配制與貯存

采用公式法計算

式中：A為95%酒精的總體積；B為75%酒精的總體積。所需添加純水的量C=B-A。

本試驗配制5 L 75%的酒精，根據(jù)上述的計算公式得出，需量取3 947 mL 95%酒精于5 L 的容器中，往容器中加入1 053 mL 純水，攪拌均勻，靜置，從中倒出220 mL 液體至量筒，用酒精計和溫度測量儀測出酒精濃度和溫度，經換算其酒精濃度為75.4%。用1 L的PP 錐形瓶盛裝，分別放置在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境下貯存30 d，每日早晚各開啟一次，每次5 min，目的是模擬企業(yè)日常每天開啟容器領取75%酒精的時間。

1.3.2 酒精濃度的檢測

每日取220 mL 酒精置于潔凈、干燥的250 mL量筒內，靜置數(shù)分鐘，待酒精中的氣泡完全消失后，放入潔凈、擦干的酒精計，不接觸量筒壁，平衡時間5 min，水平觀測，讀取與彎月面相切處的刻度數(shù)值，同時用溫度測量儀測定此時酒精的溫度。根據(jù)測得的酒精示值和溫度通過《酒精水溶液密度與酒精度（乙醇含量）對照表（20 ℃）》換算成20 ℃時的酒精度。同時，在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值，不應超過平均值的0.5%[5]。

1.3.3 消毒效果試驗

①菌液制備。使用已傳至3 代的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌菌株接種于緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基中，于36 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)后菌液濃度應不少于1×105CFU·mL-1。②設置“6 ℃貯存條件”“25 ℃貯存條件”和“35 ℃貯存條件”共3 個組，每組3 個無菌離心管，然后分別往每個無菌離心管中加入1 mL 菌液和9 mL75%酒精溶液（陽性對照管用緩沖蛋白胨水替代75%酒精），振蕩均勻，分別作用0.5 min、1.0 min 和2.0 min 后，向 混 合 液 中 加 入10 mL 營養(yǎng)肉湯，10 min 后，取其中1 mL 混勻溶液進行平板傾注，在36 ℃的電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。③根據(jù)《消毒技術規(guī)范》（2002 年版），計算活菌濃度（CFU·mL-1），換算成對數(shù)值，然后計算殺滅對數(shù)值：殺滅對數(shù)值＝陽性對照組平均活菌濃度的對數(shù)值－實驗組活菌濃度的對數(shù)值。判定標準：對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的殺滅對數(shù)值均≥5.00，判為消毒合格[6]。

2 結果與分析

2.1 不同環(huán)境溫度貯存下75%酒精濃度變化檢測結果

75%酒精配制后，在PP 錐形瓶容器貯存下，其酒精濃度在6 ℃、25 ℃和35 ℃的趨勢變化見圖1。6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境貯存下，酒精濃度分別從75.4%下降至74.5%、73.3%和71.2%?？偟膩碚f，貯存環(huán)境溫度越高，酒精的揮發(fā)性越強，酒精濃度下降速度越快。雖然75%酒精在不同貯存溫度環(huán)境下?lián)]發(fā)速度有所不同，但在一個月的貯存期內，酒精濃度仍在70%以上，可以達到酒精作為消毒劑的限值標準要求[7]。

圖1 酒精濃度趨勢變化

2.2 不同貯存溫度下75%酒精的消毒效果對比

75%酒精配制后分別在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境下貯存30 d，在貯存期間分別選擇貯存時長0 d、7 d、9 d、15 d、20 d 和30 d 的6 個時間段對75%酒精的消毒效果進行對比。在30 d 貯存期內，75%酒精作用0.5 min、1.0 min 和2.0 min 都可以達到對金黃色葡萄球菌的消毒效果。其中貯存時長為30 d 時，作用0.5 min 后有金黃色葡萄球菌生長，但作用1.0 min和2.0 min 可以100%殺滅金黃色葡萄球菌，平均殺滅對數(shù)值為8.41（見表1、表2、表3）。

表1 6 ℃貯存下75%酒精不同消毒作用時間的消毒效果

表2 25 ℃貯存下75%酒精不同消毒作用時間的消毒效果

表3 35 ℃貯存下75%酒精不同消毒作用時間的消毒效果

75%酒精對大腸桿菌的消毒效果隨著貯存時間的延長逐漸降低，其中2.0 min 的消毒效果最好，可以達到100%的殺滅率，作用1.0 min 和0.5 min 的消毒效果逐漸降低，但其6 個貯存時長的平均殺滅對數(shù)值均≥5.00，達到規(guī)定的消毒合格要求。

3 結論與討論

研究75%酒精在不同環(huán)境溫度中貯存30 d 的過程中，其酒精濃度和消毒效果的變化。結果表明，75%酒精分別在6 ℃、25 ℃和35 ℃ 3 個溫度中貯存30 d 后酒精濃度仍可以達到70%以上；在相同的貯存時間內，環(huán)境溫度的高低會直接影響酒精濃度揮發(fā)性的速度，溫度越高，酒精揮發(fā)速度越快。在30 d 貯存期間，選擇6 個不同貯存時長的75%酒精對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌分別作用0.5 min、1.0 min 和2.0 min，其平均對數(shù)值均可以達到5.00 以上，對細菌的殺滅效果可以達到規(guī)定的消毒要求。同時，在3 個不同的貯存溫度環(huán)境中，75%酒精在每日開啟10 min 情況下，貯存0 d 和30 d 對金黃色葡萄球菌作用1.0 min 和2.0 min 的滅菌作用沒有差別，但貯存30 d 對金黃色葡萄球菌作用0.5 min 后，有金黃色葡萄球菌生長?？梢姡?5%酒精在6 ℃、和35 ℃環(huán)境中貯存30 d，仍具有較強的消毒作用，企業(yè)可以根據(jù)自身需求選擇不同的貯存時長和消毒作用時間。

通過對75%酒精的貯存溫度和消毒效果的試驗檢測，建議75%消毒酒精在30 d 的保存期中，存儲溫度≤25 ℃，消毒時間≥1.0 min，既可減少配制的次數(shù)，又可以保證消毒效果。