張慧玲，范雅婷，劉浹怡，沈景林*，房恒通，張 晶

1.吉林省五星動物保健有限公司，吉林農(nóng)安 130000；2.吉林大學動物科學學院，吉林長春 130062

動物健康狀況取決于動物品種良種化、環(huán)境生態(tài)標準化、飼養(yǎng)管理科學化和疫病防控程序化等因素的執(zhí)行力度，以往的疫病防控，一是按畜禽防疫程序進行免疫，二是利用抗生素防治畜禽常見病和易感病[1]。2019 年中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部宣布2020 年飼料全面禁抗限抗，并發(fā)布第194 號公告，自2020年7 月1 日起，飼料生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)含有促生長類藥物飼料添加劑（中藥類除外）的商品飼料，由此，疫病防控和動物保健已成為維持動物健康的研究熱點[2]。微生態(tài)制劑是利用動物體內(nèi)提取的有益微生物調(diào)整人類或畜禽宿主體內(nèi)的微生態(tài)失調(diào)，保持微生態(tài)平衡的益生菌及其代謝物和促生長物的一種新興的綠色添加劑[3、4]，具有促進動物生長發(fā)育，維持體內(nèi)微生態(tài)平衡，增強動物免疫力等多方面的作用[5、6]。通過日糧中添加微生金肽素飼喂獺兔試驗，研究其對獺兔生產(chǎn)性能及疫病防控方面的影響，以其在畜禽疫病防控和動物保健方面成為替代抗生素的飼料添加劑，在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中得到廣泛應用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

實驗兔選用吉林大學吉戎兔繁育中心（原解放軍軍需大學吉戎兔原種兔場）培育的獺兔新品種-吉戎兔，選取發(fā)育狀況良好，體重相近的50 日齡斷奶仔兔60 只，標記耳號，按平均體重（p＜0.05）分為4 組，其中1 個對照組ck，3 個試驗組（Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組），每組3 個重復，每個重復4 只實驗兔，每組3 只后備，預試期7 d，在吉林大學吉戎兔繁育中心兔舍三層重疊式金屬籠內(nèi)飼養(yǎng)。

1.2 藥品與試劑

微生金肽素，河北省京科動物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，主要組分有：臘狀芽孢桿菌、酵母菌、乳酸桿菌及其有益代謝產(chǎn)物、低聚糖、紅酒酵母多糖、氨基酸、維生素、微量元素、未知生長因子，有效微生物含量≥30 億/g，按0.5‰、1.0‰、1.5‰的梯度分別添加于3 個試驗組的日糧中。

1.3 實驗儀器

分析天平，電子稱，剪毛剪刀，耳號鉗，飼料粉碎機，飼料顆粒機。

1.4 實驗日糧及飼養(yǎng)管理

實驗期間對照組ck 飼喂獺兔正常顆粒飼料，試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別飼喂添加0.5‰、1‰、1.5‰微生金肽素的試驗日糧，不加喂任何青綠飼料，每天定時定量飼喂，每日2 次（8:00、16:00），記錄數(shù)據(jù)，自由飲水，保持兔舍安靜并采取驅(qū)蟲保健，疫苗接種等必要的疫病防疫措施，飼喂期間需注意實驗用兔的生長發(fā)育情況，在其體重接近1.3 kg 時應分為單籠，以免吉戎兔之間撕咬或搶食。戎兔基礎日糧水平見表1。隨實驗兔體重的增加，實驗兔采食量也相應的 增加。對照組和試驗組的飼喂量見表2。

表1 基礎日糧配方及營養(yǎng)水平

表2 不同處理飼料飼喂量

1.5 測定指標與方法

1.5.1 體重測量

實驗開始前預飼3 d，空腹稱取初始體重，飼喂期間每10 天空腹稱重1 次，記錄數(shù)據(jù)，飼養(yǎng)試驗2 個月后，每組選取9 只實驗兔進行取樣分析。

1.5.2 皮張面積與被毛密度

飼喂結(jié)束后剪掉選取的9 只獺兔頸后部1 cm2兔毛，稱重，計數(shù)500 根兔毛稱重，計算被毛密度；測量實驗兔體長及胸圍，計算皮張面積。

1.5.3 發(fā)病率和死亡率

試驗期間觀察實驗兔的生長發(fā)育狀況、采食情況、運動和精神狀態(tài)，統(tǒng)計實驗兔的發(fā)病和死亡數(shù)量，計算發(fā)病率和死亡率。

1.5.4 免疫指標

測得的指標主要有體液免疫和非特異性免疫指標，包括體液免疫參數(shù)的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM，非特異性免疫參數(shù)的C3、C4 補體蛋白，超氧化物歧化酶活性以及溶菌酶的活性。

測定方法：免疫球蛋白以及補體蛋白采用全自動生化分析儀ACA 迪瑞CS-600 進行測定；超氧化物歧化酶SOD 的活性、溶菌酶活性采用試劑盒測定，是由南京建成生物公司的總SOD 酶活力測定試劑盒和溶菌酶活力測定試劑盒進行測定。測定試劑盒等相關試劑必須嚴格按照實驗要求及說明書進行規(guī)范操作與保存。

1.6 數(shù)據(jù)處理

對所得數(shù)據(jù)進行計算再通過SPSS 軟件進行單因素方差分析處理，并用LSD 法進行平均數(shù)間的差異顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 微生金肽素對吉戎兔增重的影響

科學合理和安全有效的飼料才能保證動物健康，進而影響動物的正常生長發(fā)育，在飼料中添加不同水平微生金肽素，通過飼喂吉戎兔試驗，研究微生金肽素對吉戎兔生長發(fā)育的影響，微生金肽素對吉戎兔增重影響見表3。

表3 微生金肽素對吉戎兔增重的影響 單位：kg

結(jié)果表明，微生金肽素對吉戎兔生長發(fā)育有影響，無顯著差異（p＞0.05）。試驗1 ～10 d 時對照組、Ⅱ組和Ⅲ組實驗兔體重略有下降，這主要是預飼期結(jié)束后實驗兔還有應激反應，試驗1 ～40 d 時Ⅰ組和Ⅲ組吉戎兔平均增重均低于對照組（p＞0.05），試驗1 ～50、1 ～60 d 時Ⅰ組和Ⅲ組吉戎兔平均增重均高于對照組（p＞0.05）；Ⅱ組在1 ～10 d時略有減重外，11 ～60 d 時吉戎兔平均增重均高于對照組（p＞0.05），1 ～20 d 時吉戎兔平均增重低于Ⅰ組（p＞0.05），21 ～60 d 時吉戎兔平均增重均高于Ⅰ組（p＞0.05）；Ⅱ組和Ⅲ組在1 ～10 d時均略有減重外，Ⅱ組在11 ～60 d 時吉戎兔平均增重均高于Ⅲ組（p＞0.05）。微生金肽素中大量的有益微生物在動物體腸道和飼料中生長繁殖，代謝產(chǎn)出許多對其生長發(fā)育有益的生物活性物質(zhì)，特別是酶類、維生素和氨基酸的大量產(chǎn)生[7、8]，對消化系統(tǒng)有增強營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和促進消化的作用，其中光合細菌能利用體溫進行糖和淀粉的合成，乳酸菌能將糖和淀粉生成有機酸并能分解粗纖維，這樣就提高了動物對飼料的蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物等營養(yǎng)素的利用率[9、10]，促進了其生長，但增重效果不明顯。

2.2 微生金肽素對吉戎兔毛皮品質(zhì)的影響

吉戎兔是以皮用為主的新品種兔，影響毛皮品質(zhì)的因素有被毛密度、被毛整齊度、被毛亮度、毛纖維長度、皮張面積和皮板厚度等，其中被毛密度和皮張面積是是影響毛皮品質(zhì)的兩個主要指標。結(jié)果顯示，微生金肽素影響吉戎兔被毛密度，且差異顯著（p＜0.05）。Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組3 個試驗組的被毛密度均高于對照組，Ⅰ組和對照組相比差異不顯著（p＞0.05），Ⅱ組和Ⅲ組均高于Ⅰ組和對照組（p＜0.05），Ⅱ組高于Ⅲ組（p＞0.05），由此，Ⅱ組微生金肽素的添加量明顯增加了吉戎兔的被毛密度，優(yōu)于對照組、Ⅰ組和Ⅲ組。微生金肽素內(nèi)的芽孢桿菌在獺兔小腸中下部生長，減少了小腸中的有機胺和硝態(tài)氮的含量，有利于誘導腸道胰蛋白酶的分泌，提高蛋白消化率，保證了營養(yǎng)供給和動物正常生長發(fā)育，促進了毛囊發(fā)育和皮毛生長，增強吉戎兔皮毛的光澤，改善毛皮品質(zhì)[11]，因此微生金肽素對吉戎兔的被毛密度有顯著影響。

胸圍和體長是影響皮張面積的主要指標，結(jié)果顯示，微生金肽素對吉戎兔胸圍、體長無顯著影響(p＞0.05)，但略高于對照組。微生金肽素能提高吉戎兔腸道內(nèi)飼料利用率和蛋白消化率，保證了營養(yǎng)供給和動物正常生長發(fā)育，促進動物體架的增大和改善皮張的大小，增強吉戎兔皮毛的光澤，改善毛皮品質(zhì)，對吉戎兔的被毛密度有顯著影響外，但對吉戎兔的皮張面積無顯著影響。

2.3 微生金肽素對吉戎兔健康指數(shù)的影響

微生金肽素改善動物腸道菌群結(jié)構(gòu)，增強動物的免疫力，提高動物的健康指數(shù)，微生金肽素對吉戎兔健康指數(shù)的影響見表4。

表4 微生金肽素對吉戎兔健康指數(shù)的影響

添加微生金肽素的試驗組吉戎兔糞便光滑細膩，無明顯臭味，且沒有飼料殘留。試驗Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的吉戎兔死亡率顯著低于對照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組吉戎兔死亡率顯著低于Ⅰ組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組吉戎兔死亡率無顯著差異(p＞0.05)；試驗Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的吉戎兔成活率顯著高于對照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組吉戎兔成活率顯著高于Ⅰ組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組吉戎兔成活率無顯著差異(p＞0.05)。Ⅰ組發(fā)病率13.33%雖低于對照組33.33%，Ⅰ組成活率93.33%高于對照組80.00%，但發(fā)病的實驗兔有死亡。這主要是Ⅰ組的微生金肽素的添加量中活性較強的有益菌不能完全在動物腸道內(nèi)占位并生長，抑制有害菌的侵入和繁殖，維持動物腸道菌群微生態(tài)平衡，提升實驗兔的群體抗病免疫力，防止消化道疾病的發(fā)生，因而有實驗兔發(fā)病后死亡。Ⅱ組發(fā)病率6.67%顯著低于對照組33.33%，Ⅱ組成活率100.00%高于對照組80.00%，但發(fā)病的實驗兔無死亡；Ⅲ組發(fā)病率0%顯著低于對照組33.33%，Ⅲ組成活率100.00%高于對照組80.00%。這主要是Ⅱ組和Ⅲ組的微生金肽素的添加量中活性較強的有益菌在動物腸道內(nèi)占位并迅速生長，消耗大量的氧，造成腸道內(nèi)厭氧環(huán)境，產(chǎn)生某些抗菌物質(zhì)，抑制了有害菌的侵入和繁殖，促進有益菌的生長，維持動物腸道菌群微生態(tài)平衡[12]。同時，微生金肽素與腸道內(nèi)有益菌群可競爭性抑制病原菌附著于腸壁上，并在消化道內(nèi)形成致密的膜菌群，防止病原菌吸附在腸壁上，促使其隨糞便排出體外，提升了動物群體抗病免疫力，防止消化道疾病的發(fā)生，減少疫病對動物的危害，從而降低了動物的發(fā)病率和死亡率[13]。從微生金肽素對實驗兔的發(fā)病率和成活率影響結(jié)果來看，以及添加微生金肽素的成本考慮，Ⅱ組微生金肽素的添加劑量可滿足實驗動物的需要。

2.4 微生金肽素對吉戎兔血液生化指標的影響

微生金肽素改善動物腸道菌群結(jié)構(gòu)，增強動物的免疫力，提高動物的血液生化指標，微生金肽素對吉戎兔血液生化指標的影響見表5。

表5 微生金肽素對吉戎兔血液生化指標的影響

結(jié)果表明，試驗Ⅰ組溶菌酶活性低于對照組(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組溶菌酶活性高于對照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組間溶菌酶活性差異不顯著(p＞0.05)；試驗Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的SOD 低于對照組(p＞0.05)；試驗Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的C3 均高于對照組，Ⅰ組和對照組間差異不顯著(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組的C3 均高于對照組和Ⅰ組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著(p＞0.05)；試驗Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的C4 均高于對照組，Ⅰ組和對照組間差異不顯著(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組的C4 均高于對照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組的C4均高于Ⅰ組(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著(p＞0.05)；試驗Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的IgA 均高于對照組（p＜0.05），Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組間的IgA 差異不顯著(p＞0.05)；試驗Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的IgG均高于對照組(p＞0.05)，Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組與對照組間的IgG 差異不顯著(p＞0.05)；試驗Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的IgM 均高于對照組，Ⅰ組和對照組間差異不顯著(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組的IgM 均高于對照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組的IgM 均高于Ⅰ組(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著(p＞0.05)。微生金肽素中活性較強的有益菌在動物腸道內(nèi)占位并生長，促進腸道內(nèi)的有益菌增殖，抑制了有害菌的侵入和繁殖，維持動物腸道菌群微生態(tài)平衡，刺激動物主動免疫系統(tǒng)的較早建立，增強動物防病抗病免疫力[14]。血清中免疫球蛋白IgG 指標升高激活機體防御系統(tǒng)中動物體液免疫應答，發(fā)揮免疫功能；參與機體免疫防御系統(tǒng)的防御反應及免疫調(diào)節(jié)的補體，補體C3 通過激活補體，補體C4 通過活化補體來發(fā)揮其生物功能，血清中補體C3 和C4 的水平升高提高了機體免疫力[15]。腸道黏膜免疫指標分泌型免疫球蛋白A（sIgA），有益菌在腸道中發(fā)揮了免疫佐劑作用，提高免疫識別力，同時活化腸系膜淋巴結(jié)、黏膜內(nèi)和黏膜固有層等腸道相關淋巴組織，使sIgA 抗體分泌增多，防止消化道疾病發(fā)生，減少疫病對動物的危害[16]。因此微生金肽素對維護動物健康及血液生化指標的影響效果明顯。

3 討論

通過微生金肽素飼喂試驗研究，微生金肽素可提高獺兔日增重，增加被毛密度與皮張面積，改善被毛品質(zhì)?；钚暂^強的有益菌在獺兔腸道內(nèi)占位并生長，抑制了有害菌的侵入和繁殖，促進腸道健康，提高免疫力。有益微生物在獺兔腸道和飼料中生長繁殖，代謝產(chǎn)生的維生素和酶等生物活性物質(zhì)，增強了消化系統(tǒng)對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和消化。其中，光合細菌能進行糖和淀粉的合成，乳酸菌將糖和淀粉生成有機酸并分解粗纖維，提高了飼料利用率；芽孢桿菌在獺兔小腸中下部生長，減少了小腸中的有機胺和硝態(tài)氮的含量，誘導腸道胰蛋白酶的分泌，提高蛋白消化率，促進動物體架的增大和皮張面積的改善，增強獺兔毛皮的光澤，改善毛皮品質(zhì)。

4 結(jié)論

4.1 微生金肽素能提高吉戎兔飼料的利用率，促進吉戎兔生長，但增重效果不顯著。

4.2 微生金肽素能增強吉戎兔皮毛光澤和被毛密度，改善毛皮品質(zhì)，但皮張面積無顯著差異。

4.3 微生金肽素能維持動物腸道菌群微生態(tài)平衡，增強動物免疫力，降低了動物發(fā)病率和病死率，對動物血液生化指標有顯著影響。

4.4 微生金肽素的適宜添加量為1.0‰。