惠鑫　王昊　郭洪?！×昼腓ぁW陽(yáng)夏荔　吳嘉威　于密密　趙百孝

摘要 目的：通過(guò)對(duì)艾絨的薄層色譜鑒別，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）成分分析，初步建立艾絨混偽品的鑒別方法。方法：將正品艾絨、混偽品艾絨加石油醚（60～90 ℃）加熱回流，蒸干后加環(huán)己烷溶解作為供試品溶液，另取艾葉對(duì)照藥材同法制備對(duì)照藥材溶液。吸取供試品溶液和對(duì)照溶液各2 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板和反向薄層色譜硅膠預(yù)制板，于日光下及紫外光燈（365 nm）下檢視。采用GC-MS測(cè)定艾絨揮發(fā)油類(lèi)成分比較正品艾絨與艾絨混偽品的氣相色譜圖差異。結(jié)果：硅膠薄層色譜及C18反相薄層色譜均可在日光、紫外光燈（365 nm）下出現(xiàn)特異性斑點(diǎn)。氣相色譜圖顯示混偽品艾絨在揮發(fā)油類(lèi)成分含量上存在差異，且檢出了正品艾絨中沒(méi)有檢出的成分（十五烷、菊薁）。結(jié)論：采用硅膠薄層色譜、C18反相薄層色譜2種方法能較快、較準(zhǔn)確地鑒別艾絨混偽品，結(jié)果穩(wěn)定。GC-MS能夠檢測(cè)出混偽品艾絨的組分差異。

關(guān)鍵詞 艾絨；薄層色譜；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用；艾絨鑒別；艾灸；艾絨標(biāo)準(zhǔn)化；艾葉

Identification of Moxa Floss Adulterant

HUI Xin1，2，WANG Hao1，3，GUO Hongzhu4，LIN Minyu5，OUYANG Xiali1，WU Jiawei1，YU Mimi4，ZHAO Baixiao6

（1 School of Acupuncture-moxibustion and Tuina，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 2 Beijing Aerospace General Hospital，Beijing 100076，China; 3 The Sixth Medical Center of PLA General Hospital，Beijing 100037，China; 4 Beijing Institute for Drug Control，Beijing 102206，China; 5 International School，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 6 Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100007，China）

Abstract Objective：Thin layer chromatography （TLC） and gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS） were used to identify moxa floss adulterant.Methods：The authentic moxa floss and adulterant were heated under reflux with petroleum ether （60～90 ℃），evaporated to dryness，and then dissolved in cyclohexane to yield the test solution.The reference Folium Artemisiae Argyi was used to prepare the reference solution with the same method.A total of 2 μL of test solution and 2 μL of reference solution were respectively dripped on the same Merck TLC silica gel plate and reversed-phase TLC silica gel precoated plate and observed under sunlight and ultraviolet light （365 nm）.GC-MS was used to determine the volatile oil constituents of moxa floss and gas chromatograms of the authentic product and the adulterant were compared.Results：Silica gel TLC plate and C18 reversed-phase TLC plate showed specific spots under sunlight and ultraviolet light （365 nm）.According to the gas chromatograms，the content of volatile oil constituents was different between the authentic moxa floss and the adulterant and pentadecane and chamazulen which were found in the adulterant failed to be detected in authentic moxa floss.Conclusion：Silica gel TLC and C18 reversed-phase TLC can quickly and accurately distinguish moxa floss adulterant，with stable result.GC-MS can be used to detect the differential components in the adulterant.

Keywords Moxa floss; TCL； GC-MS; Identification of moxa floss; Moxibustion; Standardization of moxa floss; Folium Artemisiae Argyi

中圖分類(lèi)號(hào)：R282.5;R245.81文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2023.02.005

艾絨，作為艾灸療法應(yīng)用最廣、療效穩(wěn)定的首要灸材，其質(zhì)量?jī)?yōu)劣直接影響了艾灸療法的臨床效果［1-2］。艾灸療法因其操作簡(jiǎn)單、治療范圍廣，越來(lái)越受到人們的推崇，已廣泛應(yīng)用于內(nèi)科、外科、婦科等多種急慢性疾病的防治［3］。隨著艾灸療法的使用越來(lái)越普遍、市場(chǎng)需求越來(lái)越大，許多不良商家為謀求經(jīng)濟(jì)利益趁機(jī)以次充好、制假售假，造成諸多市場(chǎng)亂象。缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、嚴(yán)格有序的市場(chǎng)監(jiān)管，是造成這種亂象的重要原因之一。此外，當(dāng)前在全國(guó)范圍內(nèi)主要是以使用正品艾葉為主，艾葉所含有的成分具有多種生物活性［4-11］，但仍有地區(qū)將艾蒿、野艾蒿、魁蒿作為艾葉混用，菊科蒿屬多種植物也被少數(shù)地區(qū)混作艾葉使用，混偽品數(shù)量多達(dá)20余種［12］。若沒(méi)有豐富的藥材鑒別經(jīng)驗(yàn)很難把握真?zhèn)?，所以本?shí)驗(yàn)旨在建立艾絨薄層色譜鑒別方法，以期通過(guò)簡(jiǎn)便易行的薄層色譜手段方便快捷地進(jìn)行艾絨混偽品的鑒別。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Gas ChromatographyMass Spectrometer，GC-MS，Thermo Electron Corporation，美國(guó)，型號(hào)：TSQ Quantum GC）；HP-5MS毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）（Thermo Electron Corporation，美國(guó)，型號(hào)：HP-5MS）；Xcalibur處理軟件。

1.2 試劑與材料 水為去離子水，其他試劑均為分析純；石油醚（60～90 ℃）（分析純，北京現(xiàn)代東方精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號(hào)：20131013）；環(huán)己烷（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20160712）；甲醇（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170822）；三氯甲烷（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170216）；甲酸（88%）分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20150210）。硅膠薄層色譜預(yù)制板（Merck KGaA，德國(guó)，型號(hào)：HPTLC Silica gel RP-18）;C18反相薄層色譜預(yù)制板（MACHEREY-NAGEL，德國(guó)，型號(hào)：DC-Fertigplatten RP-I8W/UV254）。

1.3 分析樣品

實(shí)驗(yàn)選取正品艾絨來(lái)自湖北省蘄春縣，由李時(shí)珍國(guó)灸集團(tuán)（湖北）有限公司提供，采摘時(shí)間為2016年端午前后，加工比例為3∶1（30%）（即3 kg艾葉產(chǎn)出1 kg艾絨）。實(shí)驗(yàn)收集市售艾絨及艾條產(chǎn)品47份，年份比例來(lái)源均參照包裝標(biāo)示。見(jiàn)表1。

1.3.1 混偽品的鑒別 將47個(gè)市售艾絨、艾條樣品進(jìn)行混偽品鑒定。艾絨樣品由北京市藥品檢驗(yàn)所于密密副主任藥師鑒定。47份艾絨樣品中混偽品有6份，樣品編碼分別為S1-7、S1-8、S1-9、S1-11、S1-14、S3-4。樣品S1-8、S1-9、S1-11、S1-14、S3-4絨色偏土黃，無(wú)艾葉的清香氣味，絨質(zhì)短且松散，粉末較多，不易成團(tuán)，且用水蒸氣蒸餾法支管中加入環(huán)己烷提取稀釋后的揮發(fā)油呈黃色。有相關(guān)文獻(xiàn)記載西安地區(qū)的某些野菊［13］、山東德州產(chǎn)蒙古蒿為黃色［14］，初步認(rèn)為此類(lèi)“艾絨”是由野菊或蒙古蒿葉片制成。樣品S1-7絨色質(zhì)與普通艾絨差別不大，但夾雜濃烈的青草氣味。采用水蒸氣蒸餾法支管中加入環(huán)己烷，提取稀釋后的揮發(fā)油溶液呈寶藍(lán)色，有文獻(xiàn)記載濟(jì)菊［15］、苦艾［16］、白蒿［17］、野艾蒿等揮發(fā)油也呈藍(lán)色，而薁類(lèi)成分菊薁是令揮發(fā)油呈藍(lán)色的主要組分［18］。初步認(rèn)為該類(lèi)艾絨可能是摻雜有與艾葉同科屬含薁類(lèi)成分的近親植物。

1.3.2 樣品的選擇 1）薄層色譜法：選取鑒別出的混偽品S1-7、S1-8、S1-9、S3-4、S1-11、S1-14作為供試品；選取湖北蘄春產(chǎn)2016年3∶1艾絨作為正品供試品，另取艾葉對(duì)照藥材。2）GC-MS法：選取鑒別出的混偽品S1-7、S1-8、S1-11、S1-14，湖北蘄春產(chǎn)2016年3∶1艾絨作為正品對(duì)照。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別法

2.1.1 薄層色譜法供試品溶液的制備 1）取艾絨2 g，置入錐形瓶中，加入石油醚（60～90 ℃）30 mL，置水浴上加熱回流30 min，濾過(guò)，濾液揮干，揮干后的殘?jiān)迎h(huán)己烷1 mL使溶解，作為供試品溶液［19］。2）取艾葉對(duì)照藥材2 g（批號(hào)：121345-201002），同上法制成對(duì)照藥材溶液。

2.1.2 《中華人民共和國(guó)藥典》艾葉的薄層色譜鑒別 參照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-甲苯-丙酮（10∶8∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰［19］。置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，雖然各樣品與對(duì)照品相比均能顯相同顏色的主斑點(diǎn)，若按標(biāo)準(zhǔn)判斷，偽品也符合規(guī)定，故難以辨別真?zhèn)巍Ｒ?jiàn)圖1。

2.1.3 改進(jìn)艾絨混偽品鑒別方法與結(jié)果 1）硅膠薄層色譜法：吸取S1-7、S1-8、S1-9、S3-4、S1-11、S1-14的艾絨供試品溶液、艾葉對(duì)照藥材溶液、正品蘄艾絨各2 μL，分別點(diǎn)于同一Merck薄層色譜硅膠預(yù)制板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（8∶0.2∶1）為展開(kāi)劑，飽和30 min，展開(kāi)、取出，晾干。置日光下和紫外光燈（365 nm）下檢視。見(jiàn)圖2。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)位置上，日光下不應(yīng)出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)，紫外光下，在與對(duì)照藥材相應(yīng)位置上不應(yīng)出現(xiàn)亮藍(lán)色的斑點(diǎn)。由圖可見(jiàn)，日光下，S1-8、S1-9、S1-11、S3-4顯黃色斑點(diǎn)，S1-14顯淡黃色斑點(diǎn)，而正品供試品和對(duì)照藥材日光下不顯該顏色的斑點(diǎn)；紫外光燈（365 nm）下，S1-7在綠色主斑點(diǎn)下出現(xiàn)一藍(lán)色斑點(diǎn)。2）C18反相薄層色譜法：吸取艾絨供試品溶液、艾葉對(duì)照藥材溶液各2 μL分別點(diǎn)于同一反相薄層色譜預(yù)制板上，以甲醇為展開(kāi)劑。飽和30 min，展開(kāi)，取出晾干。置日光下和紫外光燈（365 nm）下檢視。見(jiàn)圖3。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)位置上，日光下不應(yīng)出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)，紫外光下，在與對(duì)照藥材相應(yīng)位置上不應(yīng)出現(xiàn)藍(lán)色的斑點(diǎn)。由圖可見(jiàn)，日光下，S1-8、S1-9、S1-11、S3-4顯黃色斑點(diǎn)，S1-14顯淡黃色斑點(diǎn)，而正品供試品和對(duì)照藥材日光下不顯該顏色的斑點(diǎn)；紫外光燈（365 nm）下，S1-9、S1-8出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，S1-14、S3-4、S1-11出現(xiàn)淡紅色斑點(diǎn)。

2.2 GC-MS方法鑒別混偽品揮發(fā)油類(lèi)成分

2.2.1 樣品制備 取艾葉適量，剪碎成約0.5 cm的碎塊，取2.5 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水250 mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器。自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，再加環(huán)己烷2 mL，然后連接回流冷凝管。將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸騰，加熱4 h，放冷，分取環(huán)己烷層置5 mL量瓶中，用環(huán)己烷多次洗滌支管及冷凝管，轉(zhuǎn)入同一量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 GC-MS分析條件 氣相色譜條件：載氣為氮?dú)猓?9.99%），流速0.6 mL/min；進(jìn)樣量為1 μL；前進(jìn)樣口溫度250 ℃；柱箱溫度50 ℃；不分流。程序升溫：起始溫度50 ℃，以3 ℃/min升至65 ℃，保持6 min，以1 ℃/min升至90 ℃，再以9 ℃/min升至150 ℃，以2 ℃/min升至170 ℃，保持1 ℃，最后以10 ℃/min升至250 ℃，保持2 min。質(zhì)譜條件：電離方式為EI源，檢測(cè)器溫度：250 ℃，傳輸線溫度：250 ℃，電離電壓100 eV，質(zhì)量范圍50～500 m/z全程掃描。質(zhì)譜檢索標(biāo)準(zhǔn)庫(kù)：NIST庫(kù)。

2.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 采用GC-MS方法，對(duì)艾絨揮發(fā)性成分進(jìn)行定性分析，比較色譜圖，大致可將以上混偽品分為3類(lèi)。比較正品艾絨，混偽品S1-7揮發(fā)油含量整體偏低，正品艾絨中含量較高的桉油精、龍腦、樟腦、丁香酚、石竹烯、石竹素在S1-7中均較低，且S1-7在52.59 min出現(xiàn)最高峰，GC-MS分析該物質(zhì)為菊薁（Chamazulen），又稱蘭香油薁，洋甘菊油萜，此中物質(zhì)為藍(lán)色油狀物，故S1-7樣品提取的揮發(fā)油呈藍(lán)色。見(jiàn)圖4。

比較正品艾絨，混偽品S1-11和S1-14揮發(fā)油含量整體偏低，正品艾絨中含量較高的桉油精、龍腦、樟腦、丁香酚，在2種混偽品中均較低，S1-11和S1-14揮發(fā)油呈黃色。見(jiàn)圖5。

比較正品艾絨，混偽品S1-8揮發(fā)油含量極低，正品艾絨中含量較高的桉油精、龍腦、樟腦、丁香酚在S1-8中均極低，石竹烯、石竹素含量偏低，但S1-8中有2種成分含量很高，經(jīng)GC-MS成分分析，一種為45.48 min出現(xiàn)的十五烷（Pentadecane），一種為52.57 min出現(xiàn)的菊薁，S1-8揮發(fā)油呈黃色偏綠。見(jiàn)圖6。

3 討論

艾絨是由艾葉經(jīng)加工制成的絨狀物，所以原材料艾葉及加工都影響著艾灸療法的臨床療效［20］。目前市面上銷(xiāo)售的艾絨花樣繁多，其中不乏一些以次充好的假冒偽劣產(chǎn)品。例如摻雜其他菊科植物莖葉用來(lái)制作艾絨，若沒(méi)有豐富的藥材鑒別經(jīng)驗(yàn)較難鑒別。本研究探索了操作簡(jiǎn)便、應(yīng)用廣泛的薄層色譜法鑒別艾絨混偽品，并采用GC-MS對(duì)正品艾絨及混偽品艾絨的氣相色譜圖進(jìn)行比較分析。2種方法均能較準(zhǔn)確地區(qū)分艾絨混偽品且結(jié)果穩(wěn)定，具有可行性。

《中華人民共和國(guó)藥典》雖然有記述艾葉的鑒定方法，但因艾絨不同于艾葉，艾絨的本草范圍更局限，艾絨的鑒別難度更大，采用藥典的薄層方法無(wú)法有效鑒別艾絨，故需建立新的艾絨薄層色譜鑒別方法［19］。本次實(shí)驗(yàn)分別探索了正相薄層色譜硅膠預(yù)制板和C18反相薄層色譜預(yù)制板2種方法進(jìn)行混偽品鑒別。這2種薄層色譜鑒別方法斑點(diǎn)清晰、特異性高，能快速分辨艾絨混偽品，同時(shí)其操作簡(jiǎn)便，展開(kāi)劑選擇簡(jiǎn)單、安全性好。2種薄層色譜快速鑒別方法的建立，可以提高檢驗(yàn)的效率，降低檢驗(yàn)的成本。此外，比較正品艾絨和混偽品艾絨，其色澤氣味均有差異，且水蒸氣蒸餾法提取到的揮發(fā)油也與正品艾絨有異，呈黃色、藍(lán)色等。通過(guò)GC-MS對(duì)艾絨揮發(fā)油類(lèi)成分進(jìn)行氣質(zhì)聯(lián)用分析，觀察正品艾絨與混偽品艾絨的揮發(fā)油類(lèi)成分可知，混偽品艾絨的揮發(fā)油含量種類(lèi)偏少，含量偏低，在揮發(fā)油呈黃色的艾絨中檢出含量較高的成分十五烷，揮發(fā)油呈藍(lán)色的艾絨中檢出含量較高的成分菊薁。

利益沖突聲明：無(wú)。

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（2021-12-27收稿 本文編輯：孫昊）

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究”重點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)（2019YFC1711900）；國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)委國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目（20170320-T-468）；國(guó)家自然科學(xué)基金——外國(guó)青年學(xué)者研究基金項(xiàng)目（81850410548）作者簡(jiǎn)介：惠鑫（1992.02—），女，博士，主治醫(yī)師，研究方向：艾灸標(biāo)準(zhǔn)化，E-mail：jeshui@126.com通信作者：趙百孝（1963.03—），男，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：艾灸標(biāo)準(zhǔn)化與艾灸作用機(jī)制研究，E-mail：baixiao100@vip.sina.com；于密密（1980.02—），女，碩士，副主任藥師，研究方向：中藥質(zhì)量控制，E-mail：123171052@qq.com