穆開朗，劉剛，劉育辰，李昌桔，李艷，阮玉蘭

貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025

近年來，國家高度重視中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展，多次強(qiáng)調(diào)發(fā)展中醫(yī)藥已經(jīng)上升為國家戰(zhàn)略、國家意志[1-2]，我國中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展的新格局也逐步形成且備受關(guān)注。而中藥材質(zhì)量參差不齊的問題在一定程度上制約了中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展[3-4]?？茖W(xué)的中藥質(zhì)量控制方法是中藥質(zhì)量均一、穩(wěn)定的有效保障，也是中醫(yī)藥高質(zhì)量發(fā)展和走向國際的基石。

中藥指標(biāo)性成分的選擇是中藥質(zhì)量控制研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。當(dāng)前，中藥質(zhì)量控制大多采用化學(xué)藥質(zhì)量控制方法，而中藥是通過多成分協(xié)同發(fā)揮藥效的[5-6]，以單一指標(biāo)作為對(duì)照評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量，顯然與中醫(yī)藥整體性特點(diǎn)不符，因此，多指標(biāo)整體中藥質(zhì)量控制成為具有中醫(yī)藥特色的中藥發(fā)展必然趨勢(shì)。針對(duì)此問題，研究者對(duì)中藥質(zhì)量控制方法進(jìn)行了諸多研究，在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，從單一指標(biāo)向多指標(biāo)邁進(jìn)，先后提出了替代對(duì)照品法、一測(cè)多評(píng)法、中藥指紋圖譜、中藥特征圖譜等多指標(biāo)中藥質(zhì)量控制方法[7-11]，為體現(xiàn)中醫(yī)藥整體性特點(diǎn)的質(zhì)量控制方法提供了很好的思路，但在指標(biāo)成分定性、定量方面仍存在諸多問題[11-13]。

Xie 等[14]于2013 年提出應(yīng)用對(duì)照提取物進(jìn)行中藥質(zhì)量控制，對(duì)照提取物具有易于制備、專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)[15-16]，與中醫(yī)藥整體性的特點(diǎn)不謀而合[17-18]，可廣泛應(yīng)用于中藥多指標(biāo)定性、定量研究，為多指標(biāo)中藥質(zhì)量控制提供了新思路，使中藥質(zhì)量控制更具有實(shí)際意義。但近年來的應(yīng)用中也發(fā)現(xiàn)了很多不足[15,19]。本文就對(duì)照提取物的概況、發(fā)展及應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，在此基礎(chǔ)上對(duì)中藥對(duì)照提取物發(fā)展進(jìn)行展望，初步提出“有效對(duì)照提取物”這一提升概念，以期為中藥質(zhì)量控制研究科學(xué)化提供有益參考。

1 對(duì)照提取物的概念及優(yōu)勢(shì)

《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020 年版將對(duì)照提取物定義為經(jīng)特定提取工藝制備的含有多種主要有效成分或指標(biāo)性成分，用于中藥材（含飲片）、提取物、中成藥等鑒別或含量測(cè)定的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[20]，豐富了對(duì)照提取物的內(nèi)涵，增強(qiáng)對(duì)照提取物應(yīng)用于中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性。此外，對(duì)照提取物應(yīng)符合樣本基原明確（真實(shí)性）、不同中藥對(duì)照提取物特性明顯（專屬性）、評(píng)價(jià)同種藥材樣品基本特征或特性相同（一致性）、定性或定量特性隨時(shí)間恒定（穩(wěn)定性）等要求。

針對(duì)單味中藥或復(fù)方對(duì)其中的某一成分或君藥進(jìn)行測(cè)定來控制中藥質(zhì)量具有一定的片面性[21]，中藥及中藥復(fù)方成分復(fù)雜，根據(jù)中醫(yī)藥理論，中藥藥效的發(fā)揮是各個(gè)組分協(xié)同作用的結(jié)果[22]。因此，多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)對(duì)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立有重要意義，應(yīng)用對(duì)照提取物進(jìn)行中藥質(zhì)量控制具有以下優(yōu)點(diǎn)：1）對(duì)照提取物可以從整體角度反映中藥可檢測(cè)化學(xué)特征，從而確保中藥產(chǎn)品化學(xué)成分批間一致；2）對(duì)照提取物中的化學(xué)成分可以很容易地替代已知化學(xué)參考物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定，完整的化學(xué)特征可以提供更詳細(xì)的質(zhì)量評(píng)估；3）藥物有毒化合物制備成對(duì)照提取物，可大大減小其毒性，降低安全性風(fēng)險(xiǎn)，如烏頭堿類有毒成分制成單酯型/雙酯型烏頭堿對(duì)照提取物；4）對(duì)照提取物色譜峰的積分值可作為簡單的半定量分析，供藥材指標(biāo)成分的定量參考；5）對(duì)照提取物作為質(zhì)量控制參考物質(zhì)成本較低。目前，國內(nèi)外有關(guān)中藥對(duì)照提取物研制的品種和數(shù)量均較少，中藥質(zhì)量控制大多借鑒化學(xué)藥控制模式，但由于中藥成分復(fù)雜，中藥對(duì)照品制備技術(shù)要求高、成本高，難以大量生產(chǎn)。此外，部分中藥對(duì)照品不穩(wěn)定，給使用、儲(chǔ)存和運(yùn)輸造成困難。同時(shí)，多種化學(xué)對(duì)照品的使用使中藥質(zhì)量控制成本大幅提高，現(xiàn)實(shí)可行性不強(qiáng)[23]。相較于化學(xué)藥單一對(duì)照品和基于中醫(yī)藥整體性特點(diǎn)的對(duì)照藥材，對(duì)照提取物都具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，在對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行總結(jié)分析后[15-16,23-25]，總結(jié)出對(duì)照提取物、化學(xué)對(duì)照品、對(duì)照藥材各自特點(diǎn)（表1），在制備難易、成本、質(zhì)量控制指標(biāo)、批間重復(fù)性、定量準(zhǔn)確性、應(yīng)用難易方面對(duì)照提取物均有一定的優(yōu)勢(shì)，表明了其應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制具有較好的前景。

表1 化學(xué)對(duì)照品、對(duì)照藥材、對(duì)照提取物特點(diǎn)

2 對(duì)照提取物在中藥質(zhì)量控制中的研究現(xiàn)狀

2.1 《中國藥典》中收載對(duì)照提取物情況

《中國藥典》2005 年版首次收載11 種對(duì)照提取物，之后各版《中國藥典》逐漸增加對(duì)照提取物的收載數(shù)量，到《中國藥典》2020 年版共收載28 種對(duì)照提取物，表明對(duì)照提取物作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)有較大的發(fā)展?jié)摿20,26]。

《中國藥典》2020年版（一部）收載中藥2711種，分為藥材和飲片、植物油脂和提取物、成方制劑和單味制劑3 部分內(nèi)容。目前已將部分對(duì)照提取物應(yīng)用于中藥的各項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目中（表2）。其中成方制劑和單味制劑應(yīng)用對(duì)照提取物進(jìn)行質(zhì)量控制的品種最多，包括棗仁安神膠囊、棗仁安神顆粒、康萊特軟膠囊、云南白藥、云南白藥膠囊、前列通片、血塞通片、血塞通膠囊、血塞通顆粒、血栓通膠囊、注射用血塞通、注射用血栓通、血塞通注射液、血栓通注射液、血塞通軟膠囊、加味藿香正氣軟膠囊、香連片、烏靈膠囊、金水寶片、金水寶膠囊、地奧心血康膠囊、銀杏葉片、銀杏葉膠囊、銀杏葉滴丸、銀杏葉口服液、銀杏葉軟膠囊、養(yǎng)正消積膠囊、寬胸氣霧劑、八味檀香散、宮血寧膠囊30 種；植物油脂和提取物應(yīng)用對(duì)照提取物進(jìn)行質(zhì)量控制的品種包括人參莖葉總皂苷、八角茴香油、松節(jié)油、三七總皂苷、銀杏葉提取物、薄荷素油等；藥材和飲片應(yīng)用對(duì)照提取物進(jìn)行質(zhì)量控制的品種包括陳皮、功勞木、薏苡仁、檀香、羌活、川烏、馬錢子7種。對(duì)照提取物在《中國藥典》2020年版質(zhì)量控制項(xiàng)下以鑒別項(xiàng)應(yīng)用最多，含量測(cè)定、檢查、特征圖譜等質(zhì)量控制項(xiàng)應(yīng)用較少（表3），表明對(duì)照提取物作為標(biāo)準(zhǔn)參照物進(jìn)行中藥多指標(biāo)質(zhì)量控制還有較大的開發(fā)潛力，對(duì)照提取物在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用仍需進(jìn)一步完善與提升。

表2 《中國藥典》收載的28種對(duì)照提取物應(yīng)用情況

2.2 在國外的應(yīng)用概況

國外藥典中對(duì)照提取物（或?qū)φ罩苿┍欢x為二級(jí)參考物質(zhì)，必須有相應(yīng)的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)定期或定時(shí)對(duì)其進(jìn)行校準(zhǔn)。在國外藥典中天然產(chǎn)物質(zhì)量控制項(xiàng)下已被廣泛應(yīng)用[27-29]。自2004以來，歐洲藥品質(zhì)量管理局在天然產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究方面做了大量工作。目前，《歐洲藥典》第11版已使用對(duì)照提取物對(duì)多種天然藥物進(jìn)行定性鑒別，如圣約翰草對(duì)照提取物用于測(cè)定金絲桃素、偽金絲桃素總含量；越橘對(duì)照提取物用于測(cè)定總花青素含量；奶薊草（又名水飛薊）對(duì)照提取物用于測(cè)定水飛薊賓A、水飛薊賓B、異水飛薊賓A、異水飛薊賓B、次水飛薊素、水飛薊寧的總含量，以及水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊亭、水飛薊寧的含量[27]。

《美國藥典》第44版[28]中對(duì)照提取物大多應(yīng)用于薄層色譜法（TLC）鑒別測(cè)試及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)或某些峰的識(shí)別等，其中對(duì)照提取物不僅作為藥材色譜峰定位的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，也應(yīng)用于藥材提取物、揮發(fā)油、流浸膏等色譜峰的定位，對(duì)照提取物用于色譜峰定位在《歐洲藥典》第11版、《美國藥典》第44版中使用廣泛?！度毡舅幘址健返?8版[29]天然藥物鑒別主要采用理化鑒別，近1/3 的天然藥物無含量測(cè)定項(xiàng)。有薄層鑒別項(xiàng)的也僅選取1種或2種單一化學(xué)成分作為指標(biāo)，含量測(cè)定項(xiàng)也相對(duì)簡單，基本控制某些單一成分，質(zhì)量體系較為單一，缺乏整體控制指標(biāo)，無定量對(duì)照提取物應(yīng)用。由此可見，對(duì)照提取物作為一種標(biāo)準(zhǔn)參照物仍具有較大的開發(fā)利用潛力。

2.3 在中藥材及飲片質(zhì)量控制中的研究現(xiàn)狀

中藥材是中藥飲片的原料，是中成藥（復(fù)方制劑）的源頭。中藥材在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，經(jīng)過加工炮制后可直接用于調(diào)配或制劑的加工炮制品稱為中藥飲片，中藥材質(zhì)量的優(yōu)劣可一定程度上影響其加工炮制得到的中藥飲片質(zhì)量[30]，中藥飲片的質(zhì)量直接關(guān)乎中醫(yī)臨床療效。中藥材及飲片成分多樣且復(fù)雜，以單一化學(xué)對(duì)照品控制其質(zhì)量，所提供的信息遠(yuǎn)達(dá)不到整體質(zhì)量控制的目的，以對(duì)照提取物控制中藥材及飲片質(zhì)量可完善中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，解決部分中藥標(biāo)準(zhǔn)缺失和炮制前后成分改變而標(biāo)準(zhǔn)未變等問題。

Xie等[14]提出應(yīng)用對(duì)照提取物進(jìn)行中藥質(zhì)量控制之初，即對(duì)酸棗仁、浙貝母2 種中藥應(yīng)用薄層鑒別、高效液相色譜法（HPLC）指紋圖譜分析，說明了對(duì)照提取物應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制的可行性。此后，國內(nèi)外研究者采用此方法對(duì)多種中藥材質(zhì)量進(jìn)行了更深入的研究。楊麗麗等[31]采用溶劑提取法、色譜分離法制備了枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物，以枳實(shí)中的代表性的成分蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷4 個(gè)成分為對(duì)照，對(duì)枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物含量進(jìn)行標(biāo)定，隨后分別以已知含量的枳實(shí)黃酮對(duì)照提取物和4個(gè)單體成分為對(duì)照，建立了枳實(shí)藥材HPLC含量測(cè)定方法，并對(duì)其中4 個(gè)成分含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果采用t檢驗(yàn)和相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明2 種方法無明顯差異。Wang 等[32]采用單一參考標(biāo)準(zhǔn)確定多化合物、對(duì)照提取物定量分析等方法，開發(fā)了十大功勞藥材中非洲防己堿、藥根堿、巴馬汀、小檗堿4 個(gè)生物堿的含量測(cè)定方法。將這些方法與外標(biāo)法進(jìn)行了綜合比較，結(jié)果表明采用對(duì)照提取物法可以準(zhǔn)確地完成定量。Jing 等[33]采用硅膠柱色譜、反相制備色譜法以隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA為指標(biāo)制備丹參對(duì)照提取物，并利用HPLC-二極管陣列檢測(cè)器（DAD）對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估。朱星宇等[34]自制了補(bǔ)骨脂對(duì)照提取物并采用HPLC 標(biāo)定了其中補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂甲素、補(bǔ)骨脂定、補(bǔ)骨脂乙素、補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚、補(bǔ)骨脂酚7 個(gè)成分的含量，并對(duì)12批補(bǔ)骨脂飲片7個(gè)成分含量進(jìn)行測(cè)定，然后與對(duì)照品測(cè)定法的結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果表明2種測(cè)定方法所得數(shù)據(jù)的RSD<3%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，相關(guān)文獻(xiàn)也分別利用此方法對(duì)女貞子飲片和五味子飲片質(zhì)量控制進(jìn)行了研究，均說明對(duì)照提取物應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制具有可行性[35-36]。

2.4 在中成藥質(zhì)量控制中的研究現(xiàn)狀

中成藥是現(xiàn)代醫(yī)藥的重要組成部分，在臨床防治疾病中起到關(guān)鍵作用[37-38]。中成藥組成藥味多、成分復(fù)雜，鑒別和質(zhì)量控制困難較大，僅用某一味味藥或單一成分難以體現(xiàn)整個(gè)制劑的藥效，也不符合中醫(yī)藥整體性觀念。因此，應(yīng)用對(duì)照提取物進(jìn)行中成藥質(zhì)量控制研究已迫在眉睫。針對(duì)此問題，國內(nèi)外研究者利用對(duì)照提取物法對(duì)中成藥質(zhì)量控制進(jìn)行了更加深入的研究，在查閱相關(guān)文獻(xiàn)后，對(duì)近10 年利用對(duì)照提取物進(jìn)行中成藥質(zhì)量控制情況進(jìn)行了總結(jié)分析（表4）。由表4 可知，對(duì)照提取物在中成藥質(zhì)量控制中已有較多研究，但研究內(nèi)容大多為含量測(cè)定方面，未能將對(duì)照提取物在中成藥成分定性、定量中的優(yōu)勢(shì)完全展現(xiàn)，對(duì)照提取物在中成藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用還需更加深入的研究。

表4 近10年對(duì)照提取物在中成藥質(zhì)量控制中的研究現(xiàn)狀

3 展望

3.1 加強(qiáng)對(duì)照提取物的研制，積極進(jìn)行對(duì)照提取物的應(yīng)用探索

目前，國內(nèi)外采用對(duì)照提取物進(jìn)行質(zhì)量控制的藥物品種數(shù)量較少，為降低中藥質(zhì)量控制成本，擺脫化學(xué)對(duì)照品價(jià)格高昂、種類有限的束縛，加強(qiáng)中藥整體質(zhì)量控制水平，推進(jìn)中藥國際化，應(yīng)大力開展同時(shí)標(biāo)識(shí)多個(gè)指標(biāo)成分的中藥對(duì)照提取物的制備研究，完善中藥整體質(zhì)量控制評(píng)價(jià)體系。對(duì)照提取物雖然在成分定性、定量上表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)，但目前對(duì)照提取物的應(yīng)用也多限于“一標(biāo)多測(cè)”的指標(biāo)性成分含量測(cè)定及部分中藥的薄層鑒別中，未能完全體現(xiàn)對(duì)照提取物的優(yōu)勢(shì)。因此，在進(jìn)行對(duì)照提取物研制的同時(shí)，要積極開展其應(yīng)用探索，在對(duì)照提取物對(duì)中藥質(zhì)量控制定性、定量的應(yīng)用基礎(chǔ)上，嘗試其由標(biāo)準(zhǔn)參照物向中藥固體/半固體制劑原輔料、注射劑原輔料、禽畜業(yè)抗病飼料輔料等領(lǐng)域的應(yīng)用探索。

3.2 強(qiáng)化對(duì)照提取物與作用功效的關(guān)聯(lián)性，深入開展“有效對(duì)照提取物”研究

中藥質(zhì)量控制最根本的目的是保障臨床用藥的安全性、有效性及穩(wěn)定性，因此，在保證用藥安全、穩(wěn)定最基本要求的基礎(chǔ)上，與藥效關(guān)聯(lián)的“有效”即成為了中藥質(zhì)量控制研究的關(guān)鍵。目前，對(duì)照提取物研究重點(diǎn)多為替代多個(gè)單一指標(biāo)成分的含量測(cè)定，而對(duì)中藥對(duì)照提取物的有效性未做深入研究，且多指標(biāo)成分是否可代表中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)也有待商榷。多指標(biāo)成分整體功效的有無，各指標(biāo)成分間的協(xié)同/拮抗作用，都是值得更進(jìn)一步研究。因此，對(duì)照提取物研制過程中應(yīng)增加對(duì)其有效性的探究驗(yàn)證，推進(jìn)中藥質(zhì)量控制研究從藥物-藥效基礎(chǔ)-指標(biāo)成分的重點(diǎn)控制模式，到藥物-藥效物質(zhì)群-有效對(duì)照提取物的整體質(zhì)量控制思路轉(zhuǎn)變，中藥“有效對(duì)照提取物”研究流程見圖1。借助現(xiàn)代化學(xué)物質(zhì)組學(xué)-代謝組學(xué)、譜-效關(guān)系學(xué)、生物學(xué)效應(yīng)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)等多學(xué)科、多領(lǐng)域交融，大力開展“有效對(duì)照提取物”研究，加強(qiáng)中藥標(biāo)準(zhǔn)參照指標(biāo)的代表性，促進(jìn)對(duì)照提取物向臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)變，加快中藥質(zhì)量控制體系的完善進(jìn)程，使對(duì)照提取物成為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參照物、臨床防治疾病的有效品。

圖1 中藥“有效對(duì)照提取物”研究流程

3.2.1 “有效對(duì)照提取物”的研制方法 中藥對(duì)照提取物是中藥質(zhì)量的參照物質(zhì)，在其研制過程中需遵循藥材基原準(zhǔn)確、提取工藝合理、指標(biāo)成分選擇科學(xué)、定量定性穩(wěn)定等基本要求。

3.2.1.1 藥材樣品來源 在對(duì)照提取物的研制過程中，藥材樣品應(yīng)具有充分的代表性，參照《中國藥典》2020 年版藥材及飲片研究的相關(guān)要求[20]，一般選取至少3 批符合《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GAP）要求栽培的優(yōu)質(zhì)道地藥材進(jìn)行對(duì)照提取物研制，對(duì)收集樣品進(jìn)行真?zhèn)?、道地等鑒別，可采用傳統(tǒng)性狀與中藥材DNA 條形碼分子鑒別等方法，以保障樣品基原的準(zhǔn)確性，從而確保對(duì)照提取物研制的可靠性。

3.2.1.2 指標(biāo)性成分的選擇 中藥質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分選擇是中藥質(zhì)量控制的核心環(huán)節(jié)，應(yīng)以效應(yīng)成分的辨識(shí)與確認(rèn)為基礎(chǔ)，凸顯傳統(tǒng)道地性，符合生產(chǎn)規(guī)范性，體現(xiàn)安全有效性，保證穩(wěn)定可控性，強(qiáng)化鑒別專屬性，彰顯內(nèi)在關(guān)聯(lián)性、綜合性[55]，在此基礎(chǔ)上，選擇化學(xué)結(jié)構(gòu)母核或極性相似的一類成分，如總皂苷、總生物堿等作為中藥對(duì)照提取物的指標(biāo)性成分。

3.2.1.3 提取工藝 對(duì)照提取物提取過程可按照天然藥物有效成分提取方法[19]。一般可采用傳統(tǒng)的溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、升華法、透析法等，也可采用新興的超臨界流體萃取、微波提取、超聲波提取、酶法提取、半仿生提取、破碎提取、空氣爆破、亞臨界流體萃取等方法。提取液經(jīng)濃縮后，含多糖、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等雜質(zhì)較多的，需要進(jìn)一步純化，可將濃縮液通過萃取、醇沉、酸堿沉淀等方法初步除雜，再經(jīng)硅膠、離子交換樹脂、大孔吸附樹脂、凝膠等柱色譜方法進(jìn)一步純化，必要時(shí)還可以采用中壓或高壓液相色譜進(jìn)行制備。

3.2.1.4 有效性驗(yàn)證 有效性驗(yàn)證是“有效對(duì)照提取物”區(qū)別于對(duì)照提取物的重要一點(diǎn)，也是對(duì)照提取物由標(biāo)準(zhǔn)參照物走向制劑原料的必要環(huán)節(jié)[4,56]。應(yīng)根據(jù)具體原藥材、飲片或成方制劑的特點(diǎn)，進(jìn)行有針對(duì)性的研究，同時(shí)，注重考察對(duì)照提取物與原料樣品之間的聯(lián)系，對(duì)結(jié)果與評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行科學(xué)分析，采用現(xiàn)代體內(nèi)外藥理、血清藥理、代謝組學(xué)、譜-效關(guān)系等驗(yàn)證，如中藥復(fù)方藥效學(xué)研究與藥動(dòng)學(xué)結(jié)合的濃度-效應(yīng)-時(shí)間研究、蛋白組學(xué)與基因芯片結(jié)合的分子-細(xì)胞-器官-整體研究等對(duì)對(duì)照提取物進(jìn)行有效性驗(yàn)證。

3.1.2.5 定性、定量方法 對(duì)照提取物在制備后需進(jìn)行定量賦值與定性鑒別等研究。一般采用紫外-可見分光光度法、HPLC、氣相色譜法（GC）、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）、GC-MS 等用于對(duì)照提取物的定量研究，通過考察多個(gè)單一對(duì)照品法測(cè)定多批樣品的含量測(cè)定結(jié)果與對(duì)照提取物含量測(cè)定結(jié)果的差異性，探討對(duì)照提取物代替多個(gè)單一對(duì)照品的可行性并進(jìn)行賦值[9,52,56]。為了對(duì)中藥材或其成方制劑進(jìn)行鑒別，需要對(duì)對(duì)照提取物進(jìn)行定性鑒別研究。與定量賦值研究類似，可采用標(biāo)準(zhǔn)TLC、標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜等進(jìn)行定性鑒別，通過與多個(gè)單一對(duì)照品的比較研究，確定可用于藥材或成方制劑的標(biāo)準(zhǔn)TLC 及標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜鑒別方法。

3.2.2 研究舉例

3.2.2.1 苗藥黑骨藤有效對(duì)照提取物的研制 黑骨藤系蘿藦科杠柳屬植物黑龍骨Periploca forrestiiSchltr.的干燥根或全株，現(xiàn)代研究表明，黑骨藤乙醇提取物的乙酸乙酯部位為其抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的有效部位。

本課題組對(duì)21 批基原明確的苗藥黑骨藤采用溶劑（乙醇）提取法，減壓濃縮后采用系統(tǒng)溶劑萃取法獲得乙酸乙酯部位，利用HPLC 對(duì)21 批黑骨藤樣品進(jìn)行含量測(cè)定并利用化學(xué)模式識(shí)別得到苗藥黑骨藤抗RA 有效部位中6個(gè)咖啡酰基奎寧酸類主要差異成分[58]。采用柱色譜法富集黑骨藤抗RA 有效部位中的6 個(gè)咖啡酰基奎寧酸類成分，制備其對(duì)照提取物，進(jìn)一步構(gòu)建膠原誘導(dǎo)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（CIA）大鼠模型，測(cè)定大鼠足趾厚度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)及大鼠血清促炎細(xì)胞因子[白細(xì)胞介素（IL）-6、IL-1β、和腫瘤壞死因子（TNF）-α]，觀察踝關(guān)節(jié)滑膜組織病理變化，驗(yàn)證黑骨藤抗RA 對(duì)照提取物的有效性，結(jié)果顯示黑骨藤抗RA對(duì)照提取物活性顯著，可減少CIA大鼠足趾腫脹、降低關(guān)節(jié)炎評(píng)分、改善滑膜組織病理學(xué)變化。最后成功利用黑骨藤有效對(duì)照提取物，采用超高效液相色譜法（UPLC）建立測(cè)定苗藥黑骨藤有效對(duì)照提取物（包括6 個(gè)咖啡?；鼘幩犷惓煞郑┖康姆椒?，并建立了其抗RA 功效的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。

3.2.2.2 白及藥材有效對(duì)照提取物的研制 白及為蘭科植物白及B1etilla striata（Thunb.）Reiehb.f.的干燥塊莖，《中國藥典》2020 年版首次收載了白及的定量分析方法，以單一指標(biāo)白及苷作為質(zhì)量控制指標(biāo)顯然不符合中藥多組分整體質(zhì)量控制觀，而白及中許多成分的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品存在制備困難、有價(jià)無市的情況。因此，采用“有效對(duì)照提取物”模式進(jìn)行白及藥材質(zhì)量控制至關(guān)重要。

本課題組利用UPLC-飛行時(shí)間質(zhì)譜法（UPLCQ-TOF/MS）、中藥指紋圖譜結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別等方法，對(duì)50 批基原明確的白及藥材樣品進(jìn)行成分鑒定與差異性成分分析，確定了白及藥材中一類特異性成分2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類化合物可作為白及藥材質(zhì)量控制指標(biāo)[59]。采用溶劑提取法經(jīng)減壓濃縮后得到白及藥材提取浸膏，利用大孔樹脂色譜分離純化、富集白及對(duì)照提取物。進(jìn)一步構(gòu)建大鼠出血模型，測(cè)定大鼠出血時(shí)間、凝血時(shí)間、血小板聚集率、凝血因子（血漿凝血酶原時(shí)間、凝血酶時(shí)間、活化部分凝血活酶時(shí)間、組織纖維溶酶原激活物、纖溶酶原激活物抑制劑-1）等指標(biāo)。結(jié)果顯示，白及對(duì)照提取物具有良好的止血效果，甚至在某些指標(biāo)上顯著優(yōu)于陽性對(duì)照藥品（云南白藥）。最后成功利用白及有效對(duì)照提取物，采用UPLC 建立了測(cè)定中藥白及對(duì)照提取物（包括4個(gè)2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類化合物）含量的方法，并建立了簡便易行的中藥白及質(zhì)量評(píng)價(jià)體系?；谏鲜鲅芯?，本課題組撰寫了白及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)增訂草案及起草說明。

4 結(jié)語

近年來，中醫(yī)藥發(fā)展得到國家政策的大力支持，同時(shí)，隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展和生活水平的提高，人民群眾健康需求也不斷增長，中醫(yī)藥發(fā)展迎來了一個(gè)嶄新的春天[60]。中醫(yī)藥現(xiàn)代化進(jìn)程也明顯加快，但由于中藥成分復(fù)雜，藥理作用依賴多組分、多靶點(diǎn)、多途徑實(shí)現(xiàn)，中藥質(zhì)量控制就成為了中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展亟待解決的關(guān)鍵問題之一。對(duì)中藥質(zhì)量控制方法逐步完善，由初級(jí)向更深層次邁進(jìn)，現(xiàn)代技術(shù)手段與方法也已經(jīng)取得了許多成果，從單一特征指標(biāo)性成分逐步向有效多指標(biāo)成分綜合評(píng)價(jià)過渡[61]。

對(duì)照提取物的應(yīng)用從整體性角度完善了中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，但目前國內(nèi)外對(duì)照提取物品種和數(shù)量較少，化學(xué)對(duì)照品在藥品質(zhì)量控制領(lǐng)域仍占據(jù)主導(dǎo)地位，國內(nèi)外均尚未建立完整的對(duì)照提取物評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)數(shù)據(jù)庫，對(duì)照提取物在醫(yī)藥領(lǐng)域作為一種標(biāo)準(zhǔn)參照物有著其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但標(biāo)準(zhǔn)建立困難，穩(wěn)定性、均一性難以控制等也是中藥質(zhì)量控制的重大挑戰(zhàn)?；趯?duì)照提取物的中藥“有效對(duì)照提取物”提升概念，為中藥質(zhì)量控制提出了新要求，同時(shí)也為中藥整體質(zhì)量評(píng)價(jià)帶來了新的思路。以類群成分專屬性為基礎(chǔ)，強(qiáng)化中藥質(zhì)量控制指標(biāo)與其功效的關(guān)聯(lián)性，促進(jìn)中藥質(zhì)量控制體系逐步完善，有利于健全中藥整體質(zhì)量控制體系，從而推動(dòng)實(shí)現(xiàn)中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化與國際化。