舒暢，潘志明，呂珍珍，張嫻

德陽市食品藥品安全檢驗(yàn)檢測中心，德陽市食品檢驗(yàn)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（德陽 618000）

蜂蜜是一種天然的甜味物質(zhì)，其主要成分為果糖和葡萄糖，富含多種維生素、礦物質(zhì)、氨基酸等，營養(yǎng)均衡，具有很高的食用、藥用、保健價(jià)值，是天然的滋補(bǔ)食品。因其口感好，食用方便，備受廣大人群的喜愛[1]。由于蜜蜂在生長、采集花蜜和花粉等活動(dòng)過程中不可避免地會(huì)接觸農(nóng)藥，從而引起蜂蜜中的農(nóng)藥殘留污染，給消費(fèi)者帶來健康風(fēng)險(xiǎn)[2]。據(jù)調(diào)查，全球超過75%的蜂蜜含有至少一種農(nóng)藥的殘留[3]。蜂蜜中農(nóng)藥來源主要有2種途徑：一是養(yǎng)蜂生產(chǎn)中使用殺螨劑引起的藥物殘留污染[4]；二是蜜蜂采集被農(nóng)藥污染的花蜜、花粉等遷移至蜂蜜中導(dǎo)致污染[5]。為保障消費(fèi)者的安全與利益，歐美各國及中國先后制定蜂蜜中農(nóng)藥的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，但是與歐盟和美國、日本、加拿大等發(fā)達(dá)國家相比，我國蜂蜜限量標(biāo)準(zhǔn)中限量值和農(nóng)藥種類還是個(gè)位數(shù)，農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)也還未成體系[6]。

針對(duì)蜂蜜農(nóng)藥殘留現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)、前處理方法及檢測技術(shù)進(jìn)行分析，以期為健全蜂蜜標(biāo)準(zhǔn)體系、為監(jiān)管部門、產(chǎn)業(yè)界及研究者提供借鑒和參考。

1 我國蜂蜜農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀

我國現(xiàn)行的GB 14963——2011《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)蜂蜜》是專門適用于蜂蜜的一項(xiàng)強(qiáng)制執(zhí)行國標(biāo)，其中對(duì)農(nóng)藥殘留限量的要求是“應(yīng)符合 GB 2763及相關(guān)規(guī)定”，但是GB 2763——2021《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》對(duì)蜂蜜中農(nóng)藥殘留并無限量要求。目前我國現(xiàn)行的對(duì)蜂蜜中農(nóng)藥殘留限量有要求的標(biāo)準(zhǔn)僅有兩部：NY/T 1243——2006《蜂蜜中農(nóng)藥殘留限量（一）》及GB 31650——2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》，限量指標(biāo)僅有四項(xiàng)。NY/T 1243——2006是2007年2月1日實(shí)施的一部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，其中規(guī)定了氟胺氰菊酯、氟氯苯氰菊酯和溴螨酯3種殺螨劑的限量，限量值分別為0.05，0.01和0.1 mg/kg。2020年4月1日實(shí)施的GB 31650——2019替代了農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》相關(guān)部分，刪除了蠅毒磷的限量標(biāo)準(zhǔn)，僅對(duì)氟胺氰菊酯和雙甲脒及其代謝物有限量要求，限量值分別為0.05和0.2 mg/kg。而且兩部標(biāo)準(zhǔn)中氟胺氰菊酯項(xiàng)目及限量值重復(fù)，四項(xiàng)限量指標(biāo)完全不能滿足當(dāng)下的市場需求。

1993年6月4日我國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)局發(fā)布了第一部蜂蜜中農(nóng)藥殘留檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 0213.1——1993《出口蜂蜜中殺蟲脒殘留量檢驗(yàn)方法 氣相色譜法》。從1993年起蜂蜜中農(nóng)藥殘留測定方法標(biāo)準(zhǔn)不斷更新，發(fā)展至今一共有二十二部，現(xiàn)行有效的共十一部（見表1）。

表1 現(xiàn)行有效蜂蜜中農(nóng)藥殘留檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)

從最初的一種檢測項(xiàng)目到如今的近五百種檢測項(xiàng)目，從早期的氣相色譜法，到如今的液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。但是，大部分標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布日期較早，而且存在不同程度的缺陷，比如GB/T 21169——2007《蜂蜜中雙甲脒及其代謝物殘留量測定 液相色譜法》等采用液液萃取方法之后直接上儀器測定，此方法操作簡便，但是蜂蜜基質(zhì)復(fù)雜，如果不凈化會(huì)出現(xiàn)基線高，雜質(zhì)峰多等情況，影響準(zhǔn)確度和精密度。又如農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告-7-2006 《蜂蜜中氟氯苯氰菊酯殘留量的測定 氣相色譜法》中利用HLB小柱凈化了樣品，然而缺乏對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的考慮，可能會(huì)出現(xiàn)回收率不理想的情況。再如GB 23200.7——2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 蜂蜜、果汁和果酒中497種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法》中樣品經(jīng)丙酮、二氯甲烷提取后采用多種固相萃取小柱洗脫，凈化效果好且考慮了基質(zhì)效應(yīng)，但該方法有機(jī)試劑用量較大，凈化過程消耗時(shí)間長，財(cái)務(wù)成本較高。因此還需開發(fā)更經(jīng)濟(jì)、更環(huán)保、更便捷的前處理方法。

2 蜂蜜中農(nóng)藥殘留檢測前處理方法

2.1 液液萃取法

液液萃?。↙LE）是根據(jù)物質(zhì)在2種不相溶的或微溶的溶劑中的溶解度的不同，使得目標(biāo)物從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中。隨著液液萃取技術(shù)的發(fā)展，液液萃取技術(shù)的類型也在越來越多，如鹽析輔助液液萃?。⊿HLLE）、分散液液微萃取技術(shù)（DLLME）等。DLLME是一種操作簡單、快速、富集效率高且有機(jī)溶劑用量少的環(huán)境友好型前處理方法。

方英立等[7]采用液液萃取技術(shù)，用4%硫酸鈉溶解蜂蜜，乙酸乙酯為提取液，進(jìn)行蜂蜜中六六六和滴滴涕的測定，回收率為85.5%~113.1%。梁宇等[8]采用液液萃取技術(shù)，用1%乙酸水溶解蜂蜜，再用乙酸乙酯萃取，測定蜂蜜中氯蟲苯甲酰胺殘留量，回收率為90.5%~105.9%。

呂冰等[9]用乙腈基于鹽析輔助液液萃取（LLE）交聯(lián)聚維酮（PVPP）凈化技術(shù)檢測分析蜂蜜中噻蟲胺、啶蟲脒、烯啶蟲胺、呋蟲胺、吡蟲啉、噻蟲嗪和噻蟲啉7種新煙堿類農(nóng)藥，7種組分平均回收率為84.8%~112.7%。并且采用已建立的方法對(duì)市售的66份蜂蜜樣品進(jìn)行檢測，啶蟲脒檢出15份，含量為0.20~13.44 μg/kg，吡蟲啉檢出25份，含量為0.10~4.83 μg/kg，噻蟲啉檢出2份，含量分別為0.14和0.18 μg/kg，噻蟲嗪檢出1份，含量為0.50 μg/kg。

王東等[10]使用乙腈為分散劑，三氯甲烷為提取劑，通過渦旋、離心使分析物富集到微量三氯甲烷中，采用氣相色譜-質(zhì)譜快速檢測蜂蜜中六六六（BHC）和滴滴涕（DDT）類農(nóng)藥殘留?；厥章蕿?1.0%~100.1%，最低檢測濃度均為20 μg/kg。

2.2 固相萃取法

固相萃取法（solid-phase extraction，SPE）是液固萃取和柱液相色譜結(jié)合的一種前處理方法，具有操作簡單、使用溶劑少、凈化效果好等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)是需要專門的固相萃取裝置。目前在蜂蜜農(nóng)藥殘留測定中常使用的SPE柱有HLB柱、氟羅里矽柱、氨基柱、PSA、C18吸附劑以及人工填充的SPE柱。

汪建妹等[11]將蜂蜜經(jīng)乙腈-水（8︰2）提取，用PRiME HLB柱凈化，超高相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析39種抗生素和25種農(nóng)藥，農(nóng)藥回收率在72%~115%。陳興蓮等[12]將蜂蜜樣品溶于純凈水中，加入氯化鈉和乙腈提取，使用添加PSA的氟羅里矽柱凈化，結(jié)果顯示六六六和滴滴涕平均回收率為70.2%~97.4%。

何麗君等[13]用15%氯化鈉水溶液溶解蜂蜜后，以1%甲酸乙腈進(jìn)行鹽析提取，并考察分散固相萃取法（DSPE）凈化填料PSA和C18粉末的用量，結(jié)果表明使用50 mg PSA和25 mg C18粉末可獲得較優(yōu)的凈化效果，回收率為73.9%~110.4%。張爍等[14]以10%氯化鈉溶液溶解蜂蜜，1%甲酸乙腈為萃取溶液，比較HLB固相萃取法和以50 mg PSA和50 mg C18為吸附劑的分散固相萃取法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DSPE和HLB柱2種凈化方法均無明顯的基質(zhì)增強(qiáng)或抑制效應(yīng)，但HLB柱洗脫較慢，繁瑣耗時(shí)。在加標(biāo)回收試驗(yàn)中，HLB柱法對(duì)毒死蜱的絕對(duì)回收率低于50%，而DSPE法對(duì)14種農(nóng)藥的絕對(duì)回收率在80.3%~112.7%，故試驗(yàn)采用DSPE法。

楊青等[15]采用乙酸乙酯為萃取溶劑，乙酸乙酯-正己烷（1︰1）為洗脫劑，利用自制的硅膠固定化聚硅氧烷離子液體材料填充萃取柱，運(yùn)用氣相色譜ECD檢測器測定蜂蜜中6種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留，相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999，回收率在76.4%~104.0%，SRSD在3.52%~11.38%。He等[16]以馬拉硫磷為模板，甲基丙烯酸縮水甘油酯為親水共聚單體，首次制備新型分子印跡聚合物，并作為固相萃取柱內(nèi)的吸附劑，對(duì)馬拉硫磷、環(huán)磷辛烷、甲拌磷、叔丁磷、樂果和芬胺磷6種農(nóng)藥進(jìn)行萃取，結(jié)果表明：其萃取能力與商用萃取柱相當(dāng)，將該柱與氣相色譜法聯(lián)用檢測蜂蜜中農(nóng)藥殘留，方法線性范圍為0.01~1.0 μg/mL，檢出限為0.000 5~0.001 9 g/mL，SRSD為2.26%~4.81%，相對(duì)回收率為90.9%~97.6%。

2.3 QuEChERS法

QuEChERS（Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged and Safe）法是在固相萃取法基礎(chǔ)上發(fā)展起來由美國化學(xué)家Steven J.Lehotay和德國Michelangeio Anastassiadas提出的，具有快速、簡便、廉價(jià)、高效、耐用和可靠等特點(diǎn)，同時(shí)所需溶劑需要量少、污染低[17]。QuEChERS法采用的凈化劑主要有PSA粉末、C18粉末和石墨化碳黑（graphitizedcarbon black，GCB）粉末3種。蜂蜜主要的干擾物質(zhì)來自于糖類、有機(jī)酸，PSA可有效去除樣品基質(zhì)中的糖類、脂肪酸、酚類、有機(jī)酸等干擾物質(zhì)及部分極性色素[18-19]。

劉建輝等[20]稱取蜂蜜樣品用超純水浸泡溶解，加乙腈和氯化鈉提取，旋蒸濃縮后再次使用乙腈復(fù)溶，加入QuEChERS分散式固相萃取試劑盒（50 mg C18、50 mg PSA、7.5 mg GCB、150 mg MgSO4），測得氟胺氰菊酯回收率為92.00%~93.40%。李燕妹[21]用水充分溶解蜂蜜樣品，加入氯化鈉和乙酸乙酯提取，對(duì)比Carb/PSA固相萃取柱和QuEChERS法（只含PSA粉末），結(jié)果顯示2種凈化方法效果差別不大，15種農(nóng)藥回收均落在80%~110%之間，但考慮到QuEChERS法方便快捷、價(jià)格低廉、適用面廣，故采用QuEChERS法凈化蜂蜜樣品。樊艷等[22]采用不同的QuEChERS提取鹽包（a為4 g硫酸鎂、1 g乙酸鈉；b為4 g硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉、0.5 g三水合二檸檬酸二鈉；c為4 g硫酸鎂、1 g氯化鈉）和不同凈化劑（a為硫酸鎂、PSA、C18；ab為硫酸鎂、石墨化碳黑、PSA、C18）對(duì)溶解后的蜂蜜進(jìn)行提取、凈化，經(jīng)鹽包b提取后伏殺硫磷回收率超過120%，鹽包c(diǎn)提取后氧樂果、樂果、甲基毒死蜱回收率低于80%，樣品經(jīng)凈化劑b凈化后甲基毒死蜱、毒死蜱回收率低于70%，分析原因是石墨化碳黑對(duì)非極性農(nóng)藥具有較強(qiáng)的吸附性，使其不易被洗脫，故試驗(yàn)采用提取鹽包a（4 g硫酸鎂、1 g乙酸鈉）和凈化劑a（硫酸鎂、PSA、C18）。

3 蜂蜜中農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)

3.1 色譜法

3.1.1 氣相色譜

氣相色譜法具有樣品用量少、靈敏度高、準(zhǔn)確度高、分離性能好等特點(diǎn)，應(yīng)用范圍廣泛。氣相色譜法的缺點(diǎn)是汽化過程中某些不穩(wěn)定的農(nóng)藥產(chǎn)生熱降解，影響分析結(jié)果，因而不適用強(qiáng)極性化合物的測定。隋吳彬[23]運(yùn)用氣相色譜-火焰光度檢測器（GC-FPD）測定蜂蜜中滴滴涕、甲胺磷、甲拌磷等8種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留物。檢測限為0.021~0.100 μg/mL，平均回收率在81%~100%之間。李歡歡等[24]采用氣相色譜-電子捕獲器（GC-ECD）分析檢測襄陽產(chǎn)地蜂蜜中六六六和滴滴涕，檢出限為0.028~0.090 μg/kg，回收率為60.37%~115.98%，并且在蜂蜜樣品中有3種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢出，分別是α-666、β-666和γ-666，含量為0.27~0.80 μg/kg。

3.1.2 液相色譜

液相色譜法與氣相色譜法相比，靈敏度高，適用于沸點(diǎn)較高、分子量大、熱穩(wěn)定性較差的有機(jī)化合物檢測，但是液相色譜法因溶劑使用量大、分離度不夠等問題，應(yīng)用范圍受到部分限制[25]。于玲[26]采用超聲輔助分散液液微萃取技術(shù)結(jié)合高效液相色譜法測定蜂蜜中的溴氰菊酯，溴氰菊酯在10~1 000 μg/kg范圍內(nèi)線性良好，加標(biāo)回收率為82.6%~97.3%。蜂蜜樣品中溴氰菊酯的檢出限為8 μg/kg。該方法具有效率高、測試成本低及有機(jī)溶劑消耗量少等明顯優(yōu)勢(shì)，開辟對(duì)復(fù)雜基質(zhì)如蜂蜜中溴氰菊酯含量測定的新方法。

3.1.3 薄層色譜

薄層色譜（thin layer chromatography，TLC）是1950年由科學(xué)家Kirchner等根據(jù)被分離物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相中吸附的差異性來實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的分離提出的一種簡便的分析方法[27]。梁睿等[28]采用高效薄層色譜（HPTLC）法測定蜂蜜中吡蟲啉、噻蟲胺和噻蟲嗪3種新煙堿類殺蟲劑。3種農(nóng)藥在蜂蜜中添加回收率為71.58%~109.47%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.79%~14.23%，均滿足農(nóng)殘分析的基本要求。

3.2 聯(lián)用技術(shù)

3.2.1 氣質(zhì)聯(lián)用

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用具有氣相色譜高分離度和質(zhì)譜高準(zhǔn)確度、高靈敏度的特點(diǎn)，克服氣相色譜可能出現(xiàn)的假陰性或假陽性情況。在農(nóng)藥多殘留分析中得到廣泛應(yīng)用，可同時(shí)分析幾百種易揮發(fā)熱穩(wěn)定強(qiáng)的農(nóng)藥。鄭劍鋒等[29]采用HP-5MS色譜柱實(shí)現(xiàn)12 min內(nèi)完成蜂蜜中112種農(nóng)藥分析，112種農(nóng)藥組分的檢出限為0.002 mg/kg，回收率在68.4%~102%之間。該方法具有操作簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。張晶等[30]采用DB-5MS色譜柱同時(shí)測定蜂蜜中雙甲脒、2, 4-二甲基苯胺和氟胺氰菊酯的濃度，3種化合物的最低檢出濃度均為0.01 mg/kg，回收率為83.62%~109.75%。

3.2.2 液質(zhì)聯(lián)用

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)專屬性強(qiáng)、靈敏度高、檢出限低、分析效率高。朱之烔等[31]建立同時(shí)測定蜂蜜中9種苯并咪唑類和新煙堿類農(nóng)藥的全自動(dòng)固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。9種農(nóng)藥的檢出限和定量限分別為0.1~1.0 μg/kg，平均回收率在78.2%~101.2%之間。用該方法對(duì)實(shí)際30批蜂蜜樣品進(jìn)行檢測，多菌靈、吡蟲啉和啶蟲脒分別有不同程度檢出。其中多菌靈檢出17批，殘留量在5~10 μg/kg之間。吡蟲啉和啶蟲脒分別檢出13批和12批，檢出量分別為5~20 μg/kg和5~10 μg/kg。王思威等[32]利用高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜結(jié)合QuEChERS前處理技術(shù)，建立蜂蜜中未知農(nóng)藥殘留的非靶向快速篩查方法。結(jié)果共篩選出嘧菌酯、吡唑醚菌酯及其代謝物、苯醚甲環(huán)唑、多菌靈、毒死蜱、除蟲脲和滅幼脲8種農(nóng)藥，在1~1 000 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法檢出限為0.03~0.50 μg/kg，8種農(nóng)藥在蜂蜜中平均加標(biāo)回收率為81%~96%。并在實(shí)際樣品中吡唑醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑、除蟲脲檢出量分別為0.3~4.8，0.1~1.0和2.3 μg/kg。Wang等[33]采用QuEChERS前處理技術(shù)結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，檢測我國六盤山周邊的72個(gè)蜂巢及蜂蜜，其中蜂蜜中檢出氯蟲苯甲酰胺和噻蟲嗪。

3.3 其他方法

熒光光譜具有水分干擾小、靈敏度高、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。葛學(xué)峰等[34]利用穩(wěn)態(tài)熒光光譜儀對(duì)蜂蜜溶液中腐霉利的含量進(jìn)行了檢測和研究。結(jié)果表明，腐霉利用溶液在390 nm處有較強(qiáng)的熒光峰，并且腐霉利含量與熒光強(qiáng)度具有良好的線性關(guān)系，說明可以使用熒光光譜法判定純蜂蜜中是否有腐霉利農(nóng)藥殘留。

近年來發(fā)展的可視化蛋白芯片的檢測方法，可同時(shí)檢測多種藥物及有害物殘留。與傳統(tǒng)蛋白芯片法相比，具有可視化、直接用肉眼觀察芯片結(jié)果，大幅降低檢測成本，提高檢測效率，在農(nóng)藥殘留的現(xiàn)場快速檢測中有很好的發(fā)展前景。孟東等[35]建立可視化微陣列蛋白芯片法同時(shí)檢測蜂蜜中多菌靈、啶蟲脒、蠅毒磷3種農(nóng)藥殘留含量的分析方法。該方法對(duì)多菌靈、啶蟲脒、蠅毒磷的定量檢測范圍分別為0.4~6.4，0.3~4.8和0.75~12 ng/mL，檢測限分別為3.21，2.47和2.52 ng/mL，準(zhǔn)確度為83.6%~126.4%。

4 結(jié)語

隨著蜂蜜中農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)的完善與更新，前處理方法逐步向方便快捷、經(jīng)濟(jì)安全、高凈化、低污染的方向發(fā)展。檢測設(shè)備從單一的色譜法到多種手段聯(lián)用的方法提升，有效提高靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度。

我國是蜂蜜大國，斷然不可因?yàn)椴粔蛲晟频臉?biāo)準(zhǔn)體系影響國內(nèi)蜂蜜行業(yè)的發(fā)展及國際進(jìn)出口貿(mào)易。農(nóng)藥殘留是蜂蜜產(chǎn)業(yè)發(fā)展面臨的一項(xiàng)重要安全問題。研究蜂蜜中農(nóng)藥殘留前處理和檢測技術(shù)，對(duì)于評(píng)估蜂蜜風(fēng)險(xiǎn)、健全標(biāo)準(zhǔn)體系、保障人民健康、監(jiān)管蜂蜜產(chǎn)業(yè)、促進(jìn)貿(mào)易發(fā)展等都具有極其重要的意義。