佟雷, 林懿

(華僑大學 醫(yī)學院, 福建 泉州 362021)

近年來,外泌體(exosome)作為腫瘤診斷的生物標志物已逐漸成為研究熱點,它源于細胞內(nèi)吞系統(tǒng)中的多囊泡內(nèi)體,通過出芽、內(nèi)陷等形成球形、扁形的雙層磷脂膜結(jié)構(gòu)小體,并通過胞吐的形式分泌到細胞外.作為一種細胞間通訊的載體,外泌體以結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、攜帶信息量大、生物相容性好等特點在診療、預后、靶向藥物傳遞等腫瘤精準診療環(huán)節(jié)中顯示出極具潛力的臨床應(yīng)用前景.本文結(jié)合外泌體的結(jié)構(gòu)特點,從腫瘤診斷及靶向治療兩方面出發(fā),對外泌體的研究進展及臨床應(yīng)用前景進行綜述.

1 外泌體概述

外泌體是細胞分泌的直徑為40～100 mm級別的生物納米級球形脂質(zhì)雙分子層囊泡,大小均勻.外泌體在蔗糖密度梯度溶液中以質(zhì)量濃度為1.13～1.19 g·mL-1進行漂浮,大多數(shù)正常細胞和腫瘤細胞均以出芽方式進行分泌,特別是樹突狀細胞、淋巴細胞、上皮細胞等免疫相關(guān)細胞[1].外泌體的提取方法很多,除高速離心是金標準外,還包括超濾、免疫親和捕獲、基于電荷中和的聚合物沉淀、尺寸排阻色譜法和微流體技術(shù)等[2].

Johnstone[3]發(fā)現(xiàn)成熟紅細胞中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的形成與胞內(nèi)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體丟失有關(guān),為了與其他類型的細胞外囊泡區(qū)別,將其命名為外泌體.早期研究發(fā)現(xiàn)外泌體廣泛存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中,是細胞排出代謝廢物的一種簡單方法.

隨著不同類型的外泌體中分離出不同的核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì),人們已經(jīng)認識到外泌體在腫瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病等人類多種疾病中發(fā)揮重要作用.根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫的更新,外泌體內(nèi)容物包括9 769種蛋白質(zhì)、4 946種mRNA、2 838種miRNA和1 116種脂質(zhì).在表觀遺傳調(diào)控和腫瘤生物學行為中,已有大量研究發(fā)現(xiàn),多種腫瘤細胞外泌體攜帶的核酸、蛋白質(zhì)與腫瘤細胞信號通路的調(diào)控與腫瘤微環(huán)境的改變有著密切的關(guān)系.

外泌體內(nèi)容物與不同類型腫瘤生物學功能的關(guān)系,如表1所示.

表1 外泌體內(nèi)容物與不同類型腫瘤生物學功能的關(guān)系

外泌體內(nèi)容物可以作為腫瘤的抑制或促進因子,調(diào)節(jié)細胞增殖和遷移,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),以及血管生成和轉(zhuǎn)移等,在腫瘤微環(huán)境的信息傳遞過程中發(fā)揮重要作用[4].與傳統(tǒng)血清腫瘤抗原生物標志物相比,外泌體獨特的表達模式及其內(nèi)容物的相對穩(wěn)定性使其成為腫瘤液體活檢的新候選物.

外泌體還可在免疫治療中作為免疫細胞激活物刺激抗癌免疫應(yīng)答,發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能,其獨特結(jié)構(gòu)也適用于靶向藥物傳遞系統(tǒng)的構(gòu)建,有助于實現(xiàn)抗腫瘤藥物的靶向傳遞[5].綜上,將外泌體作為一種新的臨床檢驗方式及治療手段應(yīng)用于腫瘤的診療具有極大潛力.

2 外泌體在不同類型腫瘤診斷中的應(yīng)用

2.1 胃癌(gastric cancer,GC)

GC作為消化系統(tǒng)最重要腫瘤之一,患者往往由于早期癥狀不典型而延誤病情,錯過最佳治療機會.因此,GC的早期診斷對提高患者的長期生存率至關(guān)重要.研究發(fā)現(xiàn),外泌體攜帶的內(nèi)容物,尤其是非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA),在GC診療方面都具有巨大潛力.Guo等[24]運用RNA的分離、合成方法及RT-PCR技術(shù),檢測循環(huán)外泌體中GC來源的外泌體lncRNA-GC1(早期、多階段),發(fā)現(xiàn)lncRNA-GC1與傳統(tǒng)臨床血清標志物CEA,CA72-4,CA19-9相比,在鑒別GC患者、GC癌前病變患者、特別是對于標準生物標志物陰性的GC患者中表現(xiàn)出更強的特異性和敏感性.Tang等[25]在不同腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(tumor node metastasis,TNM)分期的GC患者的臨床樣本中檢測circRNA表達譜,發(fā)現(xiàn)circ-KIAA1244在GC患者組織細胞、血漿中的表達水平均低于對照組,且GC組織來源的circ-KIAA1244在血漿中的表達水平降低與GC患者的TNM中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移行為負相關(guān),表明GC組織來源的circ-KIAA1244有望作為一種新型GC檢測生物標志物.

此外,一些外泌體攜帶的蛋白已被證實具有GC診斷價值.GC患者血清中GKN1濃度明顯低于健康人群和結(jié)直腸癌、肝細胞癌患者,提示其有可能成為GC特異性診斷標志物[26].外泌體在GC的進展中發(fā)揮重要作用,包括GC發(fā)生、轉(zhuǎn)移、耐藥等.紫杉醇耐藥GC細胞MGC803R通過產(chǎn)生含有過表達miR-155-5p的外泌體,抑制GATA結(jié)合蛋白3和p53誘導核蛋白1的表達水平,從而促進紫杉醇敏感GC細胞的EMT,降低紫杉醇化療敏感性[27].

2.2 結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)

CRC是另一種重要的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,其發(fā)病率在我國逐年呈上升趨勢,但臨床診斷上缺少除腸鏡外的有效早期診斷方法,外泌體的研究可能成為新的手段.Li等[28]發(fā)現(xiàn)CRC患者手術(shù)治療前,腫瘤組織和血漿外泌體中GPC1+蛋白表達水平明顯高于對照組,同時,檢測到血漿中miR-96-5p和miR-149表達水平降低,手術(shù)治療2個月后,3者指標均恢復正常.過表達miR-96-5p和miR-149可以明顯降低外泌體GPC1+的表達水平,說明血漿GPC1+外泌體的增加和血漿miR-96-5p和miR-149表達水平的減少可能是CRC診斷的特異性標志物和CRC治療的靶點.

此外,患者血清外泌體的檢測還與CRC的增殖、遷移及預后有顯著相關(guān)性,既包括miRNA[29],例如,miR-25-3p,miR-130b-3p,miR-425-5p表達水平的顯著上調(diào)與CRC的進展及轉(zhuǎn)移相關(guān),也包括長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA),例如,lncRNA GAS5與CRC細胞增殖、遷移、侵襲及預后顯著相關(guān),CRC中l(wèi)ncRNA GAS5低表達導致miR-221的表達水平升高,從而抑制了RECK mRNA表達水平,最終促進CRC細胞的遠處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和局部復發(fā)[30].

2.3 肺癌(lung cancer,LC)

LC是世界上最常見的癌癥,也是引起癌癥死亡的主要原因,主要包括小細胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)兩種類型,它們分別占LC的15%和85%.臨床上,LC患者組織活檢是常用的診斷標準,但由于組織采集的數(shù)量和時間的限制,且腫瘤具有異質(zhì)性,這種方法在時間性和準確性上還有缺陷,外泌體內(nèi)多種miRNA,ncRNA,蛋白質(zhì)的檢測均可能成為新的診斷標志.據(jù)報道,與正常對照組相比,NSCLC患者外泌體miRNA表達譜顯著改變,其中,血清外泌體miR-146a-5p,miR-486-5p表達水平上調(diào)可能是NSCLC早期診斷較好的生物標志物,而miR-320d,miR-320c和miR-320b過表達水平被認為是預測晚期NSCLC免疫治療療效的潛在生物標志物[31].同時,NSCLC細胞來源的外泌體lncRNA UFC1的高表達水平與腫瘤浸潤有關(guān),lncRNA UFC1通過與EZH2結(jié)合,并介導EZH2在PTEN啟動子區(qū)域的富集,使H3K27的三甲基化及PTEN的表達水平受抑制,進而促進NSCLC細胞的增殖、遷移和侵襲,為NSCLC診斷提供了一個潛在的標志物[32].此外,間變型淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)陽性NSCLC患者外泌體蛋白質(zhì)組Tim-3和Galectin-9表達水平降低提示其可用于NSCLC早期檢測[33].

除了可以作為診斷標志物以外,外泌體內(nèi)還包括一些與腫瘤治療相關(guān)的蛋白,包括表皮生長因子受體、生長因子受體結(jié)合蛋白等在NSCLC外泌體中高表達水平.奧西麥替尼是NSCLC的一線治療藥物,然而,大多數(shù)接受奧西麥替尼治療的患者一年內(nèi)易復發(fā),EGFR基因突變可能是誘發(fā)耐藥的重要因素.Wu等[34]通過構(gòu)建小鼠模型,證實奧西麥替尼可通過上調(diào)Rab GTPase (RAB17)促進外泌體EGFR的釋放,而含突變EGFR的外泌體通過癌細胞網(wǎng)格蛋白依賴的內(nèi)吞作用內(nèi)化,激活下游的PI3K/AKT和MAPK信號通路,誘導奧西麥替尼耐藥.

2.4 前列腺癌(prostate cancer,PCa)

血液中的外泌體lncRNAs有望成為對PCa診斷有效且無創(chuàng)的腫瘤診斷新生物標志物.明確腫瘤來源的外泌體lncRNAs的功能是了解其對癌癥鑒別診斷意義的先決條件.Wang等[35]通過建立雙抗體免疫親和系統(tǒng)研究lncRNA SAP30L-AS1,lncRNA SChLAP1在PCa中的表達模式和臨床意義,發(fā)現(xiàn)SChLAP1在PCa中的表達水平顯著高于健康和良性前列腺增生個體,而SAP30L-AS1在良性前列腺增生表達水平上調(diào),與前列腺特異性抗原(prostate-specific antigen,PSA)值呈正相關(guān).此外,PCa患者尿液中催化糖基化的酶表達異?？僧a(chǎn)生PCa特有的糖蛋白,測定PCa患者尿液中異常表達的糖蛋白量也有望作為另一種潛在的診斷方法.Fujita等[36]發(fā)現(xiàn)尿液中異常糖蛋白表達水平與PSA表達有關(guān)(PSA也是一種具有n-糖基化位點的糖蛋白),采用凝集素抗體酶聯(lián)免疫吸附法測定69名男性(20名活檢陰性的男性,49名PCa患者),與活檢陰性的男性相比,PCa患者的PSA表達水平明顯降低.

骨轉(zhuǎn)移是PCa晚期常見征象,此時,患者易發(fā)生病理性骨折,且在X線片上表現(xiàn)為成骨細胞增多.Yu等[37]發(fā)現(xiàn)外泌體miR-92a-1-5p是調(diào)節(jié)骨穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵介質(zhì),體外實驗表明,PCa細胞來源的外泌體通過直接靶向COL1A1下調(diào)I型膠原的表達水平,從而促進破骨細胞向成骨細胞分化.此外,PCa來源外泌體也顯著降低了I型膠原在體內(nèi)的表達水平.主要表現(xiàn)為破骨細胞的骨溶解,從而促進骨腫瘤生長.外泌體miR-92a-1-5p誘導破骨細胞分化,為PCa骨轉(zhuǎn)移提供了可能潛在的治療靶點.

2.5 膀胱癌(bladder cancer,BCa)

臨床上BCa的初步診斷包括膀胱鏡檢查、上尿道造影和尿液細胞學檢查.盡管特異性高,但這些檢測易導致尿路炎癥,經(jīng)常發(fā)生假陽性.另外,核基質(zhì)蛋白22和膀胱腫瘤抗原作為現(xiàn)有診斷性生物標志物,由于缺乏診斷特異性和敏感性,不適用低級別BCa[38],因此,迫切需要尋找BCa新分子靶點.近年來,隨著表觀遺傳和遺傳標記等技術(shù)取得重大進展,外泌體的ncRNA的標記主導了這一領(lǐng)域的研究.據(jù)報道,BCa患者中血清外泌體lncRNA PCAT-1的AUC(藥時曲線下面積)為0.753,尿液外泌體lncRNA PCAT-1的AUC分別為0.832和0.729,表明lncRNA PCAT-1表達水平與BCa有較強相關(guān)性.聯(lián)合生物標志物組可能比單一生物標志物更準確地診斷BCa.例如,BCa患者血液外泌體lncRNA PCAT-1,UBC1和SNHG16聯(lián)合的AUC為0.826,敏感性為80%,特異性為75%.尿液外泌體miR-139-5p,miR-136-3p和miR-19b1-5p的聯(lián)合應(yīng)用將AUC提高到0.903,敏感性提高到80%,特異性提高到88.2%[39-41].外泌體miR-4644是另一種促進細胞增殖的miRNA,Yan等[42]發(fā)現(xiàn)與非BCa患者相比,BCa患者血漿外泌體中miR-4644水平更高,其可直接靶向并下調(diào)UBIAD1的表達水平,進而刺激BCa細胞增殖.

2.6 其他系統(tǒng)腫瘤

卵巢癌(ovarian cancer,OC)患者的低生存率和低生活質(zhì)量的部分原因是缺乏早期診斷工具,既往研究認為miR-200f可作為診斷標志物,因為上皮性O(shè)C患者血液中miR-200f水平顯著升高[43].此外,最近的一項研究報道了上皮性O(shè)C患者血漿中外泌體miR-21,miR-100和miR-320的表達水平較高,而miR-16,miR-93和miR-126的表達水平較低,并揭示上皮性O(shè)C來源的外泌體miRNAs在刺激內(nèi)皮細胞血管生成的作用[44].近年來,中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病越來越受到重視,miR-1246在膠質(zhì)母細胞瘤(glioblastoma,GBM)患者的腦脊液中富集,腫瘤切除后表達水平降低,表明miR-1246可能是診斷GBM的一個新的生物標志物,靶向miR-1246的治療可能有助于抗GBM免疫治療[45].乳腺癌(breast cancer,BC)現(xiàn)已成為全球第一大癌癥,早篩查、早診斷仍是降低BC發(fā)病率和死亡率的關(guān)鍵措施,Risha等[46]通過Western blotting和高分辨率流式細胞術(shù)對BC衍生外泌體GLUT-1,GPC-1和ADAM10三種外泌體膜/表面蛋白進行驗證,結(jié)果表明,與正常組織相比,GLUT-1,GPC-1在BC組織膜表面表達水平較強,而ADAM10則在晚期BC患者或高級別BC組織中表達水平較高,可用于評估BC診斷和預后潛在的新型生物標志物.

3 外泌體在腫瘤治療中的應(yīng)用

3.1 腫瘤免疫治療

外泌體可能成為最有效的腫瘤疫苗、靶向抗原/藥物載體,在免疫治療方面具有很大的潛力.例如,CD8+T細胞來源的外泌體被發(fā)現(xiàn)能夠靶向和誘導腫瘤間質(zhì)細胞凋亡,促進自然殺傷(natural killer,NK)細胞的激活和增殖,從而誘導腫瘤退化[47].NK細胞來源的外泌體(NKEVs)在體內(nèi)外均發(fā)揮抗腫瘤活性.一方面,NKEVs可以通過與腫瘤或免疫細胞的相互作用促進癌癥治療,另一方面,NKEVs中的內(nèi)容物可反映癌癥患者NK細胞實際狀態(tài).Federici等[48]開發(fā)了一種基于NKEVs的免疫酶檢測方法(NKExoELISA)檢測血漿NKEVs,發(fā)現(xiàn)參與細胞毒性、淋巴細胞歸巢、細胞粘附和免疫激活的NKEVs高表達腫瘤抑制因子101(tsg101),CD81,CD63和CD9,提示這些標記物有望成為檢測NK細胞免疫功能的指標.另外,免疫調(diào)節(jié)研究發(fā)現(xiàn),NKEVs可刺激外周血單核細胞增殖,誘導單核細胞上人類白細胞抗原DR亞型和共刺激分子的表達,同時,NKEVs還增加了CD56+NK細胞的表達比例,促進免疫應(yīng)答.因此,NKEVs可能對癌癥治療發(fā)揮重要作用.

細胞毒性T細胞(cytotoxic T cell,CTL)與MHC I的親和力對控制細胞內(nèi)病原體和腫瘤發(fā)生發(fā)展具有重要意義.Wu等[49]發(fā)現(xiàn)高親和力CTL分泌的外泌體IL-12可以在不需要抗原的刺激下促進低親和力CTL的快速激活,從而提高機體的免疫防御功能.同時,IL-12外泌體也激活CD8+T細胞產(chǎn)生IFN-γ和顆粒酶B,并最終誘導宿主細胞凋亡.這些結(jié)果揭示了CTLs完全激活低親和力CTL的潛在機制,可能對提高低親和力CTL在癌癥和慢性病毒感染免疫治療中的功能具有重要意義.

CD4+輔助T細胞(CD4+Th)表面標志物主要為CD4,CD4與抗原提呈細胞表面的MHC Ⅱ結(jié)合時,可激活免疫應(yīng)答.從CD4+Th分離的外泌體包含外泌體相關(guān)蛋白(LAMP-1,TCR和LFA-1)和CD4+T細胞標記物(CD4,TCR,LFA-1,CD25和FasL),在外泌體中過表達這些蛋白及標記物可能促進細胞毒反應(yīng)和抗腫瘤免疫的發(fā)生[50].

有研究表明,外泌體DNA(ExoDNA)可能來源于在細胞質(zhì)中積累的細胞核和線粒體受損DNA,ExoDNA可通過旁分泌作用激活胞質(zhì)STING/cGAS通路并激活免疫細胞.既可以調(diào)節(jié)腫瘤免疫,又可以作為檢查點免疫治療的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[51].NK細胞對轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤或血液系統(tǒng)惡性腫瘤可表現(xiàn)出快速的免疫反應(yīng).Zhu等[52]證實了NK細胞來源的外泌體(exosomes derived from NK cells,NK-exo)膜上FasL的表達,其對黑色素瘤細胞具有良好的殺傷作用.同時,通過BLI和CCK-8試驗證實NK- Exo對小鼠黑色素瘤細胞具有良好的體外抗腫瘤作用,且對正常細胞無明顯影響.

3.2 腫瘤靶向治療

外泌體作為一種具有獨特靶向功能的“納米顆?！鄙锬遗?本身具有裝載多種生物小分子和大分子的能力,并且可以在體內(nèi)進行運輸,可以成為良好的天然藥物傳遞載體,已有研究將其進行多種修飾,用于腫瘤的靶向治療中.有研究表明,可溶性FMS樣酪氨酸激酶-1(soluble FMS-like tyrosine kinase-1,sFlt-1)在許多癌癥中通過抑制血管生成發(fā)揮抗腫瘤活性.基于此,Hao等[53]設(shè)計了一種用于裝載sFlt-1外泌體,為探索潛在的NSCLC治療方法進行體內(nèi)外測試,sFlt-1通過抑制NCI-H69腫瘤異種移植體的生長增加腫瘤凋亡,發(fā)揮顯著抗腫瘤活性,并抑制腫瘤細胞增殖.此外,在胰腺導管腺癌免疫治療的研究中,Zhou等[54]構(gòu)建了一種基于外泌體的雙傳遞生物系統(tǒng),該系統(tǒng)由骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)來源的外泌體、電穿孔加載的半乳糖凝聚素-9 siRNA(Galectin-9 siRNA)組成,表面由奧沙利鉑(OXA)前體藥包裹,作為免疫原性細胞死亡(ICD)的觸發(fā)因子.

OXA可逆轉(zhuǎn)M2樣腫瘤相關(guān)巨噬細胞的腫瘤免疫抑制作用,而BM-MSC外泌體通過靶向Galectin-9/dectin 1軸可增加藥物在腫瘤部位的積累,發(fā)揮腫瘤殺傷作用.這種外泌體修飾的抗腫瘤藥物通過抑制腫瘤周圍巨噬細胞極化、細胞毒性T淋巴細胞募集、下調(diào)調(diào)節(jié)性T細胞表達水平等途徑誘導抗腫瘤免疫的療法被稱為iEXO-OXA聯(lián)合療法,其在腫瘤治療中已取得顯著療效.miR-21在多種腫瘤細胞中表達水平均出現(xiàn)顯著異常,其在多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用.Wang等[55]將外泌體靶向治療與化療、基因、光熱療法結(jié)合起來,設(shè)計了一種裝載有模型抗癌藥物內(nèi)化阿霉素(doxorubicin,DOX)和磁性納米顆粒的外泌體,且外泌體內(nèi)含有能夠靶向腫瘤周圍miR-21的分子信標,這些磁性納米顆粒通過外部磁場引導至腫瘤富集miR-21的部位.當外泌體聚集在腫瘤部位后,應(yīng)用近紅外輻射誘導局部熱療,并誘導外泌體包裹的DOX的釋放.釋放的分子信標可以靶向miR-21進行成像和基因沉默,同時,釋放的DOX可以殺死約91.04%癌細胞.誘導腫瘤細胞的鐵死亡有助于增強抗腫瘤免疫效果,而黑素細胞瘤分泌的外泌體PD-L1具有免疫抑制作用.在這種情況下,Zhao等[5]設(shè)計了由外泌體抑制劑(GW4869)和鐵死亡誘導劑(Fe3+)組裝成的納米單元,通過靶向下調(diào)外泌體PD-L1表達水平,誘導黑色素瘤細胞的鐵死亡,解除黑素瘤細胞對機體的免疫抑制,從而提高全身抗腫瘤免疫應(yīng)答.上述研究表明,以外泌體為載體構(gòu)建的靶向藥物模型,以及配合多模式治療有望成為精準腫瘤納米藥物開發(fā)的新方向.

4 結(jié)論

外泌體與多種腫瘤的生物學行為有密切聯(lián)系,核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等可通過外泌體內(nèi)容物形式傳遞至受體細胞并激活相應(yīng)信號通路調(diào)控腫瘤細胞生物應(yīng)答,這種外泌體介導的反應(yīng)可以促進或抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,在各類型腫瘤的診斷和預后等方面都具有良好應(yīng)用前景.因外泌體膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性及體液中分布廣泛性,以其為基礎(chǔ)的液體活檢有望成為未來腫瘤診斷的重要手段.在治療方面,與外泌體內(nèi)容物相關(guān)的信號通路可能作為一種更安全、更有效的腫瘤免疫治療的手段.同時,外泌體可被設(shè)計成用于遞送不同藥物的載體,包括siRNA、反義寡核苷酸、化療藥物等,這種設(shè)計可以比其他合成載體更有效、更有針對性地作為抗腫瘤藥物的靶向載體.

雖然外泌體具有很多特異性的優(yōu)勢,但仍需克服諸多難題.一方面,由于外泌體的分離提純?nèi)源嬖谝恍├щy,故外泌體的診斷在腫瘤患者中的臨床應(yīng)用證據(jù)不足.首先,目前大多數(shù)外泌體是從血漿等體液或細胞培養(yǎng)的上清液中分離出來,外泌體的產(chǎn)量和純度受到限制;其次,目前外泌體診斷研究的標本量較少,但外泌體應(yīng)用于腫瘤早期診斷和治療的研究需要大樣本量的實驗數(shù)據(jù)支持,而且如何大量生產(chǎn)具有治療目的外泌體也是制約其臨床應(yīng)用的問題之一[56].此外,對外泌體分離提純始終未建立一套統(tǒng)一的標準,超速離心法、免疫親和捕獲法、聚合物沉淀法等都有所涉及,但無論何種方法都存在蛋白質(zhì)污染,使得研究人員數(shù)據(jù)互通和繼續(xù)研究存在障礙[57].另一方面,基于外泌體的免疫治療和靶向治療目前仍處于早期臨床試驗階段,對于這種新型藥物載體的生產(chǎn)和應(yīng)用,國際上尚無具體的管理指南[58].因此,在外泌體正式應(yīng)用于臨床之前,應(yīng)解決基于外泌體的生物制藥的質(zhì)量分類和標準問題,并盡快制定具體臨床應(yīng)用指南,以確保外泌體治療的安全性.總之,外泌體在腫瘤診療中的應(yīng)用具有巨大的潛力和廣闊的前景,但在基于外泌體的治療被臨床廣泛應(yīng)用之前,還需要大量的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究.