徐金銘, 常毅洪, 龔 涵, 龔文芳, 袁德義

(中南林業(yè)科技大學 林學院,湖南 長沙 410004)

油茶(CamelliaoleiferaAbel.)是山茶科山茶屬常綠小喬木,是我國南方特有的重要木本油料樹種,與油棕、油橄欖和椰子并稱為世界四大木本食用油料植物[1]。在開花植物中,落在柱頭上的花粉萌發(fā)和花粉管在雌蕊組織中的生長是植物有性繁殖的關鍵[2]。授粉成功是雙受精的先決條件?；ǚ勐涞街^后,花粉會附著、水合并萌發(fā)花粉管[3]?；ǚ酃芡ㄟ^柱頭細胞和花柱向胚珠生長,來自胚珠的吸引信號引導花粉管沿著株柄生長并進入胚珠的珠孔,最后,花粉管在退化的助細胞中停止生長,然后破裂釋放出兩個精細胞進行雙受精[4]。體外花粉萌發(fā)提供了一種新的方法和策略來加速樹木育種的遺傳改良[5]。據(jù)報道,花粉萌發(fā)和花粉管生長會受到許多內(nèi)部和外部因素的影響[6]。影響花粉萌發(fā)的外在因素包括培養(yǎng)時間、溫度、濕度、培養(yǎng)基成分、pH值等[7-11],蔗糖、硼酸、激素、Ca2+、硝酸鈣、硝酸鉀和硫酸鎂等有機和無機物質(zhì)對花粉的體外萌發(fā)有影響[5,12-13]。此外,一氧化氮(NO)在植物發(fā)育過程中的許多生物和非生物脅迫中發(fā)揮著重要作用,包括花粉管生長[14]?；钚匝?reactive oxygen species,ROS)也調(diào)節(jié)植物的許多發(fā)育過程,如細胞增殖和分化、種子萌發(fā)、程序性細胞死亡、向地性、根毛發(fā)育、衰老等[15]。上述各物質(zhì)對油茶花粉萌發(fā)的影響鮮見報道。因此,本文探討了外源激素赤霉素(GA3)、生長素(NAA)、乙烯利(ETH)、礦質(zhì)元素(Ca2+、Mg2+)、一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)對油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長的影響,研究結(jié)果將為調(diào)控油茶花粉萌發(fā)提供理論依據(jù)和實踐指導。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料采于湖南省長沙市望城區(qū)中南林業(yè)科技大學油茶試驗基地。該地區(qū)氣候?qū)賮啛釒Ъ撅L氣候,年平均氣溫19.3 ℃,年平均降雨量1 380 mm,日照和熱量充足,雨量充裕。供試品種為‘華碩’。2020年11月采集花藥開裂前1～2 d的帶花枝條,置于室內(nèi)水培待用,含苞欲放時,用消毒的鑷子取出新鮮花藥置于硫酸紙袋中,放在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱烘12 h,再將散出的花粉收集起來放入醫(yī)用的潔凈青霉素小瓶中,于4 ℃冰箱保存待用[16-17]。

1.2 試驗方法

1.2.1 外源物質(zhì)濃度配置

采取瓊脂培養(yǎng)基萌發(fā)法[18],以100 g·L-1蔗糖、10 g·L-1瓊脂、0.1 g·L-1H3BO3作為花粉離體培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基(對照,CK)。配置不同質(zhì)量濃度的溶液,GA3、NAA、乙烯利各設置3個質(zhì)量濃度梯度,分別為0.5、5、50 mg·L-1;MgSO4設置3個質(zhì)量濃度梯度,分別為10、30、50 mg·L-1;CaCl2·2H2O設置3個質(zhì)量濃度梯度,分別為50、150、450 mg·L-1;EGTA(乙二醇二乙醚二胺四乙酸)設置4個濃度梯度,分別為200、400、600、800 μmol·L-1;SNP(硝普鈉)和L-NNA(N′-硝基-L-精氨酸)設置3個濃度梯度,分別為100、200、300 μmol·L-1;H2O2和NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)設置3個濃度梯度,分別為100、300、500 μmol·L-1。

1.2.2 花粉離體培養(yǎng)

參照文獻[19]的方法,在天平上稱取所需培養(yǎng)基材料,倒入錐形瓶中并依次標記,然后加入定量蒸餾水,加熱煮沸至內(nèi)容物充分溶解,室溫冷卻至50 ℃左右后,加入計算好的每種藥物母液的體積,用玻璃棒攪拌使藥物溶液與培養(yǎng)基充分混合,然后倒入培養(yǎng)皿中。當培養(yǎng)基變成固體后,用干凈毛刷蘸取少許花粉均勻撒于培養(yǎng)基表面,然后在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)2 h。每個處理設置3個重復。2 h后,使用BX-53顯微鏡(Olympus,Tokyo,Japan)監(jiān)測花粉萌發(fā)。每個樣品(培養(yǎng)皿)隨機選擇5個光場,每個光場包含不少于50個花粉粒[16,20]。之后,每隔2 h在顯微鏡下觀察花粉管長度,直至24 h?；ǚ勖劝l(fā)的標準是花粉管的長度超過花粉粒的直徑。

γ=(n/N)×100%。

式中:γ為發(fā)芽率,n為花粉萌發(fā)數(shù),N為花粉總數(shù)。

1.2.3 正交法優(yōu)化培養(yǎng)基成分

基于單因素試驗結(jié)果,選取對普通油茶花粉萌發(fā)影響較大的處理進行正交試驗,試驗因素水平見表1。以正交表L10(34)安排試驗,來確定花粉萌發(fā)培養(yǎng)基中各種組分的最佳濃度組合。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用圖像處理軟件Image J來測量花粉管長度;試驗數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 2016軟件整理,用Origin 2021軟件繪制圖表。使用SPSS 25.0軟件進行單因素方差分析(ANOVA),在P≤ 0.05時使用Duncan的多重比較評估平均值之間的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同外源物質(zhì)對花粉萌發(fā)和花粉管生長的影響

2.1.1 植物生長調(diào)節(jié)劑

植物生長調(diào)節(jié)劑的直接作用對普通油茶的花粉萌發(fā)和花粉管生長有影響(表2)。與對照組萌發(fā)率(54.78%)相比,隨著乙烯利質(zhì)量濃度的升高,花粉萌發(fā)率逐漸降低,50 mg·L-1乙烯利處理的花粉萌發(fā)率最低(4.37%)?；ǚ勖劝l(fā)率隨NAA質(zhì)量濃度升高先升高后下降,0.5 mg·L-1NAA處理的花粉萌發(fā)率(71.29%)顯著高于對照,50 mg·L-1NAA處理的花粉萌發(fā)率(2.86%)顯著低于對照。0.5、5 mg·L-1GA3處理的花粉萌發(fā)率與對照無顯著差異,50 mg·L-1GA3處理的花粉萌發(fā)率(4.90%)顯著低于對照。

表2 不同植物生長調(diào)節(jié)劑處理下油茶花粉萌發(fā)率與花粉管長度Table 2 Pollen germination rate and pollen tube length of C. oleifera under different plant growth regulator treatments

培養(yǎng)2 h后對照組花粉管長度為789.22 μm,50 mg·L-1乙烯利、NAA和GA3的培養(yǎng)基中,2 h后花粉管的平均長度最小,分別為202.59 μm、127.83 μm和357.95 μm,顯著小于對照。0.5、5.0 mg·L-1乙烯利處理的花粉管長度與對照組無顯著差異,0.5 mg·L-1NAA處理的花粉管長度顯著大于對照組,0.5、5.0 mg·L-1GA3處理的花粉管長度也顯著大于對照組。

根據(jù)單因素試驗的結(jié)果,選取每種植物生長調(diào)節(jié)劑促進或抑制效果最顯著的濃度(0.5 mg·L-1NAA、5 mg·L-1GA3和50 mg·L-1乙烯利)進行處理,不同處理的油茶花粉管長度見圖1。對照組在0～10 h花粉管生長最快,10 h后開始趨于緩慢,24 h花粉管長度為2 619.61 μm。50 mg·L-1乙烯利處理的花粉管生長十分緩慢,24 h的花粉管長度僅為392.21 μm。0.5 mg·L-1NAA和5 mg·L-1GA3處理的花粉管生長速率相近,0～12 h花粉管生長較快,12 h后開始趨于平緩,24 h花粉管長度分別為2 820.70、2 865.57 μm(圖1)。在適當?shù)臐舛确秶鷥?nèi),低質(zhì)量濃度的GA3和NAA促進油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長,而高濃度抑制,乙烯利的質(zhì)量濃度越高,油茶花粉萌發(fā)率越低,花粉管長度越小。

圖1 不同植物生長調(diào)節(jié)劑處理對油茶花粉管生長的影響Fig.1 Effects of different plant growth regulator on pollen tube growth of C. oleifera

2.1.2 礦質(zhì)元素

外源礦質(zhì)元素的直接作用對普通油茶的花粉萌發(fā)和花粉管生長有影響(表3)。與對照組萌發(fā)率(54.78%)相比,隨著MgSO4、CaCl2·2H2O和EGTA濃度的升高,花粉萌發(fā)率逐漸降低,其中10 mg·L-1MgSO4處理的花粉萌發(fā)率顯著高于對照組,50 mg·L-1MgSO4處理的花粉萌發(fā)率與對照組無顯著差異;50 mg·L-1CaCl2·2H2O處理花粉萌發(fā)率顯著高于對照組,450 mg·L-1CaCl2·2H2O處理的花粉萌發(fā)率顯著低于對照組;200 μmol·L-1EGTA處理的花粉萌發(fā)率與對照組無顯著差異,400～800 μmol·L-1EGTA處理的花粉萌發(fā)率顯著低于對照組。

培養(yǎng)2 h后,對照組花粉管長度為789.22 μm,花粉管長度隨著MgSO4、CaCl2·2H2O、EGTA濃度的提高而變小,10 mg·L-1MgSO4處理的花粉管平均長度最大,其次是50 mg·L-1CaCl2·2H2O處理,均顯著大于對照組;200～800 μmol·L-1EGTA 處理的花粉管長度顯著小于對照組。

根據(jù)單因素試驗結(jié)果,選取每種礦質(zhì)元素促進或抑制效果最顯著的濃度(10 mg·L-1MgSO4、50 mg·L-1CaCl2·2H2O、800 μmol·L-1EGTA、800 μmol·L-1EGTA+50 mg·L-1CaCl2·2H2O共培養(yǎng))進行處理,花粉管長度見圖2。對照組在0～10 h花粉管生長最快,10 h后開始趨于緩慢,24 h花粉管長度為2 619.61 μm。10 mg·L-1MgSO4和50 mg·L-1CaCl2·2H2O處理的花粉管生長速率相近,0～8 h生長速率最快,8 h后趨于緩慢,24 h花粉管長度分別為2 809.56、2 770.11 μm。800 μmol·L-1EGTA 處理的花粉管0～2 h生長最快,但整體速率緩慢,24 h花粉管長度為1 061.06 μm。800 μmol·L-1EGTA+50 mg·L-1CaCl2·2H2O共培養(yǎng)處理在0～8 h花粉管生長速率比800 μmol·L-1EGTA處理的速率快,24 h的花粉管長度為1 311.04 μm,這說明Ca2+可以減輕EGTA對花粉管生長的抑制作用。

圖2 不同礦質(zhì)元素處理對油茶花粉管生長的影響Fig.2 Effects of different mineral elements on pollen tube growth of C. oleifera

綜上,一定濃度的Mg2+和Ca2+促進油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長,但濃度不宜過高,濃度過高反而會抑制。EGTA的濃度越高,油茶花粉萌發(fā)率越低,花粉管長度越小。

2.1.3 化合物

SNP、H2O2和NAC處理均能降低花粉萌發(fā)率,且隨著濃度的升高,花粉萌發(fā)率逐漸降低;花粉萌發(fā)率隨著L-NNA濃度升高先升高后下降,200 μmol·L-1L-NNA萌發(fā)率最高,顯著大于對照組(表4)。

表4 不同化合物處理下油茶花粉萌發(fā)率與花粉管長度Table 4 Pollen germination rate and pollen tube length of C. oleifera under different compound treatments

培養(yǎng)2 h后,100～300 μmol·L-1SNP花粉管長度與對照組無顯著差異,200 μmol·L-1L-NNA處理的花粉管長度顯著大于對照組,100～500 μmol·L-1H2O2和NAC處理的花粉管長度均顯著小于對照組。

根據(jù)單因素試驗結(jié)果,選取每種外源化合物促進或抑制效果最顯著的濃度(300 μmol·L-1SNP、200 μmol·L-1L-NNA、500 μmol·L-1H2O2和500 μmol·L-1NAC)進行處理,花粉管長度見圖3。對照組在0～10 h花粉管生長最快,10 h后開始趨于緩慢,24 h花粉管長度為2 619.61 μm。300 μmol·L-1SNP、200 μmol·L-1L-NNA和500 μmol·L-1NAC處理的花粉管生長速率相近,均在0～6 h最快,之后略有降低,24 h的花粉管長度分別為2 410.99、2 726.66、2 253.19 μm。500 μmol·L-1H2O2處理的花粉管整體生長緩慢,24 h的花粉管長度為僅為878.71 μm,顯著低于對照組(圖3)。

圖3 不同化合物處理對油茶花粉管生長的影響Fig.3 Effect of different compounds on the pollen tube growth of C. oleifera

外源NO和ROS均能抑制油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長,且濃度越高,花粉萌發(fā)率越低,花粉管長度越小。這是否由于濃度設置過高,導致內(nèi)源性ROS的平衡被打破,花粉管生長受到抑制,還有待進一步考究。

從單因素試驗結(jié)果可以看出促進花粉萌發(fā)和花粉管生長的外源物質(zhì)為NAA、GA3、CaCl2·2H2O、L-NNA、MgSO4,但它們濃度過高會產(chǎn)生抑制作用;抑制花粉萌發(fā)和花粉管生長的外源物質(zhì)(EGTA、SNP、NAC、H2O2)的濃度越高,花粉萌發(fā)率和花粉管長度越小;因此,外源物質(zhì)的濃度對花粉萌發(fā)和花粉管生長有非常重要的影響。分析0～24 h 花粉管的長度可知,50 mg·L-1乙烯利、800 μmol·L-1EGTA處理對花粉管生長的抑制作用十分明顯,與對照組差異顯著。0.5 mg·L-1NAA、5 mg·L-1GA3、10 mg·L-1MgSO4、50 mg·L-1CaCl2·2H2O和200 μmol·L-1L-NNA處理的花粉管長度顯著大于對照組。

2.2 正交試驗結(jié)果

正交試驗設計與結(jié)果見表5和表6。油茶花粉培養(yǎng)2 h后,各處理組合的花粉萌發(fā)率和花粉管長度均大于對照組。由極差分析可知, 參試的4個因素對普通油茶花粉萌發(fā)的影響程度從大到小依次是CaCl2·2H2O、MgSO4、NAA、GA3。根據(jù)各因素水平均值k的大小,可得最佳萌發(fā)培養(yǎng)基組合是A1B1C1D1,即100 g·L-1蔗糖、10 g·L-1瓊脂、0.1 g·L-1H3BO3、50 mg·L-1CaCl2·2H2O、10 mg·L-1MgSO4、0.5 mg·L-1NAA、2 mg·L-1GA3,這一組合也存在于9個處理組合中,即處理1,萌發(fā)率也達到了最高值(表5)。值得一提的是,在萌發(fā)方面,處理1的配方中各種成分濃度都是最小的,因此,處理1還具有經(jīng)濟友好的優(yōu)勢。

表5 油茶花粉萌發(fā)的正交試驗結(jié)果Table 5 Orthogonal test results of pollen germination of C. oleifera

2 h后對照組的花粉管長度最短,為1 056.62 μm,由極差分析可知,參試的4個因素對油茶花粉管生長的影響大小依次為CaCl2·2H2O濃度>NAA濃度>MgSO4濃度>GA3濃度。根據(jù)均值k的大小可得,花粉管生長的最佳培養(yǎng)基組合是A1B1C1D3(表6),即100 g·L-1蔗糖、10 g·L-1瓊脂、0.1 g·L-1H3BO3、50 mg·L-1CaCl2·2H2O、10 mg·L-1MgSO4、0.5 mg·L-1NAA、8 mg·L-1GA3。

表6 極差分析結(jié)果Table 6 Results of range analysis

綜上可知,CaCl2·2H2O對油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長影響最大,GA3對油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長影響最小。4個因素對花粉萌發(fā)與花粉管生長都具有重要的影響,并且油茶花粉萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基配比和花粉管生長的最佳培養(yǎng)基配比不同。

3 討論

植物花粉的萌發(fā)是一個復雜的生理過程和形態(tài)過程,涉及花粉管的極性生長和管壁的構建,有許多因素參與花粉萌發(fā)和花粉管的生長過程,包括培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基pH值[7]、營養(yǎng)[8]、植物生長調(diào)節(jié)劑、濕度、溫度等[5,9-11,13]。

3.1 植物生長調(diào)節(jié)劑

許多與植物生長發(fā)育相關的生理過程都受到生長調(diào)節(jié)劑的影響[21]。曾令達等[22]研究表明,0.5～3.0 mg·L-1NAA對荔枝花粉萌發(fā)和花粉管生長有促進作用。本研究發(fā)現(xiàn),0.5 mg·L-1NAA促進油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長,而5 mg·L-1NAA抑制了花粉萌發(fā)。低濃度的NAA對植物花粉萌發(fā)的促進作用明顯,物種不同,NAA的促進作用也相近。Acar等[23]發(fā)現(xiàn),隨著GA3濃度的增加,雄性開心果的花粉萌發(fā)減少,薛曉敏等[24]研究表明,高濃度的GA3會導致桃花花粉萌發(fā)能力喪失。本研究中,50 mg·L-1GA3也表現(xiàn)出非常顯著的抑制作用,這與薛曉敏等[24]的研究結(jié)果一致。曾令達等[22]認為,20.0 mg·L-1乙烯利對荔枝花粉的萌發(fā)和花粉管生長具有抑制作用。劉才宇等[25]發(fā)現(xiàn),乙烯利對番茄和茄子的花粉萌發(fā)均有不同的抑制作用。本研究中,不同濃度的乙烯利對油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長均有抑制作用,且濃度越高抑制作用越明顯。說明乙烯利在不同物種上對花粉萌發(fā)和花粉管生長都表現(xiàn)出一定的抑制作用,濃度越高,抑制作用越明顯,造成花粉管破裂、變形、彎曲,不能正常生長發(fā)育。

3.2 礦質(zhì)元素

鎂在10～50 mg·L-1時,對花粉發(fā)芽和花粉管生長都有促進作用[26]。硫酸鎂為100、300 mg·L-1時甘蔗花粉萌發(fā)率較高,0、400 mg·L-1時甘蔗花粉萌發(fā)率處于較低水平[27]。本試驗中,10～50 mg·L-1MgSO4均可促進油茶花粉萌發(fā),并且10 mg·L-1MgSO4的促進效果最明顯,這與韓志強等[26]的研究結(jié)果一致。Mg2+對植物花粉萌發(fā)和花粉管生長有一定的作用,這與Mg2+的濃度密切相關,濃度的高低在不同物種上的促進作用差異較為明顯。

鈣是花粉萌發(fā)和花粉管生長的核心調(diào)節(jié)劑,它在花粉管生長的各個方面都發(fā)揮著重要作用[28]。EGTA作為鈣離子的特異性螯合劑,主要與細胞壁上的細胞外Ca2+螯合,抑制花粉管頂端的Ca2+流入[29]。已有研究表明,Ca2+可以影響許多植物的花粉萌發(fā)和花粉管生長[28,30]。適當濃度的Ca2+可促進花粉萌發(fā),EGTA可抑制花粉萌發(fā)和花粉管生長,而外源Ca2+可逆轉(zhuǎn)EGTA的抑制作用[31]。Zhan等[32]指出,在一定濃度下,Ca2+可以促進金合歡花粉萌發(fā)和花粉管生長,隨著濃度的增加,花粉的萌發(fā)率、花粉管長度均增加,但隨著Ca2+濃度的繼續(xù)增加,花粉的萌發(fā)率下降。本研究中,50、150 mg·L-1CaCl2·2H2O促進了花粉管的生長,而450 mg·L-1CaCl2·2H2O則抑制了花粉的萌發(fā),且CaCl2·2H2O是正交試驗4個因素中對油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長影響最大的因素。EGTA濃度越高,抑制作用越明顯,外源Ca2+可減輕EGTA對花粉管生長的抑制作用,這進一步驗證了Ca2+對花粉管的重要作用,這些結(jié)果與上述其他人的研究結(jié)果一致。也有研究表明,不同作物花粉離體萌發(fā)所需的Ca2+濃度差異極顯著,植物花粉萌發(fā)對Ca2+需求的差異可能是植物進化過程中對環(huán)境適應的結(jié)果,具體原因有待進一步的探究。

3.3 化合物

NO是一種參與生理過程的信號分子[33-34]。常溫下,SNP的施用抑制花粉萌發(fā)和花粉管生長,隨著SNP濃度的增加,抑制作用加強。NO抑制劑L-NNA處理可以減弱SNP處理對花粉萌發(fā)率和花粉管生長的抑制作用[35]。使用NO清除劑或NOS抑制劑降低花粉細胞中NO含量,導致花粉萌發(fā)和花粉管生長減少,并導致嚴重的形態(tài)異常[36]。Duan等[37]報道了擬南芥中由FERONIA控制的機制,其中第1個花粉管到達胚珠會觸發(fā)NO在絲狀器中的積累,從而改變胚珠的條件并抑制其他花粉管的進入。本研究發(fā)現(xiàn),100、200、300 μmol·L-1SNP抑制花粉管的生長;L-NNA促進花粉管的生長,但濃度應控制在一定范圍內(nèi),其中200 μmol·L-1L-NNA的促進效果最好,這與李孝誠[35]的試驗結(jié)果一致,但與Pasqualini等[36]的結(jié)果不一致,這可能與物種不同有一定的關系,但NO對植物花粉萌發(fā)和花粉管生長的作用是顯而易見的。結(jié)合Duan等[37]的結(jié)果,NO抑制花粉萌發(fā)和花粉管生長,可能是因為NO對誘導花粉管進入胚珠的誘餌蛋白進行了亞硝基化修飾,一方面可能會阻止其分泌,另一方面會使其失去誘導花粉管的活性。因此,花粉萌發(fā)和花粉管生長受到抑制。

在植物中,ROS作為有氧代謝的正常副產(chǎn)品或在環(huán)境壓力下產(chǎn)生[38],對多種生理過程很重要,但由于其高反應性,ROS會破壞蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和DNA[38-40]。當ROS的產(chǎn)生超過其失活時,會導致氧化應激[38,41]。ROS在柏樹的花粉萌發(fā)和花粉管形成中具有信號傳導作用,NAD(P)H氧化酶抑制劑可以降低花粉細胞中的內(nèi)源性ROS含量,導致花粉萌發(fā)和花粉管生長減少[36]。在擬南芥中,來自花粉的不同肽類與柱頭肽競爭與柱頭受體激酶復合物的相互作用,導致柱頭處的ROS減少,從而使花粉水合和萌發(fā)[42]。本試驗中,添加H2O2和NAC會降低花粉發(fā)芽率和花粉管長度,推測適當降低ROS的含量可以促進花粉管的生長,但一旦內(nèi)源性ROS平衡被打破,花粉萌發(fā)和花粉管生長會受到抑制,這值得進一步探討。

4 結(jié)論

油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長受到激素、礦質(zhì)元素(Ca2+、Mg2+)、化合物(一氧化氮(NO)、活性氧(ROS)等外源物質(zhì)的影響。其中,Ca2+、Mg2+與適當濃度的GA3、NAA促進花粉萌發(fā)和花粉管生長,而乙烯利、NO和ROS對花粉萌發(fā)和花粉管生長起抑制作用。CaCl2對油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長影響最大,GA3對油茶花粉萌發(fā)和花粉管生長影響最小。油茶花粉離體萌發(fā)最佳配比為100 g·L-1蔗糖、10 g·L-1瓊脂、0.1 g·L-1H3BO3、50 mg·L-1CaCl2·2H2O、10 mg·L-1MgSO4、0.5 mg·L-1NAA和2 mg·L-1GA3,油茶花粉管離體生長的最佳配比為100 g·L-1蔗糖、10 g·L-1瓊脂、0.1 g·L-1H3BO3、50 mg·L-1CaCl2·2H2O、10 mg·L-1MgSO4、0.5 mg·L-1NAA和8 mg·L-1GA3。