王會敏，王洪濤，張洪軍，王娟，尹利利，張建軍，陳瑞蘭，劉佳興，于洪浩，趙曉光，劉國臣，張秀麗

（1.河北省圍場縣動物疫病預(yù)防控制中心，河北 承德 068450；2.河北省承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局科技教育工作站，河北 承德 067000；3.四合永畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)中心站，河北 承德 068451）

羊梭菌性疾病由梭狀芽胞桿菌屬中的微生物所引起的一類傳染性疾病，包括羊快疫、羊腸毒血癥、羊猝疽、羊黑疫、羔羊痢疾等病。此病的特點(diǎn)是發(fā)病快、病程短、病死率高，對養(yǎng)羊業(yè)危害極大。預(yù)防此病除了加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，疫苗免疫是最有效的手段。本次試驗(yàn)通過對試驗(yàn)羊只注射三聯(lián)四防疫苗后，定期采集血清檢測抗體，對疫苗免疫效果進(jìn)行評估。通過本次試驗(yàn)找到最佳的免疫時間，能有效控制本地區(qū)的羊梭菌病的發(fā)生。

1 試驗(yàn)材料

在本地4 個試驗(yàn)場選取200 只未感染梭菌病的羊（后經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證），每個試驗(yàn)場選取50 只羊。

2 試驗(yàn)藥品

羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、腸毒血癥四聯(lián)干粉滅活疫苗 （廠家：哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司）。山羊魏氏梭菌病（cp）ELISA 檢測試劑盒（廠家：上?？瓢┥铮┊a(chǎn)氣莢膜梭菌病核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）（廠家：廣州達(dá)安生物科技有限公司）。

3 試驗(yàn)方法

免疫前對羊只進(jìn)行耳標(biāo)標(biāo)號，并用紅色自噴漆進(jìn)行標(biāo)記，在每次采血時用另外顏色進(jìn)行噴記，標(biāo)記后對200 只羊進(jìn)行疫苗注射，每只羊按說明書要求劑量進(jìn)行免疫，每只羊注射1 毫升，并于免疫后10 天、20 天、30 天、180 天、240 天、360 天、420 天靜脈采血≥5 毫升，常溫放置析出血清后，通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)進(jìn)行抗體效力檢樣，觀察免疫效力維持的時間。

4 健康羊確定及注射疫苗后的狀態(tài)

在未注射前采集血液，進(jìn)行梭菌病病原學(xué)檢測，經(jīng)過PCR 病原學(xué)及Elisa 病原學(xué)檢測后，確定本次試驗(yàn)羊只為未感染梭菌病的羊只。

免疫后對羊只日常情況進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)個別羊只精神萎靡、采食下降、飲水偏少等癥狀，但此癥狀多在1 天內(nèi)消失，絕大多數(shù)羊只在免疫后無不良反應(yīng)。

5 血清采集及酶聯(lián)免疫吸附（ELisa）實(shí)驗(yàn)

已經(jīng)進(jìn)行初免的羊只于免疫后10 天、20天、30 天、60 天、90 天、120 天、180 天、240 天、360 天、420 天靜脈采血收集血清后，常溫放置析出血清后，通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)進(jìn)行抗體效力檢樣，觀察免疫效力維持的時間。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

6 結(jié)果

從表1、圖1 中可以看出，用疫苗免疫后10天開始已經(jīng)有抗體產(chǎn)生，在20 天時產(chǎn)生完全保護(hù)抗體，此抗體保護(hù)一直持續(xù)至240 天，360 天時抗體逐漸減弱，至420 天后所有抗體水平均消失。此試驗(yàn)結(jié)果與李勇生、張登基等的試驗(yàn)結(jié)果基本一致，與魏曉云、霍子?xùn)|等在所做的對比試驗(yàn)中的試驗(yàn)結(jié)果也基本符合。為了使梭菌疫苗處于保護(hù)期內(nèi)，建議在每年的4 月份與10 月份進(jìn)行免疫，2 次/年，可有效防止梭菌病的發(fā)生。

表1 Elisa 抗體檢測結(jié)果

圖1 梭菌病抗體合格率

再次對200 只產(chǎn)生免疫抗體的羊只進(jìn)行PCR 病原學(xué)檢測，檢測結(jié)果如下表2。

表2 PCR 病原學(xué)檢測結(jié)果

通過此次檢驗(yàn)結(jié)果可知：有極少數(shù)量的羊只在注射疫苗免疫后，仍能感染梭菌病，成為隱藏的攜帶者，本次實(shí)驗(yàn)達(dá)到4%，這4%在日常生產(chǎn)管理中不到位的情況下，會把病毒傳播到整個羊群，危害養(yǎng)殖戶安全?？梢娨呙缑庖卟荒芡耆鸬奖Ｗo(hù)作用，若要健康養(yǎng)殖，還應(yīng)該在日常中加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。

7 討論

對于養(yǎng)殖戶來說僅僅通過注射疫苗防治疫病是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。為了有效防治羊梭菌病發(fā)生，還要在平時加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。在農(nóng)區(qū)或者牧區(qū)春夏之際少搶青、搶茬；秋季避免吃過量的結(jié)籽飼草，精料、粗料、青料搭配合理。在常發(fā)地區(qū)，應(yīng)定期注射“羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、腸毒血癥四聯(lián)苗”或者“羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、腸毒血癥、羊黑疫五聯(lián)苗”。若遇到發(fā)病群，有條件應(yīng)立即搬圈，避免在低洼潮濕地方，轉(zhuǎn)移到相對高燥的地方放牧。發(fā)病羊一般病程較短，往往來不及救治，病程稍長的除了用中藥治療外，亦可用西藥抗生素、磺胺類藥物共同治療。對于體質(zhì)瘦弱及羔羊要單獨(dú)飼喂，增加營養(yǎng)，提高抵抗力。對圈舍和經(jīng)?；顒訄鏊ㄆ谙?，運(yùn)草料、糞便等運(yùn)輸車輛定期消毒。飼草飼料嚴(yán)格管理，防治霉變。