任國棟，郝小燕，張暄梓，劉森，張宏祥，田光元，張建新?

1山西農業(yè)大學動物科學學院，山西太谷 030801；2山西祥和嶺上農牧開發(fā)股份有限公司，山西右玉 037200

0 引言

【研究意義】羊產業(yè)是我國畜牧業(yè)中重要的支柱產業(yè)，集約化舍飼養(yǎng)殖正逐漸成為養(yǎng)羊行業(yè)重要的生產模式。通過營養(yǎng)調控，提高肉羊飼料效率和生產性能，對肉羊產業(yè)“節(jié)本、提質、增效”發(fā)展具有重要意義。胍基乙酸（guanidineacetic acid，GAA）和甜菜堿（betaine，BT）作為兩種功能性營養(yǎng)添加劑，現(xiàn)階段研究主要集中在其單獨使用效果，二者聯(lián)合應用對動物生產性能影響尚不明確?！厩叭搜芯窟M展】胍基乙酸又稱胍乙酸，天然存在于脊椎動物體內，主要在肝臟或胰腺中由精氨酸和甘氨酸生物合成，是肌酸的直接前體物質[1-2]。肌酸通過磷酸化產生磷酸肌酸，磷酸肌酸可為細胞活動提供能量，在機體能量代謝過程中發(fā)揮著重要作用[3-4]。WYSS等[5]報道肌酸主要存在于動物性副產品中，如魚粉或骨粉，而植物性飼料缺乏肌酸，且動物源性副產品已被禁止用作反芻動物飼料[6]。此外，動物機體自身合成的肌酸僅占機體需要的50%—75%[7]，難以滿足需要。因此，需外源性補充肌酸?，F(xiàn)如今，胍基乙酸作為穩(wěn)定替代肌酸來源的營養(yǎng)補充劑[1]，具有性質穩(wěn)定、生物效價高等優(yōu)點。研究表明，飼糧中添加胍基乙酸可以提高綿羊生長性能[8-9]，促進安格斯公牛瘤胃發(fā)酵[10]，改善育肥豬肉品質[11-12]。但有研究表明，外源性補充GAA可能會消耗機體 40%—75%的不穩(wěn)定甲基供體，其甲基需要量甚至比其他甲基化反應總和還要多[13-15]。且 GAA在生成肌酸的同時會伴隨同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）的生成，后者過度積累可引發(fā)“高同型半胱氨酸血癥”，對機體健康造成危害。甜菜堿（betaine，BT），又名三甲基甘氨酸，作為良好的甲基供體，廣泛存在于自然界植物中。飼糧中添加甜菜堿可以提高奶牛泌乳性能[16]，促進公牛生長[17]，且飼糧中添加過瘤胃甜菜堿可提高羔羊生長性能和抗氧化能力[18]。研究表明，甜菜堿甲基與同型半胱氨酸在甜菜堿同型半胱氨酸甲基轉移酶的作用下轉化為蛋氨酸和二甲基甘氨酸[19-20]。【本研究切入點】胍基乙酸作為合成肌酸的前體物質，可促進肌酸合成。但胍基乙酸在合成肌酸的同時會消耗機體大量的甲基供體，并伴隨同型半胱氨酸的產生。而甜菜堿作為良好的三甲基供體，不但能為機體提供甲基，還參與同型半胱氨酸水解途徑。鑒于胍基乙酸和甜菜堿在合成肌酸途徑上的相互關系，本研究假設飼糧中添加胍基乙酸和甜菜堿能夠促進肌酸合成，進而提高動物的生產性能?！緮M解決的關鍵問題】在研究飼糧中添加胍基乙酸和甜菜堿對羔羊生長性能、瘤胃發(fā)酵及血清生化指標的影響，為胍基乙酸和甜菜堿在反芻動物生產中的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

本試驗于2020年7—10月在山西右玉祥和嶺上養(yǎng)殖場進行。試驗選用48只體重相近（22.03±1.30）kg、3月齡左右的杜泊×小尾寒羊雜交公羔，采用2×2因子完全隨機試驗設計，試驗因素為 GAA（0或 900 mg·kg-1）和 BT（0 或 5 g·d-1）。隨機分配到 4 組，每組 12只羊。分別為：(1)對照組，飼喂基礎日糧；(2)GAA(純度≥98%)組，飼喂基礎日糧+900 mg·kg-1GAA（干物質基礎）；(3)BT（純度≥78%）組，飼喂基礎日糧+5 g·d-1BT（干物質基礎）；(4)GAA+BT組，飼喂基礎日糧+900 mg·kg-1GAA 和 5 g·d-1BT（干物質基礎）。試驗期共75 d，其中預試期15 d，正試期 60 d。在正試期內，晨飼前用分析天平稱取每日每只羊GAA和BT添加量，放入已裝有60 g粉狀飼糧的不銹鋼碗里混合后，一次性飼喂給每只羊，以保證完全攝入。所有試驗羊單欄飼養(yǎng)，每天各飼喂2次（08:00和17:00），自由采食和飲水，試驗飼糧參照NRC（2007）綿羊營養(yǎng)需要量設計配方，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。飼糧采用全混合顆粒飼料。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air dry basis, %)

1.2 樣品采集

于正試期第 1天晨飼前對所有羊進行空腹稱重，作為初始體重（IBW），之后試驗第 30天進行第2次稱重，記錄數據。正試期結束當日晨飼前先采血后進行空腹稱重，作為終末體重（FBW）。血清樣品2 000×g離心15 min后分離血清，-80℃冷凍保存。飼喂期間記錄每只羊的日采食量、剩料量。正試期結束后計算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和飼料效率（FE），其中飼料效率（FE）=平均日增重（ADG）/平均日采食量（ADFI）。

所有試驗羊正試期結束當日正常飼喂，在試驗羊采食后3 h通過口腔采集每只試驗羊的瘤胃液。為了避免唾液污染，棄掉最初收集的瘤胃液，隨后的80 mL瘤胃液立即測定其pH，同時將其分裝在離心管中，一部分保存在液氮中用于分析瘤胃菌群定量和酶活，另一部分保存于-20℃測定瘤胃發(fā)酵指標。

1.3 指標測定

血清中乳酸、肌酸、肌酸激酶、L-精氨酸-甘氨酸脒基轉移酶（AGAT）、S-腺苷蛋氨酸-胍基乙酸-N-甲基轉移酶（GAMT）和同型半胱氨酸（Hcy）采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測定，ELISA試劑盒購自上海優(yōu)選生物科技有限公司。

采集飼喂后3 h的瘤胃液用于測定揮發(fā)性脂肪酸（VFA）和氨態(tài)氮（NH3-N）濃度。參照嚴淑紅等[22]方法利用氣象色譜儀（Aglient 7980B，美國）測定VFA；參照金亞倩等[23]方法測定NH3-N濃度；參照AGARWAL等[24]方法測定瘤胃液中纖維素酶和淀粉酶；參照MILLER等[25]方法測定瘤胃液中蛋白酶。

采用珠磨-CTAB法[26]提取瘤胃微生物DNA。用核酸蛋白分光光度計（Thermo Scientific, 美國）測定提取的瘤胃微生物 DNA濃度和質量。由北京華大基因科技股份有限公司合成目的瘤胃微生物引物（表2）。目的微生物標品由山西農業(yè)大學動物營養(yǎng)實驗室提供，采用10倍連續(xù)稀釋法建立目的微生物標注曲線[27]。參照LI[10]等方法，使用TaKaRa 公司SYBR?Primic Ex TaqTM（TliRNaseHPlus）試劑盒及 ABI stepone plus 實時熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）儀器進行操作，對目的基因進行Real-time PCR。PCR反應體系如下（20.0 μL）：2.0 μL DNA模板，10.0μL SYBR?PrimicExTaqTM（TliRNaseH Plus）（2x），6.0 μL dH2O（滅菌蒸餾水），0.8μL PCR Forward Primer（10 μmol·L-1），0.8 μL PCR Reverse Primer（10 μmol·L-1），0.4 μL ROX Reference Dye（50x）Ⅱ。

表2 基因引物序列Table 2 Primer sequences of genes

1.4 數據分析

試驗所得數據通過Excel 2019進行初步整理，應用SAS9.2軟件中一般線性模型（GLM）有交互作用的雙因素過程進行統(tǒng)計分析，當交互作用顯著時采用Tukey’s法進行多重比較。P＜0.01表示差異極顯著，P＜0.05表示差異顯著，0.5＜P＜0.10表示有趨勢。

2 結果

2.1 飼糧中添加GAA和BT對羔羊生長性能的影響

生長性能數據已發(fā)表[33]，詳見表 3。飼糧中添加GAA或BT對羔羊終末體重無顯著影響（P＞0.05）。飼糧中添加 GAA有降低羔羊平均日采食量的趨勢（P=0.072），且一定程度提高了 ADG，但差異不顯著（P＞0.05），添加 BT 則顯著提高了 ADG（P＜0.05）。添加GAA或BT顯著提高FE（P＜0.05）。在互作效應方面，GAA和BT對FE有顯著互作效應（P＜0.05），對ADG有極顯著互作效應（P＜0.01）。

表3 胍基乙酸和甜菜堿對羔羊生長性能的影響Table 3 Effects of GAA and BT on growth performance of lambs

2.2 飼糧中添加GAA和BT對羔羊瘤胃發(fā)酵的影響

由表4可知，飼糧中添加GAA或BT顯著降低了瘤胃液 pH（P＜0.05），對瘤胃液中乙酸、丁酸、異丁酸、乙丙比和 NH3-N均無顯著影響（P＞0.05）。添加BT顯著提高了羔羊采食后3h的丙酸和總揮發(fā)性脂肪酸濃度（P＜0.05），GAA則極顯著提高了丙酸和總揮發(fā)性脂肪酸濃度（P＜0.01）。添加BT極顯著降低了戊酸和異戊酸濃度（P＜0.01），而GAA顯著提高了戊酸的濃度（P＜0.05）。飼糧中添加GAA和BT對羔羊瘤胃發(fā)酵指標無顯著互作效應（P＞0.05）。

表4 胍基乙酸和甜菜堿對羔羊瘤胃發(fā)酵的影響Table 4 Effects of GAA and BT on ruminal fermentation of lambs

2.3 飼糧中添加GAA和BT對羔羊瘤胃微生物酶活性的影響

由表5可知，飼糧中添加GAA或BT顯著提高了蛋白酶活性（P＜0.05）。添加BT極顯著提高了木聚糖酶、果膠酶和α-淀粉酶活性（P＜0.01），顯著提高了羧甲基纖維素酶活性（P＜0.05），且有提高纖維二糖酶活性的趨勢（P=0.075）。飼糧中添加GAA則有提高果膠酶和 α-淀粉酶活性的趨勢（P=0.091，P=0.056）。飼糧中添加GAA和BT對果膠酶活性具有極顯著互作效應（P＜0.01）。

表5 胍基乙酸和甜菜堿對羔羊瘤胃微生物酶活性的影響Table 5 Effects of GAA and BT on rumen microbial enzyme activity of lambs (U·mL-1)

2.4 飼糧中添加GAA和BT對羔羊瘤胃功能微生物的影響

由表6可知，飼糧中添加GAA或BT極顯著提高了羔羊瘤胃液中黃色瘤胃球菌和溶纖維丁酸弧菌的數量（P＜0.01），顯著提高了產琥珀酸絲狀桿菌的數量（P＜0.05），顯著降低了瘤胃原蟲的數量（P＜0.05），對總細菌、總厭氧真菌、白色瘤胃球菌和嗜淀粉瘤胃桿菌則無顯著影響（P＞0.05）。添加BT則顯著提高了棲瘤胃普雷沃氏菌的數量（P＜0.05），顯著降低了產甲烷菌的數量（P＜0.05），且有提高嗜淀粉瘤胃桿菌數量的趨勢（P=0.098）。添加GAA則顯著提高了棲瘤胃普雷沃氏菌的數量（P＜0.05），有降低瘤胃產甲烷菌數量的趨勢（P=0.085）。添加GAA和BT對羔羊瘤胃微生物菌群無顯著互作效應（P＞0.05）。

表6 胍基乙酸和甜菜堿對羔羊瘤胃菌群的影響Table 6 Effects of GAA and BT on ruminal microflora of lambs (U·mL-1)

2.5 飼糧中添加GAA和BT對羔羊血清生化指標的影響

由表7可知，飼糧中添加GAA和BT對羔羊血清生化指標無顯著互作效應（P＞0.05）。添加GAA或BT顯著提高血清中肌酸含量（P＜0.05）。飼糧中添加 GAA有提高血清中同型半胱氨酸的趨勢（P=0.053），有降低AGAT的趨勢（P=0.056）。添加BT極顯著降低血清中同型半胱氨酸濃度，且有提高肌酸激酶濃度的趨勢（P=0.063）。

表7 胍基乙酸和甜菜堿對羔羊血清生化指標的影響Table 7 Effects of GAA and BT on serum biochemical parameters of lambs (U·mL-1)

3 討論

3.1 飼糧中添加胍基乙酸和甜菜堿對羔羊生長性能有不同程度的影響

SPEER等[34]通過瘤胃與皺胃灌注 GAA研究發(fā)現(xiàn)，有50%左右的GAA可通過瘤胃進入腸道。這說明GAA在瘤胃中被部分降解。研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加未包被的GAA可提高綿羊和公牛的生產性能[8-10]。ARDALAN等[35]發(fā)現(xiàn)瘤胃后灌注GAA提高了瘺管牛血漿中的肌酸濃度，而包被胍基乙酸對反芻動物生產性能的效果還有待于進一步探究。甜菜堿具有較高的水溶性，進入瘤胃后大約有20%—45%被利用，而且在以粗飼料為主的日糧中代謝更快[36-37]。飼糧中添加BT可提高公牛的生長性能[17]，增加奶牛的產奶量[16]，飼糧中添加過瘤胃BT可減少羔羊腹部脂肪，但對生產性能無顯著影響[18,38-39]。但也有研究表明飼糧中分別添加BT和過瘤胃BT均提高了羔羊的日增重，改善肉品質，且過瘤胃BT效果優(yōu)于未包被BT[40]。造成研究結果差異的原因可能是因為BT添加水平、試驗動物等因素。

采食量的高低影響反芻動物能量的攝入。前人研究表明飼糧中添加 GAA對羔羊平均日采食量無顯著影響[8-9]。但也有研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加GAA提高了安格斯公牛和育肥豬的平均日采食量[10-11]。本研究結果表明，飼糧中添加 GAA有降低羔羊平均日采食量的趨勢，這與前人研究結果不一致。影響動物采食量的因素有很多，主要包括動物生長發(fā)育水平、日糧結構、環(huán)境和飼養(yǎng)管理等方面。研究發(fā)現(xiàn)，較高的NDF水平下，瘤胃的充盈程度會直接抑制采食[41]。辛均平等[42]研究發(fā)現(xiàn)添加 GAA可以促進體外瘤胃產氣量及揮發(fā)性脂肪酸的增加。在本試驗中，飼糧中添加GAA可能促進了瘤胃產氣，使瘤胃充盈程度相對提高，這可能是導致平均日采食量有降低趨勢的原因。LI等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在精粗比5∶5全混合日糧中添加0.9g·kg-1GAA顯著提高了營養(yǎng)物質消化率，改善了瘤胃發(fā)酵，提高了公牛的生長性能。此外，也有研究表明 GAA對 ADG無顯著影響[43-45]。在本試驗條件下，飼糧中添加GAA提高了FE，但對ADG影響有限。不同試驗結果的差異可能是由于不同的 GAA添加比例及日糧配方組成導致。

本試驗結果表明飼糧中添加BT對羔羊的平均日采食量無顯著影響。CHENG等[16]發(fā)現(xiàn)飼糧中添加0.6 g·kg-1BT對奶牛平均日采食量無顯著影響。同樣地，LI等[18]研究發(fā)現(xiàn)飼糧中補充6 g·d-1過瘤胃BT對湖羊平均日采食量雖有提高，但無顯著影響，與本試驗結果一致。日糧在瘤胃中經微生物發(fā)酵作用產生的揮發(fā)性脂肪酸主要經瘤胃壁吸收后進入機體組織，進行氧化供能或用于合成脂肪或葡萄糖，而能量水平的高低又決定動物的生長速度。本試驗中，飼糧中添加 BT顯著提高了羔羊的日增重和飼料效率，這可能與飼糧中添加BT促進瘤胃發(fā)酵有關。

3.2 飼糧中添加胍基乙酸和甜菜堿對羔羊瘤胃發(fā)酵有影響

日糧經反芻動物采食后進入瘤胃，瘤胃中微生物會產生各種消化酶，將日糧中的碳水化合物分解并生成乙酸、丙酸、丁酸等揮發(fā)性脂肪酸[46]，為反芻動物提供70%—80%的能量來源，并且VFA產量與能量轉化效率呈正相關，與pH呈負相關[47]。瘤胃發(fā)酵產生的大量VFA會在短時間內導致瘤胃pH下降，隨著機體對VFA的吸收及唾液中的大量緩沖鹽流入瘤胃，瘤胃內容物的酸度得到很好的緩沖，使瘤胃 pH保持穩(wěn)定[48]。LI等[10]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加GAA顯著提高了丙酸及總揮發(fā)性脂肪酸的濃度，降低了瘤胃pH，這與本試驗研究結果一致。日糧在瘤胃中降解發(fā)酵的程度與瘤胃微生物菌群數量密切相關，總揮發(fā)性脂肪酸的增加可能與瘤胃主要功能微生物菌群數量及微生物酶活性的提高有關。NH3-N是瘤胃微生物降解飼糧蛋白質的產物，也是合成微生物蛋白的主要前體物質，當其釋放速率與瘤胃微生物可利用能量釋放速率不同步時，就會造成瘤胃中NH3-N累積[49]。研究發(fā)現(xiàn)，在精粗比 5∶5的飼糧中添加 GAA顯著降低了瘤胃NH3-N濃度[10]，而LIU等[50]研究發(fā)現(xiàn)添加GAA顯著提高了瘤胃 NH3-N濃度。在本試驗中，飼糧中添加GAA顯著增加了相關蛋白降解菌群的數量及蛋白酶活性，但對瘤胃NH3-N濃度無顯著影響，這與劉笑梅等[8]研究結果一致，其原因可能是GAA的添加促進了微生物利用NH3-N合成微生物蛋白。

甜菜堿作為一種功能性添加劑，可以通過調節(jié)滲透壓維持細胞正常形態(tài)與功能，還可以幫助胃腸道抵抗氧化應激改善其功能[51-52]。研究發(fā)現(xiàn)飼糧中添加甜菜堿可以提高干物質、粗蛋白等營養(yǎng)物質在公牛消化道中的消化率，并顯著提高乙酸、丙酸和總揮發(fā)性脂肪酸的含量[17]。RATRIYANTO等[53]發(fā)現(xiàn)飼糧中添加BT顯著提高了粗蛋白和大部分氨基酸在仔豬全消化道中的消化率。本試驗結果表明，飼糧中添加BT顯著提高了羔羊瘤胃中丙酸和總揮發(fā)性脂肪酸的濃度，這可能與瘤胃功能性微生物數量及酶活性的提高有關。CHENG等[16]研究表明，飼糧中添加4 g·kg-1BT顯著降低了奶牛瘤胃NH3-N濃度，而WANG等[17]研究發(fā)現(xiàn)添加0.6 g·kg-1BT對安格斯公牛瘤胃NH3-N濃度無顯著影響，這與本試驗結果一致。導致不同結果的原因可能是不同的BT添加比例及飼糧配方組成。

3.3 飼糧中添加胍基乙酸和甜菜堿可提高羔羊瘤胃功能微生物數量及酶活性

研究表明添加 GAA顯著提高了公牛瘤胃中白色瘤胃球菌、黃色瘤胃球菌、產琥珀絲狀桿菌、溶纖維丁酸弧菌和嗜淀粉瘤胃桿菌的菌群數量，提高了瘤胃微生物纖維素酶、蛋白酶和α-淀粉酶的活性[50]。其中白色瘤胃球菌、黃色瘤胃球菌、產琥珀絲狀桿菌和溶纖維丁酸弧菌是具有很強纖維降解能力的纖維分解菌，它們能夠產生大量的纖維素酶。溶纖維丁酸弧菌和棲瘤胃普雷沃氏菌是主要的蛋白降解菌，能夠分泌降解蛋白的酶。嗜淀粉瘤胃桿菌主要發(fā)酵淀粉，是瘤胃中主要淀粉降解菌之一。本試驗中，飼糧中添加GAA顯著提高了黃色瘤胃球菌、產琥珀絲狀桿菌、溶纖維丁酸弧菌和棲瘤胃普雷沃氏菌菌群數量，提高了果膠酶和蛋白酶的活性，且有提高淀粉酶活性的趨勢，這與前人研究結果一致。GAA作為肌酸的前體物質，可間接通過促進肌酸合成從而在細胞能量代謝過程中發(fā)揮重要作用[54]，外源補充的GAA可能為瘤胃微生物的生長繁殖提供了額外的能量來源。此外，瘤胃中還棲息著一類重要的微生物瘤胃原蟲，其種類和數量隨反芻動物飼喂條件、生理等因素的變化而發(fā)生變動。因此，瘤胃原蟲的這種變化通常被作為反映瘤胃環(huán)境狀況的一個指標。韓昊奇等[55]研究發(fā)現(xiàn)隨著精料比例的增加，瘤胃 pH顯著降低，而瘤胃內原蟲數量在精料比例最高時降至最低。這說明瘤胃原蟲數量與反芻動物的日糧結構及瘤胃 pH密切相關。本試驗結果表明，飼糧中添加 GAA顯著降低了瘤胃原蟲的數量，這與LI等[10]研究結果一致，瘤胃原蟲數量的減少可能與瘤胃pH顯著降低有關。但也有研究表明飼糧中添加0.6 g·kg-1GAA顯著提高了瘤胃原蟲的數量[43]。不同的研究表明 GAA對瘤胃原蟲數量的影響有差異，其影響還需進一步深入研究。在瘤胃中產甲烷菌是一類重要的微生物，它能將CO2、H2、甲酸及其他化合物轉化成甲烷或甲烷和CO2，從中獲得能量。瘤胃產甲烷菌和原蟲之間屬于共生關系[56]，且研究發(fā)現(xiàn)在瘤胃去除原蟲后瘤胃甲烷生成量減少9%—40%[57]。瘤胃發(fā)酵趨于丙酸型發(fā)酵可競爭性抑制瘤胃甲烷產生，而低的瘤胃 pH也可抑制產甲烷菌[58-59]。本試驗結果表明，飼糧中添加 GAA顯著降低了瘤胃產甲烷菌的數量，這與瘤胃原蟲數量減少及降低的瘤胃pH相一致。

甜菜堿作為良好的甲基供體，其甲基也可作為瘤胃微生物的直接底物[60]。研究發(fā)現(xiàn)飼糧中添加BT可以提高瘤胃原蟲、白色瘤胃球菌、黃色瘤胃球菌、產琥珀酸絲桿菌和嗜淀粉瘤胃桿菌的數量，并提高蛋白酶和纖維素酶的活性[16-17]。在本試驗中，添加 BT顯著提高了黃色瘤胃球菌、產琥珀酸絲狀桿菌、溶纖維丁酸弧菌和棲瘤胃普雷沃氏菌的數量，有提高嗜淀粉瘤胃桿菌數量的趨勢，且提高了瘤胃中纖維素酶、淀粉酶和蛋白酶的活性，這與前人研究結果一致。瘤胃原蟲和瘤胃產甲烷菌數量的降低可能與補充BT促進了揮發(fā)性脂肪酸的生成直接降低了瘤胃pH有關。

3.4 飼糧中添加胍基乙酸和甜菜堿對羔羊血清生化指標的影響

外源性肌酸前體物 GAA在肝臟中由合成肌酸并釋放進入血液[2]。本試驗結果表明，飼糧中添加GAA顯著提高了血清中肌酸的濃度。LI等[10]研究發(fā)現(xiàn)飼糧中添加 GAA顯著提高了公牛血清中的肌酸濃度。劉洋等[12]發(fā)現(xiàn)在給育肥豬補充GAA15d后，顯著提高了育肥豬肌肉中的肌酸含量。這與本試驗研究結果一致。血清中肌酸濃度的提高可能與 GAA促進肌酸轉化有關。AGAT的作用主要是在肝臟或胰腺中促進精氨酸和甘氨酸合成 GAA，而 GAA的濃度可以反饋調節(jié)AGAT的生成[5]。在本試驗中，飼料中添加GAA有降低血清中AGAT濃度的趨勢，這可能與額外補充GAA有關。ARDALAN等[35]發(fā)現(xiàn)通過皺胃輸入GAA顯著提高了奶牛血清中肌酸含量，但同型半胱氨酸的含量也隨之提高。本試驗研究表明，飼糧中添加 GAA有提高血清中同型半胱氨酸的趨勢。作為 GAA合成肌酸時的伴隨產物，同型半胱氨酸的提高可能與 GAA促進肌酸合成有關。本研究表明，補充BT顯著提高了血清中肌酸含量，并顯著降低了同型半胱氨酸的含量，這可能是由于BT的添加促進了肌酸的合成，并與生成的同型半胱氨酸一同轉化為蛋氨酸和二甲基甘氨酸。

在本試驗中，飼糧中添加GAA和BT對ADG和飼料效率有顯著的交互作用，但是GAA和BT的組合效果卻對ADG的提高有一定的限制。高濃度的谷物和可發(fā)酵碳水化合物可以為反芻動物提供足夠的能量，但在長期飼養(yǎng)過程中也會導致瘤胃和后腸道pH下降和VFA積累，導致微生物代謝紊亂，阻礙生長[61-62]。我們推測在日糧中添加GAA和BT可以協(xié)同促進瘤胃發(fā)酵，過量的揮發(fā)性脂肪酸在短時間內使瘤胃 pH急劇下降，使羔羊產生應激，對機體健康生長造成負面影響。此外，與單獨添加GAA或BT相比，聯(lián)合添加GAA和BT可提高血液中肌酸的濃度，這表明BT的添加能夠促進GAA向肌酸的轉化。GAA和BT都可以促進揮發(fā)性脂肪酸的產生，降低瘤胃pH，因此未來可以探究在精粗比5∶5飼糧配比下GAA和BT能否會有更好的促進作用。

4 結論

飼糧中添加胍基乙酸或甜菜堿可以提高血清中肌酸含量，增加瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸產量和功能微生物菌群數量，提高瘤胃內微生物酶活性，進而提高飼料效率，且甜菜堿可以降低血清中同型半胱氨酸的濃度。但與單獨添加胍基乙酸或甜菜堿相比，聯(lián)合添加胍基乙酸和甜菜堿對羔羊日增重的影響有限，這可能與該研究中飼糧精料比例過高和過低的瘤胃 pH使羔羊在長期飼喂過程中產生了一定的應激有關。