王光花，劉佳裕，席慶凱，李勇，劉天驥，劉匆，張遨然，萬新生，顧夕章，種金豆，江聰，李洪琴，趙敏，5

(1.新希望六和股份有限公司，北京 100102；2.四川新希望六和科技創(chuàng)新有限公司，四川 成都 610101；3.山東新希望六和集團(tuán)有限公司，山東 青島 266061；4.射陽六和飼料有限公司，江蘇 鹽城 224000；5.中國海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，山東 青島 266061)

2020年以來，全球通脹導(dǎo)致以魚粉、豆粕為代表的飼料蛋白原料價(jià)格高漲，亟須尋找質(zhì)優(yōu)價(jià)廉、貨源穩(wěn)定的新蛋白質(zhì)原料。我國是全球主要的畜禽養(yǎng)殖大國之一，畜禽副產(chǎn)物資源豐富，雞骨架年均產(chǎn)量約為400萬噸，富含可溶性蛋白和多種呈味氨基酸，且鈣、磷含量豐富，是潛在的優(yōu)質(zhì)飼料蛋白源。目前雞骨架通常以肉骨粉的形式添加至飼料中，肉骨粉價(jià)格低廉，但氨基酸組成不平衡、灰分含量高、消化率低，且不易儲存、容易酸敗，影響水產(chǎn)動物對營養(yǎng)素的吸收利用，并且過量添加會對水產(chǎn)動物肝臟脂質(zhì)代謝造成負(fù)擔(dān)，因此在水產(chǎn)動物飼料中的添加量十分受限(Robaina L等，1997；周文豪等，2003)。酶解技術(shù)作為一種成熟的畜禽副產(chǎn)品加工方法，可以將雞骨架中豐富的膠原蛋白、骨膠纖維等生物大分子的空間結(jié)構(gòu)打開，使其降解為易被消化吸收的小分子肽和氨基酸，可大幅提高雞骨架的營養(yǎng)利用率。

凡納濱對蝦俗稱南美白對蝦，適應(yīng)性強(qiáng)，生長周期短，營養(yǎng)需求低，適合高密度工廠化養(yǎng)殖，年產(chǎn)量連續(xù)多年超過百萬噸，是我國目前養(yǎng)殖產(chǎn)量最大的對蝦品種。酶解雞漿作為新興的飼料蛋白質(zhì)原料，目前在水產(chǎn)動物上的相關(guān)研究甚少，僅在珍珠龍膽石斑魚、大口黑鱸上有報(bào)道。研究結(jié)果表明，酶解雞漿可以提高魚飼料效率、改善腸道結(jié)構(gòu)、增加腸道菌群多樣性、提高魚的免疫功能，然而在凡納濱對蝦上鮮有研究。因此，本研究將不同濃度的酶解雞漿添加至飼料中飼喂對蝦，探討酶解雞漿對凡納濱對蝦生長性能、飼料效率、免疫性能和消化酶活性的影響，并明確酶解雞漿在凡納濱對蝦飼料中的最適添加量，助力對蝦健康養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)酶解雞漿及飼料配方

本試驗(yàn)所用酶解雞漿由青島某生物科技公司提供。試驗(yàn)配制4種飼料，分別添加0、2%、4%和6%酶解雞漿，同時(shí)調(diào)整豆粕、玉米DDGS、米糠粕和魚油比例，以保證飼料蛋白、脂肪含量一致。試驗(yàn)飼料配方見表1。千克、維生素E 128毫克/千克、維生素B134毫克/千克、維生素B234毫克/千克、煙酸200毫克/千克、葉酸28毫克/千克、泛酸50毫克/千克、氯化鈉3毫克/千克、七水硫酸鎂1.1克/千克、七水硫酸鋅30毫克/千克、六水氯化鈷60毫克/千克、五水硫酸銅15毫克/千克、一水磷酸二氫鈣3.5克/千克、七水硫酸亞鐵70毫克/千克、碘化鉀0.9毫克/千克

表1 試驗(yàn)配方 %

2.試驗(yàn)動物及飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在新希望六和飼料研究院即墨特水養(yǎng)殖基地進(jìn)行，選取初重為(2.20±0.21)克/尾、規(guī)格均勻、體表無明顯損傷的凡納濱對蝦13.32萬尾，隨機(jī)分成4個(gè)處理組，每組6個(gè)平行，每個(gè)平行5 550尾對蝦。分別投喂上述4種飼料，即對照組(0)、酶解雞漿組(2%、4%、6%)。試驗(yàn)期為73天。養(yǎng)殖過程中，每天投料4次(6:00、10:00、14:00、18:00)，每周對投餌量進(jìn)行調(diào)整。水池內(nèi)配置充氧設(shè)備，并定時(shí)開啟，以保證蝦池中溶氧大于5毫克/升。自然海水鹽度30，水溫23～32℃，pH 7.5～8.5，氨氮濃度低于1.0毫克/升，亞硝酸鹽濃度低于0.01毫克/升。

3.樣品收集

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將試驗(yàn)蝦禁食24小時(shí)，然后計(jì)算每個(gè)水泥池試驗(yàn)蝦的數(shù)量并稱取總重量，用于計(jì)算試驗(yàn)蝦末重(FBW)、增重率(WG)、特定生長率(SGR)、餌料系數(shù)(FCR)、飼料轉(zhuǎn)化率(FE)、蛋白質(zhì)效率(PER)和養(yǎng)殖成活率(SR)。

試驗(yàn)結(jié)束，每個(gè)試驗(yàn)桶隨機(jī)選取6尾試驗(yàn)蝦取肝胰腺放入凍存管中，立刻凍于液氮中，隨后置于-80℃冰箱中保存，用于檢測多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LYZ)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和脂肪酶(LPS)活性。

4.樣品分析

將飼料樣品烘干(105℃)至恒重，使用凱式定氮儀(VELP)測定粗蛋白質(zhì)含量，使用索氏抽提儀(SOX416)測定脂肪含量，采用失重法測定灰分含量，使用氨基酸分析儀(L-8800)測定飼料中賴氨酸和蛋氨酸的含量。肝胰臟樣品送至南京建成生物科技有限公司測定PPO、SOD、LYZ、ALT、AST和LPS活性。

5.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，若各處理組之間存在顯著差異，進(jìn)行Duncan's多重比較，差異顯著水平為0.05。

二、結(jié)果

1.生長性能和飼料效率

酶解雞漿對凡納濱對蝦生長性能和飼料效率的影響見表2。凡納濱對蝦增重率、特定生長率、飼料轉(zhuǎn)化率、蛋白質(zhì)效率和成活率均隨飼料中酶解雞漿添加水平的提升呈現(xiàn)先上升、后下降的趨勢，在酶解雞漿添加量為4%時(shí)達(dá)最高值。酶解雞漿添加量為2%～4%時(shí)，凡納濱對蝦飼料轉(zhuǎn)化率和蛋白質(zhì)效率顯著高于對照組(P＜0.05)。EHC-4組凡納濱對蝦成活率顯著高于對照組(P＜0.05)，增重率和特定生長率較對照組分別提高了11.21%和5.96%，但無顯著差異(P＞0.05)。餌料系數(shù)隨飼料中酶解雞漿添加水平的增加呈現(xiàn)先下降、后上升的趨勢，在飼料酶解雞漿含量為4%時(shí)達(dá)到最低值；酶解雞漿添加量為2%～4%時(shí)，凡納濱對蝦餌料系數(shù)顯著低于對照組和EHC-6組(P＜0.05)。

表2 酶解雞漿對凡納濱對蝦生長性能及飼料效率的影響

2.免疫性能和消化酶活性

酶解雞漿對凡納濱對蝦免疫性能和消化酶活性的影響見表3。EHC-4組凡納濱對蝦多酚氧化酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶活性分別高于對照組0.47、0.60、7.18單位/毫克，但無顯著性差異(P＞0.05)，EHC-6組凡納濱對蝦肝胰腺多酚氧化酶活性顯著低于其他3組(P＜0.05)。添加酶解雞漿可提高凡納濱對蝦谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和脂肪酶活性，但各組間無顯著差異(P＞0.05)。

三、討論

1.酶解雞漿對凡納濱對蝦生長性能及飼料效率的影響

雞骨架是肉雞加工過程中的副產(chǎn)物，富含呈味氨基酸，有一定的誘食效果，是一種非糧蛋白質(zhì)資源。但雞骨架中的蛋白質(zhì)以膠原蛋白為主，消化吸收率和能量利用率較低，在動物飼料中的添加水平極為有限；酶解技術(shù)可以將雞骨架中的大分子蛋白質(zhì)酶解為更易被消化吸收的肽類和氨基酸，有效為動物生長發(fā)育供能(Mccalia J等，2008)。研究表明，酶解雞漿可以顯著提高大口黑鱸終末體重、增重率、特定生長率和蛋白質(zhì)效率，并顯著降低餌料系數(shù)(馬卉佳，2021)。在珍珠龍膽石斑魚上的研究也有相似的結(jié)果，飼料中添加酶解雞漿可以顯著提高珍珠龍膽石斑魚增重率和特定生長率(王俊賢，2020)。本研究發(fā)現(xiàn)飼料中酶解雞漿的添加量為4%時(shí)，凡納濱對蝦飼料轉(zhuǎn)化率、蛋白質(zhì)效率和養(yǎng)殖成活率均顯著高于對照組，增重率和特定生長率也較對照組分別提高了11.21%和5.96%，而且餌料系數(shù)顯著低于對照組。酶解雞漿中富含的寡肽和氨基酸由于分子量小，動物對其的吸收機(jī)制與大分子蛋白質(zhì)不同，無需消化酶分解，可直接以主動運(yùn)輸或協(xié)助擴(kuò)散的方式進(jìn)入細(xì)胞被機(jī)體利用，過程更加節(jié)能、高效且不易飽和(Carrigan C N等，2005；Singh B P等，2014)，這可能就是酶解雞漿能夠提高凡納濱對蝦增重率、特定生長率、飼料轉(zhuǎn)化率和蛋白質(zhì)效率的主要原因。此外，研究發(fā)現(xiàn)酶解產(chǎn)生的小肽具有一定免疫調(diào)節(jié)功能(Gauthier S F等，2006)，能夠增強(qiáng)水產(chǎn)動物非特異性免疫功能(Zhuang Y等，2021)，這可能是由于酶解雞漿中的小肽提高了凡納濱對蝦非特異性免疫系統(tǒng)抵御病原微生物入侵的能力，因此大幅提高了對蝦的成活率。

表3 酶解雞漿對凡納濱對蝦免疫性能和消化酶活性的影響 單位/毫克

2.酶解雞漿對凡納濱對蝦免疫性能和消化酶活性的影響

凡納濱對蝦屬于典型的無脊椎動物，特異性免疫系統(tǒng)相對不發(fā)達(dá)，主要依靠固有免疫系統(tǒng)抵御病原入侵(Wang P H等，2014)?？寡趸到y(tǒng)是動物固有免疫系統(tǒng)中的重要一環(huán)，脂質(zhì)過氧化會導(dǎo)致機(jī)體免疫損傷，易受細(xì)菌或病毒感染，抗氧化對于動物免疫功能具有重要意義(Wang Y等，2017)。本研究結(jié)果表明，飼料中添加4%酶解雞漿后，凡納濱對蝦肝胰腺多酚氧化酶和超氧化物歧化酶活性較對照組分別提高了0.47單位/毫克和0.60單位/毫克，這與在大口黑鱸上的研究結(jié)果類似。酶解雞漿的添加可以顯著提高大口黑鱸腸道超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的活性，顯著降低腸道丙二醛含量，抗氧化能力大幅增強(qiáng)(馬卉佳，2021)。此外，溶菌酶作為先天免疫系統(tǒng)的基石之一，可以通過水解細(xì)菌細(xì)胞壁和調(diào)節(jié)宿主對感染的免疫反應(yīng)發(fā)揮其保護(hù)作用(Ragland S A等，2017)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)酶解雞漿可以大幅提高凡納濱對蝦溶菌酶活性，飼料中酶解雞漿添加量為4%時(shí)，對蝦肝胰腺溶菌酶活性較對照組提高了15.64%。綜上，筆者推測酶解雞漿或許可以通過提高機(jī)體抗氧化能力和溶菌酶活性，進(jìn)而提高凡納濱對蝦免疫能力，從而抵御養(yǎng)殖過程中的病原入侵，提高對蝦成活率。

凡納濱對蝦是以動物性餌料為主的雜食性動物，以蛋白質(zhì)和脂肪為主要能量來源，因此蛋白質(zhì)和脂肪的消化吸收能力與其生長增重效果息息相關(guān)。肝胰腺不僅是凡納濱對蝦的免疫器官，而且作為高等動物肝臟在對蝦上的等效器官，還是主要的代謝場所，轉(zhuǎn)氨酶是對蝦肝胰腺中主要的氨基酸代謝酶(Li X等，2021)，催化甘油三酯分解為甘油和游離脂肪酸的脂肪酶也大量存在于對蝦肝胰腺(Kuepethkaew S等，2017)。本研究發(fā)現(xiàn)，添加酶解雞漿后，凡納濱對蝦肝胰腺谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和脂肪酶活性均高于對照組。酶解雞漿可以提高凡納濱對蝦肝胰腺消化酶活性，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的高效轉(zhuǎn)化，這可能是酶解雞漿促進(jìn)凡納濱對蝦生長的機(jī)制之一。

綜上所述，在本試驗(yàn)條件下，飼料中添加酶解雞漿可以提高凡納濱對蝦生長性能、飼料效率、免疫性能及消化酶活性，推薦添加量為4%。