徐從華,馬挺軍

(北京農(nóng)學(xué)院 食品科學(xué)與工程學(xué)院，北京 100026)

芒果葉為漆樹(shù)科植物芒果(MangiferaindicaL.)的葉，在中國(guó)主要產(chǎn)于云南、廣西、廣東、福建、臺(tái)灣等地，在印度、孟加拉和馬來(lái)西亞等國(guó)也有大量種植，品種較為豐富[1]。芒果葉主要含有酚酸、黃酮、甾體皂苷等成分[3]，現(xiàn)代藥理研究表明芒果葉及其提取物具有止咳平喘[4-6]，抗氧化[7]，抗炎[8]等作用。

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，飼料供需矛盾日益突出，飼料原料不足，尤其是蛋白質(zhì)飼料不足，已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的極大障礙。就全世界魚(yú)用配合飼料組成而言，其主要蛋白質(zhì)飼料仍是魚(yú)粉和大豆粕。這兩種傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)飼料不僅產(chǎn)量有限，而且價(jià)格高昂，因此世界各國(guó)都十分重視新蛋白質(zhì)飼料的開(kāi)發(fā)，以拓寬飼料來(lái)源，降低飼料成本[9]。而芒果葉的來(lái)源較為充足，其含有大量的蛋白質(zhì)、脂肪、維生素和礦物質(zhì)，且黃酮和酚酸都是很好的抗氧化劑，如果魚(yú)飼料中添加了這些物質(zhì)，會(huì)起到抗氧化、消炎殺菌的作用。除此之外，有研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加芒果葉浸膏，提高了羅非魚(yú)、鯉魚(yú)和甲魚(yú)的抗氧化能力及免疫力；進(jìn)而提高了羅非魚(yú)成活率、鯉魚(yú)和甲魚(yú)的生長(zhǎng)速度；同時(shí)提高了飼料轉(zhuǎn)化效率，降低了養(yǎng)殖的飼料成本[10]。而且芒果葉提取物對(duì)水產(chǎn)常見(jiàn)病原菌表現(xiàn)出較好的抑菌活性[11]?；诖?，研究不同品種芒果葉中的活性成分含量及清除DPPH的能力，選擇出品質(zhì)較佳的芒果葉品種，對(duì)開(kāi)發(fā)新型魚(yú)飼料有十分重要的意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

原料：干燥的貴妃芒果葉、圣心芒果葉、臺(tái)芒一號(hào)芒果葉、金煌芒果葉、象牙芒果葉由海南東方農(nóng)場(chǎng)提供。用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩，備用。

主要試劑：蘆丁、沒(méi)食子酸、Folin-Ciocalteu試劑(Sigma)，碳酸鈉、乙醇、亞硝酸鈉溶液、氯化鋁溶液、氫氧化鈉(北京化工廠)均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1黃酮含量測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：精確稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20 mg，置于100 ml容量瓶中，加60%乙醇溶解，稀釋至刻度，精確量取25 ml，置于50 ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得每1 ml含蘆丁0.1 mg的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：精確量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 ml，分別置于25 ml容量瓶中，加30%乙醇補(bǔ)足至12.5 ml，加5%亞硝酸鈉溶液0.75 ml搖勻，放置5 min后，精確加入10%硝酸鋁溶液0.75 ml搖勻，放置5 min，再精確加入1 mol/L氫氧化鈉溶液10 ml，用30%乙醇稀釋至刻度。以第1容量瓶為空白，于510 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

根據(jù)莫陽(yáng)麗等[12]的研究方法提取芒果葉中黃酮，測(cè)定芒果葉的黃酮含量。

1.2.2酚酸的測(cè)定方法

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

稱(chēng)取0.005 0 g沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品，定容至50 ml，配成0.1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液，分別吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液，定容至3 ml。配成10、20、30、40、50 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液。吸取上述標(biāo)準(zhǔn)液0.4 ml于試管中，加入2 mol/L福林酚試劑0.1 ml，加入15%的碳酸鈉溶液2 ml，用蒸餾水定容至8 ml。在25℃反應(yīng)2 h，另吸取蒸餾水0.4 ml，同上操作。在765 nm處測(cè)定吸光度。

(2)樣品測(cè)定

固體樣品在料液比1:30(液為60%的乙醇)、溫度為50℃，時(shí)間40 min，回流提取總酚酸。抽濾，取膏體用乙醇溶解，定容至50 ml，取0.4 ml，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測(cè)定。

1.2.3營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定

蛋白質(zhì)含量測(cè)定參照GB 5009.5—2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》[13]；脂肪含量的測(cè)定方法參照GB/T 5009.6—2016《食品中脂肪的測(cè)定》[14]；總碳水化合物的測(cè)定方法，參照GB 5009.7—2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中還原糖的測(cè)定》[15]；總糖含量的測(cè)定方法，參照GB 5009.8—2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測(cè)定》[16]；淀粉含量的測(cè)定方法，參照GB 5009.9—2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中淀粉的測(cè)定》[17]；粗纖維含量的測(cè)定方法參照GB/T 5009.10—2003 《植物類(lèi)食品中粗纖維的測(cè)定》[18]。

1.2.4芒果葉清除DPPH活性的測(cè)定

DPPH溶液配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取20 mg DPPH，現(xiàn)用現(xiàn)配，用無(wú)水乙醇溶解并定容至250 ml。

分別將2 ml不同濃度的芒果葉提取物待測(cè)溶液及2 ml DPPH溶液加入同一具塞試管中，搖勻，放置30 min后，以無(wú)水乙醇為空白測(cè)定其吸光度Aj，同時(shí)測(cè)定DPPH溶液與2 ml無(wú)水乙醇混合后的吸光度Ac，以及2 ml芒果葉提取物溶液與2 ml無(wú)水乙醇混合后的吸光度Ai。按照下列公式計(jì)算清除率，清除率越大抗氧化能力越強(qiáng)。分光光度計(jì)波長(zhǎng)為535 nm。

清除率=[1-(Aj-Ai)÷Ac]×100%

式中：Ai為2 mlDPPH+2 ml樣品待測(cè)溶液的吸光度值；Aj為2 ml樣品待測(cè)溶液+2 ml乙醇的吸光度值；Ac為2 mlDPPH+2 ml乙醇的吸光度值；每個(gè)樣品的測(cè)定管做三個(gè)平行。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃酮與酚酸含量

五種芒果葉的黃酮和酚酸含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，象牙芒果葉的黃酮含量顯著高于其它芒果葉(P>0.05)，其含量為0.060 4±0.000 3 g/g，臺(tái)農(nóng)一號(hào)芒果葉中黃酮含量最低0.017 4±0.000 4 g/g，貴妃、圣心、金煌芒果葉中黃酮含量均為0.03～0.05 g/g；臺(tái)農(nóng)一號(hào)、貴妃、象牙芒果葉的酚酸含量約為3.000 0 mg/g，圣心、金煌芒果葉中酚酸含量較低，分別為1.058 5±0.000 4 mg/g、1.152 9±0.000 4 mg/g。綜上所述，基于黃酮和酚酸含量的比較，象牙芒果葉和貴妃芒果葉的品質(zhì)較好。

圖1 五種芒果葉中黃酮與酚酸含量

2.2 五種芒果葉中營(yíng)養(yǎng)成分含量

五種芒果葉的營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 五種芒果葉中營(yíng)養(yǎng)成分含量.a～d表示顯著性差異(P<0.05)。

圖2(a)～(f)分別對(duì)應(yīng)五種芒果葉中蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、總糖、淀粉及粗纖維含量的測(cè)定結(jié)果。由圖2(a)可知，金煌和圣心芒果葉中蛋白質(zhì)含量顯著高于其他品種(P<0.05)，分別為10.00±0.17 g/100 g和10.20±0.10 g/100 g，另外三種蛋白質(zhì)含量在9.00 g/100 g左右；由圖(b)可知，圣心芒果葉中脂肪含量最高為2.80±0.17 g/100 g，象牙芒果葉中脂肪含量最低為1.20±0.17 g/100 g，臺(tái)農(nóng)一號(hào)與貴妃芒果葉種脂肪含量在2.60 g/100 g左右，而金煌芒果葉中的脂肪含量為2.30±0.26 g/100 g；由圖(c)可知，五種芒果葉的碳水化合物含量均在65.00 g/100 g以上，其中象牙芒果葉的碳水化合物含量最高；由圖(d)可知，臺(tái)農(nóng)一號(hào)、象牙和貴妃芒果葉的總糖含量顯著高于圣心和金煌芒果葉的總糖含量(P< 0.05)，具體含量分別為5.80±0.10 g/100 g、5.40±0.44 g/100 g和5.10±0.17 g/100 g；由圖2(e)可知，圣心芒果葉的淀粉含量(11.10±0.26 g/100 g)顯著高于其它品種的芒果葉(P<0.05)，其次為金煌芒果葉(9.70±0.35 g/100 g)，而臺(tái)農(nóng)一號(hào)芒果葉、象牙芒果葉和貴妃芒果葉淀粉含量沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)，均在7.50 g/100 g左右；由圖2(f)可知，臺(tái)農(nóng)一號(hào)和貴妃芒果葉的粗纖維含量無(wú)顯著性差異(P>0.05)，均在27.00 g/100 g以上，但顯著高于其它三種芒果葉的粗纖維含量。

2.3 芒果葉清除DPPH活性

五種芒果葉提取物(2 mg/ml)清除自由基DPPH能力的測(cè)定結(jié)果如表1所示。從表1可知，五種芒果葉清除自由基DPPH的能力為：象牙芒果葉>貴妃芒果葉>金煌芒果葉>圣心芒果葉>臺(tái)農(nóng)一號(hào)芒果葉。

表1 五種芒果葉提取物(2 mg/ml)清除自由基DPPH能力的測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

研究表明，在魚(yú)飼料中尤其是草食性魚(yú)類(lèi)配合飼料中使用一定量的苜蓿草粉，有益于提高魚(yú)的生長(zhǎng)性能、改善外觀體形和體色以及產(chǎn)品品質(zhì)，降低飼料成本。苜蓿的粗蛋白質(zhì)含量高為12.3%～26.1%，一般為18.5%左右[19]；和干苜蓿葉的營(yíng)養(yǎng)成分作對(duì)比，五種芒果葉中蛋白質(zhì)的含量均約為干苜蓿葉中蛋白質(zhì)的含量的1/2。而飼料蛋白質(zhì)水平過(guò)高，容易導(dǎo)致飼料營(yíng)養(yǎng)失衡，降低魚(yú)類(lèi)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化利用效率，增加養(yǎng)殖污染物的排放，不僅增加了飼料成本,還易造成水體環(huán)境的污染[20-21]。比較五種芒果葉的黃酮和酚酸含量發(fā)現(xiàn)，象牙芒果葉和貴妃芒果葉品質(zhì)較好；基于六種營(yíng)養(yǎng)成分含量的比較，貴妃芒果葉綜合品質(zhì)較好，此外，其DPPA清除率達(dá)到61.45%。綜合考慮，貴妃芒果葉在所檢測(cè)的芒果葉中最適合做魚(yú)飼料輔料，不僅能節(jié)約成本，還能提供所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并且可以有效地防控魚(yú)類(lèi)疾病的發(fā)生和傳播。