宇汝勝 童鐘 段勝 王曉剛 鄭吉順 胡啟立

肝硬化是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)慢性攜帶者常見并發(fā)癥，也是增加病人罹患肝癌風(fēng)險(xiǎn)的重要原因[1-2]。前S1抗原(Pre-S1 antigen，PreS1Ag)結(jié)構(gòu)域是肝細(xì)胞上的主要病毒附著位點(diǎn)，在HBV感染和宿主免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，可作為治療靶點(diǎn)或開發(fā)HBV感染抑制劑、HBV疫苗、HBV感染的診斷工具[3-5]。此外，PreS1Ag可用于肝細(xì)胞癌發(fā)展和復(fù)發(fā)的預(yù)測[6]，證實(shí)PreS1Ag在HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生中的作用。本研究探討PreS1Ag/HBsAg比值是否可用于HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

對象與方法

一、對象

2019年3月～2021年4月我院收治HBV相關(guān)肝硬化肝癌病人61例(發(fā)生組)，未發(fā)生肝癌的HBV相關(guān)肝硬化病人61例(未發(fā)生組)[7]。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)HBV-DNA檢測存在HBV感染，且符合肝硬化相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；(2)肝硬化分期為代償期肝硬化(早期肝硬化，肝功正?；蜉p度異常，可有門靜脈高壓，但沒有腹水，肝性腦病或上消化道出血)[8]；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他型肝炎病毒感染；長期服用肝損性藥物或β、γ等射線暴露史者；因藥物性、代謝性及其他因素導(dǎo)致的肝硬化。發(fā)生組病人年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg高于未發(fā)生組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。本研究通過本院倫理委員會審核并批準(zhǔn)。

表1 兩組病人傾向性匹配后基線資料比較

二、方法

1.一般資料收集：于入院時(shí)收集病人一般資料，包括年齡、性別、吸煙、喝酒、身高、體重、肝硬化病程、合并癥，PreS1Ag、HBsAg水平及生化指標(biāo)。

2.PreS1Ag、HBsAg水平測量：抽取所有受試者5 ml空腹靜脈血，采用3.2%檸檬酸抗凝管抗凝，3 500 r/min離心5分鐘后，取上層液，置于-80 ℃醫(yī)用冰箱中保存，采用ARCHITECT?化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，測量病人PreS1Ag、HBsAg水平及其PreS1Ag與HBsAg比值。以相對光單位測量化學(xué)發(fā)光反應(yīng)結(jié)果，使用校準(zhǔn)曲線測定標(biāo)本中乙肝五項(xiàng)及PreS1Ag的濃度。

3.生化指標(biāo)測量：取血清標(biāo)本，使用全自動生化分析儀采用酶聯(lián)免疫吸附法測量病人ALT、AST、膽紅素、血清白蛋白、甲胎蛋白水平等。

4.HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《2017 APASL亞太臨床實(shí)踐指南：肝癌的管理》中“肝癌”的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評估[7]。

5.質(zhì)量控制：兩名專職人員嚴(yán)格按照納入、排除標(biāo)準(zhǔn)選擇研究對象；調(diào)查員經(jīng)研究者統(tǒng)一培訓(xùn)。采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行資料收集、整理，并剔除無效數(shù)據(jù)；數(shù)據(jù)錄入采用雙人錄入、核對。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

1.HBV相關(guān)肝硬化肝癌病人PreS1Ag、HBsAg水平及PreS1Ag/HBsAg比值：發(fā)生組病人PreS1Ag、HBsAg水平及PreS1Ag/HBsAg分別為(112.36±20.47)ng/ml、(3.67±0.29)log IU/ml和 (1.14±0.20)。

2.HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析：Logistic回歸分析顯示，年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg是HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素，見表2。

3.HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生危險(xiǎn)因素預(yù)測效能分析:根據(jù)多因素Logistic回歸分析結(jié)果建立預(yù)測模型，結(jié)果顯示，HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg在預(yù)測HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生均具臨床價(jià)值，見圖1，表3。

表2 HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析

圖1 HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生危險(xiǎn)因素預(yù)測效能的ROC曲線

表3 HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生危險(xiǎn)因素預(yù)測效能分析

討論

HBsAg是臨床上判斷HBV在宿主體內(nèi)復(fù)制并具有傳染性的重要血清學(xué)指標(biāo)[9]。PreS1Ag可通過與?；悄懰徕c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)多肽相互作用，介導(dǎo)病毒與宿主細(xì)胞受體相互作用以進(jìn)入肝細(xì)胞，并在HBV病毒粒子的組裝和釋放中起關(guān)鍵作用[10]。Shouval等[11]研究認(rèn)為，PreS1Ag結(jié)構(gòu)域是治療性疫苗開發(fā)的理想免疫原候選物，也是識別非活動性HBV攜帶者的新工具，但與HBsAg的比值水平在早期預(yù)測HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)價(jià)值，尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。鑒于此，本研究檢測HBV相關(guān)肝硬化測量病人PreS1Ag、HBsAg及其比值水平，并探討其對肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的影響。

本研究結(jié)果顯示，HBV相關(guān)肝硬化病人PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg比值升高。有分析認(rèn)為，PreS是HBV的一個高度免疫原性區(qū)域，包含諸多B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的表位，在病毒復(fù)制和進(jìn)入肝細(xì)胞中具至關(guān)重要的作用，并反映了Dane粒子的數(shù)量。在HBV相關(guān)肝硬化病人中Dane顆粒數(shù)量增加，HBsAg水平增加，PreS1Ag也隨之增加，且增加幅度高于HBsAg，使PreS1Ag/HBsAg比值升高[12]。

本研究結(jié)果還觀察到年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg是HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素，年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg預(yù)測HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生均具臨床價(jià)值。先前研究也指出，HBV相關(guān)肝硬化肝癌發(fā)生率在不同年齡人群中具較大差異，40歲以下人群中較少見，但隨著年齡的增長呈線性增加，在70歲達(dá)到平臺期[13]。HBV相關(guān)肝硬化肝癌發(fā)生率在年齡中的差異機(jī)制尚不完全清楚。在HBsAg方面，經(jīng)典Wnt通路的異常調(diào)節(jié)導(dǎo)致淋巴增強(qiáng)結(jié)合因子1(LEF-1)蛋白表達(dá)異常是HBV相關(guān)肝硬化肝癌發(fā)生的關(guān)鍵，免疫組織化學(xué)染色和實(shí)時(shí) PCR 實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在表達(dá)HBsAg的肝細(xì)胞中Wnt信號通路失調(diào)，LEF-1上調(diào)。Tian等[14]發(fā)現(xiàn)，LEF-1的表達(dá)與肝癌組織中的HBsAg表達(dá)密切相關(guān)，在HBsAg陰性組織中的腫瘤細(xì)胞和瘤周細(xì)胞之間進(jìn)行比較時(shí)，LEF-1蛋白表達(dá)無顯著差異。證實(shí)HBsAg 可能通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路在HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生中發(fā)揮重要作用。PreS1Ag及PreS1Ag/HBsAg方面，PreS1Ag是成熟病毒粒子包膜的主要成分，參與了病毒-宿主細(xì)胞的相互作用過程。PreS1Ag增加可導(dǎo)致氧化應(yīng)激和進(jìn)一步的肝損傷，并通過激活血管內(nèi)皮生長因子/Akt/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白、calpain切割和核因子κB通路，形成活性氧，增加肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[15]。

綜上所述，年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg是HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生危險(xiǎn)因素，HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg預(yù)測HBV相關(guān)肝硬化病人肝癌發(fā)生均具臨床價(jià)值。本研究的不足之處在于HBsAg水平在HBV相關(guān)肝硬化病人疾病進(jìn)展過程中具動態(tài)變化趨勢，但本研究僅測量了病人入組時(shí)的HBsAg水平及其PreS1Ag/HBsAg比值，未動態(tài)測量病人HBsAg水平及其PreS1Ag/HBsAg比值；同時(shí)本研究僅納入了代償期HBV相關(guān)肝硬化病人，研究結(jié)果可能存在偏倚，后期需動態(tài)測量病人HBsAg水平及其PreS1Ag/HBsAg比值，并納入失代償期HBV相關(guān)肝硬化病人，以對本研究結(jié)論做進(jìn)一步驗(yàn)證。