高青華，高傳慶，孫圣福，胡莉萍，楚遵鋒，張 月，馬慧玲，蘭鄒然，3

（1.濱州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東濱州 256600；2.山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250022；3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇南京 210008）

炭疽是由炭疽桿菌引起的一種人獸共患傳染病，畜間以牛、馬、羊等食草動物最易感。在炭疽自然疫源地環(huán)境中存在的炭疽桿菌會通過各種途徑感染人和動物，人和動物感染后排出的炭疽桿菌又會污染環(huán)境。人炭疽病例容易被發(fā)現(xiàn)，而動物炭疽常因皮膚被毛發(fā)覆蓋而不易被發(fā)現(xiàn)，只有動物死亡后，才會被有經(jīng)驗的獸醫(yī)識別。環(huán)境中的炭疽桿菌容易感染動物，而人類主要通過接觸病畜毛皮和食肉而感染，如果手部皮膚出現(xiàn)破損，就更易被感染，尤其是屠宰從業(yè)人員，此外吸入含有炭疽桿菌的粉塵或氣溶膠也可被感染[1]。

2021 年山東省降雨量超乎預(yù)期，而雨水沖刷導(dǎo)致炭疽桿菌從地下到地表，容易造成人畜感染。山東省衛(wèi)健委通報，在連續(xù)6 年全省未報告人間炭疽病例后，2021 年又出現(xiàn)了人間病例，從而引起了省委、省政府的高度關(guān)注。出現(xiàn)人炭疽病例后，依據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部印發(fā)的《炭疽防治技術(shù)規(guī)范》要求，獸醫(yī)部門需開展動物間的緊急流行病學(xué)調(diào)查[2]。本研究結(jié)合實踐，參考《炭疽防治技術(shù)規(guī)范》，就出現(xiàn)人炭疽病例后的畜間緊急流行病學(xué)調(diào)查方案的制定實施和注意事項展開探討，希望對獸醫(yī)工作者開展類似工作有所幫助。

1 方案制定與實施

《炭疽防治技術(shù)規(guī)范》要求，在出現(xiàn)人間炭疽病例時，需要成立調(diào)查組開展動物間緊急流行病學(xué)調(diào)查，以便確定感染來源，掌握畜間及環(huán)境中的炭疽桿菌感染及分布狀況，大致需要開展以下工作：其一，確定調(diào)查目的；其二，確定調(diào)查范圍；其三，確定調(diào)查方式；其四，確定采樣數(shù)量和檢測方法；其五，確定調(diào)查時間；其六，方案實施；最后，收集、整理和分析數(shù)據(jù)。

1.1 調(diào)查目的

調(diào)查目的主要有兩個：一是追溯人感染病例的關(guān)聯(lián)動物，協(xié)助衛(wèi)健部門查找人感染病例的可能傳染源；二是掌握調(diào)查區(qū)域范圍內(nèi)的畜間病例，以及環(huán)境中的炭疽桿菌污染情況。

1.2 調(diào)查范圍

人間炭疽病例所在縣級區(qū)域的所有牛羊養(yǎng)殖場戶以及屠宰、加工、銷售場點。

1.3 區(qū)域劃分

1.3.1 核心區(qū) 人間炭疽病例關(guān)聯(lián)的動物養(yǎng)殖、交易、屠宰和加工場點。

1.3.2 重點區(qū) 以核心區(qū)為中心，周邊3 km 范圍內(nèi)所有牛羊養(yǎng)殖場戶、屠宰場點，以及全縣與其有關(guān)聯(lián)的牛羊屠宰場點、加工和銷售場點。

1.3.3 一般區(qū) 核心區(qū)、重點區(qū)以外的，全縣其他區(qū)域的牛羊養(yǎng)殖場點。

1.4 調(diào)查方式

1.4.1 核心區(qū) 臨床排查并填寫專項流行病學(xué)調(diào)查表，現(xiàn)場采集血樣和環(huán)境樣品，溯源調(diào)查人間病例發(fā)病前20 d 內(nèi)養(yǎng)殖場內(nèi)飼養(yǎng)動物的調(diào)入、調(diào)出情況，屠宰、加工、銷售相關(guān)動物及動物產(chǎn)品的流動情況，以及放牧、割草等活動。

1.4.2 重點區(qū) 臨床排查并填寫專項流行病學(xué)調(diào)查表，采集環(huán)境樣品。

1.4.3 一般區(qū) 進(jìn)行相關(guān)動物養(yǎng)殖場點臨床排查。

1.5 采樣數(shù)量

1.5.1 核心區(qū) 采集所有與人感染病例關(guān)聯(lián)的動物抗凝血樣品，每頭（只）動物1 mL，并采集這些動物關(guān)聯(lián)場點的環(huán)境樣品，每個場點20 份，采樣中應(yīng)考慮到每個場點的樣品分布。

1.5.2 重點區(qū) 每個場點采集環(huán)境樣品5 份。

1.5.3 一般區(qū) 根據(jù)臨床排查情況進(jìn)行采樣。

1.6 檢測方法

對血樣，采用堿性美藍(lán)莢膜染色鏡檢法（或其他染色法）或熒光PCR 方法檢測；對環(huán)境樣品，采用熒光PCR 方法檢測。

1.7 調(diào)查時限

3 d 內(nèi)完成所有調(diào)查、采樣和檢測工作。

1.8 實施要求

各鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道辦）獸醫(yī)站將動物炭疽排查日報表于每天下午3 點前報縣動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)。炭疽流行病學(xué)調(diào)查表于開始調(diào)查后第3 天下午5 點前報縣動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)。對檢測發(fā)現(xiàn)的陽性動物，嚴(yán)格按照《炭疽防治技術(shù)規(guī)范》處置。對核心區(qū)，由養(yǎng)殖戶和畜牧獸醫(yī)部門共同開展消殺工作；對重點區(qū)和一般區(qū)，由畜牧獸醫(yī)部門指導(dǎo)養(yǎng)殖戶自行開展消殺工作。

1.9 報告撰寫

由緊急流行病學(xué)調(diào)查組撰寫報告，根據(jù)調(diào)查進(jìn)度寫出初步調(diào)查報告、階段性調(diào)查報告和調(diào)查報告終稿等。

2 注意事項

2.1 劃定區(qū)域，基于風(fēng)險抽樣，減少工作量

通常情況下，根據(jù)人間病例關(guān)聯(lián)情況，將調(diào)查范圍劃為核心區(qū)、重點區(qū)和一般區(qū)。核心區(qū)一般確定為與人間病例緊密關(guān)聯(lián)的養(yǎng)殖、屠宰、銷售和加工場點，如果人間病例所在縣從事零星宰殺動物的場點比較容易確定，那么可以將這些場點也納入核心區(qū)進(jìn)行重點調(diào)查和采樣。核心區(qū)的調(diào)查往往決定整個調(diào)查的質(zhì)量和進(jìn)程，所以在制定調(diào)查方案時，確定核心區(qū)要慎重，應(yīng)認(rèn)真研究后確定；選擇調(diào)查場點時，應(yīng)考慮動物種類，是僅調(diào)查牛相關(guān)場點，還是僅調(diào)查羊相關(guān)場點，或是牛羊相關(guān)場點都調(diào)查，這取決于與人間病例關(guān)聯(lián)的動物種類。

2014 年后山東省已連續(xù)6 年未報告人間炭疽疫情，2021 年再次發(fā)現(xiàn)人炭疽病例，這與動物的調(diào)入和雨水的異常增多有一定關(guān)系，但人炭疽病例數(shù)量較少，推斷關(guān)聯(lián)的動物感染數(shù)量也不會太多。因此，沒有必要開展大范圍采樣，否則會增加大量無效勞動。采樣時要注重基于風(fēng)險的采樣，找準(zhǔn)與人間病例密切相關(guān)的養(yǎng)殖、屠宰、加工、銷售場點以及相關(guān)動物、環(huán)境，這樣才能提高采樣效率，找準(zhǔn)問題，發(fā)現(xiàn)炭疽病源。在制定方案時，一定要重點考慮采樣環(huán)節(jié)的設(shè)置，從開展的采樣檢測情況看，大部分活動物檢測結(jié)果為陰性。對活動物采樣比較困難，所以應(yīng)盡可能減少采樣數(shù)量，以減輕工作量，提升工作效率。因此，風(fēng)險場點的環(huán)境樣品應(yīng)是采樣重點。

2.2 做好個人防護(hù)

炭疽樣品采集涉及風(fēng)險點采樣，因此一定要做好個人防護(hù)。鞋套和手套應(yīng)選擇緊固、不容易扎破的，同時還要考慮便利穿戴和脫下，防護(hù)服需要保證質(zhì)量，盡可能防止采樣時被感染。到現(xiàn)場前，可服用阿莫西林、環(huán)丙沙星、紅霉素、羅紅霉素、阿奇霉素等抗菌藥物預(yù)防。另外，在對牛、馬等大動物采樣時，一定要做好保定工作，防止其對人產(chǎn)生傷害。

2.3 做好車輛消毒

到達(dá)風(fēng)險點的車輛也存在炭疽桿菌污染風(fēng)險，所以要避免車輛過于接近風(fēng)險場點。人員上車前應(yīng)脫下穿戴的防護(hù)用品，不可將用過的防護(hù)用品帶回到車內(nèi)。制定車輛消毒規(guī)程，對去過風(fēng)險點的車輛開展消毒工作，包括車輛外表和車輛內(nèi)部的消毒。

2.4 現(xiàn)場調(diào)查時及早申請公安部門介入

從目前人間炭疽病例的發(fā)生情況來看，多數(shù)病例通過與發(fā)病或病死動物接觸而感染[3-5]。而宰殺發(fā)病或病死動物是非法的，因此相關(guān)人員往往存在隱瞞心理，現(xiàn)場與其交流時獲得的信息可信度較低，這通常會直接影響調(diào)查效率。因此，對于炭疽的現(xiàn)場調(diào)查，一定要申請公安部門盡快介入，如果仍然不能獲取可靠信息，則建議公安部門采取偵破手段，來獲取真實信息。

2.5 多種檢測方法結(jié)合使用

動物炭疽的檢測可參考《動物炭疽診斷技術(shù)》（NY/T561—2015），將堿性美蘭莢膜染色法、革蘭氏染色法等用于細(xì)菌學(xué)檢查，也可以使用PCR方法進(jìn)行核酸檢測。染色鏡檢法和PCR 法各有利弊，需要結(jié)合使用。染色鏡檢法操作簡便，檢測成本較低，但是由于整個檢測過程均需人工操作，從視野中尋找目標(biāo)菌，工作量較大；而PCR 方法由于可以采用批量快速核酸自動提取技術(shù)，工作量相對較小，適合于大批量樣品檢測。從理論上來說，染色鏡檢法的檢出限應(yīng)該會比PCR 法更低，畢竟提取和擴(kuò)增炭疽桿菌需要一定炭疽桿菌拷貝數(shù)。熒光PCR 法檢出限也較低，但仍不及染色鏡檢法的檢出限。目前農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和出入境動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)中還沒有納入熒光PCR 檢測方法，但是市場上已有不少熒光PCR 商品試劑盒，期待早日將熒光PCR 方法納入動物炭疽診斷相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，以滿足實際需求。

2.6 其他措施

一旦發(fā)生洪澇災(zāi)害，務(wù)必按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《洪澇災(zāi)害后動物防疫技術(shù)指南》，做好災(zāi)后消毒、死亡畜禽無害化處理、緊急免疫等防疫措施。