徐慧芳，萬(wàn)子維，盛榮，魏文學(xué)，張文釗，黃國(guó)勤

1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)生態(tài)科學(xué)研究中心，南昌 330045；2.中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所桃源農(nóng)業(yè)生態(tài)試驗(yàn)站/亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過(guò)程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)沙 410125

土壤微生物群落多樣性作為評(píng)價(jià)土壤質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)，已越來(lái)越引起人們的廣泛關(guān)注[1］。微生物在土壤生物化學(xué)循環(huán)中扮演著重要角色，研究表明，不同的農(nóng)業(yè)管理措施將導(dǎo)致土壤微生物群落結(jié)構(gòu)及其多樣性的變化[2］，進(jìn)而影響農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。因此，研究稻田長(zhǎng)期不同耕作模式下土壤微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性的變化，可為制定合理的耕作措施及改善土壤質(zhì)量提供重要依據(jù)。

真菌在土壤中的數(shù)量?jī)H次于細(xì)菌和放線菌，其在有機(jī)質(zhì)分解[2］、土壤養(yǎng)分固定[3］、促進(jìn)植物養(yǎng)分吸收[4］及增強(qiáng)土壤抗鹽堿能力[5］等過(guò)程中均發(fā)揮著重要作用，是維持生態(tài)系統(tǒng)健康的關(guān)鍵指示物。人為干擾、輪作方式及土地管理措施均會(huì)影響土壤真菌群落組成[1，3，6］。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)輪作方式對(duì)真菌群落結(jié)構(gòu)的影響已開(kāi)展了一些研究。例如，Behnke等[7］研究發(fā)現(xiàn)，與玉米單作相比，玉米-大豆輪作（旱旱輪作）處理顯著增加了真菌的數(shù)量。陽(yáng)祥等[8］研究表明水旱輪作模式增加了土壤真菌多樣性指數(shù)。蘇婷等[9］研究發(fā)現(xiàn)，相較雙季玉米和單季水稻種植方式，玉米-水稻的水旱輪作顯著增加了土壤真菌的數(shù)量。

雙季稻在我國(guó)水稻種植歷史中占據(jù)重要的地位，對(duì)于保障我國(guó)糧食安全意義重大。然而，近年來(lái)由于雙季稻種植的經(jīng)濟(jì)效益逐漸下滑，加之農(nóng)村勞動(dòng)力大量轉(zhuǎn)移，這些因素促使農(nóng)民將部分長(zhǎng)期淹水的雙季稻田轉(zhuǎn)化為單季稻或者水旱輪作等種植體系。研究表明，水旱輪作引起了土壤養(yǎng)分元素形態(tài)和有效性的變化[10］，但養(yǎng)分元素的變化是否會(huì)導(dǎo)致土壤真菌豐度及群落結(jié)構(gòu)變化的研究較少。

因此，本研究通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR 和高通量測(cè)序技術(shù)研究我國(guó)典型稻田耕作模式（雙季稻，中稻，中稻-油菜，中稻-小白菜-油菜）對(duì)土壤真菌的豐度及群落組成的影響，旨在為稻田生態(tài)系統(tǒng)可持續(xù)發(fā)展等相關(guān)措施的制定提供重要的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)樣地及土壤樣品采集

試驗(yàn)樣地位于湖南省桃源縣中國(guó)科學(xué)院桃源農(nóng)業(yè)生態(tài)試驗(yàn)站水田長(zhǎng)期耕作模式試驗(yàn)田（2012 年至今），東經(jīng)111°27?，北緯28°55?。該地區(qū)屬于我國(guó)典型的中亞熱帶向北亞熱帶過(guò)渡的季風(fēng)濕潤(rùn)氣候區(qū)，年均溫16.5 ℃，年降雨1 447.9 mm，年平均日照1 531.4 h。供試的土壤為第四紀(jì)紅色黏土發(fā)育的紅壤，試驗(yàn)前為早稻-晚稻種植模式。試驗(yàn)前耕層土壤（0~15 cm）的有機(jī)質(zhì)含量26.08 g/kg，全氮1.28 g/kg，全磷0.54 g/kg，全鉀12.79 g/kg，pH 4.84。

試驗(yàn)田設(shè)置4 個(gè)處理，分別為：中稻、雙季稻（早稻-晚稻）、中稻-油菜、中稻-小白菜-油菜，記為MR、DR、MROR、MPOR，每個(gè)處理均設(shè)置3個(gè)野外重復(fù)。不同處理之間的施肥種類和施肥用量詳見(jiàn)表1。

表1 不同耕作模式下稻田施肥狀況Table 1 Amount of fertilizer applied of four farming patterns kg/m2

MR 模式下，中稻的氮肥按照基肥∶分蘗肥∶穗肥=4∶5∶1 施用，磷鉀肥作基肥一次施入。有機(jī)質(zhì)含量為27.34 g/kg，全氮1.58 g/kg，全磷0.64 g/kg，全鉀12.11 g/kg，pH 5.13，水分含量28.66%，銨態(tài)氮含量2.53 g/kg，硝態(tài)氮含量0.51 g/kg，可溶性有機(jī)碳

84 .57 mg/kg。

DR 模式下，早稻的氮肥按照基肥∶分蘗肥=4∶6 施用，磷鉀肥作基肥一次施入，而晚稻采用氮肥按照基肥∶分蘗肥∶穗肥=4∶5∶1 施用，磷鉀肥作基肥一次施入。有機(jī)質(zhì)含量為34.38 g/kg，全氮1.60 g/kg，全磷0.6 g/kg，全鉀12.44 g/kg，pH 5.17，水分含量31.33%，銨態(tài)氮含量2.78 g/kg，硝態(tài)氮含量0.61 g/kg，可溶性有機(jī)碳83.22 mg/kg。

MROR 模式下，復(fù)合肥和有機(jī)肥均作為基肥一次施用。有機(jī)質(zhì)含量為26.23 g/kg，全氮1.47 g/kg，全磷0.57 g/kg，全鉀13.58 g/kg，pH 5.22，水分含量26.33%，銨態(tài)氮含量1.92 g/kg，硝態(tài)氮含量1.19 g/kg，可溶性有機(jī)碳85.46 mg/kg。

MRPOR 模式下，有機(jī)肥均作為基肥一次施用，小白菜移栽40 d 后收獲，移栽油菜。有機(jī)質(zhì)含量為26.04 g/kg，全 氮1.36 g/kg，全 磷0.60 g/kg，全 鉀13.00 g/kg，pH 5.38，水分含量25.33%，銨態(tài)氮含量1.87 g/kg，硝態(tài)氮含量1.04 g/kg，可溶性有機(jī)碳78.76 mg/kg。

2017 年晚稻收獲后于11 月3 日采用隨機(jī)多點(diǎn)對(duì)不同耕作模式的0~15 cm 的耕作層土壤樣品進(jìn)行取樣，去除明顯的雜質(zhì)和根系后，充分混勻后分為兩部分，一部分約200 g 土壤樣品，用錫箔紙包裝后，裝入滅菌且寫有標(biāo)簽的布袋并置于液氮罐中，于?80 ℃冰箱保存，用于真菌豐度及群落結(jié)構(gòu)分析；另一部分新鮮土壤樣品放入冰盒后于4 ℃冰箱保存，用于土壤理化性質(zhì)的測(cè)定。

1.2 土壤理化性質(zhì)的測(cè)定

土壤理化性質(zhì)采用常規(guī)分析方法[11］。土壤全氮用H2SO4消化后采用流動(dòng)注射分析儀進(jìn)行測(cè)定（FI?Astar5000，F(xiàn)OSS，Sweden）；全磷經(jīng)過(guò)高氯酸-硫酸法熔融后采用鉬銻抗比色法測(cè)定；全鉀用氫氧化鈉灼燒法后采用火焰光度法測(cè)定；土壤pH 采用水土比1∶1，用pH 計(jì) 測(cè) 定（FE-20，METTLER TOLE?DO，China）；土壤有機(jī)質(zhì)通過(guò)重鉻酸鉀加熱后，采用硫酸亞鐵銨進(jìn)行滴定測(cè)定；土壤硝態(tài)氮和銨態(tài)氮用2 mol/L KCl浸提后，采用連續(xù)流動(dòng)分析儀測(cè)定（Flastar 5000 Analyzer）測(cè)定；土壤可溶性有機(jī)碳（DOC）采用0.5 mol/L 的K2SO4浸提后測(cè)定其含量；采用烘干法測(cè)定土壤質(zhì)量含水量。

1.3 土壤總DNA提取

土壤微生物總DNA 的提取主要采用Fast DNA SPIN 提取土壤DNA 試劑盒（MP Biomedicals，San?ta Ana，CA）。提取的土壤DNA 用50 μL 無(wú)菌水進(jìn)行稀釋，然后用1%的瓊脂糖凝膠檢測(cè)其質(zhì)量，最后采用Nanodrop ND-1000UV-Vis 分光光度計(jì)測(cè)定DNA 的濃度及質(zhì)量系數(shù)（Nanodrop Technologies，Wilmington，DE，USA）。凝膠電泳檢測(cè)圖顯示所提取的土壤總DNA 條帶未發(fā)生彌散，完整度較高，可直接用于后續(xù)的PCR擴(kuò)增。

1.4 熒光定量PCR擴(kuò)增及高通量測(cè)序

采 用 Nu-ssu-0817F （5′- TTAGCATG?GAATAATRRAATAGGA-3?） 和 Nu-ssu-1196R（5?-TTAGCATGGAATAATRRAATAGGA-3?）對(duì)18S rRNA 進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增體系為10 μL，包括上游引物（10 μmol/L）0.2 μL，下游引物（10 μmol/L）0.2 μL，5 μL 的SYBR GreenⅡ（TaKaRa），0.2 μL 的Rox（TaKaRa），DNA 為1 μL（5 ng），補(bǔ)無(wú)酶水至10 μL。熒光定量PCR 擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 °C 30 s，40 個(gè)循環(huán)的95°C 5 s，60°C 30 s。

由于18S rRNA 在大多數(shù)生物中趨于保守，生物之間的基因組序列變化不大，而其內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）作為非編碼區(qū)相對(duì)變化較大，并且在物種注釋分析時(shí)可以提供更加詳細(xì)的物種信息，因此，我們采用ITS 區(qū)域鑒定真菌的物種組成[12］。運(yùn)用ITS1F（5? -CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3?） 和ITS2R（5?-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3?）[13］對(duì)ITS 序列進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。擴(kuò)增體系為Mix（TaKa?Ra）12.5 μL，上游引物（10 μmol/L）7.5 μL，下游引物（10 μmol/L）7.5 μL，DNA 為2 μL（40 ng），補(bǔ)無(wú)酶水至25 μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 ℃10 min，94 ℃30 s，55 ℃30 s，72 ℃1 min，40 個(gè)循環(huán)；74 ℃9 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，使用膠回收試劑盒純化后送到上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行高通量測(cè)序，基于Illumina Miseq PE300 測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行雙端測(cè)序。

1.5 高通量測(cè)序數(shù)據(jù)OTU聚類及群落組成分析

高通量測(cè)序得到的雙端序列數(shù)據(jù)，根據(jù)序列首尾兩端barcode 和引物序列區(qū)分樣品得到有效序列。過(guò)濾去雜的數(shù)據(jù)采用97%進(jìn)行OTU（operational taxonomic units）聚類。為了得到每個(gè)OTU 對(duì)應(yīng)的物種分類信息，采用RDP classifier 貝葉斯算法對(duì)各個(gè)基因的OTU 代表序列進(jìn)行分類學(xué)分析，設(shè)置分類水平默認(rèn)置信度閾值為0.8，并在phylum（門）水平上統(tǒng)計(jì)各個(gè)樣本的群落組成。真菌ITS 數(shù)據(jù)庫(kù)為UNITE 8.0（http：//unite.ut.ee/index.php）[14］。真菌ITS 的高通量測(cè)序數(shù)據(jù)已經(jīng)上傳至NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)（No.PRJNA836033）。

真菌在不同耕作模式之間的群落組成差異分析采用基于歐式距離的PCA 主成分分析（principal component analysis）。Venn 圖用于分析不同耕作模式下真菌群落的結(jié)構(gòu)相似性。采用CANOCO 5.0的db-RDA（distance-based redundancy analysis）分析環(huán)境因子與真菌群落結(jié)構(gòu)的關(guān)系，其中采取前置選擇法（forward selection）確定每個(gè)環(huán)境因子對(duì)真菌群落結(jié)構(gòu)的相對(duì)貢獻(xiàn)率。

1.6 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS 25.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用單因素方差分析（one-way ANOVA）比較不同耕作模式下真菌18S rRNA 豐度的差異性；數(shù)據(jù)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，n=3；采用LSD 多重比較對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)（α=0.05）；采用Origin 2021和R軟件進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同耕作模式下稻田土壤的真菌豐度

從圖1可知，不同耕作模式之間真菌豐度存在顯著差異。真菌豐度在MRPOR 處理（4.15 × 109copies/g）中顯著高于MROR（2.05 × 109copies/g）與DR（3.6×109copies/g）（P<0.05）。MR（2.86×109copies/g）的真菌豐度顯著高于MROR（P<0.05），但DR 與MRPOR、MR 與MRPOR 之間的真菌數(shù)量差異不顯著（P>0.05）。

圖1 不同耕作模式土壤真菌豐度的變化Fig.1 The abundance of soil fungi under different farming patterns

2.2 不同耕作模式下稻田土壤的真菌群落組成

4 種典型的稻田耕作模式對(duì)真菌群落結(jié)構(gòu)的影響見(jiàn)PCA 分析圖（圖2）。由圖2 可見(jiàn)，PCA 分析共提取了2 個(gè)主成分PCA1 和PCA2，二者方差累計(jì)貢獻(xiàn)率為46.84%。代表不同處理的點(diǎn)距離越遠(yuǎn)，表明真菌群落結(jié)構(gòu)差異性越大。DR 與MR 環(huán)境樣本點(diǎn)的真菌群落結(jié)構(gòu)單獨(dú)聚在一起，而MROR 與MRPOR環(huán)境樣點(diǎn)的真菌群落結(jié)構(gòu)沒(méi)有明顯分離，說(shuō)明雙季稻（DR）轉(zhuǎn)為單季稻和水旱輪作耕作模式后顯著改變了真菌的β-多樣性。

圖2 不同耕作模式土壤真菌的主成分分析PCAFig.2 PCA analysis for soil fungi under different farming patterns

2.3 不同耕作模式下稻田土壤的真菌物種組成

如圖3 所示，不同耕作模式對(duì)土壤真菌OTU 有明顯影響。4 個(gè)處理共產(chǎn)生3 990 個(gè)OTU，其中共有的OTU 有358 個(gè)，占總OTU 數(shù)量的8.97%。DR、MR、MROR 及MRPOR 分別具有1 354、1 625、1 515及1 782 個(gè)OTU。MRPOR 獨(dú)有的OTU 數(shù)量最多（826），而MROR 獨(dú)有的OTU 數(shù)量最少（590）。MR與MRPOR 共有OTU 最多（659），DR 與MROR 共有的OTU 最少（500），結(jié)果表明，不同耕作模式下稻田土壤真菌組成存在差異，MR、MROR 及MRPOR均增加了土壤真菌類群。

圖3 不同耕作模式土壤真菌群落Venn圖Fig.3 Venn of soil fungi under different farming patterns

由圖4 可見(jiàn)，4 個(gè)處理檢測(cè)出的真菌門主要包括子囊菌門（Ascomycota）、擔(dān)子菌門（Basidiomycota）、壺菌門（Chytridiomycota）、球囊菌門（Glomeromyco?ta）、接合菌門（Zygomycota）及分類地位不確定真菌（Unclassified fungi）。其中，子囊菌門（24.12% ~31.77%）與擔(dān)子菌門（7.07%~24.71%）為優(yōu)勢(shì)菌門，均為常見(jiàn)門類。與DR 相比，MR、MROR、MRPOR 子囊菌門與接合菌門的相對(duì)豐度均增加，壺菌門的相對(duì)豐度均降低；擔(dān)子菌門的相對(duì)豐度在MRPOR 處 理 中 增 加，而 在MR 及MROR 處 理 中減少。

圖4 不同耕作模式土壤真菌門水平群落組成Fig.4 Composition of soil fungi phylum under different farming patterns

2.4 不同耕作模式下稻田土壤的真菌群落多樣性

不同耕作模式下稻田土壤真菌群落的Alpha 多樣性指數(shù)如表2 所示。其中Chao1 和ACE 表示菌群豐度，Shannon 和Simpson 表示菌群多樣性，PD whole tree 表示系統(tǒng)發(fā)育多樣性，Coverage 表示觀察到的物種覆蓋度。由表2可知，各處理覆蓋度均達(dá)到99%以上，說(shuō)明各樣本測(cè)序深度合理。MROR 與MRPOR 的Shannon 指 數(shù) 顯 著 高 于MR 與DR，而Simpson 指數(shù)正好相反。MRPOR 的真菌豐富度及系統(tǒng)發(fā)育多樣性均顯著高于其他3個(gè)處理。

表2 不同耕作模式下土壤真菌群落的Alpha多樣性指數(shù)Table 2 The fungi Alpha diversities of different genes among four farming patterns

2.5 不同耕作模式下稻田土壤的真菌豐度及群落結(jié)構(gòu)與環(huán)境因子的相關(guān)性

對(duì)真菌豐度與環(huán)境因子進(jìn)行Pearson 相關(guān)性分析，結(jié)果表明真菌數(shù)量與TK、pH、NO3?-N、水分含量的相關(guān)系數(shù)分別為0.505、0.707、0.744、0.123，其中真菌豐度與pH 及NO3?-N 呈現(xiàn)顯著正相關(guān)（P<0.05）；真菌數(shù)量與SOM、TN、TP、NH4+-N及作物產(chǎn)量的相關(guān)系數(shù)分別為?0.341、?0.644、?0.388、?0.633 及?0.123，其中真菌豐度與TN 及NH4+-N 呈現(xiàn)極顯著的負(fù)相關(guān)（P<0.01）。

由圖5可見(jiàn)，環(huán)境因子對(duì)土壤真菌群落結(jié)構(gòu)的解釋量前2 個(gè)排序軸分別為43.59%和20.98%。從箭頭長(zhǎng)度可見(jiàn)，TN、NH4+-N、土壤含水量及作物產(chǎn)量與真菌群落結(jié)構(gòu)分布相關(guān)性較好且均達(dá)到顯著性水平（P<0.05）。其中土壤含水量對(duì)于不同耕作模式下真菌群落結(jié)構(gòu)分布差異的解釋率最高，為39.5%，而TK解釋率最低，為10.4%。

圖5 不同耕作模式土壤真菌群落結(jié)構(gòu)的db-RDA圖Fig.5 db-RDA of soil fungi under different farming patterns

3 討 論

土壤微生物的群落結(jié)構(gòu)是土壤生態(tài)環(huán)境的重要生物指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，雙季稻轉(zhuǎn)變?yōu)橹械?小白菜-油菜后土壤真菌的數(shù)量顯著增加。通常pH[15］、溫度[16］、養(yǎng)分有效性[4］等被認(rèn)為是影響真菌數(shù)量的關(guān)鍵環(huán)境因子。在本研究中，雖然pH 與真菌豐度存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系，但4種稻田輪作模式之間pH 值無(wú)明顯差異（5.13~5.38）。因此，pH 可能不是導(dǎo)致中稻-小白菜-油菜模式下真菌數(shù)量增加的因素。而土壤硝態(tài)氮也與真菌豐度呈顯著正相關(guān)關(guān)系。造成這種現(xiàn)象的原因可能有以下兩方面：其一，相比雙季稻，在長(zhǎng)期施肥的情況下中稻-小白菜-油菜的土壤硝態(tài)氮含量比雙季稻增加了近1倍，促進(jìn)了微生物的代謝過(guò)程，這與周玉杰等[17］認(rèn)為土壤養(yǎng)分是影響土壤真菌群落分布的重要因素的結(jié)論相一致；其二，相較雙季稻，中稻-小白菜-油菜的水旱輪作處理下作物會(huì)分泌大量的單糖、多糖、氨基酸和有機(jī)酸等碳水化合物，為根際土壤真菌提供了碳源，促進(jìn)了土壤真菌的繁殖[18］，特別是水旱輪作條件下，土壤處于好氧和厭氧活動(dòng)反復(fù)交替狀態(tài)，厭氧條件下有利于形成腐殖質(zhì)，好氧條件下有利于產(chǎn)生CO2，進(jìn)一步有利于形成團(tuán)粒結(jié)構(gòu)的土壤，而團(tuán)粒結(jié)構(gòu)有助于真菌類群的棲息繁殖[19］。但在本研究中雙季稻轉(zhuǎn)為中稻-油菜后，其土壤真菌數(shù)量卻顯著下降。原因是雖然中稻-小白菜-油菜與中稻-油菜均為水旱輪作處理，但是中稻-油菜比中稻-小白菜-油菜減少了1 茬旱作，導(dǎo)致中稻-油菜植物殘?bào)w數(shù)量低于中稻-小白菜-油菜。同時(shí)有研究表明，絕大多的真菌為腐生性微生物，具有分解多種植物纖維素、木質(zhì)素等難降解有機(jī)質(zhì)的能力[20］。而植物殘?bào)w作為腐生微生物主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其數(shù)量的減少會(huì)直接導(dǎo)致真菌豐度的降低[21］。此外，本研究的物種注釋結(jié)果也顯示，子囊菌門（24.12%~31.77%）與 擔(dān) 子 菌 門（7.07%~24.71%）為不同耕作模式下土壤中的主要真菌門類，二者均為腐生營(yíng)養(yǎng)為主[6，22］，也印證了我們的猜測(cè)。

本研究中，不同輪作模式顯著改變了真菌的群落結(jié)構(gòu)，這與張慧等[22］的研究結(jié)果相似。此外，雙季稻轉(zhuǎn)變?yōu)橹械炯八递喿髂Ｊ胶笳婢腟hannon 多樣性指數(shù)顯著增加。雙季稻轉(zhuǎn)變?yōu)樗递喿髂Ｊ胶螅ǔ?huì)使土壤變得疏松，從而增加了土壤的透氣性能，有利于真菌的多樣性增加[23］。這表明，水旱輪作模式在提升土壤真菌群落多樣性方面具有一定的優(yōu)越性，這與陽(yáng)祥等[8］對(duì)不同輪作模式下土壤真菌群落結(jié)構(gòu)及功能特征的分析結(jié)果相一致，即不同耕作模式會(huì)引起土壤pH、速效養(yǎng)分等土壤理化指標(biāo)的改變，而這些土壤理化因子的改變又與真菌的群落組成密切相關(guān)。本研究表明土壤含水量是影響土壤真菌群落結(jié)構(gòu)分布差異關(guān)鍵的環(huán)境因素，這與其他學(xué)者[24-26］探討水分對(duì)真菌群落結(jié)構(gòu)影響的結(jié)果一致，均認(rèn)為水分含量是影響真菌的群落組成的關(guān)鍵因子。此外，子囊菌門（Basidiomycota）是不同耕作模式下的優(yōu)勢(shì)種群，其作為典型的陸生型真菌們更加適應(yīng)土壤水分低及通氣條件好的環(huán)境。土壤TN、NH4+-N 及作物產(chǎn)量也是影響真菌群落結(jié)構(gòu)分布差異的關(guān)鍵影響因子。本研究表明調(diào)控不同耕作模式真菌群落結(jié)構(gòu)的因素復(fù)雜多樣，并不是由單一的環(huán)境因素決定真菌在不同耕作模式下的分布差異，而是各因素共同調(diào)控的結(jié)果。

不同耕作模式下稻田土壤理化性質(zhì)的差異導(dǎo)致了土壤真菌豐度及群落結(jié)構(gòu)的差異。其中雙季稻轉(zhuǎn)變?yōu)橹械?小白菜-油菜種植模式后增加了土壤的硝態(tài)氮含量，進(jìn)而提高了真菌的豐度；而由于雙季稻轉(zhuǎn)變?yōu)閱渭镜净蛘咚递喿鞣N植模式后改變了土壤的水分含量，間接影響了真菌對(duì)土壤養(yǎng)分的利用，導(dǎo)致真菌群落結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。雙季稻轉(zhuǎn)換為單季稻或者水旱輪作過(guò)程中改善了土壤的養(yǎng)分狀況，提高了真菌的豐度及多樣性，這些結(jié)果有助于更好地選擇科學(xué)的輪作模式以改善土壤微生物群落結(jié)構(gòu)并提高土壤生產(chǎn)力。