劉傾城,盧穎穎,尚念杰,李彪,龔光祿,黃萬(wàn)兵*

（1.貴州省農(nóng)作物品種資源研究所，貴州 貴陽(yáng) 550006；2.貴州省食用菌育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550006；3.貴州省食用菌現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資源育種功能實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550006）

白鬼筆（Phallus impudicus）是鬼筆科鬼筆屬的藥食兩用珍稀食用菌，主要分布在我國(guó)貴州、廣東、山西等地［1-2］。白鬼筆可入藥，在活血祛痛、調(diào)節(jié)免疫、消水腫、抗凝血甚至抗癌方面有一定功效［3-5］，具有較大的市場(chǎng)空間和人工栽培價(jià)值。馬鈴薯全粉是以新鮮馬鈴薯為原料，經(jīng)過(guò)挑選、清洗、去皮、切片、漂洗、預(yù)煮、冷卻、蒸煮、搗泥、脫水干燥等工藝，制作成的片狀、細(xì)顆粒狀或粉末狀的馬鈴薯加工產(chǎn)物［6］。根據(jù)加工工藝的不同，馬鈴薯全粉又分為馬鈴薯雪花全粉和馬鈴薯顆粒全粉［7］。馬鈴薯全粉廣泛應(yīng)用于食品、制藥、微生物培養(yǎng)基等領(lǐng)域。馬鈴薯培養(yǎng)基可提供微生物培養(yǎng)所需要的碳氮源、生長(zhǎng)因子等，宜培養(yǎng)真菌。以馬鈴薯浸煮汁為主料的培養(yǎng)基配方，因馬鈴薯浸煮過(guò)程不統(tǒng)一，導(dǎo)致其營(yíng)養(yǎng)成分和營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定，會(huì)對(duì)藥食用菌的人工選育和栽培造成不利影響。為提升白鬼筆培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分與營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，用營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)和營(yíng)養(yǎng)成分相對(duì)穩(wěn)定的馬鈴薯雪花全粉優(yōu)化白鬼筆培養(yǎng)基配方，以期篩選出白鬼筆人工栽培的最佳培養(yǎng)基配方，供生產(chǎn)上推廣使用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株 白鬼筆B-L1，由貴州省食用菌育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 供試培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基（對(duì)照培養(yǎng)基）：馬鈴薯360 g、葡萄糖10 g、蛋白胨2.5 g、酵母浸粉0.5 g、磷酸二氫鉀0.9 g、硫酸鎂1.8 g、瓊脂10 g、蒸餾水1 000 mL。馬鈴薯雪花全粉梯度培養(yǎng)基：分別用馬鈴薯雪花全粉0～36 g全部替代馬鈴薯浸煮汁，具體見(jiàn)表1。

表1 馬鈴薯雪花全粉優(yōu)化培養(yǎng)基梯度表

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制作將360 g馬鈴薯加入600 mL蒸餾水中，加熱至馬鈴薯軟爛，用5層細(xì)紗布過(guò)濾得到馬鈴薯浸煮汁，在馬鈴薯浸煮汁中分別加入葡萄糖10 g、蛋白胨2.5 g、酵母浸粉0.5 g、磷酸二氫鉀0.9 g、硫酸鎂1.8 g，并加入瓊脂10 g后加熱至瓊脂完全融化，用蒸餾水將培養(yǎng)基定容至1 L備用。

1.2.2 梯度培養(yǎng)基的制作 按照表1的馬鈴薯雪花全粉含量，分別將馬鈴薯雪花全粉溶于800 mL蒸餾水中充分?jǐn)嚢杈鶆?，替代馬鈴薯浸煮汁，并分別加入葡萄糖10 g、蛋白胨2.5 g、酵母浸粉0.5 g、磷酸二氫鉀0.9 g、硫酸鎂1.8 g，加入瓊脂10 g后加熱至瓊脂完全融化，用蒸餾水將培養(yǎng)基定容至1 L備用。

1.2.3 菌絲培養(yǎng)及測(cè)定 供試9個(gè)培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)高溫滅菌后倒入90 mm一次性培養(yǎng)皿中，待冷卻凝固后，用10 mm直徑打孔器取白鬼筆B-L1接種塊種于培養(yǎng)皿中央，放置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行避光培養(yǎng)，采用十字劃線法標(biāo)記剛萌發(fā)時(shí)的菌落直徑，培養(yǎng)28 d后記錄菌絲直徑并停止劃線，每個(gè)培養(yǎng)基重復(fù)5次。

菌絲生長(zhǎng)速度=（最后一次所測(cè)菌落直徑-接種塊直徑）/培養(yǎng)天數(shù)×2

2 結(jié)果與分析

2.1 白鬼筆菌絲的生長(zhǎng)勢(shì)

白鬼筆菌絲在不同供試培養(yǎng)基中均能生長(zhǎng)，但其生長(zhǎng)勢(shì)存在明顯差異。從圖1和表2可以看出，1～7號(hào)培養(yǎng)基的白鬼筆菌絲生長(zhǎng)勢(shì)均較優(yōu)，表現(xiàn)為氣生菌絲較為豐富、健壯、濃密、潔白、菌落完整且邊緣整齊；基礎(chǔ)培養(yǎng)基的白鬼筆菌絲生長(zhǎng)勢(shì)次之，較濃密，能形成完整的菌落但氣生菌絲生長(zhǎng)較弱；而8號(hào)（空白）培養(yǎng)基白鬼筆菌絲的生長(zhǎng)勢(shì)較差，氣生菌絲稀疏且?guī)缀醪豢梢?jiàn)，無(wú)法形成完整菌落。

圖1 不同供試培養(yǎng)基白鬼筆菌絲的生長(zhǎng)勢(shì)

表2 不同培養(yǎng)基白鬼筆的菌絲生長(zhǎng)

2.2 白鬼筆菌絲的生長(zhǎng)速度

白鬼筆菌絲在不同供試培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度存在一定差異。由表2可知，基礎(chǔ)培養(yǎng)基和1～7號(hào)培養(yǎng)基的白鬼筆菌絲生長(zhǎng)速度均極顯著高于8號(hào)（空白）培養(yǎng)基，其中，3號(hào)培養(yǎng)基的白鬼筆菌絲生長(zhǎng)速度最快，達(dá)2.482 mm/d，顯著高于1號(hào)、2號(hào)、4號(hào)、5號(hào)培養(yǎng)基和基礎(chǔ)培養(yǎng)基，說(shuō)明馬鈴薯雪花全粉添加量為26 g時(shí)，有利于白鬼筆菌絲的生長(zhǎng)且明顯優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基；1號(hào)、2號(hào)、4號(hào)、5號(hào)培養(yǎng)基與基礎(chǔ)培養(yǎng)基的白鬼筆菌絲生長(zhǎng)速度無(wú)顯著差異；6號(hào)、7號(hào)培養(yǎng)基的白鬼筆菌絲生長(zhǎng)速度極顯著低于基礎(chǔ)培養(yǎng)基，說(shuō)明隨著馬鈴薯雪花全粉添加量的降低，菌絲生長(zhǎng)速度受到抑制。

3 小結(jié)

馬鈴薯浸煮汁與馬鈴薯雪花全粉均有利于促白鬼筆菌絲的生長(zhǎng)，其中，3號(hào)配方培養(yǎng)基白鬼筆菌絲的生長(zhǎng)速度最高，達(dá)2.482 mm/d，顯著或極顯著高于其余供試培養(yǎng)基，且白鬼筆菌絲生長(zhǎng)勢(shì)健壯、濃密，優(yōu)于以馬鈴薯浸煮汁為主料的培養(yǎng)基。表明，3號(hào)配方培養(yǎng)基是白鬼筆的最佳優(yōu)化培養(yǎng)基，即馬鈴薯雪花全粉26 g、葡萄糖10 g、蛋白胨2.5 g、酵母浸粉0.5 g、磷酸二氫鉀0.9 g、硫酸鎂1.8 g、瓊脂10 g、蒸餾水1 000 mL。馬鈴薯雪花全粉具有極強(qiáng)的抗氧化性，且其營(yíng)養(yǎng)成分與分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定［8］，用馬鈴薯雪花全粉優(yōu)化白鬼筆培養(yǎng)基配方，有利于穩(wěn)定白鬼筆所需培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分和營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)，從而促進(jìn)白鬼筆菌絲的生長(zhǎng)。