張學(xué)清

（江西康美醫(yī)藥保健品有限公司，江西樟樹 331200）

三氯生，化學(xué)名為二氯苯氧氯酚，對(duì)真菌、酵母及革蘭氏陽(yáng)性菌等都有殺滅及抑制作用[1]。相比傳統(tǒng)的殺菌和抑菌劑，三氯生具有優(yōu)越的配伍性，是目前廣泛用于個(gè)人護(hù)理用品的高效、新型消毒劑，如抑菌產(chǎn)品。為了更安全地使用抑菌產(chǎn)品，《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》對(duì)三氯生在相關(guān)產(chǎn)品中允許的使用濃度有明確規(guī)定。

抑菌產(chǎn)品中三氯生的定量檢測(cè)主要采用儀器檢測(cè)法[2]。由于受產(chǎn)品中其他原輔料的影響，分光光度法檢測(cè)抑菌液中三氯生含量的方法準(zhǔn)確度較低。高效液相色譜法具有方便、快速、簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，已報(bào)道的檢測(cè)方法缺少對(duì)油性抑菌產(chǎn)品的針對(duì)性說(shuō)明，盡管有采用離心、萃取的方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理的報(bào)道，但對(duì)設(shè)備和操作的要求較高，其準(zhǔn)確性和重復(fù)性也存在問(wèn)題[3]。

為了找到一種可以同時(shí)檢測(cè)常規(guī)抑菌產(chǎn)品和油性產(chǎn)品中三氯生的高效液相色譜檢測(cè)方法，本文對(duì)提取溶劑、色譜條件等進(jìn)行了優(yōu)化。

1 材料與方法

1.1 儀器

Essentia LC-16型高效液相色譜儀，日本島津公司；KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；FA1104N型電子天平，上?？茣钥茖W(xué)儀器有限公司；UV-2450型紫外分光光度計(jì)，日本島津公司；ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），美國(guó)安捷倫公司。

1.2 試劑

四氫呋喃，分析級(jí)，西隴化工股份有限公司；乙腈，色譜級(jí)，福州奧研實(shí)驗(yàn)器材有限責(zé)任公司；純化水，符合《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》（GB/T 6682—2008）的二級(jí)水[4]；三氯生對(duì)照品，以C12H7Cl3O2計(jì)，含量為100.0%，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

流動(dòng)相為75%的乙腈水溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為281 nm，柱溫為35 ℃，流速為1 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

以四氫呋喃為溶劑，精確（精確至0.1mg）稱量適量的三氯生對(duì)照品，溶解配制成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以1 mg/mL的三氯生標(biāo)準(zhǔn)溶液為原液，通過(guò)稀釋配制成0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.30 mg/mL、0.40 mg/mL和0.50 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.3.3 供試品檢測(cè)

84種抑菌液產(chǎn)品，市售普通品牌。精確稱取5 mg（精確至0.1 mg）的抑菌液于10 mL容量瓶中，以四氫呋喃溶解、定容后于清洗器中超聲10～20 min，按照1.3.1項(xiàng)下的方法檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)三氯生標(biāo)準(zhǔn)品的最大吸收波長(zhǎng)為281 nm，因此液相檢測(cè)波長(zhǎng)確定為281 nm。

2.2 樣品溶劑的選擇

用不同的溶劑溶解抑菌液，觀察發(fā)現(xiàn)，油性抑菌液在甲醇、乙醇、乙腈等溶劑中不能全溶，出現(xiàn)明顯分層；在乙酸乙酯和四氫呋喃中可以全溶?？紤]到液相色譜柱的損耗問(wèn)題，四氫呋喃作溶劑較佳。

2.3 流動(dòng)相的選擇

檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在其他條件相同的情況下，乙腈和水的體積比=3∶1時(shí)，出峰時(shí)間和分離度較佳，而乙腈和水的體積比=2∶1時(shí)主峰的分離度較差，因此流動(dòng)相確定為75%的乙腈水溶液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與檢出限

在檢測(cè)條件下，三氯生的液相檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)色譜圖如圖1所示，主峰的出峰時(shí)間在6.5 min。以濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（×106）為縱坐標(biāo)作圖，得出三氯生的回歸方程式為Y=10.05X+0.033，r2=0.999 7，通過(guò)計(jì)算可得出濃度（以百分含量計(jì)）與峰面積的回歸方程式為Y=9.95×10-11X-3.70×10-6，見(jiàn)圖2。按照S/N=3計(jì)算，該檢測(cè)方法的檢出限為0.20 μg/L。

圖1 抑菌產(chǎn)品中三氯生標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

圖2 三氯生標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 回收率

準(zhǔn)確稱取0.5 g抑菌液（油性）樣本3份，分別加入三氯生含量為100.1 mg/L、250.1 mg/L和480.5 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)液，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)6次，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 抑菌液（油性）中三氯生的加標(biāo)回收率

2.6 樣品測(cè)定

本實(shí)驗(yàn)選擇的抑菌產(chǎn)品包括抑菌洗滌液、抑菌凝露、抑菌護(hù)理液、抑菌泡沫劑、抑菌液（油性）、抑菌噴劑和抑菌凝膠，共計(jì)84個(gè)樣品，按照上述方法測(cè)定其中的三氯生含量，見(jiàn)表2。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑菌洗滌液中沒(méi)有檢測(cè)出三氯生，抑菌液（油性）和抑菌凝膠中的三氯生檢出率超過(guò)15%，分別為21.4%和16.7%；所有樣品中的三氯生含量低于0.3%。

表2 抑菌產(chǎn)品中三氯生的檢出情況表

3 結(jié)論

本方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，對(duì)三氯生加標(biāo)含量為0.10～0.50 mg/mL的樣品檢測(cè)回收率在95%～102%，RSD為1.08%～1.35%（n=6），適合抑菌產(chǎn)品中三氯生的測(cè)定。