王 偉 宮秀群

阿爾茨海默?。╝lzheimer's disease,AD）是一種隱匿起病、進(jìn)行性發(fā)展的神經(jīng)退行性疾病。AD的主要臨床特征為認(rèn)知障礙、精神行為異常和社會(huì)生活功能減退。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，目前全球約有5 000萬(wàn)人患有癡呆，其中AD是最常見(jiàn)的類(lèi)型?！吨袊?guó)阿爾茨海默病報(bào)告2022》[1]指出，我國(guó)60歲以上癡呆患者有1 507萬(wàn)，其中AD患者有983萬(wàn)。AD患者的生活能力下降，需要長(zhǎng)期的護(hù)理和醫(yī)療服務(wù)，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)和護(hù)理負(fù)擔(dān)。一項(xiàng)全國(guó)性研究顯示，2015年中國(guó)AD患者的年治療費(fèi)用為1 677.4億美元，且持續(xù)上升，預(yù)計(jì)到2050中國(guó)AD患者的年治療費(fèi)用將達(dá)1.8萬(wàn)億美元。

AD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及多個(gè)病理生理過(guò)程，如β淀粉樣蛋白沉積、tau蛋白磷酸化、神經(jīng)炎癥、神經(jīng)元損傷和凋亡、突觸可塑性受損、乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)不足等[2]?，F(xiàn)有的治療藥物如膽堿酯酶抑制劑、谷氨酸受體拮抗劑等只能改善和緩解臨床癥狀，但不能逆轉(zhuǎn)病情的發(fā)展且存在副作用[2]。長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐表明，中藥復(fù)方因副作用小，且具有多成分多作用靶點(diǎn)的特點(diǎn)，成為近年來(lái)AD藥物研究的熱點(diǎn)[3]。

通竅活血湯（Tongqiao Huoxue decoction,TQHXD）是清代名醫(yī)王清任創(chuàng)立的中醫(yī)經(jīng)典方劑，由桃仁、紅花、川芎、赤芍、大棗、蔥、生姜和麝香8味中藥構(gòu)成，具有通竅醒神、活血化瘀之功效。多項(xiàng)臨床研究表明，TQHXD能夠改善癡呆患者的認(rèn)知功能，提高日常生活能力[4-5]。但TQHXD治療AD的機(jī)制仍不明確，本文以TQHXD中活性成分為研究對(duì)象，應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合GEO芯片及分子對(duì)接方法，挖掘TQHXD的主要活性成分和靶點(diǎn)，建立中藥活性成分-靶點(diǎn)-疾病之間的關(guān)系，探究TQHXD治療AD的分子基礎(chǔ)和作用機(jī)制，為T(mén)QHXD的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 TQHXD藥物成分及靶點(diǎn)獲取

通過(guò)檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)分析平臺(tái)（TCMSP，https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）獲得TQHXD中桃仁、紅花、川芎、赤芍、大棗、蔥、生姜7味中藥的所有化合物成分，TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)未收錄麝香，故通過(guò)檢索TCMID（http://47.100.169.139/ tcmid）數(shù)據(jù)庫(kù)獲得麝香的藥物成分。根據(jù)吸收、分布、代謝、排泄（absorption,distribution,metabolism,and excretion,ADME）規(guī)則，以口服生物利用度（oral bioavailability,OB）≥30%，藥物類(lèi)藥性（drug-likeness,DL）≥0.18為篩選條件，篩選TQHXD有效成分[6]。中藥的活性成分通過(guò)調(diào)節(jié)靶點(diǎn)來(lái)發(fā)揮相關(guān)的生物功能。基于配體預(yù)測(cè)法，通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)獲得TQHXD各個(gè)有效成分的作用靶點(diǎn)。

1.2 AD差異基因獲取

GEO數(shù)據(jù)庫(kù)是美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心（NCBI）的一個(gè)子數(shù)據(jù)庫(kù)[7]，收集了世界各國(guó)研究機(jī)構(gòu)提交的人、大鼠、小鼠等基因表達(dá)、測(cè)序及甲基化數(shù)據(jù)。通過(guò)對(duì)芯片進(jìn)行差異分析，可以篩選出在疾病等特定環(huán)境下差異表達(dá)的基因網(wǎng)絡(luò)。通過(guò) GEO（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）數(shù)據(jù)庫(kù)，以Alzheimer’s disease為檢索詞，物種限定為Homo sapiens獲取GSE33000數(shù)據(jù)集文件，包括非癡呆對(duì)照組157例，AD組310例，樣本均來(lái)自貢獻(xiàn)者死后的前額葉皮層（BA9）。應(yīng)用R語(yǔ)言limma包對(duì)表達(dá)矩陣進(jìn)行差異分析，以|log2FC|＞0.2，P＜0.05為條件，篩選出AD組和非癡呆對(duì)照組的差異基因，采用R語(yǔ)言ggplot2包繪制差異基因火山圖。

1.3 TQHXD藥物成分-靶點(diǎn)-差異基因-疾病網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將TQHXD各藥物成分作用靶點(diǎn)與AD芯片數(shù)據(jù)差異基因進(jìn)行取交集，得到TQHXD治療AD的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)（藥物-疾病靶點(diǎn)）。運(yùn)用Cytoscape 3.7.2軟件繪制藥物活性成分-靶點(diǎn)-疾病（AD）之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。

1.4 TQHXD治療AD的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和核心靶點(diǎn)篩選

將TQHXD作用靶點(diǎn)與AD差異基因取交集后上傳至String數(shù)據(jù)庫(kù)（https://cn.string-db.org），物種選擇人類(lèi)（homo sapiens），靶點(diǎn)直接的最低聯(lián)系分?jǐn)?shù)＞0.4，設(shè)置隱藏不與其他靶點(diǎn)相聯(lián)系的靶點(diǎn)，得到蛋白質(zhì)間相互作用信息，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖。將String數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析，篩選核心靶點(diǎn)。篩選標(biāo)準(zhǔn)包括Betweenness（BC）、Closeness（CC）、Degree（DC）、Eigenvector（EC）、Local Average Connectivity-based method（LAC）、Network（NC），只有靶點(diǎn)分值均大于節(jié)點(diǎn)中位數(shù)時(shí)將其定義為核心靶點(diǎn)。

1.5 TQHXD治療AD分子靶點(diǎn)基因本體（GO）富集分析

通過(guò)R 4.1.2軟件，應(yīng)用clusterprofiler包對(duì)TQHXD治療AD的潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析，以P＜0.05為篩選條件獲取生物進(jìn)程（biological process,BP）、細(xì)胞組分（cellular component,CC）、分子功能（molecular function,MF）富集分析數(shù)據(jù)。根據(jù)基因富集數(shù)目和顯著程度（pvalue Cutoff＜0.05），選取排名前20的結(jié)果，繪制TQHXD治療AD分子靶點(diǎn)的GO富集分析氣泡圖。

1.6 TQHXD治療AD分子靶點(diǎn)基因京都基因和基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析和基因-KEGG網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

通過(guò)R 4.1.2 軟件，應(yīng)用clusterprofiler包對(duì)TQHXD治療AD潛在靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析，根據(jù)基因富集數(shù)目和顯著程度（pvalue Cutoff＜0.05），選取排名前20的結(jié)果繪制TQHXD治療AD分子靶點(diǎn)的KEGG通路富集分析氣泡圖。KEGG通路富集分析結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，根據(jù)Degree值繪制KEGG通路-基因網(wǎng)絡(luò)圖。

1.7 分子對(duì)接

將1.4中篩選出的核心靶點(diǎn)通過(guò)RCSB蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)（PDB）（https://www.rcsb.org/）下載蛋白受體的PDB格式文件。使用Pymol軟件對(duì)蛋白受體進(jìn)行去水、加氫、刪除配體、調(diào)整電荷等處理。通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）下載與核心靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的中藥有效成分（小分子配體）的2D結(jié)構(gòu)文件，應(yīng)用Chemoffice軟件將2D結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換為3D結(jié)構(gòu)。將蛋白受體和小分子配體導(dǎo)入Auto Dock Vina 軟件進(jìn)行分子對(duì)接，利用 PyMol 軟件繪制對(duì)接結(jié)果圖。

2 結(jié)果

2.1 TQHXD活性成分與靶點(diǎn)

共獲得TQHXD各藥物的活性成分共125個(gè)，其中赤芍29個(gè)，川芎7個(gè)，蔥6個(gè)，大棗29個(gè)，紅花22個(gè)，生姜5個(gè)，麝香4個(gè)，桃仁23個(gè)。見(jiàn)表1。去除重復(fù)值得到TXHXD有效成分107個(gè)。各藥物成分相應(yīng)的靶點(diǎn)分別為赤芍158個(gè)，川芎42個(gè)，蔥88個(gè)，大棗435個(gè)，紅花449個(gè)，生姜75個(gè)，麝香24個(gè)，桃仁139個(gè)（補(bǔ)充材料1）。對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行基因注釋?zhuān)瑒h除重復(fù)值，得到TQHXD靶點(diǎn)236個(gè)。

表1 TQHXD各藥物的活性成分

2.2 AD差異基因分析結(jié)果

GEO數(shù)據(jù)庫(kù)下載AD數(shù)據(jù)集GSE33000和對(duì)應(yīng)的注釋文件GPL4372，利用R軟件及相關(guān)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行過(guò)濾及標(biāo)準(zhǔn)化、注釋?zhuān)Y選差異基因。得到對(duì)照組與AD組1 262個(gè)差異基因，其中678個(gè)上調(diào)，584個(gè)下調(diào)。見(jiàn)圖1。

圖1 GSE33000基因芯片中對(duì)照組和AD組的基因差異表達(dá)火山圖

2.3 TQHXD治療AD的活性成分與靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

通過(guò)Cytoscape軟件對(duì)TQHXD的8 味中藥及其107個(gè)活性成分，236個(gè)靶點(diǎn)基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及可視化。見(jiàn)圖2。網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中共有 59 個(gè)節(jié)點(diǎn)，31個(gè)活性成分作用靶點(diǎn)，共有89條邊代表靶點(diǎn)和有效成分之間的相互作用。

圖2 TQHXD治療AD的藥物成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)

2.4 TQHXD治療AD的PPI網(wǎng)絡(luò)與核心靶點(diǎn)篩選

將TQHXD治療AD潛在靶點(diǎn)與AD差異基因取交集后，得到31個(gè)交集基因（圖3），將交集基因列表導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖。見(jiàn)圖4。在所得網(wǎng)絡(luò)的基礎(chǔ)上使用Cytoscape軟件中CytoNCA插件構(gòu)建拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)，通過(guò)前文方法中所述篩選標(biāo)準(zhǔn)，共篩選到3個(gè)靶點(diǎn)NFKBIA、IL6、CCL2位于網(wǎng)絡(luò)的核心位置。見(jiàn)圖5。

圖3 TQHXD潛在靶基因與AD差異基因的韋恩圖

圖4 TQHXD治療 AD分子靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)

圖5 PPI網(wǎng)絡(luò)核心基因篩選

2.5 TQHXD治療AD基因GO富集分析

GO富集分析結(jié)果顯示在分子功能方面，靶點(diǎn)涉及神經(jīng)遞質(zhì)受體活性（neurotransmitter receptor activity）、突觸后神經(jīng)遞質(zhì)受體活性（postsynaptic neurotransmitter receptor activity）、兒茶酚胺結(jié)合（catecholamine binding）、NAD-視黃醇脫氫酶活性（NAD-retinol dehydrogenase activity）、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合（DNA-binding transcription factor binding）功能等。在生物過(guò)程方面這些靶點(diǎn)涉及細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)（cellular response to oxidative stress）、對(duì)活性氧的反應(yīng)（response to reactive oxygen species）、氧化應(yīng)激反應(yīng)（response to oxidative stress）、細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激反應(yīng)（cellular response to chemical stress）等，分別選取前20條GO條目繪制氣泡圖。見(jiàn)圖6。

圖6 GO富集分析

續(xù)表1

續(xù)表1

2.6 TQHXD治療AD基因KEGG富集分析及基因-通路網(wǎng)絡(luò)

共富集到85條通路關(guān)系，這些通路涉及TNF-α、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、Legionellosis、Pertussis、流體剪切應(yīng)力信號(hào)通路（圖7）。將KEGG通路導(dǎo)入Cytoscape 軟件，取前20條通路，根據(jù)Degree值大小，顯示通路與基因的富集程度，繪制通路基因網(wǎng)絡(luò)圖（圖8）。KEGG通路基因網(wǎng)絡(luò)圖中基因節(jié)點(diǎn)的面積越大表示該基因參與的通路越多。根據(jù)Degree值，在網(wǎng)絡(luò)中排名前5位的基因?yàn)椋篟ELA、MAPK8、

圖7 KEGG富集分析

圖8 TQHXD治療AD的KEGG通路與基因網(wǎng)絡(luò)

NFKBIA、IL6、CLCX2。

2.7 分子對(duì)接

由交集靶點(diǎn)的PPI核心網(wǎng)絡(luò)可知，NFKB1A、IL6、CCL2為T(mén)QHXD治療AD的重要靶點(diǎn)，通過(guò)與活性成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)取交集，得到MOL000098（quercetin）、MOL000006（luteolin）、MOL001002（ellagic acid）、MOL001924（paeoniflorin）是TQHXD治療AD的關(guān)鍵成分。通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)下載4個(gè)活性成分的2D結(jié)構(gòu)，應(yīng)用Chem Office軟件將2D結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換為3D結(jié)構(gòu)。通過(guò)PDB數(shù)據(jù)庫(kù)分別下載NFKBIA、IL6、CCL2的晶體結(jié)構(gòu)1IKN（NFKBIA）、1ALU（IL6）、1DOK（CCL2），借助Auto Dock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果表明，網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵化合物均與相應(yīng)的蛋白具有較強(qiáng)的親和力。見(jiàn)表2。借助PyMol軟件將對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化。見(jiàn)圖9。

圖9 分子對(duì)接

表2 分子對(duì)接能量

3 討論

AD是一種復(fù)雜的進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病，由于涉及多個(gè)病理生理過(guò)程，目前仍缺乏有效的治療方法。在中醫(yī)理論體系中，AD屬于“呆病”“健忘”等范疇，是由髓海空虛、腦神失養(yǎng)、神機(jī)失用而引發(fā)的神志功能異常性疾病。治法主要為補(bǔ)腎益精，益氣健脾，化痰祛瘀等[8]。TQHXD為清代名醫(yī)王清任所創(chuàng)，具有通竅醒神，活血化瘀之功效，多項(xiàng)臨 床研究表明TQHXD能改善患者認(rèn)知功能。

本研究通過(guò)設(shè)置ADME規(guī)則獲得TQHXD的107個(gè)有效成分，進(jìn)一步與GEO芯片AD差異表達(dá)基因的聯(lián)合分析，得到TQHXD治療AD的31個(gè)作用靶點(diǎn)。通過(guò)將31個(gè)靶點(diǎn)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)及網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析篩選得到TQHXD治療AD的3個(gè)核心基因

NFKBIA、IL6、CCL2。

NFKBIA基因編碼IKBα，靜息狀態(tài)下的IkBα與p65結(jié)合，遮蔽p50蛋白的核定位信號(hào)，此時(shí)NF-kB在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)處于失活狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞受到LPS、ROS、TNF-α等刺激時(shí)，IKBα在蛋白酶體作用下降解，隨即與p50/p65異源二聚體解離，獲得自由的p50/p65異源二聚體迅速進(jìn)入細(xì)胞核中，啟動(dòng)靶基因，參與及調(diào)節(jié)各種生理及病理過(guò)程。經(jīng)尸檢發(fā)現(xiàn)，AD患者腦組織中NF-kB活性升高，并且在退變神經(jīng)元和老年斑鄰近的神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)出p65蛋白的免疫活性。LPS可激活小膠質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)過(guò)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞中的NF-kB p65亞基的核移位，從而促進(jìn)炎癥因子（IL-1β、IL-6、Cox-2和TNF-α）的產(chǎn)生[9]。被激活的NF-kB從細(xì)胞質(zhì)遷移到細(xì)胞核，通過(guò)結(jié)合特定的DNA啟動(dòng)序列調(diào)控如反應(yīng)性炎癥相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，從而加重AD患者的神經(jīng)病理?yè)p傷[10]。趨化因子CCL2又被稱(chēng)為單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1），是趨化因子家族最重要的成員之一。研究發(fā)現(xiàn)患者血清及腦脊液中的CCL2增高與神經(jīng)退行性疾病進(jìn)展相關(guān)。CCL2可招募、促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞分化增殖，并可影響小膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎癥因子，加速小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的β-淀粉樣蛋白異常聚集物形成，加速認(rèn)知障礙的進(jìn)展[11]。研究證實(shí)抑制CCL2的表達(dá)可減少小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，減輕β-淀粉樣蛋白的沉積，改善小鼠認(rèn)知功能[11]。IL6是一種多功能細(xì)胞因子，在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、炎癥及機(jī)體防御機(jī)制中起著重要作用。一項(xiàng)Meta分析顯示，AD患者外周血IL-6水平較對(duì)照組顯著升高，且與簡(jiǎn)易智力狀態(tài)檢查量表（MMSE）評(píng)分正相關(guān)[12]。IL6基因敲除（knock out,KO）小鼠在被動(dòng)回避和八臂迷宮測(cè)試中較野生型（wild type,WT）小鼠表現(xiàn)出更少的工作記憶錯(cuò)誤[13]。IL6的存在可增強(qiáng)N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）和β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷[14]。IL6還可通過(guò)cdk5/p35、JAK-STAT等途徑增加tau過(guò)度磷酸化[14]。在β-淀粉樣蛋白沉積的情況下，小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放IL-6，進(jìn)一步加速AD的病理級(jí)聯(lián)[15]。

AD的發(fā)生發(fā)展是多個(gè)分子、多條信號(hào)通路對(duì)多種細(xì)胞生物學(xué)行為進(jìn)行調(diào)節(jié)的結(jié)果。本研究通過(guò)基因富集分析獲得111個(gè)GO條目和85個(gè)KEGG通路。GO富集分析顯示TQHXD治療AD機(jī)制涉及對(duì)活性氧的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激反應(yīng)、神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、突觸后神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、兒茶酚胺結(jié)合、NAD-視黃醇脫氫酶活性、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合等生物過(guò)程。TQHXD治療AD涉及TNF-α信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈硬化等信號(hào)通路。TNF-α可以激活星形膠質(zhì)細(xì)胞為反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞，驅(qū)動(dòng)神經(jīng)炎癥過(guò)程，神經(jīng)炎癥進(jìn)一步導(dǎo)致淀粉樣蛋白β沉積的增加。TNF-α與白細(xì)胞介素-1、干擾素-γ等可通過(guò)MAPK途徑誘導(dǎo)γ-分泌酶裂解淀粉樣前體蛋白[16]。TNF-α還可刺激NF-kB信號(hào)通路，從而增加淀粉樣蛋白的生成[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，除了炎癥通路，TQHXD治療AD還涉及脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化通路。大腦中富含大 量的脂質(zhì)，AD與脂質(zhì)的穩(wěn)態(tài)破壞有關(guān)，早、中期AD患者腦組織存在脂質(zhì)過(guò)氧化，膠質(zhì)細(xì)胞中脂質(zhì)顆粒增多[18]。AD患者血脂中HDL-C、LDL-C、TC及TG均出現(xiàn)代謝異常[19]。服用他汀類(lèi)藥物可顯著降低AD的發(fā)病率，亦從側(cè)面證實(shí)脂代謝異常與AD的相關(guān)性[20]。本研究通過(guò)GO、KEGG富集分析再次證明了TQHXT治療AD的多通路、多靶點(diǎn)作用。

分子對(duì)接通過(guò)評(píng)估網(wǎng)絡(luò)中小分子與蛋白配體的結(jié)合能來(lái)評(píng)估分子間的相互作用，從而提高網(wǎng)絡(luò)的準(zhǔn)確性[21]。為驗(yàn)證篩選的核心靶點(diǎn)可靠性，對(duì)3個(gè)核心靶點(diǎn)與之對(duì)應(yīng)的活性成分進(jìn)行分子對(duì)接，計(jì)算結(jié)合能評(píng)價(jià)結(jié)合活性。本研究分子對(duì)接結(jié)果顯示，TQHXD的4個(gè)核心成分與3個(gè)核心靶點(diǎn)均能有效對(duì)接。其中quercetin與3個(gè)核心靶點(diǎn)均有良好的結(jié)合能力。quercetin屬于類(lèi)黃酮中的黃酮醇類(lèi)，多項(xiàng)體外、在體研究發(fā)現(xiàn)其有顯著的抗炎功效[22]。quercetin可下調(diào)LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的表達(dá)[23]，干擾β-淀粉樣蛋白寡聚體的形成，還可破壞β-淀粉樣蛋白纖維的穩(wěn)定性，逆轉(zhuǎn)β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性[24]。quercetin通過(guò)抑制BCAE-1的第3位碳原子上的氫鍵形成從而抑制BCAE-1的活性，減少β-淀粉樣蛋白的生成[25]。此外quercetin還可通過(guò)抑制NF-kB間接調(diào)節(jié)APP的β裂解減少β-淀粉樣蛋白的生成[26]。長(zhǎng)期口服quercetin可顯著減少 3xTg-AD模型小鼠海馬和杏仁核的β-淀粉樣蛋白和減輕tau蛋白磷酸化趨勢(shì)，改善小鼠在高架十字迷宮中的表現(xiàn)[27]。分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了篩選的TQHXD治療AD核心網(wǎng)絡(luò)的準(zhǔn)確性。

本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分別從藥物疾病靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，差異基因篩選，PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，GO、KEGG富集分析等方面探究TQHXD治療AD的分子機(jī)制，最后通過(guò)分子對(duì)接，驗(yàn)證了TQHXD有效成分與其作用靶點(diǎn)的良好結(jié)合活性。中藥治療AD從整體觀念出發(fā)，具有多靶點(diǎn)、多通路的優(yōu)勢(shì)，為T(mén)QHXD用于AD臨床治療提供了理論基礎(chǔ)。

綜上所述，TQHXD可能通過(guò)參與炎癥信號(hào)通路及相關(guān)生物功能作用于NFKBIA、IL6、CCL2等疾病靶點(diǎn)，發(fā)揮治療AD作用。