陳召亮 ， 張 誠， 崔 歡， 張春茂，郭振東*，劉聚祥*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，河北 保定 071000；2.軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院 軍事獸醫(yī)研究所，吉林 長春 130122)

流感病毒是正黏病毒科、流感病毒屬的單股、負(fù)鏈RNA病毒，分為A(甲型)、B(乙型)、C(丙型)、D(丁型)4個亞型，其中A型流感病毒相較于其他亞型來說，危害最大[1]。A 型流感病毒基因組分為8股獨(dú)立的RNA片段，負(fù)責(zé)編碼包膜糖蛋白血凝素(hemagglutinin，HA)、神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase，NA)、核蛋白(nucleoprotein，NP)、堿性聚合酶1(polymerase basic 1，PB1)、堿性聚合酶2(polymerase basic 2，PB2)、酸性聚合酶(polymerase acidic，PA)、基質(zhì)蛋白(matrix protein，M1)、非結(jié)構(gòu)蛋白1(nonstructural protein 1，NS1)和核輸出蛋白(nuclear export protein，NEP；nonstructural protein 2，NS2)等流感病毒相關(guān)蛋白[2]。

A型流感病毒基因組編碼的HA和NA是對A型流感病毒進(jìn)行毒株分類和病毒血清亞型分型的重要依據(jù)，HA可分為18個亞型(H1-H18)，NA可分為11個亞型(N1-N11)，兩者相互組合形成眾多亞型[3]。A型流感病毒宿主廣泛，可感染禽、人、豬、馬等動物，因此A型流感病毒可分為禽流感病毒、人流感病毒、豬流感病毒和馬流感病毒等[4]。

2021年中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布信息，山東省東營市黃河三角洲自然保護(hù)區(qū)、北京市海淀區(qū)、江蘇省連云港市、遼寧省沈陽市和平區(qū)、西藏那曲市色尼區(qū)、陜西省榆林市神木市紅堿淖自然保護(hù)區(qū)相繼發(fā)生野生禽類流感疫情。流感病毒始終威脅著我國的畜牧業(yè)發(fā)展和公共衛(wèi)生安全，采用疫苗免疫接種是當(dāng)前最主要、也最有效的預(yù)防流感病毒感染的方式，但從疫苗注射到產(chǎn)生保護(hù)性抗體需要較長時間，存在免疫后到產(chǎn)生抗體的窗口期等問題；更重要的是由于流感病毒的抗原變異性較強(qiáng)，上一次流感發(fā)病期間所用的疫苗在下一次流感暴發(fā)時可能會失去保護(hù)作用；而且，疫苗保護(hù)期短，有效性也顯著降低，這往往也影響了對流感病毒的防控效果[5-6]。這些不足使得抗流感藥物的研發(fā)十分必要，同時，隨著國內(nèi)養(yǎng)殖業(yè)“減抗”、“替抗”模式的推行，中藥及其活性成分已引起行業(yè)專家和學(xué)者的足夠重視。中藥在防治病毒性傳染病上的應(yīng)用已有上千年的歷史，在流感的防治上同樣積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)和研究成果。因此，本文對近兩年國內(nèi)外中藥抗流感病毒的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為日后抗流感中藥及其制劑的研發(fā)提供理論支持和經(jīng)驗(yàn)借鑒。

1 中藥復(fù)方

1.1 芩根提取液程鄧芳等[7]組方芩根提取液(QinGen extract，QG)，該方以黃芩、板藍(lán)根為主，配伍使用兼具清熱瀉火、涼血解毒的作用。通過對其進(jìn)行NA抑制劑篩選研究發(fā)現(xiàn)，QG對流感病毒的NA有一定的抑制作用，并呈濃度依賴性。QG能在一定程度上抑制H9N2亞型流感病毒的吸附、穿入以及在犬腎傳代細(xì)胞(Madin-Daby canine kidney cells，MDCK)細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，所以，其對H9N2亞型流感病毒感染宿主細(xì)胞具有一定的預(yù)防作用，其甚至能在一定程度上直接抑制H9N2亞型流感病毒。另外，QG的安全性較高，對MDCK細(xì)胞最大安全濃度的測定結(jié)果顯示，QG的最大安全濃度是奧司他韋的5倍。

1.2 復(fù)方魚腥草合劑復(fù)方魚腥草合劑(compound houttuynia mixture，CHM)是魚腥草、黃芩、板藍(lán)根、連翹和金銀花5味中藥組成的復(fù)方制劑。顏海燕等[8]對此合劑的抗流感病毒作用及其作用階段進(jìn)行了初步研究，該研究發(fā)現(xiàn)，CHM具有廣譜抗流感病毒的作用，對多種亞型流感病毒(如H5N1亞型和H7N9亞型)有明顯的抑制作用。CHM在RNA、蛋白和細(xì)胞水平均可劑量依賴性抑制流感病毒的復(fù)制。該研究通過時間進(jìn)程分析實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在加入病毒的同時加入CHM具有顯著的抗病毒作用，而在感染后2 h及以后開始給藥，CHM均無明確的抗流感病毒作用。表明CHM只在流感病毒感染的早期階段發(fā)揮作用，抑制流感病毒的復(fù)制。

1.3 犀角地黃湯合銀翹散銀翹散在《溫病條辨》中被稱為“辛涼平劑”，具有透散衛(wèi)分表邪的功效；犀角地黃湯首載于《備急千金要方》，清熱解毒、涼血散瘀，主治熱入血分；犀角地黃湯合銀翹散源于吳鞠通《溫病條辨·上焦篇》，銀翹散可散衛(wèi)分之邪，犀角地黃湯能解營血之毒，在急性熱病早期合用，重視衛(wèi)氣營血同治，可在疾病早期切斷病邪傳變，防止病邪深入，達(dá)到截斷病勢迅速惡化目的[9]。

鄧迪等[9]對此合方及兩單方治療小鼠H1N1亞型流感病毒肺炎的效果進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)合方的治療效果優(yōu)于兩單方。在合方中，銀翹散主要發(fā)揮抗病毒作用，犀角地黃湯主要起到抗炎作用，兩方合用則既可抑制病毒早期復(fù)制，又可防止炎癥的過度發(fā)展，從而起到更優(yōu)的治療效果。

1.4 薄荷-荊芥薄荷、荊芥是中醫(yī)臨床上經(jīng)常配伍使用且相對固定的2味中藥，配伍使用后可以相互促進(jìn)增強(qiáng)藥效或者相互調(diào)節(jié)降低毒性[10]。薄荷、荊芥兩味中藥是中醫(yī)上的一對經(jīng)典藥對，兩藥相配伍應(yīng)用于許多經(jīng)典方劑，如荊芥湯、荊芥散、荊防散、銀翹散、荊芥薄荷湯、荊防敗毒散、薄荷白檀湯等代表性方劑[11]。

薄荷、荊芥分別具有良好的抗流感病毒作用，揮發(fā)油類和黃酮類是薄荷和荊芥的主要有效成分[12]。束雅春等對此藥對不同成分的組合(薄荷揮發(fā)油、荊芥揮發(fā)油、薄荷黃酮、荊芥黃酮4種成分以不同方式進(jìn)行組合)在體外對H1N1亞型流感病毒的抑制作用進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)薄荷-荊芥的不同成分組合均對甲型流感病毒的體外增殖具有抑制作用，其中薄荷揮發(fā)油-薄荷黃酮-荊芥黃酮組合、荊芥揮發(fā)油-薄荷黃酮-荊芥黃酮組合、薄荷揮發(fā)油-荊芥揮發(fā)油-荊芥黃酮組合對病毒增殖的抑制作用最為明顯[11]。

1.5 復(fù)方芩蘭口服液復(fù)方芩蘭口服液由金銀花、黃芩、連翹、板藍(lán)根 4 味中藥組成，其可以有效治療急性上呼吸道感染疾病[13]。鮑巖巖等[14]對其治療呼吸道病毒感染性疾病的藥效進(jìn)行了進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)復(fù)方芩藍(lán)口服液可以有效減少H1N1亞型流感病毒感染小鼠的肺組織及氣管病變，顯著降低感染小鼠血清中細(xì)胞因子含量，對甲型流感病毒性肺炎具有良好的療效。

1.6 熱毒寧吸入溶液熱毒寧由青蒿、金銀花和梔子3味藥材組成，對上呼吸道感染、急性支氣管炎及外感風(fēng)熱所致的感冒、咳嗽具有顯著治療效果[15]。霧化吸入給藥是治療呼吸道疾病的一種重要的局部給藥方式，相比于口服給藥和注射給藥等全身給藥方式，吸入給藥可以達(dá)到更高的生物利用度，起效速度快，不良反應(yīng)少[16-17]。孫靜等[18]對熱毒寧吸入溶液治療H1N1亞型流感病毒性肺炎的效果進(jìn)行了研究，該研究通過建立感染小鼠肺炎模型，發(fā)現(xiàn)熱毒寧吸入溶液對流感病毒所致肺炎具有良好的治療效果，可以顯著降低或減少小鼠肺指數(shù)、肺組織病毒載量、炎癥因子含量及肺部病理變化。

1.7 鄧氏清毒飲鄧氏清毒飲是由金銀花、桑葉、野菊花、蒲公英等19味中藥配伍而成，其常被應(yīng)用于預(yù)防和治療流感及其引起的發(fā)熱、咳嗽等病證[19]。馬欽海等[19]對其體外抗H3N2亞型流感病毒作用及對炎癥細(xì)胞因子過度表達(dá)的抑制作用進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鄧氏清毒飲可以明顯抑制MDCK細(xì)胞中的H3N2亞型流感病毒活性，對感染的MDCK細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，并可以減少炎性細(xì)胞因子和趨化因子的含量，降低炎性因子的過度表達(dá)。

2 單味中藥

2.1 連翹趙冰倩等[20]制備出了連翹水提液(forsythiae fructus aqueous extract)，并對其在體外抑制H5N1和H9N2亞型流感病毒增殖及其介導(dǎo)炎癥的效果進(jìn)行了評估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)連翹水提液可以顯著抑制H5N1和H9N2亞型流感病毒在雞胚成纖維細(xì)胞(DF-1)上的增殖，并可以抑制因H5N1和H9N2亞型流感病毒感染而介導(dǎo)的多種趨化因子和細(xì)胞因子的表達(dá)。該研究在3種不同給藥方式下探究該藥液在不同質(zhì)量濃度下分別對H9N2和H5N1亞型流感病毒的抑制作用。3種不同加藥方式分別為：藥液預(yù)處理病毒后感染、先感染病毒后加藥、先加藥后感染病毒。結(jié)果顯示，連翹水提液預(yù)處理病毒后感染和先加連翹水提液再感染病毒這2種給藥方式對H9N2和H5N1亞型流感病毒均無明顯的抑制作用，結(jié)果表明連翹水提液對H9N2和H5N1亞型流感病毒沒有直接的抑制作用。而先將病毒感染細(xì)胞后再加入連翹水提液則能有效抑制H9N2和H5N1亞型流感病毒的增殖，并且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性，這表明連翹水提液是在病毒的增殖階段發(fā)揮作用。根據(jù)前人研究結(jié)果,連翹提取物連翹酯苷A可抑制流感病毒M1蛋白的表達(dá)，干預(yù)子代病毒顆粒的組裝過程[21]，該研究推測連翹可能是通過抑制病毒復(fù)制所需酶的活性來抑制病毒蛋白的合成，從而起到抗病毒的作用。

除了抑制病毒本身的增殖外，連翹還可以干預(yù)宿主細(xì)胞信號通路活化，抑制流感病毒誘導(dǎo)的某些炎性因子的釋放[20]。許珊麗等[22]發(fā)現(xiàn)貫葉連翹提取物對流感病毒感染小鼠機(jī)體有一定免疫調(diào)節(jié)作用，可明顯增強(qiáng)流感病毒感染小鼠的細(xì)胞免疫、體液免疫和非特異性免疫作用。

2.2 太子參太子參(pseudostellaria heterophylla)又稱孩兒參，為石竹科孩兒參屬植物，常以塊根入藥，性平、味甘微苦，功能益氣、生津，主治肺虛咳嗽、脾胃虛弱等癥。張炎達(dá)等[23]對太子參須提取物在鴨H9N2亞型流感病毒體外生長過程中的抑制作用進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)太子參須提取物對鴨 H9N2亞型流感病毒在 MDCK 細(xì)胞上的體外增殖具有一定抑制作用，且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性。

2.3 黃芩李衛(wèi)鵬[24]通過雞胚培養(yǎng)試驗(yàn)和血凝試驗(yàn)對桂枝、川芎、蒼術(shù)、大青葉、防風(fēng)、黃芩、地黃、魚腥草、金銀花、荊芥10種單味中藥湯劑在雞胚內(nèi)抗 H6N6亞型鴨源流感病毒效果進(jìn)行劑篩，發(fā)現(xiàn)黃芩湯劑在雞胚中抗流感病毒效果最佳。該研究又用不同質(zhì)量濃度的黃芩苷對感染鴨源 H6N6 亞型流感病毒的小鼠進(jìn)行治療，發(fā)現(xiàn)黃芩苷在對 H6N6 亞型流感病毒引起的炎癥中，可以降低病毒在肺臟中的復(fù)制能力，降低白細(xì)胞總數(shù)、抑制出血反應(yīng)、調(diào)節(jié)血清中細(xì)胞因子含量，減輕小鼠肺臟組織的病理損傷。

2.4 無毒干蟾干蟾是我國傳統(tǒng)中藥材，蟾酥，蟾皮，蟾衣等均可藥用，干蟾及其制劑對多種病毒感染有著良好的療效，具有較高的藥用價值[25]。早期有研究發(fā)現(xiàn)，蟾苷提取物可以有效抑制流感病毒在感染小鼠肺臟內(nèi)的繁殖[26]；蟾毒內(nèi)酯可以通過抑制流感病毒相關(guān)蛋白活性，直接抑制流感病毒[27]。傳統(tǒng)干蟾具有較高的毒性，而無毒干蟾是在傳統(tǒng)干蟾的基礎(chǔ)上研發(fā)而成，毒副作用小，具有較高的安全指數(shù)，并且同樣對多種病毒性疾病具有良好的療效[25]。

劉暢等[25]研究發(fā)現(xiàn)無毒干蟾可以顯著降低H1N1亞型流感病毒感染小鼠血清和肺組織中多種促炎性細(xì)胞因子和趨化因子的過度表達(dá)，可以緩解肺組織充血、水腫等炎癥癥狀，對流感病毒感染小鼠的肺臟具有修復(fù)和保護(hù)作用。另外，該研究還發(fā)現(xiàn)流感病毒對感染小鼠結(jié)腸存在一定的損傷作用，肺和大腸相表里的中醫(yī)理論再次得到驗(yàn)證，而無毒干蟾則可以改善結(jié)腸的不良狀況。

3 活性成分

3.1 皂甙人參莖葉皂甙(Ginseng stem and leaf saponin，GSLS)是從人參的莖和葉中提取的一種由甙元與糖相連構(gòu)成的糖甙類化合物，是中藥人參的有效成分之一。人參皂甙廣泛來源于人參的根、莖、葉、花等部位，與根皂甙相比，GSLS 來源于中藥人參的廢棄部分——莖和葉，具有明顯的成本優(yōu)勢。楊金保等[28]對GSLS 調(diào)節(jié)肉鴨免疫功能的研究進(jìn)行了報道，發(fā)現(xiàn)飲水口服 GSLS 具有增強(qiáng)鴨群對禽流感疫苗的免疫應(yīng)答水平和機(jī)體抗氧化功能的作用，配合禽流感疫苗使用能提高機(jī)體體液免疫應(yīng)答和Th1 和Th2 型細(xì)胞免疫應(yīng)答，增強(qiáng)鴨群抗流感病毒感染能力，表現(xiàn)出良好的口服免疫增強(qiáng)作用。

3.2 植物精油植物精油(essential oils，EOs)存在于植物的分泌管、腺體和分泌毛中，被廣泛用于醫(yī)藥和食品保鮮[29]。EOs具有廣譜抗病毒活性，可對抗1型和2型單純皰疹病毒等DNA病毒，以及新城疫病毒、朱尼病毒和SARS-CoV(嚴(yán)重急性呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒)等RNA病毒[30]。 EOs可以使病毒蛋白或/和糖蛋白變性從而發(fā)揮抗病毒作用[31-32]。EOs作為抗病毒藥物的機(jī)制主要包括：通過抑制病毒聚合酶來抑制病毒復(fù)制；阻止病毒脫殼；阻斷與宿主細(xì)胞的結(jié)合；抑制病毒感染力；抑制蛋白酶；抑制病毒宿主受體[33]。EOs也可以與傳統(tǒng)抗病毒藥物協(xié)同作用，例如，質(zhì)量濃度為0.03～0.12 g/L的丁香油酚，可增加低劑量阿昔洛韋的效果[34]。

薰衣草(Lavandulaangustifolia)和鼠尾草(Salviaofficinalis)屬于唇形科、亞灌木植物，是高生物活性精油的重要來源，其被廣泛用于醫(yī)療、化妝品和食品領(lǐng)域[35]。DHAB等[36]制備出薰衣草精油和鼠尾草精油，分別分析其化學(xué)成分，評估其抗氧化和抗炎癥活性，并對薰衣草和鼠尾草精油的抗H5N1流感病毒活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明薰衣草精油的主要成分是乙酸芳樟酯(linalyl acetate)和芳樟醇(linalool)，而鼠尾草精油的主要成分是樟腦(camphor)和α-側(cè)柏酮(α-thujone)。以不同的亞細(xì)胞毒性濃度對薰衣草和鼠尾草精油的抗流感病毒活性進(jìn)行評價，結(jié)果顯示兩種精油對H5N1亞型流感病毒均有良好的抑制作用。

3.3 黃酮類紫萁貫眾(OsmundajaponicaThunb)為紫萁科、紫萁屬植物，早期研究結(jié)果表明，紫萁貫眾具有抗病毒、抗菌、抗癌、提高機(jī)體免疫力等作用[37]。目前已從紫萁貫眾中分離得到了23種化合物單體，其中的紫箕酮、異銀杏雙黃酮等多種化合物單體都對各種亞型的NA有一定的抑制作用。郎爽等運(yùn)用分子對接技術(shù)對紫萁貫眾中的23個化合物進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)異銀杏雙黃酮等黃酮類化合物對NA抑制作用最強(qiáng)[38]。黃酮類化合物能夠與NA的ARG118、ARG371、ARG292等重要氨基酸殘基產(chǎn)生氫鍵作用，相較與其他黃酮類化合物，異銀杏雙黃酮與NA形成的配體-NA復(fù)合物的穩(wěn)定性更強(qiáng)，能阻礙宿主體內(nèi)受體蛋白與唾液酸的結(jié)合，對病毒產(chǎn)生更強(qiáng)的抑制作用。這種通過與NA活性中心以外的必需基團(tuán)結(jié)合的方式，提示黃酮類化合物可能為一種非競爭性抑制劑。

黃芩射干湯(Huangqin-shegan decoction)由黃芩、射干兩藥配伍而成，兩藥均為常用清熱解毒中草藥，具有抗病毒活性，能抑制H7N9亞型流感病毒的復(fù)制[39-40]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芩和射干主要藥效成分多集中在黃酮類成分，黃芩中主要的黃酮苷及苷元包括黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、木蝴蝶素A等；射干以異黃酮類成分為主，射干苷、鳶尾黃素、次野鳶尾黃素、白射干素等[41]。劉志強(qiáng)[42]利用分子對接技術(shù)將黃芩射干湯中13種主要黃酮類成分與H7N9亞型流感病毒NA逐一對接，比較各成分與H7N9亞型流感病毒NA的對接結(jié)合能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)漢黃芩素、黃芩素、木蝴蝶素A與H7N9亞型流感病毒神經(jīng)氨酸酶結(jié)合能最高，能與NA的 Arg-119，Asp-152，Arg-153，Trp-180，Arg-372，Glu-278 和Lys-294產(chǎn)生相互作用，表明黃芩射干湯抗 H7N9亞型流感病毒的主要成分為漢黃芩素、 黃芩素以及木蝴蝶素 A。這3種成分與扎那米韋樣抗 H7N9亞型流感病毒NA的作用高度相似，并且對耐藥型NA也具有一定抗性。

3.4 間苯三酚類綿馬貫眾(DryopteriscrassirhizomaNakai)為鱗毛蕨科植物粗莖鱗毛蕨的干燥根莖和葉柄殘，現(xiàn)代藥理研究表明其具有抗病毒、抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗瘧等作用[43-44]。劉暢等[45]從綿馬貫眾中分離得到了綿馬貫眾素 ABBA等25個間苯三酚類化合物，采用分子對接技術(shù)對這25個間苯三酚類化合物進(jìn)行了抗流感病毒 NA 活性篩選，發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾素 ABBA對流感病毒的抗病毒作用最為顯著，其對各亞型的 NA 均具有一定的抑制作用，且對多種流感病毒毒株均有抑制活性。

3.5 多糖類早期研究發(fā)現(xiàn)，從蜈蚣藻、孔石莼、青島馬尾藻3種藻類中提取制備的硫酸多糖在體內(nèi)外具有不同的抗流感病毒活性[46]。之后，程鄧芳等[47]又對中藥單味提取物海藻硫酸多糖(sulfated polysaccharide from algae，SPA)對H9N2亞型流感病毒在雞胚生長過程中的抑制作用進(jìn)行了研究。該研究采用雞胚培養(yǎng)法和血凝試驗(yàn)探究兩種藥液分別在3種不同加藥方式和不同質(zhì)量濃度下對H9N2亞型流感病毒的抑制作用。3種不同加藥方式分別為先向雞胚加藥液再接種病毒、先向雞胚接種病毒再加藥液、藥液與病毒同時加入雞胚。研究結(jié)果表明，3種加藥方式下，不同質(zhì)量濃度的SPA均能不同程度地抑制H9N2亞型流感病毒在雞胚中的增殖。

4 討論

綜上所述，A型流感病毒是一種重要的人獸共患病原，可在人與多種動物之間進(jìn)行傳播。由于流感病毒的HA和NA基因型眾多，且具有高度變異性，在不同宿主間的基因重組特性，導(dǎo)致疫苗免疫效力弱和臨床使用期短，難以有效抵御流感病毒的侵襲，由此造成流感疫情的綿延不絕。為彌補(bǔ)疫苗不足，開發(fā)新型抗流感病毒藥物，就成為一個重要選項(xiàng)之一。中藥，特別是植物類藥品，含有多種活性成分，是新藥開發(fā)的天然寶庫，已經(jīng)成為新藥發(fā)現(xiàn)的重要途徑。上述研究揭示了多種天然植物及其活性成分，對A型流感病毒表現(xiàn)出抑制作用，并初步闡釋了其作用機(jī)制，為抗流感病毒藥物的研究與發(fā)現(xiàn)提供了有意義的啟示，為進(jìn)一步開發(fā)新藥打下了良好基礎(chǔ)。