楊 青 徐倚天 劉俐君 趙小波 李清竹 張 蕾 黎丁箕

（達(dá)州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川達(dá)州 635000）

豬瘟（Classical swine fever,CSF），俗稱(chēng)“爛腸瘟”，在歐美一些地區(qū)被稱(chēng)為豬霍亂（Hog Cholera）、豬熱病或古典豬瘟，是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起豬的一種高度接觸性傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報(bào)告的傳染病[1]。

豬瘟于1833年在美國(guó)首次被發(fā)現(xiàn)，1903年確定病原體是豬瘟病毒，隨后在世界各地廣泛流行。歐盟、北美和日本等通過(guò)免疫預(yù)防措施和逐級(jí)凈化，控制和消滅了豬瘟。我國(guó)將豬瘟列為一類(lèi)動(dòng)物疫病，是目前危害我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的主要疫病之一，也是我國(guó)重點(diǎn)防范的病種。2017年豬瘟退出了國(guó)家強(qiáng)制免疫計(jì)劃，但疫苗免疫仍然是預(yù)防豬瘟的主要手段，其效果直接影響該病的綜合防控[2,3]。

抗體水平檢測(cè)是有效評(píng)價(jià)動(dòng)物防疫工作的重要指標(biāo)，加強(qiáng)對(duì)轄區(qū)內(nèi)某種動(dòng)物疫病的抗體水平監(jiān)測(cè)，可以為制定動(dòng)物疫病免疫程序和防控措施提供科學(xué)的依據(jù)。為掌握四川省達(dá)州市2021年豬瘟疫苗的免疫效果，達(dá)州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室對(duì)全市抽檢的1 605份豬血清進(jìn)行了豬瘟免疫抗體水平監(jiān)測(cè)，并進(jìn)行了數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析，以期為今后豬瘟的免疫工作開(kāi)展及豬瘟防治與凈化工作提供有力的數(shù)據(jù)支撐和建議。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品采集：從四川省達(dá)州市9個(gè)縣（市、區(qū)）下轄69個(gè)規(guī)模場(chǎng)、13個(gè)屠宰場(chǎng)、20個(gè)散養(yǎng)村里的100戶(hù)散養(yǎng)戶(hù)共采集豬血樣1605份。每頭豬前腔靜脈采血3～5mL，室溫自然凝固后分離血清，進(jìn)行抗體檢測(cè)。

1.2 儀器設(shè)備

主要使用儀器有THERMO酶標(biāo)儀（型號(hào)：Multi-skan FC），37℃恒溫培養(yǎng)箱，美國(guó)伯騰高通量微孔板洗板機(jī)，Eppendorf電動(dòng)八道可調(diào)間距移液器、8道微量移液器、單道微量移液器等。

1.3 試劑與方法

采用豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，試劑均購(gòu)自青島立見(jiàn)診斷技術(shù)發(fā)展中心，生產(chǎn)批號(hào)分別為020012003、020012102、020012106、020012111。

原理及用途：試劑盒由預(yù)包被CSFV E2Ⅰ抗原的微孔板和抗CSFV E2Ⅰ酶標(biāo)記物及其組分配套組成，應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫法檢測(cè)豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體，適用于豬瘟病毒的免疫效果監(jiān)測(cè)和抗體水平調(diào)查。

操作步驟：試劑盒使用前恢復(fù)室溫（20～25℃）并充分搖勻；向抗原包被板加入待檢豬血清20 μL及樣品稀釋液80μL，每孔100 μL；陰性、陽(yáng)性對(duì)照各加2孔，每孔100 μL；輕輕振勻孔中樣品后置37℃恒溫箱中孵育30 min；反復(fù)洗板5次；加酶標(biāo)抗體100 μL，置37℃恒溫箱中孵育30 min；洗板5次，滴加顯色液，A、B各50 μL；置37℃恒溫箱避光孵育10～15 min；每孔加終止液50 μL，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處的OD值。

結(jié)果判定：陰性對(duì)照平均值（ODnc）≤0.3，陽(yáng)性對(duì)照平均值（ODpc）≥0.6，試驗(yàn)才能成立。閾值Cut Off=ODnc×2.1（若ODnc≥0.05則按實(shí)際值計(jì)算；若ODnc＜0.05則按0.05計(jì)算），樣品OD值≥Cut Off值，為陽(yáng)性；反之為陰性。

2 結(jié)果

根據(jù)《2021年達(dá)州市動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》方案，2021年共采集免疫豬血清1 605份，合格1 548份，合格率為96.45%。其中監(jiān)測(cè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)豬血清1 245份，合格1 219份，合格率97.91%；監(jiān)測(cè)屠宰場(chǎng)豬血清260份，合格241份，合格率92.69%；監(jiān)測(cè)散養(yǎng)戶(hù)豬血清100份，合格88份，合格率88%。共監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)102個(gè)，合格94個(gè)，合格率92.16%，其中監(jiān)測(cè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)69個(gè)，合格67個(gè)，合格率97.1.16%；監(jiān)測(cè)屠宰場(chǎng)13個(gè)，合格12個(gè)，合格率92.31；監(jiān)測(cè)散養(yǎng)村20個(gè)，合格15個(gè)，合格率75%。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 2021年達(dá)州市不同場(chǎng)點(diǎn)類(lèi)型豬瘟免疫抗體合格率

從不同地區(qū)來(lái)看，達(dá)州市的9個(gè)縣（市、區(qū)）的豬瘟疫苗免疫抗體合格率分別為92.96%、93.48%、96%、100%、100%、92.8%、99.52%、99.52%、99.33%，均在90%以上，其中渠縣合格率最低，為92.8%，經(jīng)開(kāi)區(qū)、開(kāi)江縣最高，為100%，見(jiàn)表2。

表2 2021年達(dá)州市各縣 （市、區(qū)）豬瘟免疫抗體合格率

根據(jù)監(jiān)測(cè)計(jì)劃，2021年3—11月達(dá)州市分別進(jìn)行了豬瘟疫苗免疫抗體采樣、檢測(cè)，其中3月份共檢測(cè)豬血清60份，合格50份，合格率83.33%；4月份共檢測(cè)豬血清140份，合格132份，合格率94.29%；5月份共檢測(cè)豬血清270份，合格269份，合格率99.63%；6月份共檢測(cè)豬血清230份，合格225份，合格率97.83%；7月份共檢測(cè)豬血清60份，合格54份，合格率90.00%；8月份共檢測(cè)豬血清70份，合格62份，合格率88.57%；9月份共檢測(cè)豬血清60份，合格55份，合格率91.67%；10月份共檢測(cè)豬血清420份，合格408份，合格率97.14%；11月份共檢測(cè)豬血清295份，合格293份，合格率99.32%，見(jiàn)表3、圖1。

表3 2021年達(dá)州市各月份豬瘟免疫抗體合格率

圖1 2021年四川達(dá)州各月份豬瘟疫苗免疫抗體對(duì)比圖

3 討論與分析

從免疫抗體合格率來(lái)看，四川省達(dá)州市2021年豬瘟疫苗的群體免疫抗體合格率均在70%以上，全部達(dá)到了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部70%的規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。豬瘟疫苗能夠?qū)ωi群提供免疫保護(hù)，表明達(dá)州市豬瘟疫苗強(qiáng)制免疫工作達(dá)到了預(yù)期效果，免疫效果較好，豬瘟疫情風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生概率較低。

從不同場(chǎng)點(diǎn)豬瘟疫苗免疫抗體檢測(cè)結(jié)果分析，免疫抗體合格率最高的是規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，其次是屠宰場(chǎng)，散養(yǎng)戶(hù)最低，說(shuō)明豬瘟疫苗免疫存在不均衡性。主要原因可能是規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)有專(zhuān)職的技術(shù)人員，能按照規(guī)范的免疫程序積極主動(dòng)做好疫苗免疫工作；屠宰場(chǎng)生豬主要來(lái)源于養(yǎng)殖場(chǎng)，豬瘟免疫抗體水平相應(yīng)也比較高；而散養(yǎng)戶(hù)缺乏防疫意識(shí)，主要依靠春季、秋季的集中免疫時(shí)期村級(jí)防疫員來(lái)開(kāi)展免疫，也可能存在漏免的情況，從而達(dá)不到理想的效果。

從場(chǎng)點(diǎn)合格率來(lái)看，個(gè)別規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)豬瘟疫苗免疫抗體也存在不合格的情況，可能與養(yǎng)殖場(chǎng)補(bǔ)欄過(guò)程中是否及時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗免疫有關(guān)；某些屠宰場(chǎng)、散養(yǎng)戶(hù)免疫抗體不合格，說(shuō)明豬瘟散發(fā)風(fēng)險(xiǎn)仍不可忽視。

從不同地區(qū)來(lái)看，各地方豬瘟疫苗免疫抗體合格率存在一定差異?？赡茉蛴?點(diǎn)，一是基層撤鄉(xiāng)并鎮(zhèn)、畜牧獸醫(yī)站“三權(quán)”下放、體制改革等因素，影響各地方免疫工作的確實(shí)展開(kāi)；二是各地對(duì)豬瘟疫苗免疫工作的重視程度、防疫保障、人員配備及技術(shù)水平等存在差異，從而造成不同免疫結(jié)果。

從不同月份來(lái)看（見(jiàn)圖1），達(dá)州市2021年豬瘟疫苗免疫抗體合格率全年保持在80%以上，整體呈現(xiàn)良好狀態(tài)。其中3月份合格率最低，5月份、11月份合格率最高，分析原因，可能與免疫空檔期有關(guān)，達(dá)州市秋防集中免疫工作11月底結(jié)束，到第2年3月才開(kāi)始春防集中免疫，這期間可能存在漏免、補(bǔ)免不及時(shí)等情況，使得3月的免疫抗體水平最低；而5月、11月為春季、秋季集中防疫期。各縣（市、區(qū)）春季、秋季集中免疫豬瘟疫苗取得了良好的效果，豬瘟免疫抗體合格率較高。

2020年達(dá)州市豬瘟免疫抗體合格率為95.76%，2021年與之相比，略微上升，近2年的豬瘟免疫抗體水平持續(xù)高位，說(shuō)明養(yǎng)殖戶(hù)防疫意識(shí)不斷增強(qiáng)，免疫豬瘟疫苗積極性不斷提高，豬瘟疫苗的免疫效果得到提升，對(duì)全市動(dòng)物疫病防控起到了積極的促進(jìn)作用。

4 總結(jié)

達(dá)州市是全國(guó)生豬生產(chǎn)的優(yōu)勢(shì)地區(qū)，是全國(guó)優(yōu)質(zhì)肉豬戰(zhàn)略保障儲(chǔ)備基地，現(xiàn)有全國(guó)生豬調(diào)出大縣4個(gè)[4]。在黨中央、國(guó)務(wù)院和省委、省政府統(tǒng)一部署下，達(dá)州市36個(gè)國(guó)家級(jí)、255個(gè)省級(jí)生豬產(chǎn)能調(diào)控基地也即將全部完成掛牌工作，以形成長(zhǎng)期穩(wěn)定的豬肉供應(yīng)保障能力。而豬瘟的防控成效也將直接影響生豬產(chǎn)業(yè)能否持續(xù)健康發(fā)展。近年來(lái)，達(dá)州市對(duì)豬瘟疫苗實(shí)行全面強(qiáng)制免疫，有效預(yù)防了豬瘟的發(fā)生和流行，但也存在部分豬場(chǎng)免疫抗體較低的情況。

建議繼續(xù)強(qiáng)化春季、秋季的豬瘟疫苗兩防集中免疫和日常補(bǔ)免工作，切實(shí)構(gòu)筑牢固的免疫屏障；進(jìn)一步加強(qiáng)豬瘟防控知識(shí)宣傳，切實(shí)提高養(yǎng)殖戶(hù)的防疫意識(shí)和防控水平；完善免疫程序，制定更規(guī)范、更科學(xué)的免疫程序，確保免疫質(zhì)量。針對(duì)部分免疫抗體合格率較低的場(chǎng)點(diǎn)和豬群，認(rèn)真分析研究抗體水平不高的原因，開(kāi)展補(bǔ)免工作，加大對(duì)豬瘟疾病的防控力度；切實(shí)落實(shí)相關(guān)的防控策略，保障全市畜牧產(chǎn)業(yè)健康持續(xù)發(fā)展；同時(shí)有計(jì)劃地開(kāi)展凈化措施，倡導(dǎo)各養(yǎng)殖場(chǎng)不定期開(kāi)展豬瘟疫苗抗體水平監(jiān)測(cè)，制定出符合本場(chǎng)的凈化措施，減少因患豬瘟帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失。