王景，董坤，黃優(yōu)，陳海戀，林兆信，何超明

（三亞中心醫(yī)院/海南省第三人民醫(yī)院院神經(jīng)內(nèi)科，海南 三亞 572000）

0 引言

輕度認知功能障礙（mildcognitive impairment,MCI）是老年人發(fā)生癡呆和致殘的主要原因之一，也是全球面臨的重大公共健康問題之一[1]。因此，尋找與老年MCI發(fā)病相關的生物學標志物，對其早期預防和干預具有重要的臨床意義。環(huán)狀RNA（circular RNA,CircRNA）是近年來國內(nèi)外研究的熱點之一，參與調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞的增殖、分化和凋亡過程，對神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展、損傷后修復有著重要的調(diào)節(jié)作用，有望成為MCI診斷的潛在標志物[2-3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，CircRNA_0003391參與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和信號傳遞，調(diào)控大腦復雜的功能和多種神經(jīng)活動，在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮了極其重要的作用，有望成為MCI的重要診斷指標和治療靶點[4]。然而，關于CircRNA_0003391與老年MCI的相關性尚未清楚。為此，本研究通過檢測老年人群血清CircRNA_0003391表達水平，分析CircRNA_0003391表達水平與老年MCI的關系，旨在為老年MCI的早期篩查及靶向治療提供幫助。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2019年1月至2021年12月在我院體檢的老年人群250例作為研究對象，進行MCI的篩查和診斷。納入標準∶（1）MCI診斷參考《輕度認知障礙的診斷與治療（2018年）》[5]中的相關標準；（2）年齡≥65歲，無腦部手術(shù)史，臨床基線資料完整。排除標準：（1）合并腦外傷及其他腦血管疾?。唬?）存在其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病、昏迷或精神異常。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準，并與研究對象簽署知情同意書。

1.2 調(diào)查方法

由統(tǒng)一培訓的調(diào)查員進行一對一問卷調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容包括性別、年齡、基礎疾病、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、文化程度、居住地、婚姻、社交活動、睡眠狀況、生活習慣、空腹血糖（FPG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）等。

1.3 觀察指標

采集研究對象血標本3 mL，3500 r/min離心10 min（離心半徑13.5 cm），分離血清置于-70℃冰箱保存待測，應用實時熒光定量聚合酶鏈反應（real time PCR,RT-PCR）技術(shù)檢測CircRNA_0003391，反應條件為：95℃變性30 s、60℃退火30 s、72℃延伸60 s，共40個循環(huán)。以甘油醛3-磷酸脫氫酶（GAPADH）為內(nèi)參基因，采用2-△△Ct法計算CircRNA_0003391表達水平。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 老年人MCI患病率

本次調(diào)查的250 例65 歲以上的老年人中，男性153 例，女性94 例，年齡65～86（73.80±8.52）歲。最終確診MCI 患者71 例，男性46 例，女性25 例，年齡67～86（77.35±8.24）歲，MCI患病率為28.4%（71/250）。250例老年人根據(jù)發(fā)生MCI情況分為71例MCI組和179例正常無認知功能障礙組（非MCI組）。

2.2 MCI組和非MCI組一般資料比較

MCI組和非MCI組的年齡、糖尿病史、高血壓史、文化程度、體育鍛煉、閱讀習慣及社交活動比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 MCI 組和非MCI 組一般資料比較

續(xù)表1

2.3 MCI組和非MCI組血清CircRNA_0003391表達水平比較

MCI組血清CircRNA_0003391表達水平為0.21±0.05，明顯低于非MCI組0.94±0.36，差異有統(tǒng)計學意義（t=11.528，P＜0.001）。見圖1。

圖1 MCI 組和非 MCI 組血清CircRNA_0003391 表達水平比較

2.4 血清CircRNA_0003391表達水平預測老年MCI的價值

血清CircRNA_0003391表達水平預測認知功能障礙的最佳臨界值為0.46，其曲線下面積為（AUC=0.825，95%CI：0.764～0.886），敏感度為81.6%，特異度為79.5%。見圖2。

圖2 血清CircRNA_0003391 表達水平預測老年MCI 的ROC 曲線

2.5 多因素Logistic回歸分析影響老年MCI發(fā)生的危險因素

以是否發(fā)生MCI為因變量，將有統(tǒng)計學差異的影響因素（年齡、糖尿病史、高血壓史、文化程度、體育鍛煉、閱讀習慣、社交活動及CircRNA_0003391表達水平）為自變量，進行多因素Logistic回歸分析顯示，高齡（OR=1.694，95%CI：1.187～3.105）、糖尿病史（OR=1.672，95%CI：1.138～2.824）、文化程度低（OR=2.105，95%CI：1.734～4.308）及CircRNA_0003391水平＜0.46（OR=2.236，95%C I：1.841～5.310）是影響老年MCI發(fā)生的危險因素（P ＜0.05），而體育鍛煉（OR=0.618，95%CI：0.530～0.725）、閱讀習慣（OR=0.734，95%CI：0.629～0.917）及社交活動（OR=0.671，95%CI：0.552～0.806）是老年MCI的保護因素（P＜0.05）。見表2。

表2 多因素Logistic 回歸分析影響老年MCI 發(fā)生的危險因素

3 討論

MCI是指各種原因?qū)е螺p度的認知功能損害，在老年人中發(fā)病率較高，嚴重影響老年人的生命健康和生活質(zhì)量，加重了家庭的心理和經(jīng)濟負擔。隨著我國人口老齡化速度的加快，MCI的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢。因此，尋找MCI早期診斷和靶向治療的分子標志物是當前研究的重點課題。CircRNA是一類重要的內(nèi)源性RNA，具有高度的保守性和組織特異性，在神經(jīng)系統(tǒng)中高表達，尤其在腦組織中表達豐富，有望成為神經(jīng)系統(tǒng)疾病的重要診斷指標和治療靶點[6]。以往的研究表明，CircRNA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量極其豐富，是神經(jīng)疾病發(fā)生發(fā)展的重要調(diào)節(jié)因子，并通過復雜機制參與腦血管疾病的病理生理過程，故CircRNA在MCI診療方面有著廣闊的前景[7-8]。另有研究認為，CircRNA作為一種新型的非編碼RNA，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中存在顯著差異性表達，有很大潛力作為MCI診斷和治療的生物標志物[9]。

本次調(diào)查的250例65歲以上的老年人中，MCI患病率為28.4%，與國內(nèi)研究結(jié)果[10]接近。本研究MCI組血清CircRNA_0003391表達水平明顯低于非MCI組，提示CircRNA_0003391低表達可能參與MCI的發(fā)生發(fā)展。Gao等[11]研究指出，CircRNA在大腦中差異性表達，參與神經(jīng)發(fā)育、組織分化和神經(jīng)突觸形成等多種生物學過程，是認知功能障礙發(fā)生發(fā)展的重要標志物。本研究顯示，高齡是影響老年人發(fā)生MCI的危險因素，與以往的研究結(jié)果[12]一致。這主要是老年人隨著年齡的增大，腦白質(zhì)降低使得個體在執(zhí)行、信息加工等功能出現(xiàn)損傷，加重神經(jīng)衰弱，從而導致MCI發(fā)生的風險增加。老年糖尿病患者更易發(fā)生MCI，可能與胰島素抵抗和胰島素信號通路改變有關[13]。文化程度低也是影響老年MCI發(fā)生的因素之一，與廖婷婷等[14]研究結(jié)果相同。文化程度可能影響腦功能區(qū)和左下額皮質(zhì)厚度發(fā)育，文化程度越低的老年人腦儲備的信息量越少，使得接收、處理、傳遞信息的速度變慢，加快了腦萎縮的速度，進而更容易發(fā)生MCI。本研究閱讀習慣及社交活動是老年MCI的保護因素，這可能是積極的閱讀習慣、社會參與有助于老年人進行有效的人際交往和獲得社會支持，促進大腦功能運轉(zhuǎn)，延緩腦萎縮，從而降低MCI發(fā)生。體育鍛煉促進積極的神經(jīng)可塑性，增強神經(jīng)功能發(fā)生良性改變，減弱神經(jīng)退化，從而改善認知功能。因此，對老年人進行MCI的相關危險因素篩查，有助于早期發(fā)現(xiàn)MCI，并為早期干預治療提供幫助。

本研究ROC曲線顯示，血清CircRNA_0003391表達水平預測老年MCI的AUC為0.825，敏感度和特異度均較好，提示檢測CircRNA_0003391水平對臨床預測老年MCI具有重要意義，可為老年MCI的診治提供有用的幫助。多因素Logistic回歸分析也顯示，CircRNA_0003391水平＜0.46是影響老年MCI發(fā)生的重要因素，說明CircRNA_0003391表達水平降低與老年MCI發(fā)生高度有關，可能是預測老年MCI的獨立因子。Kondo等[15]研究表明，CircRNA是調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)信號的重要基因，與MCI的發(fā)生發(fā)展密切相關，有望成為MCI的重要診斷指標和治療靶點。

綜上所述，老年MCI患者血清CircRNA_0003391表達水平降低，CircRNA_0003391水平＜0.46是老年MCI的重要影響因素，對預測老年MCI具有重要的參考價值。但本研究為單中心的臨床研究，病例來源較單一，納入的病例數(shù)較少，可能對影響因素篩查有影響，未來仍需進一步深入證實。