陳林偉,戴培培,江勇,魏妮娜,徐柳,王琴,陳志鵬

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,江蘇 南京 210023;2.南京中醫(yī)藥大學(xué)泰州附屬醫(yī)院,江蘇 泰州 225300)

中藥壁虎又名守宮、天龍、蝎虎、蝘蜒、壁宮等，為壁虎科動(dòng)物無(wú)蹼壁虎GekkoswinhonisGunther、多疣壁虎GekkojaponicusDumeril et Bibron及蹼趾壁虎GekkosubpalmatusGuenther的干燥全體，其味咸、性寒，有小毒，具有祛風(fēng)定驚，解毒散結(jié)的功效[1]。壁虎在我國(guó)藥用歷史悠久,目前臨床廣泛用于各種腫瘤疾病的治療,特別是對(duì)消化系統(tǒng)腫瘤的治療效果最佳,具有毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)[2]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)壁虎抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理作用進(jìn)行了大量研究,取得了一定的研究成果,但其成分種類復(fù)雜,作用機(jī)制尚不明確[3]。因此,本文從壁虎抗腫瘤的本草考證、有效成分、臨床應(yīng)用及藥理作用4個(gè)方面進(jìn)行總結(jié),為壁虎抗腫瘤的深入研究及新藥開(kāi)發(fā)提供參考依據(jù)。

1 壁虎抗腫瘤的本草考證

壁虎在我國(guó)藥用歷史悠久,目前《中國(guó)藥典》和部頒標(biāo)準(zhǔn)尚未收載，其主要收載于江蘇、江西、山東、河南等地方藥材標(biāo)準(zhǔn)。壁虎最早以守宮之名見(jiàn)于馬王堆出土的《養(yǎng)生方》之中,其后一直歸于石龍子條下，直至《本草綱目》問(wèn)世[4]。歷代古籍文獻(xiàn)對(duì)壁虎的功效主治記載見(jiàn)表1?！侗静菥V目》的記載較為詳盡:咸、寒,有小毒,主治中風(fēng)癱瘓、手足不舉,或歷節(jié)風(fēng)痛,及風(fēng)痓驚癇,小兒疳痢,血積成痞,疬風(fēng)瘰疬,療蝎，“血積成痞,用壁虎一枚,白面和一鴨子大，包裹研爛,作餅烙熟食之,當(dāng)下血塊,不過(guò)三五次即愈,甚驗(yàn)”“瘰疬初起,用壁虎一枚,焙研,每日服半分,酒服”“反胃膈氣,地塘蟲(chóng)(即壁虎也)七個(gè)(砂鍋炒焦),木香、人參、朱砂各一錢半,乳香一錢,為末，蜜丸梧子大。每服7丸,木香湯下,早晚各1服”[5]。中醫(yī)認(rèn)為氣為血之帥,血隨氣行,氣滯血瘀,遂成積聚腫塊,說(shuō)明腫瘤的形成與氣滯血瘀有關(guān)。而疬風(fēng)瘰癘近似于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的頭頸部腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移、淋巴肉瘤、甲狀腺瘤等,反胃膈氣與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的食道癌、胃癌等疾病癥狀相吻合。因此,《本草綱目》中記載的用壁虎治血積成痞、疬風(fēng)瘰癘、反胃膈氣均屬現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的腫瘤范疇。

表1 歷代古籍文獻(xiàn)中壁虎的功效主治

2 壁虎抗腫瘤有效成分的研究

目前壁虎在臨床上抗腫瘤療效確切，已愈來(lái)愈引起國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥專家的密切關(guān)注，因此對(duì)其抗腫瘤活性成分研究已成為動(dòng)物藥的研究熱點(diǎn)。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)壁虎的化學(xué)成分進(jìn)行了大量研究,其成分種類復(fù)雜,主要包括微量元素、氨基酸、核苷、糖類、多肽、蛋白及其他小分子化合物(表2)。田雨晴等[6]利用高效液相色譜建立了同時(shí)測(cè)定尿嘧啶、胞苷、次黃嘌呤、尿苷、次黃苷、鳥(niǎo)苷、胸苷、腺苷含量的方法,結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地壁虎中均含有上述核苷類成分。Wu等[7-8]通過(guò)凝膠柱層析對(duì)壁虎提取物分離純化,分別鑒定得到甘露糖、半乳糖、葡萄糖、守宮多糖及守宮糖蛋白。駱和生等[9]研究表明壁虎中含有馬蜂毒類似的有毒物質(zhì)及組織胺類成分。鄭旭亞等[10]采用氣質(zhì)聯(lián)用法從壁虎中鑒定出2-乙基-3,5-二甲基吡嗪、異戊醛、三甲胺、1-辛烯-3-醇、正辛醛、壬醛、2-甲基萘、γ-辛內(nèi)酯、2-庚酮及苯酚10種揮發(fā)性成分。李雯等[11]采用硅膠柱及液相色譜首次從壁虎中分離出了13個(gè)化合物,分別鑒定為環(huán)肽(脯氨酸-亮氨酸)、環(huán)肽(丙氨酸-脯氨酸)、環(huán)肽(甘氨酸-脯氨酸)、環(huán)肽(丙氨酸-纈氨酸)、6-氨基嘌呤核苷、尿嘧啶核苷、脫氧胸苷、次黃苷、L-苯丙氨酸、5α-膽甾-3,6-二酮、膽甾醇、十六烷酸單甘油酯及硬脂酸。

表2 壁虎中含有的主要有效成分

3 壁虎抗腫瘤的臨床應(yīng)用

目前壁虎廣泛應(yīng)用于各種腫瘤疾病的治療,如食管癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌及肺癌等。尤其對(duì)消化系統(tǒng)腫瘤的治療效果最佳，其可以有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，改善患者臨床癥狀，延長(zhǎng)患者生存期，顯著提高患者的生存質(zhì)量。若與手術(shù)治療、化療藥物及放射治療聯(lián)合應(yīng)用，則療效更為顯著且毒副作用小，已越來(lái)越受到醫(yī)療界的密切關(guān)注。

3.1 治療食管癌

吳本端[12]將3 g壁虎粉和100 mg 5-Fu制成復(fù)方壁虎粉用于治療中晚期食管癌105例,觀察結(jié)果表明口服復(fù)方壁虎粉并結(jié)合放療能夠迅速緩解食管癌患者吞咽困難的痛苦,且未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用。賈敏[13]采用壁虎聯(lián)合化療藥物治療晚期食管癌,結(jié)果表明壁虎可以降低化療藥物的骨髓抑制,明顯提高臨床治療效果,提高患者的生存質(zhì)量。吳艷秋等[14]采用含有壁虎的扶正降逆通幽湯治療食管癌20例,根據(jù)長(zhǎng)期觀察結(jié)果顯示,20例患者中有14例存活≥1年,1年生存率70%,2年生存率25%,且使用安全無(wú)毒副作用。

3.2 治療胃癌

金龍膠囊是目前已上市治療胃癌的常用中成藥之一,主要由鮮守宮、鮮蘄蛇、鮮金錢白花蛇3味動(dòng)物藥組成。其對(duì)胃癌化療減毒的隨機(jī)雙盲、陽(yáng)性對(duì)照多中心臨床試驗(yàn)研究表明:金龍膠囊配合化療治療胃癌,可以改善患者化療期間的脘腹脹悶等中醫(yī)癥狀,提高患者的生存質(zhì)量和免疫功能,對(duì)化療的減毒作用明顯,安全性良好[15]。張良軍[16]采用復(fù)方守宮散與單純化療進(jìn)行胃癌患者治療對(duì)比研究,研究結(jié)果表明復(fù)方守宮散能改善晚期或術(shù)后復(fù)發(fā)胃癌患者的臨床癥狀,緩解患者的吞咽困難、胃部疼痛、飲食受限、口干以及味覺(jué)喪失等癥狀,且不良反應(yīng)的發(fā)生率明顯低于化療組,可以提高患者的生存質(zhì)量。

3.3 治療肝癌

邵明海等[17]采用含有壁虎的養(yǎng)肝消瘤湯治療原發(fā)性肝癌68例,研究結(jié)果表明患者的臨床癥狀有明顯改善,腫瘤體積不斷縮小,延長(zhǎng)了患者生存期,可用于無(wú)法進(jìn)行手術(shù)治療的肝癌晚期患者。李冉等[18]采用含有壁虎的龍虎抗癌免煎顆粒對(duì)24例肝癌患者進(jìn)行治療,研究結(jié)果表明龍虎抗癌免煎顆粒能夠顯著改善介入和/或射頻消融治療的患者中醫(yī)證候、生活質(zhì)量,穩(wěn)定病情,且具有較好的安全性。高曉紅等[19]采用含有壁虎的虎七散治療原發(fā)性肝癌28例,研究結(jié)果表明其能夠有效緩解肝癌患者癥狀,提高患者的生存質(zhì)量。

3.4 治療肺癌

邢向榮等[20]采用含有壁虎的保肺膏治療Ⅲ-Ⅳ期肺癌患者48例,研究結(jié)果表明其能夠控制疾病發(fā)展,外周血T淋巴細(xì)胞顯著增加,提高了患者機(jī)體的免疫力。袁坤等[21]采用含有壁虎的固肺消積飲聯(lián)合支氣管化療灌注治療老年局部晚期非小細(xì)胞肺癌27例,研究結(jié)果表明其能改善患者生存質(zhì)量及中醫(yī)證候,減輕化療灌注發(fā)生的毒副作用。尤海玲等[22]采用含有壁虎的健脾潤(rùn)肺解毒湯治療70例晚期非小細(xì)胞肺癌患者,研究結(jié)果表明健脾潤(rùn)肺解毒湯聯(lián)合化療能夠顯著降低患者腫瘤標(biāo)志物水平,減少毒副作用的發(fā)生率。蔡?hào)|林等[23]采用含有壁虎的益氣除痰散結(jié)方治療非小細(xì)胞肺癌患者60例,研究結(jié)果表明治療組患者瘤體改善效果明顯優(yōu)于對(duì)照組,提高了患者的生活質(zhì)量。

4 壁虎的藥理作用研究

隨著壁虎在臨床上治療腫瘤療效顯著,關(guān)于壁虎抗腫瘤的藥理學(xué)研究開(kāi)展得非常活躍,主要集中于食管癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌及肺癌等疾病。藥理學(xué)研究結(jié)果表明其發(fā)揮抗腫瘤的作用機(jī)制可能與抑制腫瘤細(xì)胞增殖分化、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤部位血管新生、調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境及免疫調(diào)節(jié)作用有關(guān)。

4.1 抑制腫瘤細(xì)胞增殖分化及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡

腫瘤的增殖分化異常在腫瘤發(fā)病學(xué)上有重要意義,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制其增殖分化是腫瘤治療的常用策略之一。王兵兵等[24]研究結(jié)果表明壁虎粗多肽可以提高人肝癌HepG2細(xì)胞內(nèi)E-cadherin蛋白表達(dá)水平,降低Rac1蛋白表達(dá),抑制肝癌細(xì)胞的增殖分化及遷移。段一夢(mèng)等[25]研究發(fā)現(xiàn)壁虎活性組分通過(guò)下調(diào)波形蛋白和上調(diào)腫瘤細(xì)胞中Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18和E鈣黏蛋白的表達(dá),發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖和遷移的作用。Wang等[26]通過(guò)Sephadex G-25色譜柱從鮮壁虎水提液中分離出大分子組分,研究結(jié)果表明該活性組分對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠有顯著的腫瘤抑制作用,體外可抑制人肝癌細(xì)胞Bel-7402細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其分化。

4.2 抑制血管新生

腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤的新生血管有密切關(guān)系，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是血管生成的重要促進(jìn)因子,與腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此，抑制腫瘤部位血管新生也是目前腫瘤治療的有效策略之一。黃淑瓊等[27]采用雞胚絨毛尿囊膜血管新生模型研究鮮壁虎水提物對(duì)血管的抑制作用,研究結(jié)果表明載體周圍雞胚絨毛尿囊膜組織中僅見(jiàn)少量新生血管且血管較細(xì)小,對(duì)血管新生具有顯著抑制作用。錢昕等[28]研究發(fā)現(xiàn)壁虎多肽混合物A可以抑制正常及腫瘤組織的血管增生,其作用機(jī)制可能是與抑制細(xì)胞內(nèi)VEGF的產(chǎn)生有關(guān)。Zhen等[29]研究結(jié)果表明壁虎水提液及其大分子組分能夠顯著抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)VEGF的分泌,通過(guò)抑制血管新生發(fā)揮抗腫瘤作用。

4.3 調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境

腫瘤微環(huán)境是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生和生活的內(nèi)環(huán)境，其中不僅包括了腫瘤細(xì)胞本身，還有與腫瘤細(xì)胞有密切聯(lián)系的其他細(xì)胞、細(xì)胞間質(zhì)、微血管以及浸潤(rùn)在其中的生物分子。調(diào)控腫瘤微環(huán)境長(zhǎng)期以來(lái)都是腫瘤研究中熱點(diǎn)的方向，對(duì)于認(rèn)識(shí)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過(guò)程有著重要的意義。Ding等[30]研究發(fā)現(xiàn)守宮硫酸糖肽可以抑制腫瘤微環(huán)境中淋巴管的形成,同時(shí)顯著減弱成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的血管生成,通過(guò)調(diào)控腫瘤微環(huán)境的發(fā)揮抗腫瘤作用。Chen等[31]研究發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞的微環(huán)境容易改變樹(shù)突狀細(xì)胞的生物流變特性,并使其分泌的白介素IL-12含量減少,IL-10含量增加。守宮硫酸化多糖-蛋白質(zhì)復(fù)合物可以通過(guò)減少腫瘤微環(huán)境IL-10的分泌來(lái)恢復(fù)樹(shù)突狀細(xì)胞的不良流變學(xué)特性,進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤作用。

4.4 免疫調(diào)節(jié)作用

機(jī)體的免疫功能隨著腫瘤的不斷進(jìn)展常進(jìn)行性下降,尤其是晚期腫瘤患者,其各種特異性和非特異性免疫功能均受到顯著抑制。因此通過(guò)各種途徑提高患者的免疫功能將有助于腫瘤治療。侯新楠等[32]研究結(jié)果表明鮮壁虎和干壁虎干粉均能提高肝癌H22荷瘤小鼠的脾臟和胸腺指數(shù),通過(guò)增強(qiáng)免疫發(fā)揮抗腫瘤作用。王曉蘭等[33]研究表明壁虎醇提物可不同程度地提高荷瘤小鼠白細(xì)胞數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù),通過(guò)免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮抗腫瘤作用。閆祝辰等[34]研究發(fā)現(xiàn)守宮硫酸多糖通過(guò)增加抗原遞呈細(xì)胞的抗原呈遞作用,促進(jìn)淋巴細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷作用。

5 討論

中藥壁虎治療消化道腫瘤療效顯著,但其功效物質(zhì)復(fù)雜,有待進(jìn)一步對(duì)其展開(kāi)深入研究。根據(jù)古籍記載“尾全者效佳”及臨床用藥發(fā)現(xiàn)含尾巴完整的壁虎粉劑入藥治療胃癌療效最佳,而壁虎尾巴在胃癌治療中發(fā)揮的作用尚不清楚。為了進(jìn)一步闡釋壁虎治療胃癌的物質(zhì)基礎(chǔ),課題組通過(guò)模擬胃部環(huán)境解析壁虎經(jīng)酶解后的活性多肽,同時(shí)從壁虎去尾部鑒定出41個(gè)油脂性成分,且尾部鑒定出64個(gè)油脂性成分,尾部多為長(zhǎng)鏈不飽和脂肪酸[35]。油脂中的脂肪酸類成分具有脂肪長(zhǎng)鏈和表面活性,可以促進(jìn)藥物形成膠束或超分子自組裝結(jié)構(gòu),從而促進(jìn)藥物的吸收,提高療效。綜上所述,課題組推斷壁虎尾巴中的脂肪酸發(fā)揮保護(hù)或促進(jìn)活性組分自組裝形成膠體體系,促進(jìn)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)穿越黏膜屏障,發(fā)揮抗腫瘤增效作用(如圖1)。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究也證實(shí)了上述推論的正確性,新發(fā)現(xiàn)的環(huán)肽以及脂肽不僅具有較好的抗腫瘤活性,同時(shí)還具有較強(qiáng)的自組裝能力,將來(lái)有望開(kāi)發(fā)成新型“藥輔合一”制劑,同時(shí)為新藥研發(fā)及高端制劑新輔料的開(kāi)發(fā)提供新思路。

從天然動(dòng)植物中篩選低毒、高效、多靶點(diǎn)的藥物是藥物研發(fā)的熱點(diǎn)。中藥動(dòng)物藥的活性成分多以核苷、氨基酸、多肽及蛋白為主,大量研究表明,蛋白或多肽是其主要活性物質(zhì)。然而,目前常用的提取方式多局限于傳統(tǒng)的水或醇加熱提取,主要的活性蛋白、多肽類成分容易被破壞,導(dǎo)致一些活性成分難以被發(fā)現(xiàn)。此外,對(duì)于一些全粉入藥的動(dòng)物藥,在體內(nèi)還需經(jīng)過(guò)胃腸道環(huán)境的降解,使得動(dòng)物藥活性多肽的發(fā)現(xiàn)更為困難。因此,采用現(xiàn)代仿生酶解以及模擬體內(nèi)消化代謝環(huán)境,更真實(shí)地模擬動(dòng)物藥在胃腸道的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程,是發(fā)現(xiàn)更多活性多肽的重要途徑之一。其次,對(duì)提取部位按照一定的理化性質(zhì)分離,進(jìn)一步對(duì)分離的部位進(jìn)行藥效學(xué)研究,追蹤其活性部位,確定其分子量,是發(fā)現(xiàn)活性物質(zhì)的常見(jiàn)手段。但由于多肽序列復(fù)雜,難以對(duì)其結(jié)構(gòu)準(zhǔn)確鑒定,如何精準(zhǔn)確定多肽序列是活性多肽發(fā)現(xiàn)的主要瓶頸之一。因此,有必要研發(fā)多肽快速分離和精準(zhǔn)測(cè)定儀器設(shè)備。最后,動(dòng)物源的多肽種類較多(脂肽、環(huán)肽等)，功能性較多,不僅具有生物學(xué)功能,還有一定的組裝功能,是高端制劑輔料新的研究方向。但其存在合成困難,將來(lái)有望通過(guò)生物合成技術(shù)大量制備,優(yōu)化改造其結(jié)構(gòu),進(jìn)一步拓展開(kāi)發(fā)其載藥等理化功能。