食管癌是一種世界范圍內(nèi)常見的消化道惡性腫瘤，根據(jù)其病理分型分為食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)和食管腺癌(esophageal adenocarcinoma，EAC)

，其組織病理學(xué)隨地域而異，ESCC占據(jù)絕大多數(shù)，是東亞國家和部分歐洲國家的主要組織學(xué)類型；EAC是歐洲和北美地區(qū)的主要組織學(xué)類型

。近年來，隨著腫瘤免疫治療的發(fā)展，研究者們正向著能達到臨床緩解率高，改善患者預(yù)后、臨床不良反應(yīng)的方向進行深入研究。目前，有多項研究

表明，ESCC的發(fā)生、發(fā)展與機體免疫功能和腫瘤免疫微環(huán)境密切相關(guān)。

自然殺傷(natural killer，NK)細胞作為腫瘤免疫治療的新興主力軍，近年與之相關(guān)的研究不斷涌出，其中較為熱門的為NK細胞的過繼免疫治療、嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor, CAR)修飾的NK(CAR-NK)的基礎(chǔ)及臨床研究、NK細胞的基因修飾等。NK細胞是天然免疫系統(tǒng)中重要的淋巴細胞，構(gòu)成了宿主抵御病原體和癌癥的第一道防線。它通過分泌細胞毒性因子，直接作用于腫瘤細胞，遏制腫瘤的發(fā)生和進展

，本文總結(jié)以NK細胞為基礎(chǔ)的細胞免疫治療方法在ESCC中的應(yīng)用及研究。

1 傳統(tǒng)NK細胞過繼免疫治療

NK細胞過繼免疫療法的應(yīng)用已有數(shù)十年，通過純化、細胞因子誘導(dǎo)、基因修飾等方法，提高NK細胞的療效，在多種惡性腫瘤的治療中，積累了大量臨床前和臨床證據(jù)，可作為改善血液惡性腫瘤

和部分實體瘤

的臨床手段。我們國家在10年前，已經(jīng)將其廣泛地應(yīng)用于實體瘤的治療，取得了寶貴的臨床經(jīng)驗。然而，早期的技術(shù)限制，使NK細胞體外擴增效率低，免疫治療要求高劑量和多次給藥，造成治療費用高；而且NK細胞的功能活化無很好的評價指標，僅僅依靠CD3

CD56

的比率這一指標來判斷NK細胞的培養(yǎng)效果，有很大的局限性。盡管有文獻

報道，通過檢測NK細胞釋放的細胞因子及NK細胞表達的顆粒酶和穿孔素等指標，進一步改進了NK細胞功能評價方法，但業(yè)界尚無統(tǒng)一的標準。

NK細胞的來源包括人臍帶血、患者自身外周血和骨髓，為了提高NK細胞治療的效果，人們用免疫磁珠分選純化NK細胞

，通過各種細胞因子組合，提高其體外擴增和活化的效率。目前，獲得大量且高效的NK細胞是免疫治療試驗的主要挑戰(zhàn)之一

，鑒于近幾年免疫治療在腫瘤治療方面的突破，越來越多的研究人員致力于此類研究。這些研究大部分仍集中于優(yōu)化細胞因子的刺激方案，在這一方面的探索中，確實發(fā)現(xiàn)了多種細胞因子有助于提高NK細胞培養(yǎng)的數(shù)量和質(zhì)量，但這些方面的進展，還遠不能夠滿足臨床治愈的需要。

曾獲農(nóng)牧漁業(yè)部科學(xué)技術(shù)進步一等獎、國家科技進步二等獎，屢獲“生態(tài)原產(chǎn)地保護產(chǎn)品”“第十六屆中國國際農(nóng)產(chǎn)品交易會金獎產(chǎn)品”等殊榮，上世紀八九十年代曾作為釣魚臺國賓館指定水果，用來招待、饋贈外國貴賓，遠銷國外及港澳地區(qū)……肉色紅潤、口感柔嫩、多汁化渣、風(fēng)味濃郁，一顆水果被這么多美譽加身，讓人不禁贊嘆！

IL-2是NK細胞體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)細胞因子，可以維持NK細胞的生長；IL-2對NK細胞的活化和增殖作用，對于發(fā)展NK細胞過繼免疫治療至關(guān)重要

。但IL-2也可活化T細胞，包括調(diào)節(jié)性T細胞。過去NK細胞多來源于外周血單個核細胞，包含各種免疫細胞，其中調(diào)節(jié)性T細胞活化對于NK細胞的培養(yǎng)和活化不利，因此，首先將NK細胞分選純化，有助于提高NK細胞的體外培養(yǎng)效果，如前面提到的磁珠分選，以及流式細胞學(xué)分選。

作為CAR-T細胞治療的替代方案，CAR-NK細胞治療不僅規(guī)避了這些挑戰(zhàn)，而且CAR-NK細胞不僅可通過CAR特異性識別表達抗原的腫瘤，還可通過NK細胞受體本身殺傷腫瘤。此外，擴增細胞可以使用同種異體NK細胞來源，而無需擔(dān)心移植性抗宿主病(graft versus host disease, GvHD)

。不僅如此，NK細胞系或多功能干細胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)分化的CAR-NK細胞，潛力也備受矚目

。

自腫瘤免疫治療的興起之始，研究者們一直在探索新的免疫檢查點，目前找到的影響NK細胞功能的免疫檢查點越來越多。除了經(jīng)典的NK細胞受體KIRs、LIRs和NKG2A外，其他一些免疫檢查點也被證明在各種癌癥和慢性感染中導(dǎo)致NK細胞功能障礙

，包括已經(jīng)有針對性藥物上市的CTLA-4、PD-1，以及最近確定的B7-H3、LAG-3、TIGIT、CD96、TIM-3、Siglecs家族成員(Siglec7/9)、CD200和CD47等

，可能也與NK細胞功能相關(guān)。與ESCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的免疫檢查點研究還有待進一步深入研究，尤其是NK功能相關(guān)的免疫檢查點異常。Wang等

和Jiao等

的研究表明，免疫檢查點基因CTLA4和HAVCR2的高表達與ESCC的不良預(yù)后相關(guān)，但目前暫無詳盡的以免疫檢查點基因為導(dǎo)向的ESCC治療報道。

近年來，食管癌的過繼免疫治療已有若干臨床試驗評價，但其中以NK細胞為基礎(chǔ)的臨床試驗甚少，仍待補足和探索。最近，PD-1抗體Pembrolizumab和Nivolumab已被用于一線化療失敗的晚期ESCC亞群患者。然而，與化療相比，它們在總生存期上僅顯示出中度改善

。

2 CAR-NK的研究報道和現(xiàn)狀

可轉(zhuǎn)念一想，自己畢業(yè)于武漢名牌大學(xué)，竟要淪落到用子宮來賺錢的地步，心中便有些打顫。但是，想起崔仁浩的母親說的那些話，“門不當(dāng)戶不對，以后不會幸福的”，他媽媽不就是嫌棄我們家沒有錢嗎？如果我能擁有這四五十萬元，在武漢給父母買個房子，交上首付，也算是過上了小康生活。那不管是崔仁浩的媽媽，還是以后遇上的其他男方的媽媽，都不會因為我的家庭而嫌棄我。

近幾年，除了IL-2，人們發(fā)現(xiàn)了多種NK細胞活化相關(guān)的細胞因子，如IL-12、IL-15、IL-18和IL-21等，這些細胞因子的組合刺激方案，明顯提高了NK細胞的擴增效率。例如，可使外周血單個核細胞培養(yǎng)的細胞產(chǎn)物中，CD3

CD56

NK細胞達到75%以上。在Cooley等

的1期/2期臨床試驗中，重組人源IL-15較IL-2更好地誘導(dǎo)了體內(nèi)NK細胞擴增，在淋巴衰竭后給予靜脈和皮下注射重組人源IL-15和單倍體NK細胞治療復(fù)發(fā)/難治性急性髓系白血病。IL-21較IL-15更佳，IL-21激活的NK細胞在絕對數(shù)量增長上優(yōu)于IL-15，且表型和功能上類似，但用IL-15培養(yǎng)NK細胞3～4周后細胞增殖停滯。IL-21可能通過上調(diào)共刺激受體、穿孔素和顆粒酶激活NK細胞增殖和功能活性，這可能與NKG2D/STAT3信號通路相關(guān)

。各細胞因子間存在不同的利弊，隨著雞尾酒細胞因子預(yù)激活NK細胞方案的優(yōu)化，NK細胞免疫治療仍會是一種很好的治療選擇

。近期，還有國外學(xué)者用基因修飾的自體T細胞誘導(dǎo)擴增NK細胞，也取得了很好的體外抗腫瘤效果

。

用含有CAR結(jié)構(gòu)的逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒的表達載體，轉(zhuǎn)染原代NK細胞或NK細胞系(常用NK-92)。Wang等

研究表明，將IL-15、IL-21和自殺基因引入CAR-NK可增強其安全性和有效性。CAR-NK細胞的基礎(chǔ)研究仍處于起步階段，提高其治療的安全性和有效性仍是臨床應(yīng)用的挑戰(zhàn)，包括抑制免疫檢查點和靶向TME的聯(lián)合治療可能為基于CAR-NK細胞的免疫治療提供一個新的方向。

9月26日，中國水電建設(shè)集團十五工程局有限公司在陜西西安舉行成立60周年慶祝大會。水利部部長陳雷、陜西省委書記趙樂際、陜西省省長趙正永發(fā)來賀信。

3 NK相關(guān)的免疫檢查點

除了上述的細胞因子，NK細胞功能相關(guān)的一些基因表達變化，也影響NK細胞的抗腫瘤作用，包括現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)的免疫檢查點。通過改變這些NK功能相關(guān)基因，也可以提高NK細胞的抗腫瘤效果。有研究小組

利用基因修飾NK細胞在腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment, TME)中靶向TGFβ，允許了NK細胞同時抵抗免疫抑制并實現(xiàn)增強激活，從而獲得優(yōu)異的體外和體內(nèi)抗腫瘤療效，為患有神經(jīng)母細胞瘤和其他分泌TGFβ的惡性腫瘤患者提供了一種新的治療選擇。此外，本課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)ESCC患者外周血中NK細胞Ku70、BPI、HMBG2等基因表達異常(暫未發(fā)表)，是否可以通過對這些基因進行編輯，改善NK細胞的功能，促進ESCC患者NK細胞的殺傷功能，尚在進一步研究中。

腫瘤相關(guān)抗原(tumor associated antigens，TAAs)表達的減弱或MHC-I的下調(diào)被認為是腫瘤細胞逃避免疫監(jiān)視的其他機制。CAR是一種合成的混合抗原受體，通常由抗體的可變區(qū)域和T細胞受體(T cell receptor, TCR)的恒定區(qū)域組成，使免疫細胞能夠選擇性識別腫瘤細胞上表達的TAAs

。盡管通用性CAR-T細胞的研發(fā)如火如荼，但目前的CAR-T療法需要采集患者自身T細胞(有MHC限制性)，制備周期長，且受限于重癥和淋巴細胞減少的癌癥患者中獲得足量的自體T細胞

。

4 NK細胞功能與ESCC發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性

ESCC患者TME中，NK細胞細胞毒性下降，抑制性受體KLRC1(NKG2A)和ITGA1表達增加，耗竭評分增加，部分免疫細胞細胞毒性減弱，靜息期積累，這些可能是造成ESCC總生存期縮短的原因。巨噬細胞和Treg之間的串?dāng)_可能導(dǎo)致TME的免疫抑制，這些途徑的特異性靶向可能會重新激活ESCC中的抗腫瘤免疫反應(yīng)

。

在這個階段，現(xiàn)實和信念的沖突還會影響她的工作態(tài)度和職業(yè)感受，然而，教育信念的改變使她的職業(yè)發(fā)展有了穩(wěn)定持久的動力?！白约河蓙硪丫玫睦Щ箢D感釋然”，“教書育人”的外語教育信念讓她認清教師的社會角色和職責(zé)，堅定了她的“職業(yè)信念”。因此，職業(yè)發(fā)展目標明確，她今后的職業(yè)發(fā)展就是處理好生活和教學(xué)的矛盾，解決好理想和現(xiàn)實的沖突，尋求自身發(fā)展和職業(yè)發(fā)展的融合，構(gòu)建完整的身份認同。她將繼續(xù)探索、完善“自己的”教學(xué)方法和外語教學(xué)的教育意義，實現(xiàn)用“真實的自己”上課的理想，實現(xiàn)人生發(fā)展和職業(yè)發(fā)展融合。

另外，凍存的NK細胞復(fù)蘇后活力下降明顯，也需要用IL-2的培養(yǎng)才能恢復(fù)

，但NK細胞恢復(fù)的效果，不同的研究報道結(jié)果有所差異。由于NK細胞的免疫治療需求數(shù)量多，加上凍存對其功能和存活率的影響，NK細胞的保存仍頗具挑戰(zhàn)。

Tsutsui等

研究結(jié)果表明，腫瘤內(nèi)高水平NK細胞浸潤的患者比低水平NK細胞浸潤的患者有更佳的總生存期(

=0.0068)。腫瘤內(nèi)NK細胞浸潤可作為原發(fā)性切除ESCC預(yù)后價值的變量。Watanabe等

發(fā)現(xiàn)，由于NK細胞功能障礙，癌癥患者中曲妥珠單抗和西妥昔單抗介導(dǎo)的抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)受到影響，IL-21能有效恢復(fù)ESCC患者NK細胞的ADCC功能，并上調(diào)CD247分子。

Zheng等

的研究發(fā)現(xiàn)，ESCC細胞分泌IL-6誘導(dǎo)NK細胞表達CD39，而腫瘤浸潤CD39

NK細胞增高患者，總生存期和無復(fù)發(fā)生存期短。CD39可能是增強NK細胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫的潛在靶點。也有研究

提示，ESCC中存在浸潤性CD57

NK細胞，CD57

NK細胞的豐度與腫瘤浸潤IL-17產(chǎn)生細胞的數(shù)量和患者預(yù)后呈正相關(guān)。

近年來，受各種因素的影響，出現(xiàn)了許多質(zhì)疑高校思政課正當(dāng)性和必要性的雜音和謬論，比如“思政課取消論”、“思政課非意識形態(tài)化”、“思政課無用論”等。一些人認為，把思政課作為高校學(xué)生的必修課是沒有必要的。一些人認為，高校開設(shè)思政課無可厚非，但應(yīng)該摒棄以灌輸馬克思主義、社會主義為主流的思政課，代之以介紹世界多元文化、多元價值觀。還有一些人主張，思政課沒有多大的用處，不如把思政課的時間用在專業(yè)課的學(xué)習(xí)上。這些觀點對思政課的誤解、歪曲甚至抹黑，在當(dāng)代大學(xué)生中有一定的影響力，也是思政課建設(shè)面臨的問題之一。

Li等

認為，缺乏IL-18可抑制NK細胞產(chǎn)生IFN-γ，抑制體外細胞毒性，降低食管癌的抗腫瘤免疫能力，促進了食管癌的免疫逃逸。Watanabe等

的研究發(fā)現(xiàn)，與健康者相比，ESCC患者的NK細胞中CD16明顯下調(diào)，CD56明顯上調(diào)；患者接受ESCC根治性切除后，CD16的下調(diào)和CD56的上調(diào)顯著恢復(fù)到健康者的水平。這些證據(jù)表明，NK細胞表面抗原或細胞因子的抑制或激活，是影響NK細胞活性的關(guān)鍵因素，也是當(dāng)下和未來臨床研究的重點，研究者們著眼于NK細胞因子或蛋白的編輯和修飾，提高NK細胞的增殖能力和功能活性，以期得到更好的臨床治療效果。

5 總結(jié)及展望

NK細胞具有無MHC限制性的細胞毒性、細胞因子產(chǎn)生、免疫記憶等功能，這使得它在先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)系統(tǒng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。腫瘤免疫的抑制與NK細胞的功能障礙關(guān)系密切，其功能的恢復(fù)甚至增強可能是抗腫瘤免疫治療的潛在選擇。

NK細胞相較其他免疫細胞擁有不良反應(yīng)小，GvDH發(fā)生率低等優(yōu)點，但現(xiàn)階段，隨著精準醫(yī)療的深入，聯(lián)合NK細胞治療ESCC的臨床策略、治療的劑量、不良反應(yīng)等方面有待深入研究。無論是非基因修飾的NK細胞，還是以CAR-NK細胞、其他基因修飾的NK細胞為基礎(chǔ)的治療方法，其在ESCC的治療上均有巨大的潛力。

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