賈菲菲，程佳美，趙霞，楊會英，肖新月

(中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

藥用鹵化丁基橡膠塞是由生膠經(jīng)配合、混煉、預(yù)成型、硫化、沖切、清洗硅化、包裝等步驟制備而成[1]，其中硫化是非常重要的一步。在制備橡膠塞時(shí)，需要在生膠中加入各種硫化劑、硫化活性劑和硫化促進(jìn)劑。2-巰基苯并噻唑作為通用型硫化促進(jìn)劑，合成研究報(bào)道很多，廣泛應(yīng)用于各種橡膠的制備中，硫化狀態(tài)比較平穩(wěn)，硫化性能良好。對于天然橡膠和通常以硫黃硫化的合成膠具有硫化促進(jìn)作用，可以使橡膠制品具有很高的拉伸強(qiáng)度和硬度。

2-巰基苯并噻唑在橡膠中易分散，但具有一定的毒性。2-巰基苯并噻唑可能會刺激皮膚和黏膜，能引起皮炎及難以治療的皮膚潰瘍，可致敏而且在2A類致癌物清單中。在與藥品的長期接觸中，藥用鹵化丁基橡膠塞中的添加劑有可能會遷移至藥品中，對藥品的質(zhì)量、安全性和有效性產(chǎn)生影響。根據(jù)2018年4月發(fā)布的《化學(xué)藥品與彈性體密封件相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》[11]，2-巰基苯并噻唑被列為慎用添加劑，需要高度重視其遷移至藥品中的可能性。因此，有必要對2-巰基苯并噻唑進(jìn)行考察及控制，以保障其殘留量安全。本研究采用超聲萃取及高效液相色譜法，建立了藥用鹵化丁基橡膠塞中2-巰基苯并噻唑含量的測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 2695液相色譜儀及PDA檢測器(美國沃特世公司)；電子天平(美國梅特勒-托利多集團(tuán))；MARS5微波消解儀(CEM)。

1.2 試藥 2-巰基苯并噻唑(中國食品藥品檢定研究院,純度：99.1%，195066-202001)；乙腈(Fisher，203096)；丙酮(Fisher，172014)；去離子水(Millipore)。

試驗(yàn)樣品共2批，1批注射液用氯化丁基橡膠塞，1批注射液用溴化丁基橡膠塞，均由廠家A提供?；厥章试囼?yàn)采用注射液用氯化丁基橡膠塞的樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX SB-C8(4.6 mm×250 mm，5 μm)；檢測器：紫外檢測器，檢測波長：320 nm；流動相：A液為1%乙腈水溶液，B液為乙腈，洗脫梯度見下表；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

表1 液相色譜洗脫梯度

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取2-巰基苯并噻唑約10 mg，置于10 mL容量瓶，加丙酮溶解并定容，即得2-巰基苯并噻唑?qū)φ掌啡芤骸＞芰咳∩鲜?-巰基苯并噻唑?qū)φ掌啡芤?，依次稀釋制成濃度?、5、10、30、50、80、100 μg·mL-1的系列2-巰基苯并噻唑?qū)φ掌啡芤骸?/p>

2.2.2 樣品溶液制備 取剪碎后的膠塞樣品約1.0 g，精密稱定，置萃取罐中，共2份，每份加入10 mL丙酮，蓋好瓶塞，在60 ℃條件下微波提取30 min后取出，經(jīng)0.45 μm的濾膜過濾后收集于25 mL容量瓶中，取出樣品放回萃取罐中按上述過程加入15 mL丙酮再提取一次和過濾。合并濾液并定容至25 mL，即得樣品溶液。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 線性關(guān)系考察 取“2.2”項(xiàng)下的系列對照品溶液，依次注入液相色譜儀，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，記錄色譜圖。以濃度及峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算相關(guān)系數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果見表2，相關(guān)系數(shù)良好，表明2-巰基苯并噻唑在1.02～102.26 μg·mL-1范圍內(nèi)線性良好。2-巰基苯并噻唑的典型色譜圖如圖1所示。

表2 2-巰基苯并噻唑線性試驗(yàn)結(jié)果

圖1 2-巰基苯并噻唑?qū)φ掌啡芤荷V圖

2.3.2 檢出限和定量限 吸取“2.2”項(xiàng)下濃度約1 μg·mL-1的對照品溶液，逐步稀釋注入液相色譜儀，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，信號與噪音之比為3時(shí)為檢出限，信號與噪音之比為10時(shí)為定量限。經(jīng)試驗(yàn)，2-巰基苯并噻唑的檢出限和定量限分別為0.03 μg·mL-1和0.10 μg·mL-1。

2.3.3 精密度 分別吸取“2.2”項(xiàng)下制備的濃度約為10、30、50 μg·mL-1對照品溶液10 μL，連續(xù)注入液相色譜儀6次，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，計(jì)算峰面積的RSD，結(jié)果見表3。經(jīng)計(jì)算，峰面積RSD小于3.0%，表明方法精密度良好。

表3 2-巰基苯并噻唑精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.3.4 穩(wěn)定性 分別吸取“2.2”項(xiàng)下制備的濃度約為10、30、50 μg·mL-1對照品溶液10 μL，于放置0及24 h后再注入液相色譜儀，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，計(jì)算峰面積的RSD，結(jié)果見表4。經(jīng)計(jì)算，峰面積RSD小于3.0%，表明對照品溶液放置24 h穩(wěn)定性良好。

表4 2-巰基苯并噻唑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.3.5 回收率試驗(yàn) 精密稱取2-巰基苯并噻唑約10 mg，置于10 mL容量瓶，加丙酮溶解并定容，即得2-巰基苯并噻唑提取回收對照品溶液。

取剪碎后的注射液用氯化丁基橡膠塞約1.0 g，精密稱定，置萃取罐中，共9份，每3份中分別加入0.20、0.25、0.30 mL上述2-巰基苯并噻唑提取回收對照品溶液，然后加丙酮至10 mL，蓋好瓶塞，在60 ℃條件下微波提取30 min后取出，經(jīng)0.45 μm的濾膜過濾后收集于25 mL容量瓶中，取出樣品放回萃取罐中按上述過程加入15 mL丙酮再提取1次和過濾。合并濾液并定容至25 mL，即得回收率試驗(yàn)樣品溶液。

通過外標(biāo)法計(jì)算得注射液用氯化丁基橡膠塞中2-巰基苯并噻唑的回收率在97.8%～108.9%之間，表明方法準(zhǔn)確度良好，測定結(jié)果見表5。

表5 氯化丁基橡膠塞中2-巰基苯并噻唑提取回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4 樣品測定 取注射液用氯化丁基橡膠塞和注射液用溴化丁基橡膠塞各2份，按“2.2”項(xiàng)下制備樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)。經(jīng)檢測，注射液用氯化丁基橡膠塞和注射液用溴化丁基橡膠塞中均未檢出2-巰基苯并噻唑。

3 討論

2-巰基苯并噻唑?yàn)榛蚨拘噪s質(zhì)，具有比一般雜質(zhì)更大的危害性，可能會間接或直接損傷細(xì)胞DNA，誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生基因突變，導(dǎo)致染色體重排或斷裂，從而產(chǎn)生致突變或致癌的風(fēng)險(xiǎn)[12]。根據(jù)《化學(xué)藥品與彈性體密封件相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》，2-巰基苯并噻唑被列為慎用添加劑，應(yīng)開發(fā)高靈敏度的檢測方法對密封件中可能殘留的2-巰基苯并噻唑進(jìn)行檢測。本研究所考察的2種藥用鹵化丁基橡膠塞中均未檢測到2-巰基苯并噻唑。

在后續(xù)的相容性研究中，對鹵化丁基膠塞中的2-巰基苯并噻唑進(jìn)行定性定量分析后，還應(yīng)進(jìn)一步建立藥品中該添加劑的檢測方法及其含量的測定。尤其是在穩(wěn)定性試驗(yàn)中，隨著藥品放置時(shí)間的延長，應(yīng)關(guān)注藥品中2-巰基苯并噻唑的含量變化，判定是否會對藥品的安全性和有效性帶來影響。本研究也將在后續(xù)工作中繼續(xù)對藥用鹵化丁基橡膠塞所保護(hù)的藥品中的2-巰基苯并噻唑進(jìn)行檢測方法的建立研究。

本研究建立了一種高效液相色譜法測定藥用鹵化丁基橡膠塞中的2-巰基苯并噻唑的分析測試方法。該方法簡便快速，選用丙酮作為萃取劑，通過兩次微波萃取后可以達(dá)到很好的提取效果。該方法檢測限低，精密度高，加標(biāo)回收率好。在1.02～102.26 μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9，檢出限為0.03 μg·mL-1，精密度、穩(wěn)定性RSD均小于3%，樣品加標(biāo)回收率為97.8%～108.9%，證明通過此方法可獲得準(zhǔn)確、可靠的2-巰基苯并噻唑測試結(jié)果。