魯玲玲，范盈盈，張銳利,

（1.塔里木大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，新疆阿拉爾 843300；2.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，新疆烏魯木齊 830002）

紅棗是新疆最具有資源優(yōu)勢(shì)和發(fā)展?jié)摿Φ奶厣a(chǎn)業(yè)，同時(shí)也是支撐南疆地區(qū)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要支柱。近年來(lái)，由鏈格孢屬真菌引起的“黑斑病”成為新疆紅棗產(chǎn)業(yè)最主要病害；其真菌毒素污染給消費(fèi)者對(duì)紅棗及其制品的食用帶來(lái)安全恐慌。因此，掌握紅棗中鏈格孢毒素的種類、含量及污染水平，是保障南疆紅棗產(chǎn)業(yè)持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展急需解決的問(wèn)題。

2003 年美國(guó)農(nóng)村部Michelangelo 等研究人員開發(fā)的QuEChERS 主要應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥及獸藥殘留檢測(cè)的快速樣品前處理。QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）是一種快速、便捷、低成本、高效率、穩(wěn)固且安全的前處理技術(shù)，原理與高效液相和固相萃取相似，都是利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，從而達(dá)到凈化提取的目的。隨著分析檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，QuEChERS 技術(shù)逐漸被改良并應(yīng)用在其他微量、痕量化合物的分析檢測(cè)中。由于鏈格孢毒素的種類、含量的不確定性，為其準(zhǔn)確檢測(cè)帶來(lái)較大影響。超高效液相色譜串聯(lián)一級(jí)質(zhì)譜或二級(jí)質(zhì)譜方法具有靈敏度好、準(zhǔn)確度高、無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行柱前衍生、檢測(cè)周期短等優(yōu)點(diǎn)。近年來(lái)，將QuEChERS 前處理技術(shù)與UPLCMS 相結(jié)合應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素檢測(cè)的報(bào)道越來(lái)越多，但將其應(yīng)用于紅棗及其制品中鏈格孢毒素檢測(cè)的報(bào)道甚少。

為掌握紅棗及其制品中鏈格孢毒素的污染分布情況，本文探究了以QuEChERS 為基礎(chǔ)的紅棗鏈格孢毒素提取技術(shù)，建立了UPLC-MS 檢測(cè)方法。針對(duì)南疆四個(gè)主要紅棗產(chǎn)區(qū)的原料紅棗和市售紅棗制品進(jìn)行鏈格孢毒素種類和含量的分析檢測(cè)。以期為紅棗及其制品的食用安全性評(píng)估奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

原料紅棗 2021 年11 月采集自新疆阿克蘇、和田、喀什地區(qū)未經(jīng)加工處理的駿棗，果形飽滿、呈圓柱形或長(zhǎng)倒卵形，果面深紅色，無(wú)霉?fàn)€、漿頭，無(wú)不熟果，無(wú)病果、蟲果；紅棗制品 當(dāng)?shù)靥禺a(chǎn)超市，詳情見表1；細(xì)交鏈孢菌酮酸（TeA，CAS: 610-88-8）、交鏈孢酚（AOH，CAS: 641-38-3）、交鏈孢酚單甲醚（AME，CAS: 26894-49-5）、騰毒素（TEN，CAS: 28540-82-1） 純度≥98%，新加坡Pribolab 公司；交鏈孢霉烯（ALT，CAS: 889101-41-1） 純度≥98%，加拿大TRC公司；乙腈、甲醇 色譜純，F(xiàn)isher Chemical；無(wú)水硫酸鎂、氨水（分析純）、甲酸、冰乙酸（色譜純） 福晨（天津）化學(xué)試劑有限公司；氯化鈉、碳酸銨 分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

表1 紅棗制品信息Table 1 Informations of jujube products

Oasis HLB 6 cc（500 mg）LP Extraction Cartridge 固相萃取柱 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；聚醚砜膜（PES）、聚四氟乙烯膜（PTFE）、尼龍膜（Nylon）、聚偏二氟乙烯膜（PVDF）過(guò)濾膜 直徑 13 mm，孔徑 0.22 μm，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；Vion IMS QTof MS 超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜、Waters Vac 6 cc（500 mg）Alumina B Cartridges固相萃取柱 美國(guó)Waters 公司；Milli-Q 超純水儀美國(guó)Millipore 公司；MS205DU電子分析天平Mettler Toledo 公司（中國(guó)上海）；MTS 240C 自動(dòng)水平振蕩器 上海達(dá)姆實(shí)業(yè)有限公司（中國(guó)上海）；MS3 Basic 漩渦振蕩器 德國(guó)IKA 公司；JW-100S 超聲波清洗器 深圳創(chuàng)美清洗設(shè)備有限公司；Eppendorf Centrifuge 5415D 高速冷凍離心機(jī) 艾本德中國(guó)有限公司；PHS-2F pH 計(jì) 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司（中國(guó)上海）；RE-52A1L 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 濟(jì)南泰醫(yī)生物技術(shù)有限公司（中國(guó)濟(jì)南）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 1 mg/mL 標(biāo)品儲(chǔ)備液的制備：準(zhǔn)確稱取TEA、AOH、AME、TEN、ALT 5 種毒素標(biāo)品各0.0010 g 分別置于5 支1 mL 棕色容量瓶中，加乙腈定容，于-20 ℃冰箱中密封保存。

100 μg/mL 儲(chǔ)備液的制備：吸取1 mg/mL 的TEA、AOH、AME、TEN、ALT 5 種毒素儲(chǔ)備液各0.2 mL，置于同一棕色2 mL 容量瓶中，加乙腈定容，于-20 ℃冰箱中密封保存。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取相當(dāng)體積的100 μg/mL儲(chǔ)備液，用乙腈稀釋配制成0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50 μg/mL 的5 種鏈格孢毒素標(biāo)準(zhǔn)工作液，于-20 ℃冰箱中保存。

基質(zhì)工作液：濃度設(shè)置與標(biāo)準(zhǔn)工作液相同，以不含毒素的樣品空白基質(zhì)稀釋配制。

1.2.2 毒素提取

1.2.2.1 QuChERS 方法提取固體樣品中毒素 固體樣品破碎處理后稱取2.5 g 置于50 mL 離心管中，依次加入10 mL 超純水和10 mL 乙腈（含1%乙酸），放入自動(dòng)水平振動(dòng)器在2500 r/min 條件下振蕩提取5 min 使紅棗樣品均勻分散。隨后立即加入4 g無(wú)水硫酸鎂和1 g 氯化鈉，渦旋振蕩30 s。將離心管配平后放入冷凍高速離心機(jī)在8000 g 條件下離心10 min，取適量上清液在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入1 mL 乙腈-甲醇-甲酸混合溶液（乙腈:甲醇:甲酸=70:29:1，v:v）復(fù)溶，樣液經(jīng)0.22 μm PTFE濾膜過(guò)濾，等待上機(jī)測(cè)定。

1.2.2.2 固相萃取方法提取液體樣品中毒素 取10 mL液體樣品，用甲酸調(diào)整pH 至2.5，固相萃取小柱（以5 mL 甲醇和5 mL 超純水活化），樣液分兩次注入，注意始終保持柱內(nèi)填充物被液體覆蓋，不能讓液體流干，流速控制在1 mL/min；待樣品過(guò)柱完畢后，依次用5 mL 超純水和5 mL 甲醇-水溶液（甲醇:水=4:6，v:v）淋洗，棄去此前所有過(guò)柱的混合液。準(zhǔn)備干凈的試管收集洗脫液，先向固相萃取小柱中加入5 mL 甲醇，再加入5mL 含1%氨水的甲醇-乙腈溶液（甲醇:乙腈=1:1，v:v），減壓抽干5 min 后將收集的洗脫液于40 ℃水浴中氮吹至近干，加1 mL 10%甲醇-水溶液復(fù)溶，0.22 μm PTFE 濾膜過(guò)濾，等待上機(jī)檢測(cè)。

1.2.3 超高效液相色譜條件 Acquity UPLC HSS C（2.1×100 mm，1.8 μm）色譜柱；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量5 μL；流動(dòng)相：A 為0.1 mmol/L 碳酸銨水溶液，B 為純甲醇；流速0.3 mL/min；梯度洗脫程序：0～1 min、20% A；4～5.5 min、100% A；5.6～8 min、20% A。

1.2.4 串聯(lián)質(zhì)譜條件 串聯(lián)質(zhì)譜采用電噴霧離子源（ESI），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描（MRM）。離子源溫度為150 ℃，電離電壓4 kV，脫溶劑氣流量350 L/h，脫溶劑溫度350 ℃，碰撞氣流量150 L/h，錐孔反吹氣流量30 L/h。5 種鏈格孢毒素所用質(zhì)譜參數(shù)詳見表2。

表2 質(zhì)譜參數(shù)Table 2 Mass spectrum parameters

1.2.5 基質(zhì)效應(yīng) 分別以標(biāo)準(zhǔn)溶液溶劑和樣品空白基質(zhì)配置100 μg/mL 5 種鏈格孢毒素混合標(biāo)準(zhǔn)液。根據(jù)實(shí)際測(cè)定值，通過(guò)下式計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)（ME）:ME=（A/B-1）×100%，式中：A 表示基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)峰面積；B 表示溶劑標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)峰面積。判別標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)ME＞0時(shí)，代表基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；當(dāng)ME＜0 時(shí)，代表基質(zhì)抑制效應(yīng)；當(dāng)︱ME︱≤20%表示弱基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)20%＜︱ME︱≤50%表示中等基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)︱ME︱＞50%表示強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò)超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜儀配備的MassLynx 軟件下載獲取，采用Microsoft Office Excel 2010 和Origin 2021 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

為選擇適合于TeA、AOH、AME、TEN 和ALT 5 種鏈格孢毒素色譜分離的流動(dòng)相組合，本試驗(yàn)探索了以碳酸銨水溶液、甲酸銨水溶液、甲醇-甲酸水溶液3 種水相和乙腈、甲醇2 種有機(jī)相的6 組配比作為流動(dòng)相時(shí)5 種鏈格孢毒素的色譜分離情況和峰形的對(duì)稱性。結(jié)果表明，當(dāng)以甲酸銨水溶液、甲醇-甲酸水溶液分別與甲醇、乙腈組合作為流動(dòng)相時(shí)，ALT 未見出峰，TeA 與TeN 呈長(zhǎng)拖尾峰，分離效果較差，為使5 種鏈格孢毒素充分分離，將水相換成碳酸銨水溶液分別與乙腈、甲醇組合作為流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)以碳酸銨水溶液和甲醇作為流動(dòng)相時(shí)ALT、TeA、TeN 的出峰情況有所改善。進(jìn)一步優(yōu)化碳酸銨水溶液的濃度（1.0、0.5、0.1 mmol/L）以提高5 種鏈格孢毒素的豐度和靈敏度，當(dāng)使用0.1 mmol/L 碳酸銨水溶液和甲醇作為流動(dòng)相時(shí)5 種鏈格孢毒素的豐度最好，色譜峰充分分離。優(yōu)化后的5 種鏈格孢毒素MRM 色譜圖見圖1。

圖1 鏈格孢毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液MRM 色譜圖Fig.1 MRM chromatogram of standard solution of Alternaria toxin

2.2 基質(zhì)效應(yīng)

為評(píng)價(jià)紅棗樣品中的基質(zhì)效應(yīng)，本試驗(yàn)針對(duì)紅棗、紅棗酒及紅棗提取物展開基質(zhì)效應(yīng)分析。如表3，結(jié)果表明，紅棗中ALT 為中等基質(zhì)減弱效應(yīng)，TEN為中等基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；紅棗酒中TeA 為中等基質(zhì)減弱效應(yīng)，AOH 為弱基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；紅棗提取物中TEN 為強(qiáng)的基質(zhì)減弱效應(yīng)；AOH 為強(qiáng)的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。由于紅棗和紅棗提取物中糖類物質(zhì)較多，在色譜分離過(guò)程中待測(cè)成分的離子化效應(yīng)被增強(qiáng)，提高了信號(hào)的響應(yīng)程度，此時(shí)的定量檢測(cè)結(jié)果偏高；而紅棗酒中水分含量較高，待測(cè)成分在色譜分離過(guò)程中的離子化效應(yīng)被弱化，抑制了信號(hào)的響應(yīng)程度，此時(shí)的定量檢測(cè)結(jié)果偏低。這與易盛國(guó)等研究者：糖類、油脂、蛋白質(zhì)等物質(zhì)能增強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，而含水量的增加在一定程度上抑制基質(zhì)效應(yīng)的報(bào)道一致。為補(bǔ)償樣品中的基質(zhì)效應(yīng)，保證定量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，本試驗(yàn)采用空白基質(zhì)配置標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表3 鏈格孢毒素基質(zhì)參數(shù)Table 3 Alternaria toxin matrix parameters

2.3 線性方程和相關(guān)系數(shù)

本研究試驗(yàn)以樣品基質(zhì)空白稀釋配置線性范圍在0.05～50 μg/mL 的5 種鏈格孢毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，以定量離子的相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)（Y 軸）、相應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X 軸）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得線性回歸方程的相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，并根據(jù)信噪比（S/N=3）確定5 種鏈格孢毒素的LOD 和LOQ分別為0.13～86.19、0.61～259.53 μg/g，表明本方法具有較好的準(zhǔn)確度和靈敏度，可滿足紅棗樣品中5 種鏈格孢毒素的定性定量檢測(cè)要求。線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)等見表4。

表4 鏈格孢毒素線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、LODs、LOQs（n=5）Table 4 Linear range,regression equation,LOD,LOQ and correlation coefficient of Alternaria toxin (n=5)

2.4 QuEChERS 方法提取毒素

2.4.1 樣品量的確定 樣品量的選擇在一定程度上影響著實(shí)際測(cè)定值與真值間的相近程度。在稱量過(guò)程中天平的絕對(duì)誤差是固定的，因此樣品量越大，相對(duì)誤差越??；而超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜靈敏度高，樣品量不宜過(guò)大。為確定紅棗及其制品中鏈格孢毒素測(cè)定的樣品量，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道的紅棗鏈格孢毒素既往分布情況，如圖2，本研究分別在2.5、5、10 μg/g 3 個(gè)加標(biāo)水平下（n=5），考察了0.2、1.0、2.0、2.5和5.0 g 樣品量對(duì)5 種鏈格孢毒素回收率的影響。結(jié)果顯示：當(dāng)樣品量取2.5 g 時(shí)，5 種鏈格孢毒素的加標(biāo)回收率均大于75%，在可接受范圍，其中TeA 回收率最高達(dá)到86.91%。故本研究選擇2.5 g 為樣品的稱取質(zhì)量。

圖2 樣品量對(duì)鏈格孢毒素回收率的影響Fig.2 Effect of sample size on the recovery of Alternaria toxin

2.4.2 提取溶劑 在毒素提取過(guò)程中提取溶劑的選擇至關(guān)重要。鏈格孢毒素種類繁多，因化學(xué)結(jié)構(gòu)不同性質(zhì)各異，在水中的溶解度不盡相同，但大都易溶于有機(jī)溶劑。乙腈是極性非質(zhì)子有機(jī)溶劑，溶解力強(qiáng)、洗脫力好、能兼顧化合物的不同化學(xué)性質(zhì)；研究顯示酸性體系能提高鏈格孢毒素的提取效率。如圖3，為確定提取紅棗中鏈格孢毒素的溶劑，本實(shí)驗(yàn)分別在2.5、5、10 μg/g 3 個(gè)加標(biāo)水平下（n=5）考察了1.0%乙酸乙腈、1.5%甲酸乙腈和2.0%甲酸乙腈對(duì)5 種鏈格孢毒素加標(biāo)回收率的影響，發(fā)現(xiàn)以1.0%乙酸乙腈作為提取溶劑時(shí)，AME 的回收率最高為85.82%，其余4 種毒素的3 個(gè)加標(biāo)水平回收率在51.50%～81.22%。為提高紅棗中鏈格孢毒素的提取率，本研究提取溶劑選擇1%乙酸乙腈溶液。

圖3 提取溶劑對(duì)鏈格孢毒素回收率的影響Fig.3 Effect of extraction solvent on the recovery of Alternaria toxin

2.4.3 無(wú)水硫酸鎂用量 QuEChERS 方法中加入無(wú)水硫酸鎂的作用是去除有機(jī)物中的少量水分。如圖4，為確定無(wú)水硫酸鎂的具體用量，本研究試驗(yàn)在5 μg/g 加標(biāo)水平下，分別考察了不加無(wú)水硫酸鎂和加入2.5、4、5 g 無(wú)水硫酸鎂對(duì)5 種鏈格孢毒素回收率的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)無(wú)水硫酸鎂的用量為4 g 時(shí)，AOH回收率最高達(dá)86.53%，TEN 回收率最低為72.51%，AME、TEN 和ALT 回收率在75.22%～82.63%。當(dāng)無(wú)水硫酸鎂的用量為5 g 時(shí)溶液過(guò)飽和，在復(fù)溶后的樣品中有鹽粒析出，增加了過(guò)濾時(shí)的阻力給后續(xù)工作帶來(lái)不便。因此本研究選定4 g 為無(wú)水硫酸鎂用量。

圖4 無(wú)水硫酸鎂用量對(duì)鏈格孢毒素回收率的影響Fig.4 Effect of the amount of anhydrous magnesium sulfate on the recovery of Alternaria toxin

2.4.4 氯化鈉用量 在樣品前處理過(guò)程中加入氯化鈉可以加大水相化合物的密度，從而加快水相與有機(jī)相分離。如圖5，為確定氯化鈉的用量，本研究試驗(yàn)在5 μg/g 加標(biāo)水平下，分別考察了0.2、0.4、1 和1.5 g氯化鈉用量對(duì)5 種鏈格孢毒素回收率的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)氯化鈉用量為1 g 時(shí)，TeA 回收率最高為85.26%，ALT 回收率最低為67.41%，AOH 回收率為81.35%，TEN 回收率為66.41%，ALT 回收率為67.24%。本研究選擇氯化鈉用量為1 g。

圖5 氯化鈉用量對(duì)鏈格孢毒素回收率的影響Fig.5 Effect of sodium chloride dosage on the recovery of Alternaria toxin

2.4.5 復(fù)溶溶劑 提取液經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干后，使用一定配比的有機(jī)溶劑對(duì)待測(cè)組分進(jìn)行復(fù)溶可以恢復(fù)鏈格孢毒素的化學(xué)結(jié)構(gòu)和活性，便于上機(jī)檢測(cè)。如圖6，為確定復(fù)溶溶劑的配比，本實(shí)驗(yàn)研究在5 μg/g 加標(biāo)水平下，分別考察了乙腈:甲醇=1:1、乙腈:甲醇:甲酸=70:29:1、乙腈:水=1:1 和甲醇:水=1:9 對(duì)5 種鏈格孢毒素回收率的影響。結(jié)果表明：當(dāng)以乙腈:甲醇:甲酸=70:29:1 作為復(fù)溶溶劑時(shí)，AME 回收率最高達(dá)96.3%，ALT 回收率最低為64.93%，TeA、AOH 和TEN 回收率在82.67%～95.61%。因此本研究選擇乙腈:甲醇:甲酸=70:29:1 作為復(fù)溶溶劑。

圖6 復(fù)溶溶劑對(duì)鏈格孢毒素回收率的影響Fig.6 Effect of redissolved solvent on the recovery of Alternaria toxin

2.5 固相萃取法提取毒素

2.5.1 固相萃取柱 固相萃取方法中萃取柱的選擇至關(guān)重要，根據(jù)待測(cè)組分的化學(xué)性質(zhì)選擇相應(yīng)填料的固相萃取柱能在去除雜質(zhì)保留待測(cè)物質(zhì)的同時(shí)提高待測(cè)物質(zhì)的提取率。如圖7，為選擇合適的固相萃取柱，根據(jù)鏈格孢毒素性質(zhì)和固相萃取柱填料，本研究在5 μg/g 加標(biāo)水平下分別對(duì)比了HLB LP Extraction 固相萃取柱和Vac Alumina B 固相萃取柱對(duì)液體紅棗樣品中鏈格孢毒素回收率的影響，發(fā)現(xiàn)使用HLB LP Extraction 固相萃取柱凈化后的液體紅棗樣品中AOH 回收率最高為96.20%，TeA 回收率最低為79.63%，AME 回收率為95.47%，TEN 回收率為89.17%，ALT 回收率為94.23%。HLB LP Extraction 固相萃取柱對(duì)鏈格孢毒素的提取率高，準(zhǔn)確性好，適用性強(qiáng)。這與邢家溧等研究人員報(bào)道的以HLB 小柱分離純化嬰幼兒奶粉中7 種鏈格孢霉毒素的回收率在73.1%～92.8%之間，效果略好于其他類型小柱，且HLB 小柱適用性強(qiáng)，在上樣過(guò)程中，小柱干涸不影響分離效果的結(jié)果相一致。

圖7 固相萃取柱對(duì)鏈格孢毒素回收率的影響Fig.7 Effect of solid phase extraction column on the recovery of Alternaria toxin

2.5.2 過(guò)濾膜 作為過(guò)濾雜質(zhì)保留待測(cè)組分的最后一道工序，過(guò)濾膜的選擇同樣影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前可用于樣品溶液過(guò)濾的濾膜種類較多，主要區(qū)別在于過(guò)濾膜的材質(zhì)。如圖8，為盡可能減小系統(tǒng)誤差，探究過(guò)濾膜對(duì)鏈格孢毒素回收率的影響，本研究試驗(yàn)分別使用聚醚砜膜（PES）、聚四氟乙烯膜（PTFE）、尼龍膜（Nylon）和聚偏二氟乙烯膜（PVDF）4 種過(guò)濾膜過(guò)濾加標(biāo)水平為5 μg/g 的樣品溶液，發(fā)現(xiàn)使用PTFE過(guò)濾膜的AME 回收率最高為97.51%，ALT 回收率最低為67.64%，TeA、AOH 和TEN 回收率在82.93%～96.59%。PTFE 能在過(guò)濾雜質(zhì)的同時(shí)最大程度保留待測(cè)組分，因此本研究選擇聚四氟乙烯膜（PTFE）作為過(guò)濾膜。

圖8 過(guò)濾膜對(duì)鏈格孢毒素回收率的影響Fig.8 Effect of filtration membrane on the recovery of Alternaria toxin

2.6 回收率和精密度

如表5，以不含5 種鏈格孢毒素的固體紅棗樣品和液體紅棗樣品作為本底，在2.5、5、10 μg/kg 三個(gè)加標(biāo)水平下進(jìn)行回收率試驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)水平重復(fù)測(cè)試5 次。結(jié)果表明，固體紅棗樣品中5 種鏈格孢毒素回收率在74.89%～98.04%，液體紅棗樣品中5 種鏈格孢毒素回收率在68.35%～99.83%，2 種形態(tài)紅棗樣品加標(biāo)回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%。本方法在2.5～10 μg/kg 標(biāo)準(zhǔn)添加量下均有較高的回收率，且精密度良好，能滿足紅棗中5 種鏈格孢毒素的檢測(cè)要求。

表5 紅棗樣品中鏈格孢毒素的加標(biāo)回收率和精密度（n=5）Table 5 Recovery and precision of Alternaria toxin in jujube samples (n=5)

2.7 原料紅棗中鏈格孢毒素測(cè)定

對(duì)采集自新疆阿克蘇、喀什、和田地區(qū)三個(gè)主要紅棗產(chǎn)區(qū)的原料駿棗進(jìn)行鏈格孢毒素測(cè)定。如表6，三個(gè)主要紅棗產(chǎn)區(qū)原料駿棗中共檢出2 種鏈格孢毒素，分別是TeA 和AOH，其中喀什地區(qū)原料駿棗中TeA的檢出率最高，達(dá)到99.22%，含量為5.12～10.76 μg/kg，這與程家興等研究報(bào)道中TeA 檢出率最高相一致。阿克蘇地區(qū)原料駿棗中AOH 的含量最高，達(dá)11.12～53.22 μg/kg；鏈格孢毒素AME、TEN 與ALT在三個(gè)主要紅棗產(chǎn)區(qū)的原料駿棗均未檢出。

表6 原料紅棗中鏈格孢毒素含量（n=5）Table 6 Content of Alternaria toxin in jujube (n=5)

2.8 紅棗制品中鏈格孢毒素測(cè)定

本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)凍干棗片、香酥脆棗、紫晶棗、紅棗酒、紅棗提取物中的鏈格孢毒素進(jìn)行測(cè)定，如表7，結(jié)果顯示，凍干棗片中檢出鏈格孢毒素TeA 和ALT，這2 種毒素在凍干棗片中的平均含量分別為7.68、2.12 μg/kg；香酥脆棗中同樣檢出鏈格孢毒素TeA和ALT，平均含量分別為6.91、200.76 μg/kg；紫晶棗中檢出鏈格孢毒素TeA、AOH 和ALT，平均含量分別為7.03、75.17、92.65 μg/kg；紅棗酒中TeA 毒素含量在125.31～129.07 μg/kg 范圍內(nèi)；紅棗提取物中 的TeA 毒素含量在121.73～132.86 μg/kg 范 圍內(nèi)。在所檢5 種紅棗制品中TEA 毒素均有檢出，AOH 毒素僅在紫晶棗中有檢出，ALT 毒素在香酥脆棗中的含量相對(duì)較高。就毒素種類而言，紫晶棗中檢出的鏈格孢毒素種類最多，其次是凍干棗片和香酥脆棗，在紅棗酒和紅棗提取物中的種類最少。就產(chǎn)品品項(xiàng)而言，紅棗酒受TeA 毒素污染最嚴(yán)重，其次是紅棗提取物。所有紅棗制品均未受到AME 和TEN的污染，這與原料紅棗中的毒素分布情況一致。

表7 紅棗制品中鏈格孢毒素含量Table 7 Content of Alternaria toxin in jujube products

3 結(jié)論

本研究以QuEChERS 為核心，結(jié)合固相萃取法建立了紅棗及其制品中鏈格孢毒素的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。分別采用QuEChERS 方法和固相萃取法提取固體、液體紅棗樣品中鏈格孢毒素；經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量；5 種鏈格孢毒素在2.5～10 μg/kg 標(biāo)準(zhǔn)添加量下回收率均在68.35%～99.83%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。該方法操作便捷、準(zhǔn)確度高、靈敏性好，能夠滿足紅棗及其制品中鏈格孢毒素的測(cè)定要求。應(yīng)用該方法對(duì)阿克蘇、喀什、和田三個(gè)地區(qū)原料駿棗和市售11 種紅棗制品中的鏈格孢毒素進(jìn)行污染分析。三個(gè)地區(qū)的原料駿棗中共檢出TeA、AOH 2 種毒素，喀什地區(qū)原料駿棗中的TeA 含量最高，為5.12～10.76 μg/kg。11 種紅棗制品中共檢出TeA、AOH、ALT 3 種毒素，紅棗酒中的TeA 含量最高，達(dá)到127.08 μg/kg，紫晶棗中檢出AOH，含量在34.76～98.61 μg/kg；凍干棗片、香酥脆棗和紫晶棗中檢出ALT，含量在2.04～399.64 μg/kg。為紅棗采后貯藏及紅棗加工制品中鏈格孢毒素的污染防治和管理措施制定提供技術(shù)支持，為紅棗及其制品的食用安全性評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)和參考。