王新新，封騰望，王慧姣，李晉成，孫慧武，劉 歡

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點實驗室，北京100141)

磺胺類藥物(sulfonamides，SAs)是一類以對位氨基苯磺酰胺為基本結(jié)構(gòu)的衍生物，磺酰胺基上的氫，可被不同雜環(huán)取代，形成不同種類的磺胺類藥物?；前奉愃幬镆蚓哂锌咕V廣、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、低毒性等優(yōu)點被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，主要用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病。我國發(fā)布《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》中規(guī)定磺胺類藥物最大殘留限量總量為100 μg/kg。不按規(guī)定使用、不遵守養(yǎng)殖使用休藥期規(guī)定則會導(dǎo)致其在水產(chǎn)品中殘留，進(jìn)而影響人類健康。根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部、國家市場監(jiān)管總局等發(fā)布的關(guān)于水產(chǎn)品監(jiān)督抽檢情況的通告，水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留共檢出19批次殘留超標(biāo)樣品，其中，磺胺甲噁唑(Sulfamethoxazole，SMZ)、磺胺二甲異噁唑(Sulfaisoxazole，SFZ)、磺胺二甲基嘧啶(sulfamethazine，SM)、磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine，SM)是超標(biāo)的主要參數(shù)。

基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(matrix reference material，MRM)是具備實際樣品特性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，目標(biāo)物與基體相結(jié)合，并且與待測樣品具有相同的特性，在分析過程中可有效避免基質(zhì)效應(yīng)對目標(biāo)物造成的干擾。水產(chǎn)品因基質(zhì)復(fù)雜，在藥物殘留檢測分析中基質(zhì)效應(yīng)對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性影響較大。因此，如在檢測分析中，使用基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)及質(zhì)量控制，將可以有效提高檢測的準(zhǔn)確度。歐盟明確要求對動物源食品進(jìn)行獸藥殘留檢測必須采用基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)及過程質(zhì)量控制。

目前，我國以水產(chǎn)品為基質(zhì)的磺胺類藥物殘留分析所用基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究成果有限。顏顯輝等曾研制了鯉()肌肉中SMZ殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品，尹太坤等以鰻鱺()肌肉為基質(zhì)研制了包含兩種磺胺類藥物殘留的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，但尚未有報道以草魚()為基質(zhì)研制的包含SMZ、SFZ、SM、SM4種磺胺類藥物殘留的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。本研究以草魚為基質(zhì)，研究建立了草魚粉中SMZ、SFZ、SM、SM藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備方法，以期為水產(chǎn)品基質(zhì)中磺胺類藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鮮活草魚購自北京市房山區(qū)琉璃河鎮(zhèn)趙德旺養(yǎng)魚場(約1 kg/尾)，于北京市房山區(qū)中國水產(chǎn)科學(xué)研究院鱘魚繁育技術(shù)與工程中心養(yǎng)殖池中暫養(yǎng)備用。

SMZ(Sulfamethoxazole，CAS：723-46-6，純度≥99.8%)、SFZ(Sulfaisoxazole，CAS：127-69-5，純度≥99.74%)、SM(sulfamethazine，CAS：57-68-1，純度≥99.8%)、SM(sulfamerazine，CAS：127-79-7，純度≥99.72%)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均購于德國Dr.Ehrenstorfer 公司；磺胺鄰二甲氧嘧啶(sulfadoxine，CAS：2447-57-6，純度≥99.8%)、磺胺間二甲氧嘧啶(sulfadimethoxine，CAS：122-11-2，純度≥99.8%)均購于德國Witega公司；SMZ原料藥(上海阿達(dá)瑪斯試劑有限公司，純度>98%)、SFZ原料藥[梯希愛(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司，純度>98%]、SM原料藥(上海阿達(dá)瑪斯試劑有限公司，純度>99%)、SM原料藥[西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司，純度>98%]；乙腈、甲醇、正己烷(色譜純，美國J.T.Baker公司)；乙酸銨、甲酸(質(zhì)譜級，美國Fisher公司)；無水硫酸鎂(上海麥克林生化科技有限公司)。

1.2 儀器與設(shè)備

QTRAP?5500超高效液相色譜-三重四級桿/復(fù)合線性離子阱質(zhì)譜儀(美國SCIEX公司)；MVM-2500多管渦流混合器(上海泰坦科技股份有限公司)；MS3 Basic基本型旋渦混勻器(德國IKA公司)；SB-5200DTN超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；PL2002電子天平[Mettler Toledo儀器(上海)有限公司]；H-2050R臺式高速離心機(jī)(湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司)；Buchi R210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；冷凍干燥機(jī)(德國 ZIRBUS公司)；藥浴池為圓形，規(guī)格為直徑150 cm，水深25.5 cm。

1.3 實驗方法

1.3.1 溶液配置

(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：分別準(zhǔn)確稱取10.02 mg SMZ、10.03 mg SFZ、10.02 mg SM、10.03 mg SM、10.02 mg磺胺鄰二甲氧嘧啶及10.02 mg磺胺間二甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液；分別移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于棕色容量瓶中，用甲醇逐級稀釋成濃度為100.0 μg/mL、10.0 μg/mL的SMZ、SFZ、SM、SM外標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液和磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液；以甲醇為溶劑，移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，配制成1.0 μg/mL、100.0 ng/mL SMZ、SFZ、SM、SM外標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和1.0 μg/mL磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，-20 ℃保存。

(2)藥浴液配制：準(zhǔn)確稱取0.700 g SMZ于100 mL容量瓶，用乙腈配制成7.0 mg/mL藥浴液；準(zhǔn)確稱取0.750 g SFZ于250 mL容量瓶，用乙腈配制成3.0 mg/mL藥浴液，超聲30 min；準(zhǔn)確稱取0.250 g SM于100 mL容量瓶，用乙腈配制成2.5 mg/mL藥浴液；準(zhǔn)確稱取0.375 g SM于250 mL容量瓶，用乙腈配制成1.5 mg/mL藥浴液，超聲10 min。

(3)酸化乙腈配制：99 mL乙腈中加入1 mL甲酸。

1.3.2 4種磺胺類藥物殘留分析方法

參照農(nóng)業(yè)部1077號公告-1-2008《水產(chǎn)品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜法》，并進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，具體方法如下：

(1)樣品前處理方法

準(zhǔn)確稱取1.0 g草魚粉樣品(±0.01 g)于50 mL離心管中，加入4 mL超純水使其復(fù)原，振搖、充分混勻。準(zhǔn)確加入0.05 mL內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，渦旋混合30 s，依次加入15 mL酸化乙腈、4 g無水硫酸鎂，渦旋混勻，超聲提取10 min，4 500 r/min離心10 min，取上清液于50 mL梨形瓶中。向殘渣中加入15 mL酸化乙腈，重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，于40 ℃水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。加入1.0 mL 20%甲醇水溶液，渦旋溶解殘留物，繼續(xù)加入3.0 mL正己烷渦旋混合30 s，12 000 r/min離心5 min，取下層清液，過0.22 μm濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

(2)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作

分別準(zhǔn)確吸取SMZ、SFZ、SM、SM的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和0.05 mL磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶的內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，加入陰性草魚肌肉粉基質(zhì)中，配制成10、20、50、100、200 μg/L系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，按1.3.2樣品前處理步驟進(jìn)行操作后上機(jī)檢測。以濃度為橫坐標(biāo)，目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

(3)液相色譜條件

色譜柱：Hypersil GOLD C18柱(150 mm×2.1 mm，5 μm，賽默飛世爾科技有限公司)；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流動相A相為 0.1 %甲酸溶液(含5.0 mmol/L醋酸銨)，流動相B相為甲醇；梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫條件Tab.1 Conditions of gradient elution

(4)質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子源(ESI)，正離子模式下采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式采集數(shù)據(jù)。離子源的詳細(xì)參數(shù)如下：噴霧電壓(IS)：5 500 V；離子源溫度(TEM)：550 ℃；氣簾氣(CUR)：206.85 kPa；霧化氣(GS1)：310.28 kPa；輔助加熱氣(GS2)：55 379.23 kPa；4種磺胺類化合物MRM質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 4種化合物的主要質(zhì)譜參數(shù)Tab.2 MS/MS parameters of 4 compounds

1.3.3 藥浴時間的確定

藥浴實驗組池中SMZ、SFZ、SM、SM藥浴初始濃度分別為2.72、3.75、1.05、2.49 mg/L，水溫(23±2) ℃，選擇暫養(yǎng)池中經(jīng)檢測后均無SMZ、SFZ、SM、SM藥物殘留的健康、活潑草魚，一次放入37尾，每尾規(guī)格在900～1 100 g，連續(xù)藥浴24 h后全量換水。給藥后分別在 0.5、1、2、4、6、8、10、12、14、15、24、28、32、48 h采集樣品，每個時間點隨機(jī)撈出草魚3尾，取其背部肌肉并混勻，于-20 ℃保存用于測定4種磺胺類藥物殘留量。

1.3.4 樣品的制備

根據(jù)優(yōu)化后的藥浴時間對草魚進(jìn)行藥浴，并制備成魚糜樣品。將樣品放置于冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行干燥處理；隨后對冷凍干燥樣品進(jìn)行粉碎、過120目篩后充分混勻。按照每瓶(5.0±0.1) g分裝到帶有密封內(nèi)蓋的棕色玻璃瓶中，放入-20 ℃冰箱中保存，以考察樣品的均勻性和穩(wěn)定性。

1.3.5 樣品的均勻性檢驗

根據(jù)JJF 1343-2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理》，對樣品進(jìn)行均勻性檢驗。本研究按照編號順序隨機(jī)抽取11 個包裝單元，每個單元取3個平行樣品，采用1.3.2確定的分析方法進(jìn)行樣品測定。檢測結(jié)果采用單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計分析，通過比較檢驗值與臨界值的大小來判斷樣品的均勻性。

1.3.6 樣品的穩(wěn)定性檢驗

根據(jù)JJF 1343-2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理》，對樣品進(jìn)行長期和短期穩(wěn)定性檢驗。樣品在-20 ℃儲存條件下進(jìn)行長期穩(wěn)定性考察，考察的時間間隔為1、2、3、4、6個月；短期穩(wěn)定性檢測模擬樣品運輸條件和極端條件，考察樣品在-40、-20、4、25、50 ℃保存條件下在 0、3、7、11、15 d的短期穩(wěn)定性。每次隨機(jī)取3個包裝單元，平行測定兩次，測量方法與均勻性檢驗方法相同。取三個包裝單元測量結(jié)果的平均值作為該次穩(wěn)定性檢測結(jié)果，采用檢驗法評定樣品的穩(wěn)定性，判斷樣品的長期穩(wěn)定性與短期穩(wěn)定性。

1.3.7 樣品的定值

采用多個實驗室合作定值法對樣品進(jìn)行定值測試。由6家通過資質(zhì)認(rèn)定的實驗室使用1.3.2檢測方法對樣品進(jìn)行測定，合作定值實驗室進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，并制定統(tǒng)一的作業(yè)指導(dǎo)書。每個實驗室隨機(jī)發(fā)放三個樣品，測定三個平行。所有檢測數(shù)據(jù)經(jīng)狄克遜準(zhǔn)則與科克倫檢驗后，數(shù)據(jù)等精度、無界外值，取平均值定值。

1.3.8 不確定度評定

草魚粉中4種磺胺類藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品定值結(jié)果的不確定度由三部分組成：即標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值引入的不確定度u；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性引入的不確定度u、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)長期穩(wěn)定性和短期穩(wěn)定性引入的不確定度u和u。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用Microsoft Excel 2010軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果以平均值的形式表示，并利用origin8.0軟件進(jìn)行分析及繪圖。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及回收率

4種磺胺類藥物的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)見表 3，由表3可知，4種磺胺類藥物的相關(guān)系數(shù)均大于0.998，線性關(guān)系良好。SMZ、SFZ、SM、SM回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表4，由表4可知，4種磺胺類藥物的回收率在92.90%～102.84%，批內(nèi)和批間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%。說明該方法的準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，精密度良好，可滿足草魚粉中SMZ、SFZ、SM、SM殘留量的檢測要求。

表3 4種磺胺類藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)Tab.3 Standard curves and correlation coefficients of four sulfonamides

表4 4種磺胺類藥物的回收率和精密度(n=6)Tab.4 Recovery and precision of four sulfonamides(n=6)

2.2 藥浴時間的確定

草魚肌肉中4種磺胺類藥物的殘留量隨給藥后時間的變化趨勢如圖1所示。由圖1可知，在給藥后0～24 h，是草魚對SMZ、SFZ、SM、SM的藥物吸收過程，從總體趨勢來看，給藥后6～12 h草魚肌肉中藥物殘留量變化趨勢相對平緩，10 h后藥物殘留量迅速上升，24 h時草魚肌肉中藥物殘留量達(dá)到峰值，24 h后藥浴池全量換水后，草魚肌肉中藥物殘留量隨著時間的推移逐漸降低。因此，陽性樣本的采集時間范圍在用藥后的6～12 h，考慮到預(yù)期的濃度水平且保證草魚肌肉中的SMZ、SFZ、SM、SM殘留量相對穩(wěn)定，最終選擇藥浴后10 h采集陽性樣品。

圖1 不同藥浴時間下草魚肌肉中SMZ、SFZ、SM2、SM1殘留量的變化Fig.1 Changes of SMZ，SFZ，SM2，SM1 residues in muscle of grass carp under different bath time

2.3 均勻性研究

樣品的均勻性統(tǒng)計結(jié)果見表5。其中，組間自由度為10，組內(nèi)自由度為22，(10，22)=2.3。由表中數(shù)據(jù)可知，草魚粉中的4種磺胺類藥物的統(tǒng)計量值均小于(10，22)，表明樣品間不存在顯著性差異，即樣品中SMZ、SFZ、SM、SM的含量是均勻的。

表5 均勻性統(tǒng)計結(jié)果Tab.5 Statistical analysis results of homogeneity testing

2.4 穩(wěn)定性研究

2.4.1 短期穩(wěn)定性

樣品短期穩(wěn)定性統(tǒng)計結(jié)果見表 6。采用檢驗法評定樣品的穩(wěn)定性，其中，自由度為3，置信水平0.95，t=3.18。由表中數(shù)據(jù)可知，||

表6 短期穩(wěn)定性統(tǒng)計結(jié)果Tab.6 Statistical results of short-term stability

2.4.2 長期穩(wěn)定性

樣品在棕色玻璃瓶包裝儲存條件下，進(jìn)行了6個月的長期穩(wěn)定性考察，統(tǒng)計結(jié)果見表7。其中，自由度為3，置信水平0.95，=3.18。由表中數(shù)據(jù)可知，||<×s()，表明樣品在-20 ℃下儲存6個月是穩(wěn)定的。

表7 長期穩(wěn)定性統(tǒng)計結(jié)果Tab.7 Statistical analysis results of long-term stability testing

2.5 定值

6家實驗室的定值數(shù)據(jù)經(jīng)過狄克遜和科克倫檢驗，數(shù)據(jù)等精度、無界外值，均符合定值要求，數(shù)據(jù)都可以保留，統(tǒng)計結(jié)果見表8。草魚粉中SMZ、SFZ、SM、SM藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量的多家聯(lián)合定值結(jié)果平均值分別為(22.22±1.90)、(24.04±3.65)、(31.11±3.95)、(28.55±2.26) μg/kg。

表8 定值數(shù)據(jù)狄克遜與科克倫檢驗統(tǒng)計檢驗Tab.8 Fixed value data Dixon and Cochran test statistical test

2.6 不確定度評估

通過評估協(xié)作定值、均勻性和穩(wěn)定性的不確定度分量，合成得出基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度，在95%置信水平下，取包含因子=2，得出相對擴(kuò)展不確定度，不確定度評估結(jié)果見表9。草魚粉中SMZ、SFZ、SM、SM藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量由定值的總平均值與合成擴(kuò)展不確定度組成，詳見表10。

表9 不確定度評估結(jié)果Tab.9 Evaluation results of uncertainty

表10 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值結(jié)果Tab.10 Characterization results of matrix reference materials

3 討論

3.1 藥浴時間對草魚肌肉中SMZ、SFZ、SM2、SM1殘留的影響

通過對草魚肌肉中的 SMZ、SFZ、SM、SM殘留量檢測，由消除曲線圖可以看出，SMZ、SFZ、SM、SM在肌肉中隨著藥浴時間的延長而逐漸升高，隨后進(jìn)入緩慢上升階段，24 h 換水前殘留量達(dá)到峰值，考慮到預(yù)期的濃度水平且保證草魚肌肉中的藥物殘留量相對穩(wěn)定，最終確定藥浴時間為10 h。與余孔捷等研究結(jié)果較相似，24 h 換水前藥物殘留都出現(xiàn)峰值，但與本實驗有所不同的是，余孔捷實驗中換水后第28 h 殘留變化相對平緩，而本實驗中，換水后4種磺胺類藥物都呈現(xiàn)快速下降的現(xiàn)象，結(jié)果的差異性可能與實驗環(huán)境的溫度、魚類品種不同有關(guān)，本實驗中的藥浴水體使用加熱棒控制藥浴水溫為(23±2) ℃，溫度越高藥物消除速率越快。ZHAO等研究了磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑在鯉魚體內(nèi)的吸收與殘留消除，結(jié)果顯示，0.006、0.6、6 μg/L三個給藥濃度水平下，鯉魚組織中的2種磺胺類藥物濃度隨時間而增加，所有劑量組均觀察到魚體快速吸收現(xiàn)象，這與本實驗中在換水前草魚對SMZ、SFZ、SM、SM的吸收情況是一致的。

3.2 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性與穩(wěn)定性檢驗設(shè)計

根據(jù)JJF1343-2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理》中對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品均勻性檢驗的要求，記總體單元數(shù)為N，當(dāng)N≤200時，抽樣單元數(shù)不少于11個。本研究共研制187個單元，按照編號順序，使用Microsoft Excel 2010 軟件隨機(jī)抽取11個包裝單元，每個單元獨立測量3次，結(jié)果采用單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示草魚粉中的4種磺胺類藥物的統(tǒng)計量值均小于(10,22)，表明通過本研究中的制備方法所制得的樣品含量是均勻的，可以滿足基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備的均勻性要求。

穩(wěn)定性檢驗在均勻性檢驗之后進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性檢驗分為兩種情況，一是在規(guī)定保存條件下，較長周期內(nèi)定期地進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性值的長期穩(wěn)定性檢驗；二是不同溫度的運輸條件下或極限條件下對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性值的短期穩(wěn)定性檢驗，依據(jù)樣品包裝和運輸形式，確定短期穩(wěn)定性評估的溫度。在本研究中制備的樣品為凍干粉狀態(tài)，包裝形式為棕色玻璃瓶，運輸方式為郵政網(wǎng)絡(luò)運輸傳遞。由2.4分析結(jié)果可知，樣品在6個月內(nèi)是穩(wěn)定的并且樣品可采用常溫運輸，該結(jié)論與尹太坤等研制的兩種磺胺類基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性評估結(jié)論是一致的。

3.3 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值方法選擇與不確定性影響分析

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值分為以下幾種方式：(1)由單一實驗室進(jìn)行單一基準(zhǔn)方法測量；(2)由一個或多個實驗室用2種或多種獨立的標(biāo)準(zhǔn)方法測量；(3)多個實驗室使用一種或多種已證明其準(zhǔn)確性的方法協(xié)作定值；(4)用特定方法測量；(5)利用一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行比較定值。在本研究中選擇第三種方法進(jìn)行定值，邀請國內(nèi)6家具有相關(guān)檢驗資質(zhì)的權(quán)威檢驗機(jī)構(gòu)合作定值，合作實驗室均采用1.3.1中已確定的檢測方法進(jìn)行樣品測定。參加聯(lián)合定值的6家實驗室，長期參加全國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全例行監(jiān)測、專項監(jiān)測等工作，均為國家級或省部級權(quán)威實驗室，為本研究中草魚粉中SMZ、SFZ、SM、SM藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)準(zhǔn)確定值提供了可靠保證。

由不確定度評估結(jié)果可知，樣品由均勻性引入的不確定度分量最小，說明本研究中制備的樣品均勻性良好；對4種磺胺類藥物的不確定度貢獻(xiàn)較大的因素主要為長期穩(wěn)定性引入的不確定度分量，這表明盡管標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的長期穩(wěn)定性已監(jiān)測合格，但仍有必要在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)長期穩(wěn)定性方面進(jìn)一步開展研究，探索更加有效的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲存條件，同時在實際實驗操作過程中，盡量規(guī)范操作，減少因測量引入的不確定度，從而降低不確定度，提升標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)品質(zhì)與檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4 結(jié)論

本研究通過藥浴養(yǎng)殖的給藥方式獲得了適合濃度的草魚自然污染的陽性樣品。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和多家實驗室合作定值的方式，制備了一批草魚粉中SMZ、SFZ、SM、SM藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品。所獲得的4種磺胺類藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品，已完成6個月長期穩(wěn)定性監(jiān)測，樣品性質(zhì)穩(wěn)定，特性量值準(zhǔn)確可靠，為充分保證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值的準(zhǔn)確可靠，將繼續(xù)跟蹤監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性以延長有效期。研制成果可用于質(zhì)量控制、儀器校準(zhǔn)等領(lǐng)域，對完善我國水產(chǎn)品藥物殘留檢測工作具有很大的實用價值。本研究中制備的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性良好，穩(wěn)定性符合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)要求，定值結(jié)果可靠，該方法對進(jìn)一步開展水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備提供了技術(shù)參考。