樊麗，韋雪華，李星，常靜，徐吉榮，張敏，劉德娟

（1.山東省泰安市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山東 泰安 271000；2.山東省威海市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東 威海 264300；3.山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東 濟(jì)南 250010；4.山東省肥城市畜牧獸醫(yī)事業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，山東 泰安 271600；5.山東省肥城市孫伯鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，山東 泰安 271600）

0 引言

口蹄疫（FootandMouthDisease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄動(dòng)物為主的急性、熱性、高度傳染性疫病，主要危害豬、牛、羊等的烈性疫病，是《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》規(guī)定的一類傳染病，同時(shí)被列為《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020）》優(yōu)先防治的第一位病種。該病目前尚無(wú)特效的藥物治療，安全有效的疫苗是預(yù)防控制FMD的先決條件[1]。

目前使用傳統(tǒng)的滅活疫苗，免疫效力最優(yōu)，但因純化不完全，免疫后，以檢測(cè)病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體為金標(biāo)準(zhǔn)的鑒別技術(shù)，難以精準(zhǔn)區(qū)別免疫和野毒感染動(dòng)物，即使應(yīng)用改進(jìn)的純化技術(shù)，也不能完全清除與滅活病毒大小相同的非結(jié)構(gòu)蛋白復(fù)合物，多次免疫后，仍能檢測(cè)到病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體。口蹄疫O型、A型二價(jià)3B蛋白表位缺失標(biāo)記滅活疫苗（O/rV-1株+A/rV-2株）屬此類疫苗。該疫苗是利用基因缺失和病毒拯救等反向遺傳技術(shù)，分別缺失FMDVO型和A型毒株的3B基因的優(yōu)勢(shì)表位，并重新拯救3B蛋白表位缺失病毒O/rV-1株和A/rV-2株，既保持了O型和A型毒株各自原有的良好免疫原性和增殖能力，又具備缺失3B基因的分子標(biāo)記，屬于國(guó)際上首創(chuàng)的口蹄疫O、A型雙價(jià)基因標(biāo)記疫苗。該雙價(jià)3B標(biāo)記疫苗（O/rV-1株+A/rV-2株）對(duì)當(dāng)前O／Mya-98、O／Cathay、O／PanAsia和O／Ind-2001毒株4個(gè)O型譜系毒株及A型Sea-97G1和G2分支毒株均能提供良好的免疫保護(hù)。本研究通過(guò)使用口蹄疫O型、A型二價(jià)3B蛋白表位缺失滅活疫苗和傳統(tǒng)口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗進(jìn)行首免、二免、三免，選用疫苗免疫后，擬定首免后28 d采血，以后每14 d采集血樣，檢測(cè)疫苗免疫抗體水平和口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體[2-3]。

1 材料與方法

1.1 疫苗及試劑盒

口蹄疫O型、A型二價(jià)3B蛋白表位缺失滅活疫苗（O/rV-1株+A/rV-2株），生產(chǎn)企業(yè)：內(nèi)蒙古必威安泰生物科技有限公司，批號(hào)：20200606。口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗（OHM/02株+AKT—III株），生產(chǎn)企業(yè)：內(nèi)蒙古必威安泰生物科技有限公司，批號(hào)：20200508?？谔阋卟《痉墙Y(jié)構(gòu)蛋白3ABC阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，生產(chǎn)企業(yè)：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)：20201116129。口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，生產(chǎn)企業(yè)：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)：20201111101-5；口蹄疫O型抗原，批號(hào)：101/32?？谔阋逜型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，生產(chǎn)企業(yè)：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)：20201127103-1；口蹄疫A型抗原，批號(hào)：103/27。

1.2 試驗(yàn)方案

用LB-ELISA方法檢測(cè)口蹄疫O型、A型免疫抗體效價(jià)。診斷試劑由蘭州獸醫(yī)研究所提供，口蹄疫O型試劑盒批號(hào)2013090201，口蹄疫A型試劑盒批號(hào)2013091103。具體檢測(cè)按照試劑盒使用說(shuō)明書進(jìn)行?？谔阋逴型、A型免疫抗體效價(jià)≥1∶64判定為合格。

2 試驗(yàn)方案與步驟

（1）試驗(yàn)動(dòng)物。選取37頭3月齡以上的健康及非結(jié)構(gòu)蛋白陰性牛，其中口蹄疫O型、A型二價(jià)3B蛋白表位缺失標(biāo)記滅活疫苗試驗(yàn)組25頭，口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗對(duì)照組7頭，空白對(duì)照組5頭。

（2）試驗(yàn)步驟。①安全檢驗(yàn)：注射后觀察10 d，10 d內(nèi)免疫動(dòng)物無(wú)異常，判定實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品安全。②免疫方案：肌肉注射2 mL/頭，首免后28 d進(jìn)行二免，二免后14 d進(jìn)行三免。③免疫后定期檢測(cè)。選用疫苗免疫后，擬定首免后28 d采血，以后每14 d采集血樣，用口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC單抗阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，同時(shí)測(cè)定病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體。用口蹄疫液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)免疫抗體。

3 結(jié)果與討論

（1）不同疫苗牛口蹄疫免疫抗體O型檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同疫苗牛口蹄疫免疫抗體O型檢測(cè)結(jié)果

（2）不同疫苗?？谔阋呙庖呖贵wA型檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同疫苗?？谔阋呙庖呖贵wA型檢測(cè)結(jié)果

（3）不同疫苗牛口蹄疫感染抗體3ABC檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同疫苗?？谔阋吒腥究贵w3ABC檢測(cè)結(jié)果

4 結(jié)束語(yǔ)

自20世紀(jì)70年代，隨著分子生物學(xué)、免疫化學(xué)、生物工程學(xué)的良好發(fā)展，使?？谔阋咭呙绲难邪l(fā)工作得到了更多的技術(shù)支持。如今，新型疫苗研究工作已經(jīng)取得了較大的進(jìn)步，但是大部分仍然處于實(shí)驗(yàn)室階段。想要使新型疫苗順利的進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)，需要繼續(xù)保持嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯繎B(tài)度，優(yōu)化新型疫苗的研發(fā)成果，使其在?？谔阋叻乐喂ぷ髦邪l(fā)揮出更大的作用。