趙曉，黃飛麒，陳揚(yáng)聲，魏源標(biāo)，林展，張曉輝

（1.廣東藥科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東廣州 510080；2.廣州體育學(xué)院，廣東廣州 510620）

頸椎病是指頸椎間盤組織發(fā)生退行性改變，以及其繼發(fā)病理改變累及到包括神經(jīng)根、脊髓、椎動脈、交感神經(jīng)、脊髓前中央動脈等的周圍組織結(jié)構(gòu)，并出現(xiàn)與影像學(xué)改變相符合的臨床表現(xiàn)[4]。臨床上可分為頸型、神經(jīng)根型、椎動脈型、交感型、脊髓型、混合型和食道型，其臨床表現(xiàn)有頸肩背痛、頭暈頭痛、上肢放射痛或麻木、肌肉萎縮、嚴(yán)重者雙下肢痙攣、行走困難，甚至四肢麻痹，大小便障礙，癱瘓等[5]，是骨科常見疾病之一。近年來隨著電子產(chǎn)品尤其是智能手機(jī)的普及，頸椎病的發(fā)病率呈上升趨勢。長時間低頭工作或保持單一固定姿勢或不良臥姿是該病重要的誘發(fā)因素[1]。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)高達(dá)73.2%的人患有頸肩痛，伏案工作人群頸肩痛的發(fā)生率為78.3%，且隨著每天伏案工作時間的延長，該病的發(fā)生率逐漸升高[2,3]。因此，頸椎病的預(yù)防及早期治療顯得尤為重要。目前，對于頸椎病的治療有手術(shù)治療和保守治療，其中，保守治療方法方式多樣，療效確切，臨床常用保守治療方法有中西醫(yī)藥物治療、針灸、推拿正骨、物理治療、小針刀治療、康復(fù)鍛煉等[6]。在這些療法中，頸椎病暫無特效藥物，西醫(yī)藥物治療多采取對癥治療為主，整體和遠(yuǎn)期療效欠佳，且臨床廣泛應(yīng)用的非甾體類消炎藥有著較高的胃腸道和心血管方面的副作用風(fēng)險[7]；針灸、推拿正骨、物理治療、小針刀、康復(fù)鍛煉等方法雖然療效相對確切，但存在療程長[8]或者創(chuàng)傷性大[9]，導(dǎo)致患者依從性較低。

中藥內(nèi)服治療頸椎病，經(jīng)歷了早期的臨床個案報道、臨床療效總結(jié)、臨床實(shí)驗(yàn)研究、動物實(shí)驗(yàn)研究等階段，已取得較大進(jìn)展,但所用藥物達(dá)數(shù)目繁多，可達(dá)150多種，重復(fù)性差[10]。研究組在臨床工作中曾單獨(dú)使用葛根湯合黃芪桂枝五物湯來治療頸椎病，發(fā)現(xiàn)效果顯著，這兩個方劑都是出自于《傷寒雜病論》，臨床研究[11-14]證實(shí)上述兩個方劑的療效確切，顯效率高于西醫(yī)藥物治療。在文獻(xiàn)回顧中，研究組發(fā)現(xiàn)對這兩個方劑的研究大多處于臨床研究階段，極少對其進(jìn)行藥理研究及治療的作用靶點(diǎn)的研究。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討葛根湯及黃芪桂枝五物湯通過何種成分，利用機(jī)體的哪些靶點(diǎn)的作用，最終達(dá)到治療頸椎病的目的。

1 資料與方法

1.1 中藥活性成分的篩選和靶點(diǎn) 將葛根湯處方各藥味的中文名稱“葛根”，“麻黃”，“桂枝”，“生姜”，“甘草”，“大棗”，“白芍”以及黃芪桂枝五物湯中各中藥的中文名稱“黃芪”，“桂枝”，“大棗”，“生姜”，“白芍”分別作為兩組關(guān)鍵詞，輸入中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺[15](Traditional ChineseMedicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)，最后在CNKI上檢索相關(guān)文獻(xiàn)，并整理出未納入的中藥成分進(jìn)行整理補(bǔ)充。獲取所有中藥成分以后，錄入TCMSP平臺以匹配信息，篩選活性成分條件為口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥30%、類藥性(drug-likeness，DL)≥0.18[16]。

1.2 構(gòu)建葛根湯及黃芪桂枝五物湯的“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò) 葛根湯與黃芪桂枝五物湯的“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)主要通過軟件Cytoscape 3.8.0來構(gòu)建與分析，其中成分或靶點(diǎn)用“節(jié)點(diǎn)”(node)表示，二者之間的關(guān)系用“邊”(edge)表示。

1.3 cervical spondylosis相關(guān)靶點(diǎn)檢索以“cervical spondylosis”作為關(guān)鍵詞，在Genecards[17]數(shù)據(jù)庫、Disgenet[18]數(shù)據(jù)庫、OMIM數(shù)據(jù)庫的疾病基因數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索與篩選，將得到的靶點(diǎn)匯總并去除重復(fù)值，再根據(jù)文獻(xiàn)報道查找未預(yù)測到的有效成分的已知靶點(diǎn)，并利用Uniprot數(shù)據(jù)庫將所得靶點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)化。

1.4 建構(gòu)靶蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò) 先取葛根湯與黃芪桂枝五物湯的交集靶點(diǎn)，再將湯劑的交集靶點(diǎn)與cervical spondylosis相關(guān)靶點(diǎn)取交集，最后將這部分靶點(diǎn)輸入string網(wǎng)站，基于STRING數(shù)據(jù)庫（http://string-db.org/）對篩選出的基因靶點(diǎn)構(gòu)建相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，把參數(shù)中的第一層最大交互者數(shù)設(shè)置為：不超過10個交互器，第二層設(shè)置為：不超過20個交互器，把最低互動得分設(shè)置為：中置信度（0.4000）。使用BisoGenet數(shù)據(jù)庫對篩選出的基因靶點(diǎn)構(gòu)建相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，可得到治療cervical spondylosis的PPI網(wǎng)絡(luò)圖，將所得圖導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件，繪制出PPI網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 關(guān)鍵靶點(diǎn)富集分析 將最終取得的核心靶點(diǎn)導(dǎo)入David[19,20]數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行基因本體（Gene Ontology，GO）分類富集分析和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encycloped of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析。其中GO富集分為細(xì)胞組分(cell component，CC)、生物過程(biological Processes，BP)和 分 子 功 能(molecular function，MF)三種。由于富集靶標(biāo)的數(shù)目和P有相關(guān)性，富集靶標(biāo)越多，則表示與治療cervical spondylosis相關(guān)性越密切，其P值就會越小，本研究團(tuán)隊選取GO富集數(shù)據(jù)中P＜0.01的結(jié)果數(shù)據(jù)，由大到小進(jìn)行排序，將上述數(shù)據(jù)輸入微生信網(wǎng)站（http://www.bioinformatics.com.cn/）繪制富集GO term BP，CC，MF三合一柱狀圖。選取COUNT數(shù)目排名前9的KEGG通路，使用微生信網(wǎng)站（http://www.bioinformatics.com.cn/）繪制氣泡圖，并將COUNT數(shù)目排名前5名的通路數(shù)據(jù)的基因名及通路名稱使用Cytoscape3.8.0軟件繪制通路關(guān)系圖。

2 結(jié)果

2.1 葛根湯和黃芪桂枝五物湯成分的篩選和靶點(diǎn)

2.1.1 葛根湯成分的篩選和靶點(diǎn) 以檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫并根據(jù)OB和DL值初步篩選得到葛根湯活性成分371個：其中葛根16個，麻黃18個，桂枝9個，生姜8個，甘草204個，大棗82個，白芍34個；另外共有成分有15個：大棗，甘草，麻黃共有1個成分；大棗，甘草，白芍共有2個成分；大棗，生姜，白芍，葛根，桂枝共有1個成分；大棗，甘草，麻黃共有1個成分；大棗，桂枝，白芍共有1個成分；大棗，甘草共有1個成分；大棗，葛根共有1個成分；甘草，麻黃共有1個成分；白芍，桂枝甘草共有1個成分；甘草，葛根共有2個成分；甘草，白芍，麻黃共有1個成分；甘草，白芍共有1個成分；桂枝，葛根共有1個成分；桂枝，麻黃共有1個成分。將上述活性成分輸入uniport網(wǎng)站進(jìn)行規(guī)范，最終得到葛根湯有效基因靶點(diǎn)：其中葛根312個，麻黃356個，桂枝194個，生姜81個，甘草2380個，大棗780個，白芍209個；去除重復(fù)值，得出有效基因靶點(diǎn)共194個。方中OB值排名2位的有效成分見下表：

表1 葛根湯方中OB值排名2位的有效成分

2.1.2 黃芪桂枝五物湯成分的篩選和靶點(diǎn) 以檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫并根據(jù)OB和DL值初步篩選得到黃芪桂枝五物湯活性成分180個：其中黃芪47個，桂枝9個，大棗82個，生姜8個，白芍34個；另外共有成分有9個：黃芪，大棗共有3個成分；黃芪，白芍，大棗共有1個成分；白芍，黃芪共有1個成分；桂枝，生姜，大棗，白芍共有1個成分；桂枝白芍共有1個成分；桂枝，白芍，大棗共有1個成分；白芍，大棗共有1個成分。將上述活性成分輸入uniport網(wǎng)站進(jìn)行規(guī)范，最終得到黃芪桂枝五物湯有效基因靶點(diǎn)：其中黃芪47個，桂枝194個，大棗780個，生姜81個，白芍209個；去除重復(fù)值，得出有效基因靶點(diǎn)共174個。方中OB值排名2位的有效成分見下表：

表2 黃芪桂枝五物湯方中OB值排名2位的有效成分

2.2 葛根湯及黃芪桂枝五物湯活性成分-有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

2.2.1 葛根湯活性成分-有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將檢索出的葛根湯有效靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件中，構(gòu)建葛根湯有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖（圖1）。圖中下面黃色部分表示藥物的靶點(diǎn)，上面部分表示藥物成分：同心圓的外圈藍(lán)色四邊形表示甘草，同心圓的內(nèi)圈紅色四邊形表示大棗，同心圓中間左上紫色四邊形表示葛根，同心圓中間右上淺粉紅色四邊形表示麻黃，同心圓中間左下黃色四邊形表示白芍，同心圓中間右下淺綠色四邊形表示生姜，同心圓中間右下翠綠色四邊形表示桂枝，同心圓中間呈一字排開的深粉紅色表示共同的藥物成分。由此可見，葛根湯中不同藥物可能對應(yīng)同一成分，同一成分可能對應(yīng)不同靶點(diǎn)；反之，同一靶點(diǎn)又可能對應(yīng)不同藥物成分，不同藥物成分又可能對應(yīng)同一藥物，最終得出葛根湯治療疾病可以通過不同成分作用于不同靶點(diǎn)而取得療效。

圖1 葛根湯有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.2.2 黃芪桂枝五物湯活性成分-有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將檢索出的黃芪桂枝五物湯有效靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件中，構(gòu)建黃芪桂枝五物湯有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖（圖2）。圖中同心圓的最外圈紫紅色圓形節(jié)點(diǎn)表示藥物靶點(diǎn)，同心圓第二圈土黃色四邊形節(jié)點(diǎn)表示大棗成分，同心圓第三圈黃色四邊形節(jié)點(diǎn)表示黃芪成分，同心圓第四圈翠綠色四邊形節(jié)點(diǎn)表示白芍成分，同心圓第五圈藍(lán)色四邊形節(jié)點(diǎn)表示桂枝，同心圓第五圈玫紅色四邊形節(jié)點(diǎn)表示生姜，同心圓中心呈矩形排列的粉色八邊形節(jié)點(diǎn)表示共有成分。由此可見，黃芪桂枝五物湯中不同藥物可能對應(yīng)同一成分，同一成分可能對應(yīng)不同靶點(diǎn)；反之，同一靶點(diǎn)又可能對應(yīng)不同藥物成分，不同藥物成分又可能對應(yīng)同一藥物，最終得出黃芪桂枝五物湯治療疾病可以通過不同成分作用于不同靶點(diǎn)而取得療效。

圖2 黃芪桂枝五物湯有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.3 cervical spondylosis相關(guān)靶點(diǎn)檢索在Genecards數(shù)據(jù)庫、Disgenet數(shù)據(jù)庫、OMIM數(shù)據(jù)庫的疾病基因數(shù)據(jù)庫以“cervical spondylosis”作為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索與篩選，同時根據(jù)近5年相關(guān)文獻(xiàn)查找未納入到的有效靶點(diǎn)。在Genecards數(shù)據(jù)庫中查找出54個靶點(diǎn)；在Disgenet數(shù)據(jù)庫中查找5個靶點(diǎn)；在OMIM數(shù)據(jù)庫中查找158個靶點(diǎn)，在近5年相關(guān)文獻(xiàn)未查找未納入的有效靶點(diǎn)。最終將所取得上述所有靶點(diǎn)匯總?cè)コ貜?fù)值，并利用Uniprot數(shù)據(jù)庫將所得靶點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)化，最終得到疾病靶點(diǎn)共211個。

2.4 葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的靶點(diǎn)、PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

2.4.1 葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療cervical spondylosis的交集靶點(diǎn) 將葛根湯有效基因靶點(diǎn)與黃芪桂枝五物湯有效基因靶點(diǎn)比對，經(jīng)過篩選去除重復(fù)值，最終得到AR、ESR1、PGR、ACACA、ACHE、ACPP、ADRB2、AHR、ALOX5、BCL2等共170個交集靶點(diǎn)。將所取得的170個交集靶點(diǎn)與2.3中所取得的211個疾病靶點(diǎn)再次取交集，最終取得ESR1、IFNG、IL1B、IL6、MMP3、PTGS2、SOD1、TNF、TP53、COL3A1、DRD5、HMGCR共12個交集靶點(diǎn)。

2.4.2 葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建將最終篩選出來的共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫獲取靶蛋白的相互作用關(guān)系。雖然葛根湯及黃芪桂枝五物湯交集靶點(diǎn)與cervical spondylosis共有的靶點(diǎn)只有12個，但葛根湯及黃芪桂枝五物湯對cervical spondylosis的治療作用，并不僅限于靶點(diǎn)直接相互作用。因?yàn)槊總€靶點(diǎn)都處在蛋白相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)中，所以藥物和疾病靶點(diǎn)之間即便沒有直接相互作用，藥物和疾病靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)之間也可能產(chǎn)生聯(lián)系。因此研究藥物對疾病的作用機(jī)制，不僅要研究直接作用靶點(diǎn)，還要研究蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中間接作用機(jī)制。因此筆者把STRING網(wǎng)站上的參數(shù)中的第一層最大交互者數(shù)設(shè)置為：不超過10個交互器，第二層設(shè)置為：不超過20個交互器，把最低互動得分設(shè)置為：中置信度（0.4000）。將擴(kuò)增所得到靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件中的bisogenet插件獲取靶蛋白的相互作用關(guān)系。使用Biso-Genet數(shù)據(jù)庫對篩選出的基因靶點(diǎn)構(gòu)建相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，可得到葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療cervical spondylosis的PPI網(wǎng)絡(luò)圖，將所得圖導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件，繪制出PPI網(wǎng)絡(luò)圖（圖3）。該P(yáng)PI網(wǎng)絡(luò)圖共包含三個小圖，左側(cè)圖為通過原始交集靶點(diǎn)作出的網(wǎng)絡(luò)圖，包括3661個節(jié)點(diǎn)，125936條邊，經(jīng)過計算得出BC、CC、DC的中位數(shù)分別為0.00000848、0.439、47，以此為條件截取出中間圖；中間圖包括1470個節(jié)點(diǎn)，62543條邊，經(jīng)過計算得出BC、CC、DC的中位數(shù)分別為0.00291、0.465、96，以此為條件截取出右側(cè)圖；中間圖包括450個節(jié)點(diǎn)，16152條邊，圖中節(jié)點(diǎn)越大，圖中節(jié)點(diǎn)越大代表degree值越大，degree值排名在前5位的靶蛋白：TP53（抑癌基因53），NTRK1（1型神經(jīng)營養(yǎng)性酪氨酸激酶受體），ESR1（雌激素受體1），CUL3，APP（淀粉樣前體蛋白）。

圖3 葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療cervical spondylosis的富集分析

將PPI網(wǎng)絡(luò)中的450個核心靶點(diǎn)基因?qū)隓A-ⅤID數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行GO富集分析及KEGG通路富集分析。

2.5.1 葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的GO富集分析GO富集分析結(jié)果顯示，450個相關(guān)靶點(diǎn)基因其中有430個核心靶點(diǎn)基因參與富集，共得到379個富集結(jié)果，其中包括分子功能（MF）98項(xiàng)，主要涉及蛋白結(jié)合、泛素蛋白連接酶結(jié)合、酶結(jié)合等；細(xì)胞組成（CC）178項(xiàng)，主要涉及細(xì)胞核、細(xì)胞胞漿、細(xì)胞核漿等；生物過程（BP）103項(xiàng)，主要涉及病毒過程、抑制表觀遺傳、促進(jìn)及抑制RNA聚合酶Ⅱ啟動子的轉(zhuǎn)錄等。選擇P值＜0.01的富集結(jié)果，輸入微生信網(wǎng)絡(luò)，作圖如下（圖4）：

圖4 葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的GO富集分析

2.5.2 葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療cervical spondylosis的KEGG通路富集分析KEGG分析結(jié)果：450個相關(guān)靶點(diǎn)基因，其中有354個核心靶點(diǎn)基因參與115條信號通路過程，篩選COUNT數(shù)目排名前9位的通路，輸入微生信網(wǎng)絡(luò)（圖5），將基因數(shù)目排名前20位相關(guān)基因及通路導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0繪制相關(guān)基因及通路關(guān)系圖（圖6）。

圖5 葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療cervical spondylosis排名前9位的KEGG通路

圖6 相關(guān)基因及通路關(guān)系圖

通過KEGG富集通路分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤通路，HTLⅤ-I感染，乙肝，MAPK通路，細(xì)胞周期，病毒致癌過程，EB病毒致癌過程等通路與葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療cervical spondylosis的靶點(diǎn)關(guān)系密切。相關(guān)基因數(shù)最高的兩條通路如下：

圖7 癌癥相關(guān)基因及通路關(guān)系圖

圖8 致癌作用病毒相關(guān)基因及通路關(guān)系圖

3 討論

頸椎病是指頸椎間盤組織發(fā)生退行性改變，以及其繼發(fā)病理改變累及到包括神經(jīng)根、脊髓、椎動脈、交感神經(jīng)、脊髓前中央動脈等的周圍組織結(jié)構(gòu)，因此目前臨床治療多從松解頸背部肌肉、調(diào)整頸椎的生理曲度及關(guān)節(jié)突關(guān)節(jié)等方面入手，短期效果明顯，但容易反復(fù)發(fā)作，長期效果欠佳。文獻(xiàn)回顧中發(fā)現(xiàn)研究切入點(diǎn)以炎癥因子[21]、細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期[22,23]等方向?yàn)橹?，均能取得較好的療效。

葛根湯出自《傷寒論》，原方組成為：葛根四兩、麻黃三兩(去節(jié))、桂枝二兩(去皮)、芍藥二兩(切)、甘草二兩(炙)、生姜三兩(切)、大棗十二枚(擘)，具有發(fā)汗解表，升津舒筋之功效。黃芪桂枝五物湯出自《金匱要略》，原方組成為：黃芪三兩、桂枝三兩、芍藥三兩、生姜六兩、大棗十二枚，具有補(bǔ)益氣血、通陽行痹、調(diào)和營衛(wèi)的功效。兩方藥味精簡，配伍得當(dāng)，問世近兩千年來療效顯著。兩方雖主治功效迥異，但在現(xiàn)代骨科臨床上常合方用于治療頸椎病，能收獲較好療效。

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，探討葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的作用機(jī)制，共收集到葛根湯活性成分371個；黃芪桂枝五物湯活性成分180個；治療疾病的作用靶點(diǎn)共211個，提示葛根湯及黃芪桂枝五物湯可以利用不同有效成分通過多個靶點(diǎn)蛋白治療頸椎病。PPI網(wǎng)絡(luò)圖提示葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的作用機(jī)制較為復(fù)雜，核心靶點(diǎn)涉及的范圍可以分為細(xì)胞增殖及其周期、泛素化、炎癥因子及傷口愈合相關(guān)指標(biāo)，GO和KEGG富集分析結(jié)果顯示，葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病涉及不同的生物過程及不同的信號通路，如腫瘤通路，MAPK通路，細(xì)胞周期，病毒致癌過程，EB病毒致癌過程等。本次網(wǎng)絡(luò)藥理研究結(jié)果PPI發(fā)現(xiàn)葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病degree值排名前30的核心蛋白主要參與調(diào)節(jié)軟骨及椎間盤細(xì)胞增殖凋亡以及調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)等過程。如①TP53為細(xì)胞周期研究領(lǐng)域中的明星分子，目前體外細(xì)胞證實(shí)抑制TP53可促進(jìn)人髓核細(xì)胞增殖作用[24]；同時亦有動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)干擾ESR1的表達(dá)可以通過抑制軟骨細(xì)胞凋亡進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的增殖[25,26]；對于大鼠神經(jīng)細(xì)胞的研究證實(shí)APP可抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡,從而改善神經(jīng)功能恢復(fù)[27]。②NTRK1與神經(jīng)元修復(fù)有密切關(guān)系，動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)過表達(dá)NTRK1能夠促進(jìn)神經(jīng)元的再生[28]。分析P值排名前20位的KEGG通路可以發(fā)現(xiàn)葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的主要通路可以分為以下幾類：①調(diào)節(jié)神經(jīng)及軟骨細(xì)胞的增殖、侵襲及凋亡：已經(jīng)有臨床研究觀察到MAPK信號通路的激活會促進(jìn)人頸椎椎間盤的退化[29]，動物實(shí)驗(yàn)研究及文獻(xiàn)綜述表明調(diào)控MAPK信號通路的激活，可以影響神經(jīng)及軟骨細(xì)胞的增殖速度，從而調(diào)節(jié)兩者的細(xì)胞周期[30,31]。基于上述結(jié)論，研究組推測對于治療頸椎病同樣可以通過抑制上述通路的功能，達(dá)到控制調(diào)控神經(jīng)及軟骨細(xì)胞的有絲分裂，促進(jìn)細(xì)胞增殖，延長細(xì)胞周期，從而治療頸椎病。②與腫瘤相關(guān)性：在本次網(wǎng)絡(luò)藥理研究中發(fā)現(xiàn)KEGG富集的結(jié)果有很多與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)的信號通路。頸椎病在治療期間，需要讓局部組織有持續(xù)的血管新生，局部炎癥反應(yīng)的減緩等過程。而這一系列的過程均與腫瘤的持續(xù)血管新生，促腫瘤炎癥反應(yīng)等惡性腫瘤獲得性特征[32,33]相類似。研究組在回顧文獻(xiàn)中也發(fā)現(xiàn)目前有不少對滋養(yǎng)細(xì)胞的研究也以惡性腫瘤獲得性特征作為切入點(diǎn)[34-36]，因此研究組推測日后研究葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的作用可以借鑒腫瘤相關(guān)通路來完成。

綜上，葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的主要成分可能是槲皮素、芍藥苷、β-谷甾醇、芒柄花黃素、（+）-兒茶素、甘草酚等，主要通過TP53等蛋白通過腫瘤信號通路等信號通路影響多種生物行為。本次網(wǎng)絡(luò)藥理實(shí)驗(yàn)同時發(fā)現(xiàn)了部分核心靶點(diǎn)分子及富集所得通路尚未被深入研究，同時根據(jù)文獻(xiàn)回顧結(jié)果，目前此類研究的對象集中在骨關(guān)節(jié)炎、腦缺血、帕金森病等模型，多以手法治療、針灸治療或針?biāo)幗Y(jié)合等作為干預(yù)手段，而研究藥物直接對頸椎椎間盤，軟骨形成，血管新生等的作用的試驗(yàn)并不多見。由此，研究組推斷本次網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究為進(jìn)一步明確葛根湯及黃芪桂枝五物湯治療頸椎病的機(jī)制開辟了新方向，但目前對于復(fù)方成分中不同藥物的藥量及相互作用分析仍缺乏系統(tǒng)研究模型，此后，我們可以進(jìn)一步建立研究模型以實(shí)驗(yàn)的方式來明確之間的區(qū)別。