文安敏

（貴州省遵義市播州區(qū)疾病預(yù)防控制中心，貴州遵義 563100）

現(xiàn)階段，飲用水最迫切的安全問(wèn)題是微生物污染問(wèn)題，這也是世界范圍的難題。消除安全問(wèn)題最有效的方法為生活飲用水微生物檢查。符合國(guó)家規(guī)定的飲用水都是經(jīng)由相關(guān)處理，水中微生物達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn)，且人們能夠安全飲用的水[1]。世界衛(wèi)生組織調(diào)查發(fā)現(xiàn)，水污染導(dǎo)致世界上約12億人發(fā)生了腸道傳染性疾病，其中大約有400萬(wàn)人因?yàn)樗廴炯膊∷劳?，所以生活飲用水質(zhì)量把控工作十分重要[2]。近幾年，我國(guó)加強(qiáng)了生活飲用水質(zhì)量監(jiān)測(cè)工作，以確保生活飲用水中所含有的微生物含量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)；但是在輸送等過(guò)程中也可能出現(xiàn)二次污染的問(wèn)題，導(dǎo)致水中微生物含量超標(biāo)，因此微生物檢驗(yàn)是檢驗(yàn)生活飲用水質(zhì)量的重要方式，能夠保證飲用水質(zhì)量安全[3-4]。 濾膜法是一種行之有效的微生物檢測(cè)方式，該方法操作極為便利，在檢測(cè)前會(huì)對(duì)水質(zhì)當(dāng)中的雜質(zhì)進(jìn)行判別，但是檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性較差[5]。為此，本次研究主要采用濾膜法與多管發(fā)酵法兩種微生物檢測(cè)技術(shù)對(duì)生活飲用水中微生物進(jìn)行檢測(cè)，并觀察結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 材料

研究抽取180份生活飲用水（枯水期90份，豐水期90份），時(shí)間段為2020年4月到2021年4月，樣本檢測(cè)遵循《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法水樣收集和保存》[6]中記載的流程實(shí)施采集及保存，兩組基線資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。將枯水期與豐水期的飲用水標(biāo)本分別進(jìn)行濾膜法實(shí)驗(yàn)（即對(duì)照組）與多管發(fā)酵法（即觀察組）。

1.2 試劑與儀器

生物顯微鏡，型號(hào)XSP-12CA，上海光學(xué)儀器一廠；生物安全柜，型號(hào)BSC-1500IIB2-X，濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司；高壓蒸汽滅菌消毒器，型號(hào)BKQ-B50II，濟(jì)南泰醫(yī)生物技術(shù)有限公司；電熱鼓風(fēng)干燥箱，型號(hào)DHG-9240A，武漢若瑞德科技有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號(hào)DHP-9012，上海燈晟儀器制造有限公司；紫外光燈，型號(hào)BOT-IIA，北京士博瑞科技有限公司。

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（PB95789-250 g）、伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基（PA95908-250 g）、EC-MUG培養(yǎng)基（PC 95790-250 g）、革蘭氏染色液（PB231292-100 mL×4）， 均為廣東翁江化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 濾膜法實(shí)驗(yàn)

在燒杯中放入濾膜，加入蒸餾水，將其煮至沸騰，循環(huán)沸騰3次之后，將其實(shí)施15 min的常規(guī)殺菌措施，再對(duì)燒杯實(shí)施清潔，保證無(wú)殘留物后再次煮沸。將濾膜粗糙面向上，使用無(wú)菌鑷子取出，再放在無(wú)菌濾床上。取出水樣100 mL。開(kāi)啟閥門實(shí)施抽濾，過(guò)濾完成后實(shí)施5 s抽氣，再關(guān)閉濾器閥門，使用滅菌鑷子除去濾膜，放入品紅硫酸鈉培養(yǎng)基上，確保有細(xì)菌殘留面朝上，在使用電熱恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行 培養(yǎng)。

1.3.2 多管發(fā)酵法

把10 mL水樣接種到10 mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，取1 mL水樣接種到10 mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另取1 mL水樣加入到9 mL滅菌生理鹽水中稀釋10倍，即0.1 mL水樣與10 mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液混合，每一稀釋度接種5管。從自來(lái)水廠出來(lái)的水，應(yīng)當(dāng)時(shí)常檢測(cè)，或每天檢測(cè)1次，可以與5份容積為10 mL水樣品雙料培養(yǎng)基相混合，每份與10 mL水樣品相混。若檢測(cè)水源發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重污染，則要擴(kuò)大稀釋度，可以與1 mL、0.1 mL、0.01 mL，甚至0.1 mL、0.01 mL、0.001 mL相混，每稀釋度對(duì)接5管，每種水樣品共對(duì)接15管。與低于1 mL水樣品對(duì)接時(shí)，稀釋時(shí)，必須遵守逐步增加的原則，可進(jìn)行10倍遞增的稀釋，再與1 mL對(duì)接，每上升 1次，更換1次1 mL滅菌刻度吸管。完成接種之后，將接種管置恒溫培養(yǎng)箱，36 ℃培養(yǎng)24 h。在培養(yǎng)后，觀察試管中是否有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，如所有乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報(bào)告大腸菌群陰性，若是陽(yáng)性則將產(chǎn)酸產(chǎn)氣管轉(zhuǎn)種紅美蘭瓊脂平板中，再使用培養(yǎng)箱36 ℃培養(yǎng)18～24 h，在完成培養(yǎng)后，密切觀察菌落形態(tài)，如果發(fā)現(xiàn)紫黑色且有金屬光澤、淡紫色且無(wú)金屬光澤的菌落，則必須染色后鏡檢，在染色工作完成之后，鏡檢結(jié)果凸顯革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，同時(shí)接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)，置恒溫培養(yǎng)箱36 ℃培養(yǎng)24 h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實(shí)有總大腸菌群存在。再進(jìn)行耐熱大腸菌群及大腸埃希氏菌檢測(cè)。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料用（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯水期檢出率比較

枯水期一般為每年12月至次年4月全年流水量最少的時(shí)期，此時(shí)間段的降雨量較為稀少、地表水流枯竭，主要依靠地下水補(bǔ)給水源。相對(duì)而言，水中菌群的活躍度降低、水中微生物不易繁殖。如表1所示，采用濾膜法與多管發(fā)酵法在檢測(cè)枯水期飲用水樣本時(shí)發(fā)現(xiàn)，兩種方法對(duì)大腸菌群、雜菌的檢出數(shù)量之間的差異較?。≒＞0.05），與濾膜法（對(duì)照組）相比，多管發(fā)酵法（觀察組）在大腸埃希菌、耐熱大腸菌群的檢出率偏高（P＜0.05）。

表1 枯水期檢出率比較

2.2 豐水期檢出率比較

豐水期一般為5月—9月，此時(shí)間段氣溫持續(xù)升高且多為雨水充沛或高山溶雪補(bǔ)給的時(shí)期，因此水中菌群異?；钴S、導(dǎo)致微生物的大量繁殖，若未能徹底消毒，在飲用后可引起感染。如表2所示，在豐水期分別采用濾膜法與多管發(fā)酵法檢測(cè)后，兩種方法在大腸菌群、雜菌的檢出數(shù)量之間無(wú)顯著性差異 （P＞0.05），與濾膜法（對(duì)照組）相比，多管發(fā)酵法（觀察組）在大腸埃希菌、耐熱大腸菌群的檢出數(shù)量較高（P＜0.05）。

表2 豐水期檢出率比較

3 結(jié)論與討論

水是一切生命活動(dòng)的起源，是人類及動(dòng)植物生命過(guò)程中不可缺少的一項(xiàng)重要資源，也是生物體重要的組成部分。社會(huì)的可持續(xù)發(fā)展離不開(kāi)工業(yè)、農(nóng)業(yè)及城市建設(shè)，就目前的情況來(lái)看，工業(yè)生產(chǎn)時(shí)排放未處理的廢水、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中大量使用農(nóng)藥和肥料，及城市垃圾、廢氣與污水等是造成水污染的主要原因，水質(zhì)污染的情況也越發(fā)嚴(yán)重。水污染直接影響到飲用水源的水質(zhì)，同時(shí)飲用水源中的微生物總含量超標(biāo)也對(duì)人們的健康造成嚴(yán)重影響，水污染已成為威脅人類生命安全的重要問(wèn)題。因此，有關(guān)部門還需加強(qiáng)對(duì)水源的保護(hù)，切實(shí)提高對(duì)飲用水質(zhì)的檢測(cè)技術(shù)，已保障生活飲用水的水質(zhì)質(zhì)量。

微生物檢測(cè)是評(píng)價(jià)水源、生活飲用水水質(zhì)情況的一項(xiàng)重要指標(biāo)，加強(qiáng)對(duì)水質(zhì)的監(jiān)測(cè)、提高檢測(cè)合格率，是保障居民用水安全，預(yù)防水源性疾病的重要手 段[7-8]。在日常飲水的微生物檢測(cè)方法中，多管發(fā)酵法是研究水樣大腸菌類的一種使用率較高的方法，能夠有效檢測(cè)水中的總大腸菌群。總大腸菌群的主要種類是革蘭氏陰性菌，它是無(wú)芽孢桿菌，在36 ℃培養(yǎng)24 h的條件下，此類菌種會(huì)產(chǎn)生發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，而其自身具有需氧、厭氧的屬性，可利用培養(yǎng)基以及其他試劑實(shí)施培養(yǎng)及檢測(cè)[9]。本實(shí)驗(yàn)中采用濾膜法及多管發(fā)酵法均能檢出水源中大腸菌群和雜菌，且兩種方法檢出的數(shù)量之間存在顯著差異性，但對(duì)于大腸埃希菌和耐熱大腸菌群而言，多管發(fā)酵法檢出的數(shù)量更高（P＜0.05）。

綜上所述，在對(duì)飲用水質(zhì)量進(jìn)行控制的過(guò)程中采用合理的措施，可以促進(jìn)飲用水的質(zhì)量得到提升，保證人們的身體健康，使人們可以飲用質(zhì)量合格的生活飲用水。