錢成林，吳 思，鄭旭濤，董成虎，陳權(quán)翠*

（1.新希望乳業(yè)股份有限公司食品安全監(jiān)管部，四川成都 610000； 2.華測(cè)檢測(cè)認(rèn)證集團(tuán)股份有限公司（云南華測(cè)檢測(cè)認(rèn)證有限公司），云南昆明 650000）

三聚氰胺（C3H6N6），俗稱密胺、蛋白精，IUPAC命名為1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，被用作化工原料。它是白色單斜晶體，幾乎無味，微溶于水（3.1 g/L常溫），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油及吡啶等，不溶于丙酮、醚類，對(duì)身體有害，不可用于食品加工或食品添加物。臨床研究發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺可能會(huì)在人體泌尿系統(tǒng)如膀胱和腎臟形成泥沙樣結(jié)晶或 結(jié)石[1]。

中國(guó)國(guó)家食品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)中心在2008年9月13日指出，三聚氰胺屬于化工原料，不允許添加到食品中，故暫未設(shè)定像農(nóng)藥般的殘留標(biāo)準(zhǔn)限制。除了人為添加外，三聚氰胺類物質(zhì)還可能從環(huán)境、食品包裝材料等途徑進(jìn)入到食品，且其含量極低。由于動(dòng)物源食品基質(zhì)背景復(fù)雜、所需前處理過程煩瑣費(fèi)時(shí)，因此開發(fā)復(fù)雜食品基質(zhì)中痕量三聚氰胺類物質(zhì)快速、高靈敏分析檢測(cè)方法對(duì)保障我國(guó)食品安全具有重要的意義[2]。2008年10月8日，原衛(wèi)生部、工業(yè)和信息化部、農(nóng)業(yè)部、國(guó)家工商行政管理總局和國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局聯(lián)合發(fā)布公告，制定三聚氰胺在乳與乳制品中的臨時(shí)管理值。

嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值為1 mg/kg， 高于1 mg/kg的產(chǎn)品一律不得銷售。液態(tài)奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值為 2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的產(chǎn)品一律不得銷售。目前使用的檢測(cè)方法有GB/T 22388—2008原料乳及乳制品中三聚氰胺檢測(cè)第一法高效液相色譜法[3]和 GB/T 22400—2008原料乳中三聚氰胺檢測(cè)方法[4]，按照檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果有所偏低，方法檢出限為2.0 mg/kg，加標(biāo)濃度為2～10 mg/kg，回收率在80%～110%，不能滿足《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和認(rèn)證指南》（GB/T 27417—2017）關(guān)于加標(biāo)回收率的要求，在目前的方法上進(jìn)行改進(jìn)，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。加標(biāo)回收率都在90%～110%，滿足要求[5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

牛奶樣品，工廠奶罐檢測(cè)合格牛奶；乙腈（色譜純，生產(chǎn)批號(hào)：148405，德國(guó)默克）；檸檬酸（分析純，生產(chǎn)批號(hào)：20140201，重慶川東化工有限公司）；辛烷磺酸鈉（分析純，生產(chǎn)批號(hào)：20160602，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；三氯乙酸（分析純，生產(chǎn)批號(hào)：20130124，廣東光華科技股份有限公司）；甲醇（色譜純，生產(chǎn)批號(hào)：1847607，德國(guó)默克）；超純水，實(shí)驗(yàn)室自制。

離子對(duì)緩沖試劑：使用ME204E電子天平準(zhǔn)確稱取2.10 g檸檬酸和2.16 g辛烷磺酸鈉，加入約980 mL 超純水，調(diào)節(jié)pH值至3.0，用水定容至1000 mL。使用0.45 μm水相濾膜過濾后進(jìn)行使用。

1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫高效液相色譜儀1260（美國(guó)Aligent，紫外檢測(cè)器VWD，檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm，檢測(cè)溫度40 ℃）；ME204E電子天平，精確度0.0001 g，梅特勒托利多。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 操作步驟

使用1000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行加標(biāo)至1.25 mg/L、 2.50 mg/L、10.00 mg/L。分別18次準(zhǔn)確稱?。?.000± 0.010）g制備好的加標(biāo)樣品至50 mL離心管中，準(zhǔn)確移取18 mL濃度為2%的三氯乙酸溶液和5 mL乙腈溶液至每只離心管中，渦旋混勻1 min，超聲提取10 min，振蕩提10 min，6000 r/min離心10 min。 用濾紙進(jìn)行過濾后作為凈化液，過濾溶液時(shí)間從 30 min，縮短到5 min左右。再用3 mL甲醇和5 mL水先后過活化好的陽(yáng)離子交換柱，將凈化液5 mL加5 mL水混勻后過柱，繼續(xù)用3 mL水和3 mL甲醇先后過柱，加入6 mL 5%氨化甲醇溶液洗脫，將洗脫液置于50 ℃氮吹至干，取出比色管加入1 mL流動(dòng)相溶液用0.45 μm濾膜過濾到進(jìn)樣瓶中。沒有加標(biāo)的樣品依據(jù)上述方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 進(jìn)樣條件

色譜柱C18（150 mm×4.6 mm×5 μm）；波長(zhǎng)：紫外240 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣體積：20 μL；流速：1 mL/min；洗脫方式：等度洗脫。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度及峰面積結(jié)果，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性關(guān)系y=ax+b，其中a=82.355，b=-3.1957， 線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9997，可以滿足≥0.999以上的要求，具體見圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系

2.2 加標(biāo)回收率

依據(jù)回收率標(biāo)準(zhǔn)要求（表1），分別加標(biāo)至 1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L，并進(jìn)行平行測(cè)定6次，加標(biāo)回收率在95.1%～108.4%，其中加標(biāo)至1.25 mg/L的樣品加標(biāo)回收率在98.5%～108.4%，加標(biāo)濃度至2.50 mg/L的樣品加標(biāo)回收率為98.8%～ 100.9%，加標(biāo)濃度至10.00 mg/L的樣品加標(biāo)回收率在95.1%～98.5%，都能滿足加標(biāo)回收率在90%～110%的要求。加標(biāo)回收率見表2。

表1 加標(biāo)回收率標(biāo)準(zhǔn)要求

表2 加標(biāo)回收率結(jié)果表（n=6）

2.3 精密度

計(jì)算1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L的加標(biāo)檢測(cè)結(jié)果，RSD值都低于5%，滿足RSD的要求，見 表3。

表3 樣品精密度

2.4 方法檢出限和定量限

按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，查看安捷倫1260高效液相色譜儀18次檢測(cè)結(jié)果的信噪比，3倍的信噪比作為方法檢出限，10倍的信噪比作為方法定量限。由于檢測(cè)18個(gè)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算的方法檢出限和定量限都不一致，采用18次計(jì)算結(jié)果的平均值作為方法檢出限和定量限。方法檢出限為0.08 mg/L，方法定量限為0.28 mg/L，見表4。

表4 方法檢出限與定量限（單位：mg/L）

2.5 優(yōu)化方法與國(guó)標(biāo)方法對(duì)比

優(yōu)化方法與國(guó)標(biāo)方法對(duì)比結(jié)果見表5，優(yōu)化方法檢出限更低，定容時(shí)間短，加標(biāo)回收率符合要求。

表5 優(yōu)化方法與國(guó)標(biāo)方法對(duì)比情況

3 結(jié)論

結(jié)果表明，更改前處理方法后，過濾定容時(shí)間從原來30 min縮短至5 min，定容時(shí)間縮短至原來的1/6；加標(biāo)回收率有明顯改善，從80%～110%上升至95.1%～108.4%，改善比較明顯，檢測(cè)準(zhǔn)確性提高；精密度實(shí)驗(yàn)方面，加標(biāo)樣品檢測(cè)偏差RSD值在5%以內(nèi)；方法檢出限為0.08 mg/kg，方法定量限為 0.28 mg/kg，與原有標(biāo)準(zhǔn)的定量限2.0 mg/kg相比降低顯著，低濃度樣品更加容易檢出。所以更改定容方式后檢測(cè)結(jié)果更加高效、準(zhǔn)確、可靠。