劉 娟,童明慧,郭英球,李 娟,3*

1湖南中醫(yī)藥大學(xué)；2長(zhǎng)沙歐邦生物科技有限公司；3湖南省中藥活性物質(zhì)篩選工程技術(shù)研究中心,長(zhǎng)沙 410208

惡性腫瘤嚴(yán)重地威脅了人類(lèi)健康及生命，臨床上主要以手術(shù)、靶向、藥物及放化療等手段綜合治療。中醫(yī)藥在治療惡性腫瘤中，具有一定優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)，中醫(yī)認(rèn)為腫瘤的病機(jī)主要是正氣虛弱，外邪入侵，根據(jù)惡性腫瘤的病因病機(jī)，中藥治療在辨證論治基礎(chǔ)上，分別施以扶正固本、軟堅(jiān)散結(jié)、活血化瘀、理氣行滯、清熱解毒[1]。蟾酥(Bufonis Venenum)為蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍(BufobufogargarizansCantor)或黑眶蟾蜍(BufomelanostictusSchneider)的干燥分泌物。其性味辛，溫，有毒、歸心經(jīng)，具有解毒、止痛，開(kāi)竅醒神之功效，用于治療癰疽疔瘡，咽喉腫痛，中暑神昏，痧脹腹痛吐瀉[2]，是一味優(yōu)良的抗腫瘤中藥?，F(xiàn)代藥學(xué)研究表明，蟾酥主含蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)、蟾毒色胺類(lèi)和甾醇類(lèi)等化合物，已證明蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)是蟾酥抗腫瘤的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，目前，已從蟾酥中分離鑒定出142種該類(lèi)成分[3]。其主要成分蟾毒靈、脂蟾毒配基和華蟾酥毒基在2020年版《中國(guó)藥典》蟾酥藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中作為含量測(cè)定的指標(biāo)成分，規(guī)定這三個(gè)化合物的總含量不低于7%。由蟾酥單味藥材開(kāi)發(fā)的華蟾素三種劑型(注射液、膠囊和片劑)和蟾酥注射液，治療中、晚期腫瘤具有較好的臨床療效，尤其是對(duì)原發(fā)性肝癌、肺癌、食管癌和胃癌作用效果顯著，能增強(qiáng)機(jī)體免疫力，減少放化療的毒副反應(yīng)，并提高患者生存質(zhì)量、延長(zhǎng)壽命等[4]。鑒于蟾酥優(yōu)良的抗腫瘤作用，本文綜述了近五年蟾酥及其制劑抗腫瘤的作用機(jī)理和臨床應(yīng)用，為蟾酥的深入研究和開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供指導(dǎo)依據(jù)。

1 臨床應(yīng)用

蟾酥始載于《藥性論》，原名蟾蜍眉脂。古籍《醫(yī)學(xué)入門(mén)》記載：“主癰疽疔腫瘰疬，一切惡瘡頑癬”；《本草綱目》載：“治發(fā)背疔瘡，一切惡腫”。在古人用治惡瘡腫毒的經(jīng)驗(yàn)的啟發(fā)之下，現(xiàn)代中醫(yī)將其用于各種癌腫，有攻毒抗癌、消腫止痛之效。如《抗癌治驗(yàn)本草》記載，以之與露蜂房、鴉膽子、玳瑁等配伍，治療肺癌；以之與乳香、沒(méi)藥、雄黃等配伍，治療乳腺癌等。基于前人的應(yīng)用基礎(chǔ)，采用現(xiàn)代藥物制劑技術(shù)，將蟾酥開(kāi)發(fā)成多種制劑。目前，已上市銷(xiāo)售的用于治療腫瘤的蟾酥制劑除單味藥的華蟾素三種制劑和蟾酥注射液外，還有復(fù)方制劑鶴蟾片和仙蟾片等。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者多采用隨機(jī)對(duì)照的臨床試驗(yàn)方法對(duì)蟾酥注射液，華蟾素及仙蟾片等進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，研究證實(shí)，蟾酥制劑在各種惡性腫瘤的治療中效果顯著。

1.1 單用蟾酥制劑的臨床評(píng)價(jià)

臨床常單用華蟾素制劑治療多種中、晚期腫瘤，與白介素-2、水飛薊賓葡甲胺片，以及硫酸嗎啡控釋片等相比，作用效果顯著，不良反應(yīng)少(見(jiàn)表1)。

表1 單用蟾酥制劑抗腫瘤的臨床療效

1.2 聯(lián)合應(yīng)用

蟾酥制劑常與放/化療方案聯(lián)用，治療惡性腫瘤，不僅可以增加化療藥的療效，顯著降低腫瘤標(biāo)志物水平，而且可以明顯緩解臨床癥狀、抑制炎癥反應(yīng)、減少患者復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的作用趨勢(shì)(見(jiàn)表2)。

表2 蟾酥制劑聯(lián)合放/化療方案抗腫瘤作用的臨床療效

1.3 不良反應(yīng)

華蟾素注射液中吲哚類(lèi)生物堿，主要成分5-羥色胺對(duì)血管有強(qiáng)烈的刺激和收縮作用，靜脈炎是發(fā)生率最高的不良反應(yīng)[22]。少數(shù)患者在治療過(guò)程中還會(huì)出現(xiàn)皮疹、發(fā)熱、寒戰(zhàn)、過(guò)敏性休克等癥狀，在接受對(duì)癥處理后所有癥狀都得以緩解[23]。目前沒(méi)有華蟾素注射液致死的病例報(bào)告[24]。另報(bào)道，華蟾素口服制劑給藥期間，患者會(huì)出現(xiàn)腹痛，腹瀉等胃腸道不適，但隨著時(shí)間延長(zhǎng)，這種情況多可耐受[25]。上述研究結(jié)果提示，蟾酥制劑在臨床應(yīng)用存在一定的不良反應(yīng)，但嚴(yán)格遵循說(shuō)明書(shū)用藥，加強(qiáng)用藥監(jiān)測(cè)，能有效保障其用藥的安全性。

華蟾素是臨床應(yīng)用最多的蟾酥制劑，自20世紀(jì)80年代投入臨床應(yīng)用以來(lái)，已廣泛應(yīng)用于各種中、晚期惡性腫瘤以及癌癥疼痛的治療，為二類(lèi)中藥保護(hù)品種，被收錄于《國(guó)家基本醫(yī)療保險(xiǎn)、工傷保險(xiǎn)和生育保險(xiǎn)藥品目錄》和《國(guó)家基本藥物目錄》中。華蟾素制劑單用時(shí)，可有效控制腹水量、改善機(jī)體凝血功能、降低肝細(xì)胞炎癥指標(biāo)以及緩解疼痛，提高患者的生活質(zhì)量；與化療藥物或其他治療手段聯(lián)用時(shí)，不僅可提升化療藥物的抗腫瘤作用，而且可減輕化療藥物引起的惡心嘔吐、骨髓抑制、脂質(zhì)代謝異常、腸胃粘膜損傷等一系列不良反應(yīng)。蟾酥注射液作為一種腫瘤輔助治療藥物，常與化療藥物聯(lián)合使用，與單用化療藥物相比，患者血清中CA125、CA199等癌癥標(biāo)志物的含量顯著降低，并能有效糾正患者T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào)，減輕免疫功能的損害。

2 作用機(jī)理研究

藥學(xué)工作者對(duì)蟾酥中單體化合物及其制劑的抗腫瘤作用進(jìn)行了深入研究。單體化合物主要集中在蟾毒靈、華蟾酥毒基、脂蟾毒配基、蟾毒它靈、沙蟾毒精等蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)成分，其制劑主要研究華蟾素三種制劑和蟾酥注射液，華蟾素是由中華大蟾蜍干燥皮經(jīng)水提醇沉和不同工藝制備而成的制劑，主要含有蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)、生物堿類(lèi)、多肽類(lèi)、膽固醇類(lèi)等成分；蟾酥注射液是由從中華大蟾蜍耳后腺和皮膚腺的干燥分泌物中提取的有效成分精制而成的滅菌水溶液，主含蟾毒內(nèi)酯類(lèi)、生物堿類(lèi)成分。研究發(fā)現(xiàn)其主要通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬，逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥等方面發(fā)揮抗腫瘤的作用。

2.1 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞周期阻滯

細(xì)胞周期主要分為DNA合成期(G1期、S期，G2期)和細(xì)胞分裂期(M期)，蟾酥可以通過(guò)調(diào)控周期蛋白依賴(lài)性激酶、細(xì)胞周期蛋白，以及一系列原癌基因的表達(dá)將細(xì)胞阻滯于不同時(shí)期(見(jiàn)表3)。

表3 蟾酥對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的阻滯作用

2.2 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

凋亡是一種基因控制的自殺程序，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡已被確定為治療癌癥的有效方法之一。目前對(duì)凋亡機(jī)制的研究主要匯集在三個(gè)方面：內(nèi)源性途徑、外源性途徑、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡途徑。

內(nèi)源性途徑又稱(chēng)為線(xiàn)粒體途徑，Bcl-2家族蛋白是控制該途徑的主要調(diào)節(jié)分子。Bcl-2家族蛋白可分為抗凋亡因子(Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-x、BAG等)和促凋亡因子(Bax、Bid、Bak、Bad、Bcl-10、Bim等)，通過(guò)調(diào)控Bcl-2家族蛋白引起線(xiàn)粒體膜的通透性增強(qiáng)，細(xì)胞色素(cytochrome，Cyto)C的釋放，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Han等[36]證實(shí)異沙蟾毒精可上調(diào)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620和HCT116中促凋亡蛋白Bax表達(dá)，并協(xié)同線(xiàn)粒體內(nèi)膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白腺苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(adenine nucleotide transporter，ANT)共同增強(qiáng)線(xiàn)粒體的膜通透性，降低線(xiàn)粒體跨膜電位，從而誘導(dǎo)細(xì)胞SW620和HCT116通過(guò)線(xiàn)粒體途徑實(shí)現(xiàn)凋亡?；钚匝?reactive oxygen，ROS)在細(xì)胞的凋亡中起著重要作用，華蟾酥毒基刺激人骨肉瘤細(xì)胞U2OS和143B細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)量ROS，誘導(dǎo)線(xiàn)粒體雙層膜通透孔開(kāi)放，進(jìn)而引起線(xiàn)粒體損傷，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[37]。Wu等[38]證明蟾毒靈可通過(guò)增加人結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT-116和SW620中ROS的蓄積，激活線(xiàn)粒體介導(dǎo)的半胱天冬酶(caspase，Casp)級(jí)聯(lián)凋亡途徑，促進(jìn)凋亡。除上述ROS介導(dǎo)的凋亡，線(xiàn)粒體凋亡信號(hào)通路還涉及諸多促凋亡蛋白基因、抑癌基因的表達(dá)。蟾毒靈可破壞人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87線(xiàn)粒體膜的完整性，觸發(fā)氧化應(yīng)激，進(jìn)而催化U87細(xì)胞DNA雙鍵斷裂，誘導(dǎo)下游腫瘤抑制基因p53核轉(zhuǎn)錄增加、促使聚ADP-核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase，PARP)裂解，上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Bax、Casp-9的表達(dá)，從線(xiàn)粒體途徑發(fā)揮誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用[39]。

外源性途徑又稱(chēng)為死亡受體途徑，是一條主要的細(xì)胞凋亡調(diào)控途徑。細(xì)胞表面的死亡受體與特定的死亡配體結(jié)合后通過(guò)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活Casps，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)的剪切，進(jìn)而啟動(dòng)細(xì)胞凋亡。蟾毒靈能夠誘導(dǎo)人膀胱癌細(xì)胞T24外源性凋亡，即上調(diào)死亡受體(death receptor，DR)-5蛋白水平，激活Casp-8，活化下游效應(yīng)分子Casp-3、7，并使PARP裂解，從而促使細(xì)胞凋亡[40]。Yang等[41]報(bào)道不同濃度華蟾素溶液可上調(diào)自殺相關(guān)因子(factor associated suicide，F(xiàn)as)及其配體FasL、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)-αR、DR-4的蛋白水平誘導(dǎo)人膀胱癌細(xì)胞T24和EJ外源性凋亡，并上調(diào)Bax/Bcl-2蛋白比例，促使線(xiàn)粒體釋放Cyto C激活線(xiàn)粒體途徑，放大凋亡信號(hào)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而抑制T24裸鼠異位移植瘤的生長(zhǎng)。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量最多的細(xì)胞器，Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡時(shí)，細(xì)胞內(nèi)環(huán)境被擾亂，引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress，ERS)，并進(jìn)一步激發(fā)未折疊蛋白反應(yīng)，誘導(dǎo)下游轉(zhuǎn)錄因子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein，CHOP)表達(dá)，激活c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase，JNK)信號(hào)通路，并活化Casp-12啟動(dòng)凋亡程序。蟾毒它靈誘導(dǎo)CHOP表達(dá)以及蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase，PERK)和跨膜蛋白肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1，IRE1)磷酸化，促使Casp-12激活，觸發(fā)ERS誘導(dǎo)人骨肉瘤骨細(xì)胞MG-63凋亡[42]。蟾毒靈可活化肝癌細(xì)胞HepG-2和Huh-7，白血病細(xì)胞K562和K562/A02中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白IRE1α，增加JNK蛋白磷酸化，通過(guò)作用于IRE-JNK通路誘導(dǎo)ERS，致使細(xì)胞凋亡[43，44]。

2.3 抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移

當(dāng)腫瘤細(xì)胞具備高侵襲、高遷移能力時(shí)，可從原發(fā)部位，經(jīng)淋巴道，血管或體腔等途徑到達(dá)其他部位繼續(xù)生長(zhǎng)。這一轉(zhuǎn)移過(guò)程涉及細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)屏障被破壞、原部位腫瘤血管新生、上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)后細(xì)胞侵入體循環(huán)，從循環(huán)系統(tǒng)再植入新的器官組織并隨之增殖。華蟾素注射液可抑制人肝癌細(xì)胞HepG2中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factors，VEGFs)、基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)-2、9蛋白過(guò)度表達(dá)，避免ECM屏障被破壞，使腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移受阻[45]。內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC的分裂和增殖是腫瘤血管生成的重要條件，華蟾酥毒基劑量依賴(lài)性誘導(dǎo)BALB/c裸鼠結(jié)腸腫瘤組織中HUVEC內(nèi)皮細(xì)胞ROS聚積，下調(diào)HUVEC細(xì)胞中Bcl-2和低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor，HIF-1α)蛋白水平，使蛋白激酶 B(protein kinase B，PKB/Akt)/哺乳動(dòng)物類(lèi)雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)磷酸化減少，阻礙內(nèi)皮細(xì)胞Akt/mTOR/HIF-1α通路，顯著減少血管生成數(shù)目，抑制裸鼠瘤體生長(zhǎng)[46]。蟾毒靈可通過(guò)抑制人肝癌細(xì)胞BEL-7402糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β，GSK-3β)Ser9位點(diǎn)的磷酸化和β-catenin的核轉(zhuǎn)位，下調(diào)Wnt/β-catenin信號(hào)通路下游分子MMP-7、環(huán)氧化酶(cyclooxygenase，COX)-2和Cyc D1蛋白表達(dá)，增加細(xì)胞膜上腫瘤抑制因子E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-Cad)和β-catenin的表達(dá)，從而增加E-Cad/β-catenin復(fù)合物數(shù)量，以阻斷EMT[47]。沙蟾毒精(8 nM)顯著增加人前列腺癌細(xì)胞PC3細(xì)胞中E-Cad和胞質(zhì)緊密粘連蛋白1(zonula occludens-1，ZO-1)表達(dá)，降低E-Cad轉(zhuǎn)錄抑制因子E盒結(jié)合鋅指蛋白1(zinc finger E-box binding homeobox 1，ZEB1)和波形蛋白(vimentin，Vim)表達(dá)，抑制EMT的發(fā)生[48]。

2.4 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬

華蟾素可上調(diào)自噬標(biāo)志分子微管相關(guān)蛋白輕鏈3(microtubule-associated protein light chain 3，LC3)以及p62蛋白表達(dá)，提高Bax/Bcl-2的比例，同時(shí)觸發(fā)人膀胱癌細(xì)胞T24的凋亡和自噬[49]。蟾毒靈使人結(jié)直腸癌細(xì)胞LoVo中自噬相關(guān)基因(autophagy-related gene，Atg)-5、7，12和Beclin-1蛋白表達(dá)增加，同時(shí)，LC3-I轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)C3-II，通過(guò)自噬途徑發(fā)揮抗腫瘤作用[50]。研究表明，ROS-JNK 通路的激活與細(xì)胞自噬的關(guān)系密切。蟾毒靈在人結(jié)直腸癌細(xì)胞 HT-29 和 Caco-2 中可促進(jìn) ROS 的形成和積累，進(jìn)而激活 JNK 信號(hào)通路，上調(diào)細(xì)胞中 LC3-II、Beclin-1、Atg-5 蛋白表達(dá)，應(yīng)用 ROS、JNK 抑制劑后，可削弱蟾毒靈誘導(dǎo)自噬的能力，提示蟾毒靈誘導(dǎo)人結(jié)直腸癌細(xì)胞自噬與 ROS-JNK途徑相關(guān)[51]。同時(shí)，華蟾酥毒基可通過(guò)ROS/JNK/p38途徑誘導(dǎo)人骨肉瘤細(xì)胞U2OS發(fā)生自噬[52]。蟾蜍硫堇下調(diào)H22肝癌荷瘤小鼠血清中白介素(interleukin，IL)-6水平，抑制腫瘤組織中轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducers and activators of transcription，STAT)3和蛋白酪氨酸激酶(janus kinase，JAK)-2的過(guò)度激活，發(fā)揮抗炎活性，并上調(diào)自噬相關(guān)蛋白LC3-II、Atg-5、7和Beclin-1表達(dá)水平，通過(guò)抑制IL-6/JAK/STAT3通路誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的發(fā)生[53]。

2.5 逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥

多藥耐藥是腫瘤臨床治療中導(dǎo)致治療失敗和疾病復(fù)發(fā)的主要原因之一，多藥耐藥的誘發(fā)機(jī)制復(fù)雜，蟾酥因其多靶點(diǎn)的優(yōu)勢(shì)在逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥應(yīng)用中有巨大的潛力。華蟾毒它靈可促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞5-8F中抑癌基因FOXO1的表達(dá)，進(jìn)而抑制5-8F細(xì)胞相互蛋白非肌性肌球蛋白重鏈-9(non-muscle myosin heavy chain 9，MYH9)基因的表達(dá)，增加順鉑化療的敏感性，協(xié)同抑制鼻咽癌細(xì)胞侵襲[54]。華蟾毒它靈與吉非替尼聯(lián)用，抑制肺癌細(xì)胞A549中Cyc A、Cyc D、CDK-2、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor，HGF)的蛋白表達(dá)，阻礙肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體c-Met進(jìn)一步擴(kuò)增，靶向HGF/c-Met通路降低細(xì)胞的活力，加速細(xì)胞的凋亡進(jìn)程[55]。腫瘤干細(xì)胞具有極強(qiáng)的DNA損傷耐受能力，易對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。蟾毒靈顯著抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT116和LoVo的干性，降低干性標(biāo)記物跨膜糖蛋白CD133、CD44，八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(octamer-binding transcription factor 4，OCT4)以及耐藥蛋白ABCG2的表達(dá)，在體內(nèi)外均可逆轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥[56]。

綜上所述，蟾酥抗腫瘤作用涉及細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡及自噬等多個(gè)方面，從細(xì)胞水平研究蟾酥抗腫瘤機(jī)理，以蟾酥中蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)成分為主，蟾毒靈是其中研究最多的化合物，它可以通過(guò)促進(jìn)抑癌基因的表達(dá)、調(diào)節(jié)ROS水平、誘導(dǎo)DNA損傷、阻斷EMT的發(fā)生，上調(diào)自噬基因的表達(dá)以及逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性等，在腫瘤發(fā)生發(fā)展的各個(gè)階段發(fā)揮作用。除蟾毒靈外，華蟾酥毒基、蟾毒它靈、沙蟾毒精等亦具有良好的抗腫瘤活性。

3 結(jié)語(yǔ)

臨床應(yīng)用中，蟾酥制劑除抗腫瘤作用外，還有顯著的機(jī)體免疫調(diào)節(jié)作用，對(duì)比機(jī)制研究，并未檢索到與免疫直接相關(guān)的報(bào)道，可能與主以蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)單體化合物研究為主，這類(lèi)成分無(wú)免疫調(diào)節(jié)作用。蟾酥制劑發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用可能與華蟾素和蟾酥注射液的制備工藝中保留了大量活性多肽等水溶性物質(zhì)有關(guān)，但相關(guān)研究報(bào)道極少[57，58]。蟾酥抗腫瘤作用機(jī)制的研究報(bào)道較多，并涉及腫瘤發(fā)生發(fā)展的各個(gè)過(guò)程，但研究大部分集中在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，機(jī)制研究缺乏機(jī)體完整統(tǒng)一的內(nèi)環(huán)境和神經(jīng)體液調(diào)節(jié)。同時(shí)，多篇文獻(xiàn)報(bào)道，蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)成分在一定濃度范圍內(nèi)，對(duì)正常細(xì)胞有細(xì)胞毒作用，如，華蟾酥毒基對(duì)腦神經(jīng)元細(xì)胞HCN-2的IC50值42.5 μmol/L，其抑制作用主要與細(xì)胞中ROS以及Ca2+失衡有關(guān)[59]，并對(duì)人肺上皮細(xì)胞BEAS-2B的IC50值22.3 μmol/L[60]；蟾毒靈和沙蟾毒精對(duì)人食管上皮細(xì)胞Het-1A的IC50值分別為10.1和11.8 μmol/L[61]；脂蟾毒配基抑制胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞HPDE的活力，IC50值58.12 μmol/L[62]。由此分析蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)既是抗腫瘤的藥效物質(zhì)，又是毒性成分，但毒性是相對(duì)的，通過(guò)控制安全用藥劑量，可降低對(duì)正常細(xì)胞的毒性作用。因此，在細(xì)胞水平的研究基礎(chǔ)上，開(kāi)展動(dòng)物體內(nèi)機(jī)制研究，明確蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)成分的治療劑量和毒性劑量，為指導(dǎo)臨床安全、有效用藥，是極其必要的。此外，在蟾蜍內(nèi)酯類(lèi)成分研究基礎(chǔ)上，開(kāi)展蟾酥多肽和蟾毒色胺類(lèi)等藥效物質(zhì)和機(jī)理研究，進(jìn)一步研究蟾酥抗腫瘤的量-效-毒作用規(guī)律及作用機(jī)理，以充分發(fā)揮蟾酥扶正固本和清熱解毒的治療優(yōu)勢(shì)，為蟾酥抗腫瘤的安全、合理用藥，擴(kuò)大臨床適應(yīng)癥提供重要的科學(xué)依據(jù)。