李風(fēng)順， 喬俊卿， 張榮勝， 劉郵洲， 劉永鋒

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，江蘇 南京 210095； 2.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，江蘇 南京 210014)

水稻惡苗病是常見種傳病害，自1828年日本首次報(bào)道后，幾乎在世界各水稻種植區(qū)均有發(fā)生，在中國稻區(qū)分布廣泛，造成不同程度的危害，一般減產(chǎn)10%～20%，嚴(yán)重時(shí)達(dá)50%[1-2]。水稻惡苗病由藤倉鐮刀菌復(fù)合菌群引起，已報(bào)道的病原菌種屬包括藤倉鐮刀菌(Fusariumfujikuroi)、層出鐮刀菌(Fusariumproliferatum)、擬輪枝鐮刀菌(Fusariumverticilliodes)、Fusariumandiyazi、Fusariumasiaticum和禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)，其中藤倉鐮刀菌和層出鐮刀菌分布最廣，致病力最強(qiáng)，是引起水稻惡苗病的主要致病菌，其他種屬的鐮刀菌有混合侵染的現(xiàn)象[3-4]。水稻惡苗病癥狀主要表現(xiàn)為：苗期徒長、葉片細(xì)長呈淡綠色、矮化、死苗；成株期出現(xiàn)根部和莖基部腐爛，嚴(yán)重時(shí)整株枯死或徒長，長倒生根；水稻灌漿后，發(fā)病嚴(yán)重的植株籽粒帶菌(粉紅色霉層)[5-6]。

目前水稻生產(chǎn)上，采用化學(xué)藥劑拌種、浸種或包衣防治水稻惡苗病。截至2020年，中國農(nóng)藥信息網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示，中國登記防治水稻惡苗病的種衣劑有68種(包括單劑和復(fù)配劑)，產(chǎn)品有效成分均為化學(xué)藥劑，其中約80%的產(chǎn)品有效成分含有咪鮮胺、精甲霜靈、咯菌腈或多菌靈。隨著水稻惡苗病病菌對多菌靈、咪鮮胺產(chǎn)生抗藥性[7-9]，咯菌腈、精甲霜靈和氰烯菌酯成為市場上防治水稻惡苗病的主要制劑[10]。由于水稻惡苗病病菌對化學(xué)藥劑產(chǎn)生的抗藥性逐年上升，過量使用化學(xué)農(nóng)藥造成生態(tài)環(huán)境嚴(yán)重污染，農(nóng)藥殘留增加，嚴(yán)重危害人類健康。隨著中國植保綠色防控的推廣，生物防治成為綠色綜合防控技術(shù)中的重要措施。生物農(nóng)藥源于自然，對環(huán)境友好，在病蟲害綜合治理中，是一類理想的可替代或部分替代化學(xué)農(nóng)藥的產(chǎn)品，大力發(fā)展生物農(nóng)藥，符合當(dāng)前中國農(nóng)業(yè)和環(huán)境可持續(xù)發(fā)展的要求[11]。

中國在20世紀(jì)90年代即有關(guān)于防治水稻惡苗病的生防微生物篩選的相關(guān)研究，如陳志誼等[12]報(bào)道了利用拮抗芽孢桿菌防治水稻紋枯病和惡苗病；2006年，李斌等[13]報(bào)道了枯草芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌對水稻惡苗病病菌具有較好拮抗效果。已有研究主要是以水稻惡苗病病菌(Fusariummoniliforme)為指示菌篩選拮抗菌株，由于水稻惡苗病是多種菌群復(fù)合侵染，因此利用致病菌復(fù)合菌群為指示菌篩選拮抗菌株，更符合生產(chǎn)實(shí)際。本研究以不同種屬的惡苗病致病菌為指示菌篩選拮抗菌，通過溫室盆栽試驗(yàn)，最終獲得優(yōu)良生防促生菌株，以期為創(chuàng)制防治水稻惡苗病的種子處理劑提供具有潛力的菌株資源。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

土壤樣品采集于江蘇省南京市溧水區(qū)和常州市金壇區(qū)的水稻、西瓜、青菜、辣椒和安徽淮南的樟樹、紫荊、鵝掌楸、桂花和樸樹等植物根圍土壤，共16份。

供試菌株為實(shí)驗(yàn)室保存的水稻惡苗病病菌：Fusariumfujikuroi50-1、Fusariumasiaticum25-2、FusariumproliferatumE-Q、FusariumgraminearumDG-9、FusariumgraminearumDG-11、Fusariumproliferatum63-2。水稻品種：金剛30。

水稻惡苗病病菌活化、培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基。拮抗細(xì)菌的分離、純化及發(fā)酵培養(yǎng)等所用的培養(yǎng)基為1/2 TSB、M715、LB、YPGA培養(yǎng)基，生物膜形成所用培養(yǎng)基為Msgg培養(yǎng)基，芽孢桿菌產(chǎn)孢所用的培養(yǎng)基為SSM培養(yǎng)基。各培養(yǎng)基配方見表1。

表1 本研究所用培養(yǎng)基

1.2 拮抗細(xì)菌的分離和純化

采用稀釋涂板法進(jìn)行拮抗細(xì)菌的分離。稱取10 g土壤于90 ml無菌水中，25 ℃ 150 r/min振蕩1 h后，即得到所需的土壤懸浮液，將土壤懸浮液進(jìn)行10倍梯度稀釋，稀釋液分別涂布分離平板(分離培養(yǎng)基為LB、YPGA、1/2TSB、M715)。平板于28 ℃生長2～5 d，依據(jù)菌落形態(tài)、大小、色澤等挑選不同分離物，轉(zhuǎn)接至相應(yīng)培養(yǎng)平板，通過劃線法進(jìn)行單胞純化，直至有單菌落為止。本研究共分離獲得432株細(xì)菌，并進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1.3 拮抗細(xì)菌的篩選

采用孢子萌發(fā)抑制法進(jìn)行拮抗細(xì)菌初步篩選。6株水稻惡苗病病菌在PDA平板上活化，生長4～5 d后，用無菌水洗滌孢子，分別將孢子液調(diào)整為1 ml 1×106個(gè)孢子，隨后，將6種孢子液等體積混合，并調(diào)整混合孢子液濃度為1 ml 1×105個(gè)孢子，吸取100 μl均勻涂布于PDA平板，晾干備用。將單胞純化后的細(xì)菌用無菌牙簽接入PDA平板培養(yǎng)，28 ℃培養(yǎng)3～4 d，調(diào)查細(xì)菌抑制孢子萌發(fā)的情況，3次重復(fù)。

采用平板對峙試驗(yàn)法進(jìn)行拮抗細(xì)菌復(fù)篩。6株水稻惡苗病病菌在PDA平板上活化，生長2～3 d后，沿生長茂盛的菌落邊緣打孔(直徑5 mm)制備菌餅，將菌餅置于PDA平板中央，先將其放入28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，備用。以菌餅為中心，按“十”字方位將單胞純化后的細(xì)菌接入已培養(yǎng)24 h的PDA平板，每菌株重復(fù)3次，28 ℃恒溫培養(yǎng)直到對照平板長滿真菌時(shí)，調(diào)查拮抗菌抑菌帶寬。

1.4 拮抗菌生物學(xué)相關(guān)特性的測定

1.4.1 拮抗細(xì)菌的生物膜形成能力和群集游動(dòng)能力(Swarming)檢測 將拮抗菌株平板活化，單胞接入LB培養(yǎng)液中過夜培養(yǎng)，再次轉(zhuǎn)接入新鮮LB培養(yǎng)液中，待對數(shù)生長期OD600為1.0時(shí)，取菌液1 μl滴于Msgg培養(yǎng)基[14]中，28 ℃培養(yǎng)，分別于24 h、36 h和48 h觀察菌株生物膜情況，3次重復(fù)。同時(shí)，將上述菌液取1 μl滴于0.7% LB平板中心，28 ℃培養(yǎng)，分別于24 h和48 h觀察菌株群集游動(dòng)情況，測量菌落直徑，3次重復(fù)。

1.4.2 拮抗細(xì)菌產(chǎn)生脂肽類物質(zhì)的檢測 將拮抗菌株平板活化，單胞接入LB培養(yǎng)液中30 ℃180 r/min培養(yǎng)12～16 h；隨后，將培養(yǎng)液按照1%接種體積接入新鮮LB培養(yǎng)液中，30 ℃ 180 r/min培養(yǎng)48 h，利用鹽酸沉淀法提取脂肽類抗生素。脂肽類物質(zhì)粗提物經(jīng)0.22 μm無菌濾膜過濾，進(jìn)行高效液相色譜(HPLC)檢測。具體檢測方法如下：HPLC分析采用C18柱(Sephasil Peptide C18 5 μm ST 4.6/250)；流動(dòng)相為乙腈(A)、水(B)和0.1%三氟乙酸；采用梯度檢測方法(0～25 min，60% A和40% B; 25～35 min, 70% A和30% B; 35～60 min, 93% A和7% B)；流速為0.8 ml/min，進(jìn)樣量為10 μl，檢測波長為210 nm，柱溫為30 ℃[15]。

1.5 拮抗細(xì)菌種屬分子鑒定

離心收集拮抗細(xì)菌LB過夜培養(yǎng)的菌體，按照常規(guī)SDS(十二烷基硫酸鈉)堿裂解法小量提取基因組DNA。以細(xì)菌基因組為模板擴(kuò)增16S rRNA 部分序列。16S rRNA序列擴(kuò)增引物：16S F(27f),5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；16S R (1492r),5′-GGTTACCTTACGACTT-3′。測序由北京擎科生物技術(shù)有限公司完成，通過NCBI 網(wǎng)站的BLAST 程序進(jìn)行同源性比對，采用Mega軟件建立系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.6 拮抗細(xì)菌對水稻的促生作用評價(jià)

將水稻健康種子在體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇溶液中浸泡2 min，用無菌水沖洗2～3次，再用75%乙醇浸泡1 min，用無菌水沖洗至無乙醇?xì)埩艉笤跓o菌濾紙上晾干，每30粒分裝于滅菌離心管。分別選用OD600=1.00、OD600=0.10和OD600=0.01的拮抗菌孢子液(利用芽孢桿菌產(chǎn)芽孢培養(yǎng)基培養(yǎng)至90%產(chǎn)芽孢，芽孢離心收集后用無菌水稀釋到相應(yīng)濃度)浸種24 h，以無菌水作為對照。將種子取出，保持濕潤狀態(tài)，室溫催芽72 h記錄萌發(fā)情況，每處理測量10粒正常萌發(fā)種子的根長，比較不同濃度拮抗菌孢子液對種子根長的促生作用。用OD600=0.10的各拮抗菌的孢子液(無菌水稀釋)浸種已消毒的水稻種子24 h后，室溫催芽，待露白后將種子播種于一次性水杯中，置于溫室(16～25 ℃)中生長，每杯10粒，每處理重復(fù)3次。30 d后調(diào)查所有植株的株高和鮮質(zhì)量，評估拮抗菌的促生效果。

1.7 拮抗細(xì)菌對水稻苗期惡苗病的防效評價(jià)

拮抗細(xì)菌平板活化后，單胞接入LB培養(yǎng)基， 30 ℃ 180 r/min培養(yǎng)12～16 h，按照1%接種體積接入YPGA培養(yǎng)液中，30 ℃ 180 r/min培養(yǎng)48～72 h，待拮抗細(xì)菌細(xì)胞80%以上成為芽孢后，收集發(fā)酵菌液備用。將健康種子與試驗(yàn)田留存的自然發(fā)病的惡苗病水稻種子混合(健康種子∶惡苗病種子=4∶1)，分裝50粒到15 ml滅菌離心管中，分別用OD600=1.0和OD600=0.1的拮抗細(xì)菌發(fā)酵菌液浸種24 h，用無菌水和25%咪鮮胺乳油(4 000倍稀釋液)作為空白和化學(xué)藥劑對照，重復(fù)3次。種子催芽后播種于盆缽中，30 d后調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算發(fā)病率和防治效果。

發(fā)病率=發(fā)病株數(shù)/總株數(shù)×100%。

防治效果=[(對照發(fā)病率-處理發(fā)病率)/對照發(fā)病率]×100%。

1.8 數(shù)據(jù)分析方法

數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析采用Excel和DPS軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗細(xì)菌的分離、純化和篩選

將16份土壤樣品稀釋懸浮液涂布于不同的分離培養(yǎng)基平板上，共分離獲得不同菌落形態(tài)的細(xì)菌分離株432株，利用6株水稻惡苗病病菌孢子混合液初步篩選獲得17株對孢子萌發(fā)有抑制作用的菌株。隨后，通過平板對峙試驗(yàn)評價(jià)17株菌株對6株指示菌菌絲生長的抑制效果，結(jié)果(表2)顯示，6株拮抗菌對不同的水稻惡苗病病菌都具有較為顯著的抑制效果，這6株菌株分別是LSRS26、JTRSM1、JTGSL12、JTGSM22、JTLM2和AHGHL2。

表2 拮抗菌對水稻惡苗病病菌的平板抑制作用

2.2 拮抗細(xì)菌的生防相關(guān)特征評價(jià)

本研究對篩選獲得的6株拮抗菌進(jìn)行了生物膜形成能力、群集游動(dòng)能力(Swarming)和芽孢桿菌脂肽類物質(zhì)產(chǎn)生情況的分析。

生物膜形成試驗(yàn)結(jié)果(圖1)顯示，在生物膜形成培養(yǎng)基Msgg中，拮抗菌培養(yǎng)24 h時(shí)，只有菌株JTRSM1形成了較為致密的菌膜，而菌株LSRS26、JTGSL12和AHGHL2僅僅在培養(yǎng)基表面看到非常單薄的菌膜；隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，在36 h時(shí)，菌株LSRS26、JTRSM1、JTGSL12和AHGHL2都可以形成致密褶皺的生物膜，在培養(yǎng)48 h時(shí)，4株菌的生物膜更加致密、褶皺更多(圖1A)；但是菌株JTGSM22和JTLM2培養(yǎng)48 h后，仍然不能形成明顯的生物膜。4株菌株在培養(yǎng)48 h形成生物膜的干質(zhì)量分析結(jié)果(圖1B)顯示，菌株LSRS26、JTRSM1和AHGHL2形成的生物膜干質(zhì)量基本相當(dāng)，為4.40～4.65 mg，菌株JTGSL12形成生物膜的干質(zhì)量略低，為3.37 mg。

A：拮抗菌形成的生物膜表形；B：拮抗菌培養(yǎng)48 h形成的生物膜干質(zhì)量。圖1 拮抗菌在Msgg培養(yǎng)基中形成生物膜的情況Fig.1 Biofilm formation of antagonistic bacteria in Msgg culture

群集游動(dòng)能力試驗(yàn)結(jié)果(圖2A)顯示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，5株拮抗菌的Swarming菌落直徑逐漸增加，但菌株JTLM2的群集游動(dòng)能力較差，基本未發(fā)生游動(dòng)現(xiàn)象。此外，在培養(yǎng)48 h時(shí)，菌株JTGSM22游動(dòng)能力最強(qiáng)，直徑達(dá)7 cm；游動(dòng)菌落直徑比較結(jié)果(圖2B)表明，各菌株游動(dòng)能力強(qiáng)弱：JTGSM22>JTGSL12>LSRS26>AHGHL2>JTRSM1>JTLM2。

A：拮抗菌群集游動(dòng)平板表形；B：拮抗菌群集游動(dòng)擴(kuò)散直徑。圖2 拮抗菌在0.7% LB平板的群集游動(dòng)能力Fig.2 Swarming ability of antagonistic bacteria in 0.7% LB plate

采用鹽酸(HCl)沉淀法提取芽孢桿菌脂肽類物質(zhì)粗提物，其中菌株JTGSM22 和JTLM2發(fā)酵液加HCl后未產(chǎn)生沉淀，其余4株菌株均產(chǎn)生沉淀并提取到脂肽類物質(zhì)，隨后通過高效液相色譜檢測發(fā)酵產(chǎn)生脂肽類抗生素的情況，結(jié)果如圖3所示，菌株LSRS26、JTGSL12、JTRSM1、AHGHL2 均可產(chǎn)生表面活性素(Surfactin)、伊枯草菌素(Iturin)和范革素(Fengycin)。

Surfactin：表面活性素；Fengycin：范革素；Iturin：伊枯草菌素。圖3 高效液相色譜檢測拮抗細(xì)菌產(chǎn)生脂肽類物質(zhì)情況Fig.3 High performance liquid chromatography (HPLC) detection of lipopeptides produced by antagonistic bacteria

2.3 拮抗細(xì)菌種屬的鑒定

利用16S rDNA基因部分序列，對6株拮抗菌進(jìn)行種屬鑒定。PCR產(chǎn)物經(jīng)回收后測序，測序結(jié)果在NCBI進(jìn)行同源性比對，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖4)。序列比對結(jié)果表明，菌株LSRS26、JTRSM1、JTGSL12和AHGHL2是Bacillusamyloliquefaciens(解淀粉芽孢桿菌)，菌株JTGSM22和JTLM2是Paenibacillusjamilae(杰米拉類芽孢桿菌)。

Bacillus amyloliquefaciens：解淀粉芽孢桿菌；Paenibacillus jamilae：杰米拉類芽孢桿菌。圖4 拮抗菌16S rDNA部分序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Phyligenetic tree constructed by part region of the 16S rDNA of antagonistic bacteria

2.4 拮抗細(xì)菌對水稻的促生作用

綜合拮抗細(xì)菌的抑菌活性、生防相關(guān)特征、種屬鑒定以及后期發(fā)酵生產(chǎn)的難易等因素，本研究選擇拮抗菌LSRS26、JTRSM1和JTGSL12進(jìn)行水稻促生作用評價(jià)。利用拮抗菌不同濃度的孢子液對水稻種子進(jìn)行浸種處理，評價(jià)其對種子發(fā)芽和胚根伸長的促進(jìn)作用。試驗(yàn)結(jié)果(圖5)顯示，當(dāng)用OD600=0.01和1.00的拮抗菌芽孢菌液浸種后，LSRS26、JTRSM1和JTGSL12菌株對水稻種子發(fā)芽都沒有促進(jìn)作用；當(dāng)用OD600=0.10的菌液浸種后，菌株LSRS26和JTRSM1對水稻發(fā)芽和胚根伸長都具有促進(jìn)作用，JTGSL12處理與對照無顯著差異。盆栽苗期株高和植株鮮質(zhì)量數(shù)據(jù)分析結(jié)果(圖6)表明，用OD600=0.10的菌液浸種后，3株芽孢桿菌對水稻植株鮮質(zhì)量和株高都具有不同程度的促進(jìn)作用，其中JTGSL12對水稻植株鮮質(zhì)量增加的促進(jìn)效果最為顯著。用菌株JTGSL12處理后，水稻株高平均達(dá)23.57 cm，植株鮮質(zhì)量平均為0.372 g；用菌株JTGSM1處理后，水稻植株鮮質(zhì)量平均為0.325 g。

圖5 拮抗細(xì)菌對水稻種子發(fā)芽和胚根伸長的促進(jìn)作用Fig.5 Promotion effects of antagonistic bacteria on rice germination and radicula elongation

圖6 拮抗細(xì)菌(OD600=0.10)對水稻株高和鮮質(zhì)量的促生作用Fig.6 Promotion effects of antagonistic bacteria on rice plant height and fresh weight

2.5 拮抗細(xì)菌對水稻苗期惡苗病的盆栽防治效果

利用不同濃度(OD600=1.0和OD600=0.1)菌液對帶病稻種浸種24 h后，進(jìn)行催芽播種，并在30 d時(shí)調(diào)查水稻植株惡苗病發(fā)病情況，結(jié)果(圖7)顯示，在菌液OD600=1.0時(shí)浸種，3株芽孢桿菌對水稻惡苗病都表現(xiàn)出不同程度的防治作用，防效為58.00%～72.00%，其中JTGSL12的防效最高，為71.62%。在菌液OD600=0.1時(shí)浸種，3株芽孢桿菌對水稻惡苗病的防效均比菌液OD600=1.0時(shí)顯著下降，防效為32%～50%，其中LSRS26的防效較好。

不同處理間標(biāo)有不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。圖7 拮抗菌發(fā)酵菌液對水稻惡苗病苗期防效評價(jià)Fig.7 Control effects of antagonistic bacteria on rice bakanae disease in seedling stage

3 結(jié)論與討論

由藤倉鐮刀菌復(fù)合菌群引起的水稻惡苗病近年來在中國稻區(qū)時(shí)有發(fā)生，造成不同程度的危害，其中藤倉鐮刀菌、層出鐮刀菌分布最廣，致病力最強(qiáng)，也是引起江蘇省水稻惡苗病的主要病原菌種類[16]。由于惡苗病病菌對常用化學(xué)藥劑咪鮮胺、氰烯菌酯等的抗藥性增強(qiáng)和植保綠色防控技術(shù)的推廣，使用生物防治技術(shù)防治水稻惡苗病的相關(guān)研究逐漸增多。有研究報(bào)道，枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、多黏芽孢桿菌和放線菌等可用于防治水稻惡苗病[17-21]。本研究從植物根際土壤中分離獲得不同形態(tài)的細(xì)菌432株，以不同水稻惡苗病致病菌F.fujikuroi、F.proliferatum、F.asiaticum、F.graminearum為指示菌，篩選獲得6株對不同水稻惡苗病病菌均有較好抑制效果的拮抗菌，其中4株鑒定為解淀粉芽孢桿菌，2株鑒定為杰米拉類芽孢桿菌。本研究獲得的拮抗菌是以惡苗病致病菌復(fù)合菌群為指示菌進(jìn)行篩選，區(qū)別于以往報(bào)道的以單一病原菌為指示菌的篩選；這些拮抗菌更適用于防治復(fù)合菌群引起的水稻惡苗病，可為開發(fā)適用范圍更廣的生防制劑積累菌株資源。

芽孢桿菌活體微生物制劑效價(jià)的穩(wěn)定性和貨架期主要受其抑菌活性物質(zhì)、定殖能力和芽孢形成能力的影響。拮抗菌的生物膜形成能力與其在生境中的定殖能力密切相關(guān)，游動(dòng)能力決定了生防菌在根圍的營養(yǎng)攝取能力，脂肽類抗生素的產(chǎn)生直接與生防芽孢桿菌的抑菌效果密切相關(guān)[22-25]。本研究在篩選獲得6株拮抗菌后，進(jìn)一步評估了菌株的生物膜形成能力、群集游動(dòng)能力和芽孢桿菌產(chǎn)脂肽類物質(zhì)的情況。解淀粉芽孢桿菌LSRS26、JTGSL12和JTGSM1在對惡苗病病菌的抑菌效果、生物膜形成能力、群集游動(dòng)能力和產(chǎn)抑菌物質(zhì)方面表現(xiàn)較為優(yōu)秀，且易于生產(chǎn)、發(fā)酵形成芽孢；而菌株JTLM2和JTGSM22為杰米拉類芽孢桿菌，與多黏芽孢桿菌同源，雖有較強(qiáng)的抑菌活性，但JTLM2的游動(dòng)能力最差，JTGSM22在培養(yǎng)基中產(chǎn)生的多糖較多，不利于定殖和液體生產(chǎn)、發(fā)酵。綜合以上分析，本研究最終選擇芽孢桿菌LSRS26、JTGSL12和JTGSM1進(jìn)一步開展對水稻的促生作用和對惡苗病的防治效果研究。

隨著測序技術(shù)的發(fā)展，早期枯草芽孢桿菌菌群中的解淀粉芽孢桿菌被進(jìn)一步劃分為單一的新種[26]?；蚪M序列分析發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌比枯草芽孢桿菌含有更多的次生代謝產(chǎn)物合成基因簇，且可產(chǎn)生種類更多的抑菌物質(zhì)，如解淀粉芽孢桿菌FZB42可以產(chǎn)生Surfactin、 Fengycin、Bacillomycin D等，而枯草芽孢桿菌模式株Bs168雖然含有部分脂肽類抗生素的合成基因簇，但不能正常合成相應(yīng)物質(zhì)[27]。本研究中，高效液相色譜檢測結(jié)果表明，菌株LSRS26、JTGSL12和JTGSM1產(chǎn)生的Iturin和Fengycin相對較多，而這些物質(zhì)是抑制真菌的主要活性物質(zhì)。本研究按照平板抑菌效果、定殖能力、游動(dòng)能力和產(chǎn)抑菌物質(zhì)能力，并結(jié)合后期菌株發(fā)酵難易程度等多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)篩選和評價(jià)生防菌，與郭堅(jiān)華等[28]的研究思路類似，并進(jìn)行了必要的擴(kuò)展，這更有利于精準(zhǔn)獲得在田間具有潛在應(yīng)用價(jià)值的菌株資源。

水稻種植大戶主要采用化學(xué)種子處理劑進(jìn)行水稻惡苗病的防治，隨著國家農(nóng)藥、化肥雙減工作的推進(jìn)，綠色防控勢在必行[29-30]，而微生物農(nóng)藥使用是其中的重要部分，因此，生防菌篩選確定后，繼續(xù)研發(fā)生物農(nóng)藥制劑是推進(jìn)市場應(yīng)用的必然過程。本研究團(tuán)隊(duì)后續(xù)將以篩選獲得的生防菌株作為材料，進(jìn)一步研發(fā)防治水稻惡苗病的種子處理劑。雖然，生物防治越來越多地應(yīng)用于病害防治領(lǐng)域，但與化學(xué)藥劑防治相比，生物防治效果相對較差，且不穩(wěn)定。因此，可以在種子處理劑研發(fā)過程中，加強(qiáng)助劑的篩選、生防菌與現(xiàn)有化學(xué)農(nóng)藥的兼容性等方面的研究，篩選可以增效的助劑和具有兼容性的化學(xué)藥劑，后期田間生產(chǎn)中可以考慮將生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥混用，既降低化學(xué)農(nóng)藥用量，又可以保證防治效果。