弓 寶 ，王燦紅 ，王新騰 ，吳玉蘭 ，魏建和 ，2＊＊

（1. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所海南分所/海南省南藥資源保護(hù)與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&國(guó)家中醫(yī)藥管理局沉香可持續(xù)利用重點(diǎn)研究室 ?？?570311；2. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所/中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&瀕危藥材繁育國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室 北京 10019）

失眠多由內(nèi)在情志或外在工作壓力等因素引起，目前失眠或入睡困難已經(jīng)成為臨床常見(jiàn)疾病之一，越來(lái)越多的人在睡眠及睡眠質(zhì)量方面得不到保障[1]。臨床常用的鎮(zhèn)靜催眠藥品不良反應(yīng)較多，人們長(zhǎng)期服用均會(huì)出現(xiàn)不同程度的停藥反跳、耐受性，甚至產(chǎn)生藥物依賴癥等等不良反應(yīng)[2-3]，因此醫(yī)藥學(xué)家們一直在尋找安全有效的替代藥物。

沉香在我國(guó)香料界及傳統(tǒng)醫(yī)藥領(lǐng)域擁有上千年的使用歷史[5]，當(dāng)白木香樹(shù)的樹(shù)干或枝條受到外界傷害刺激后會(huì)自發(fā)產(chǎn)生的一種樹(shù)脂類物質(zhì)，那么含有這種樹(shù)脂的木材便是沉香[4]。沉香傳統(tǒng)的使用方法以直接熏點(diǎn)吸入的方式居多，具有鎮(zhèn)靜安神、改善睡眠的功效[6]，但是其吸入助睡眠藥效和作用機(jī)制尚未闡釋清楚。隨著通體結(jié)香技術(shù)的廣泛應(yīng)用和推廣，國(guó)內(nèi)外種植沉香的面積逐年擴(kuò)大，沉香資源問(wèn)題得到了解決[7]，沉香市場(chǎng)上相關(guān)產(chǎn)品也日益增多，沉香線香作為沉香主要的產(chǎn)品形式之一，因其使用和攜帶方便，備受消費(fèi)者的重視和歡迎[6]。已有報(bào)道顯示，沉香香粉和揮發(fā)油熏香吸入具有鎮(zhèn)靜抑制自主活動(dòng)及促睡眠作用[8-11]。但是，有關(guān)線香以傳統(tǒng)燃燒熏香吸入的鎮(zhèn)靜催眠作用及作用機(jī)理一直未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

本研究采用自制熏香儀，應(yīng)用傳統(tǒng)熏點(diǎn)沉香線香的方法，觀察其對(duì)失眠模型小鼠協(xié)同戊巴比妥鈉睡眠狀況以及行為學(xué)的影響，此外檢測(cè)沉香線香熏點(diǎn)吸入后，失眠模型小鼠體內(nèi)5-HT 等神經(jīng)遞質(zhì)水平變化以及與Glu 能系統(tǒng)代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白如GluR1 及VGluT1表達(dá)的影響，初次探究以傳統(tǒng)熏點(diǎn)沉香方式吸入給藥后，其鎮(zhèn)靜安神作用及其可能的機(jī)制，為沉香線香等熏香類醫(yī)藥產(chǎn)品臨床應(yīng)用及后期沉香大健康產(chǎn)業(yè)的優(yōu)化升級(jí)提供重要的參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

自制熏香儀（50 cm × 50 cm× 40 cm 正方體，其內(nèi)部放置1 個(gè)20 cm×20 cm×20 cm 鏤空的圓柱體結(jié)構(gòu)，中間可放置熏香香插）；自主活動(dòng)儀（Shanghai Xinsoft Information Technology Co.,Ltd.,Serial:(RD-1118-COM4)；沉香線香（沉香加工中心制備）；戊巴比妥鈉（LOT NO: top2017012301, Merck, USA）；地西泮片（LOT NO: 20200921, Taiyuan Zhenxing Pharmaceutical Co., Ltd.,）；5-HT 試劑盒（LOT NO: DRE30136, Beijing Bosheng Jingwei Technology Co., Ltd.,）、GABAA試劑盒（LOT NO: DRE31429, Beijing Bosheng Jingwei Technology Co., Ltd.,）、Glu 試 劑 盒（LOT NO:DRE31214, Beijing Bosheng Jingwei Technology Co.,Ltd.,）、SDS-PAGE 凝 膠 制 備 試 劑 盒（LOT NO:HP201501, Wuhan Servicebio Technology Co, Ltd.,）、腺苷 試 劑 盒 :（LOT NO: DRE31229, Beijing Bosheng Jingwei Technology Co.,Ltd.,）、BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒（LOT NO: BL522A, Beijing Labgic Technology Co,Ltd.,）、GluR1 一 抗（LOT NO: AF2473, BiYuntian Biotechnology Co., Ltd.,）、VGluT1 一 抗（LOT NO: bs-11267R, Beijing Boosen Biotechnology Co., Ltd.,）、山羊抗兔二抗（LOT NO: A0208, BiYuntian Biotechnology Co.,Ltd.,）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

購(gòu)買雄性昆明小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，體質(zhì)量區(qū)間為18-22 g，由海南省藥物研究所有限公司提供（SCXK[瓊]2019-0004）；SPF級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)室中常規(guī)飼養(yǎng)，環(huán)境溫度維持25±1℃，環(huán)境濕度維持50±5%，日夜光照時(shí)間為12 h:12 h，3天適應(yīng)期后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組造模及給藥

將動(dòng)物按照隨機(jī)法分成：空白對(duì)照組，氯苯丙氨酸模型組，地西泮對(duì)照組（2.5 mg·kg-1），低、中、高劑量線香熏香組：0.25 g 線香（相當(dāng)于100 mg·kg-1沉香醇提物），0.5 g 線香（相當(dāng)于200 mg·kg-1沉香醇提物）、1 g線香（相當(dāng)于400 mg·kg-1沉香醇提物），共設(shè)6組，每組10 只小鼠?？瞻讓?duì)照組與氯苯丙氨酸模型組不作相應(yīng)處理；地西泮對(duì)照組采用腹腔注射方法給予地西泮；低、中、高劑量線香熏香組動(dòng)物置薰香儀中進(jìn)行熏香，分別稱重0.25，0.5，1.0 g沉香線香放置到熏香儀中的香插上點(diǎn)燃，將小鼠放入薰香儀，薰香1 h/次，連續(xù)給藥7天。第1次和第2次給藥后，模型組及給藥組均按照300 mg·kg-1劑量注射給予對(duì)氯苯丙氨酸，連續(xù)2天，制備失眠模型。參照文獻(xiàn)[12-14]，如小鼠表現(xiàn)為體重減輕、毛發(fā)凌亂、光澤消失且具有一定強(qiáng)攻擊性等情況發(fā)生，則判斷為造模成功。

2.2 沉香線香熏點(diǎn)吸入對(duì)失眠模型小鼠的睡眠觀察

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按2.1 法分組后進(jìn)行造模并給藥，模型組及熏香各組腹腔注射給予戊巴比妥鈉（50 mg·kg-1），用計(jì)時(shí)器記錄動(dòng)物入睡時(shí)間以及睡眠時(shí)長(zhǎng)，記錄時(shí)間精確到秒（S）。

2.3 沉香線香熏點(diǎn)吸入對(duì)失眠模型小鼠自主活動(dòng)的觀察

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按2.1 法分組后進(jìn)行造模及給藥，放置在動(dòng)物自主活動(dòng)儀內(nèi)進(jìn)行行為學(xué)觀察，分析記錄各組小鼠10 min 內(nèi)在活動(dòng)中央?yún)^(qū)域的停留時(shí)間、整個(gè)活動(dòng)區(qū)域動(dòng)物運(yùn)動(dòng)的總路程以及動(dòng)物運(yùn)動(dòng)的平均速度，每組觀察實(shí)驗(yàn)間隔，使用消毒酒精擦拭場(chǎng)箱，并清潔箱底糞便。測(cè)試時(shí)保持周圍環(huán)境安靜。

2.4 ELISA 法對(duì)沉香線香熏點(diǎn)吸入各組小鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)水平測(cè)定

選取2.3 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)后的小鼠，用乙醚麻醉后，將小鼠處死并在冰塊上取出腦組織，用醫(yī)用NaCl 溶液洗凈，濾紙擦干稱取重量。將腦中海馬組織剝離出來(lái)，冰浴條件下加入溫度為4℃的醫(yī)用NaCl冷凍溶液混合進(jìn)行勻漿后，低溫條件下，在每分鐘3000 轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速下離心15 min，離心液保存于-20℃低溫冰箱內(nèi)。依據(jù)試劑盒測(cè)定的方法要求制作相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將測(cè)定樣品中5-HT、Glu、AD、GABAA的 OD 值帶入，計(jì)算各組小鼠腦組織內(nèi)5-HT等遞質(zhì)的水平變化。

2.5 Western blot 法對(duì)腦內(nèi)海馬體相關(guān)蛋白表達(dá)的測(cè)定

將小鼠海馬體腦組織從全腦中分離，加入0.9%NaCl 溶液勻漿，離心，棄去上清液，加入RIPA 裂解液后進(jìn)行蛋白定量，采用試劑盒的方法，應(yīng)用酶標(biāo)儀對(duì)海馬體腦組織中的蛋白進(jìn)行濃度檢測(cè)，進(jìn)行配膠后加上樣量電泳至PVDF膜上，用5%脫脂奶粉封閉1 h后，加 1:2000 的一抗 β-actin，1:1000 的 GluR1 以及 1:1000的VGluT1。樣本置40℃溫度下過(guò)夜，二抗置于室溫條件下孵育后，采用凝膠成像儀成像的方法測(cè)定。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理及數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（）的形式呈現(xiàn)，并使用 GraphPad Prism 軟件繪制成柱形圖展示。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 沉香線香熏香吸入對(duì)小鼠睡眠的影響

觀察沉香線香熏點(diǎn)吸入后，觀察戊巴比妥鈉協(xié)同作用下對(duì)小鼠睡眠的影響情況，評(píng)價(jià)熏香吸入對(duì)睡眠作用的影響[15-22]，課題組在小鼠不死亡，而翻正反應(yīng)消失的前提下，參考前期實(shí)驗(yàn)研究使用劑量[12]，統(tǒng)計(jì)小鼠入眠時(shí)間及睡眠時(shí)長(zhǎng)（圖1）。從結(jié)果可以看出，模型組睡眠觀察指標(biāo)與空白組睡眠觀察指標(biāo)比較，模型組小鼠入睡時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)（P＜0.01）且睡眠時(shí)長(zhǎng)減少（P＜0.05），體現(xiàn)造模方法可行；熏點(diǎn)線香組與模型組的睡眠觀察指標(biāo)相比較可以看出，熏香吸入高、中、低劑量組均能顯著減少失眠小鼠的入眠時(shí)間（P＜0.05或P＜0.01），說(shuō)明沉香線香熏點(diǎn)吸入可以促進(jìn)小鼠進(jìn)入睡眠狀態(tài)；與模型組比較發(fā)現(xiàn)，熏香吸入中劑量組能顯著增加小鼠睡眠時(shí)長(zhǎng)（P＜0.05），說(shuō)明熏點(diǎn)吸入沉香線香可提高失眠小鼠的睡眠質(zhì)量；而熏香吸入的低劑量組和高劑量組則影響不顯著，可能與初始劑量不足，而加大劑量后出現(xiàn)先揚(yáng)后抑的拋物線反應(yīng)；臨床上應(yīng)用鎮(zhèn)靜安神類藥物時(shí)也發(fā)現(xiàn)，低劑量時(shí)有鎮(zhèn)靜促睡眠作用，隨著劑量加大反而出現(xiàn)興奮樣的反轉(zhuǎn)效應(yīng)?？梢?jiàn)隨著劑量加大，藥效不是一直隨之增強(qiáng)，到達(dá)一定程度可能會(huì)出現(xiàn)反作用，這也提示沉香熏香可能有“雙向調(diào)節(jié)作用”，需進(jìn)一步研究闡釋。

圖1 沉香線香熏點(diǎn)吸入對(duì)失眠小鼠睡眠狀況的觀察

3.2 沉香線香熏點(diǎn)吸入對(duì)失眠模型小鼠自主活動(dòng)的觀察

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處于新環(huán)境下，其自主活動(dòng)的表現(xiàn)、探索行為以及緊張程度都會(huì)發(fā)生變化，而曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)這些變化常用的方法之一，一般作為評(píng)價(jià)動(dòng)物行為變化、動(dòng)物是否出現(xiàn)焦慮或抑郁行為等方面被廣泛使用[23]。除空白對(duì)照組外，其余各組小鼠熏點(diǎn)吸入沉香線香后，放入曠場(chǎng)中進(jìn)行自主活動(dòng)觀察實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用計(jì)算機(jī)統(tǒng)計(jì)軟件考察小鼠總運(yùn)動(dòng)路程（mm）、運(yùn)動(dòng)平均速度（mm·s-1）及靜止時(shí)間（s）等指標(biāo)（圖2）。從結(jié)果看出，造模后模型小鼠的運(yùn)動(dòng)路程和運(yùn)動(dòng)速度變化不明顯，而小鼠靜止的時(shí)間減少（P＜0.05）；而熏點(diǎn)吸入沉香線香后，低、中劑量熏點(diǎn)線香組的自主活動(dòng)均顯著減少（P＜0.05），而高劑量熏點(diǎn)線香組的變化反而不顯著；低、中、高劑量組的動(dòng)物在靜止時(shí)間指標(biāo)上均顯著增加（P＜0.01），說(shuō)明沉香線香熏點(diǎn)吸入可以增加動(dòng)物安靜狀態(tài)；其與地西泮對(duì)照組觀測(cè)指標(biāo)相比無(wú)差異性（P ＞0.05），說(shuō)明熏點(diǎn)沉香線香和陽(yáng)性對(duì)照藥作用無(wú)顯著差異。

圖2 沉香線香熏香吸入對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響

3.3 沉香線香熏香后小鼠腦組織中Glu、GABAA、GABAA/Glu、5-HT、AD的含量變化

現(xiàn)代研究表明Glu、GABA、5-HT、AD 等神經(jīng)遞質(zhì)的水平高低以及GABA/Glu 的平衡均在睡眠—覺(jué)醒節(jié)律中起到重要的作用，觀察其含量的高低對(duì)睡眠狀況起到一定的指導(dǎo)意義[24]（圖3）。從結(jié)果可以看出，失眠模型小鼠的Glu 的水平增加比較明顯（P＜0.05），而5-HT 的含量和GABAa的含量均有所降低和減少（P＜0.05），與此同時(shí)GABA/Glu 平衡值與AD 含量值則顯著降低和減少（P＜0.05），結(jié)果說(shuō)明通過(guò)造模，小鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的水平與未造模相比有很大差異；地西泮對(duì)照組的小鼠體內(nèi)Glu 的水平明顯下降（P＜0.05），沉香線香熏點(diǎn)吸入后有一定程度的增加（P＜0.05）；另外地西泮對(duì)照組與沉香線香熏點(diǎn)吸入各組的GABA水平均有所升高（P＜ 0.05），且GABA/Glu 的平衡值與AD 水平值顯著升高（P＜ 0.01）；熏香吸入低劑量和中劑量組小鼠的5-HT 含量水平明顯升高（P＜0.01），反而高劑量組有下降趨勢(shì)（P＜0.05），以上總體說(shuō)明熏點(diǎn)沉香后對(duì)影響睡眠的主要神經(jīng)遞質(zhì)有調(diào)控作用。

圖3 沉香線香熏香后小鼠腦組織中Glu、GABAA、GABAA/Glu、5-HT、AD的含量變化

3.4 沉香線香熏點(diǎn)吸入對(duì)腦內(nèi)海馬體GluR1和GluT1蛋白表達(dá)的影響

文獻(xiàn)研究表明谷氨酸（Glu）為廣泛分布于哺乳類動(dòng)物腦內(nèi)中可引起興奮作用的一類神經(jīng)遞質(zhì)[25]，其重要原料谷氨酰胺（Gln）在谷氨酰胺酶（TG酶）的協(xié)同作用下生成谷氨酸，所以谷氨酰胺轉(zhuǎn)化為谷氨酸的程度對(duì)機(jī)體內(nèi)維持谷氨酸含量的高低十分的重要[26]。GluR1是谷氨酸的相關(guān)受體蛋白且具有傳遞興奮性信息作用；VGluT1 廣泛分布與谷氨酸囊泡陌上，在囊泡膜離子濃度改變的條件下，協(xié)助谷氨酸在囊泡間轉(zhuǎn)運(yùn)，其對(duì)機(jī)體谷氨酸含量的維持起到至關(guān)重要[27-28]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)造模組小鼠腦組織中的VGluT1 蛋白量下降較為明顯（P＜ 0.05），而GluR1 的蛋白量有下降的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；地西泮對(duì)照組與熏點(diǎn)吸入各組的GluR1表達(dá)量增加（P＜0.05），地西泮對(duì)照組與熏點(diǎn)吸入中劑量及高劑量組的VGluT1 蛋白表達(dá)量增加（P＜ 0.05）（圖4）。

圖4 沉香線香熏香后對(duì)小鼠腦組織中GluR1及VGluT1蛋白表達(dá)的影響

4 討論

目前藥效研究中，針對(duì)改善失眠癥藥物評(píng)價(jià)的經(jīng)典模型為戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠模型以及使用氯苯丙氨酸注射制作失眠模型[29,13]，睡眠實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)?？疾焖邼摲诤退邥r(shí)間兩個(gè)指標(biāo)[30-31]，參考文獻(xiàn)研究[32-33]利用PCPA 制作動(dòng)物失眠模型。本研究結(jié)果顯示，相比正常組，連續(xù)注射PCPA 2d，小鼠自主活動(dòng)顯著增加，表明小鼠出現(xiàn)了失眠癥狀。與模型組相比較，熏點(diǎn)沉香線香可以縮短失眠小鼠模型的睡眠潛伏期，且在一定熏香劑量下可延長(zhǎng)其睡眠時(shí)間，表明沉香線香熏點(diǎn)吸入具有改善睡眠作用。

給予動(dòng)物相應(yīng)的藥物后觀察其自主活動(dòng)行為的變化情況，是評(píng)價(jià)作用于精神方面藥物或者神經(jīng)方面藥物常用的方法之一[23]。本實(shí)驗(yàn)參照徐飛飛[14]和王帥[12]報(bào)道的自主活動(dòng)評(píng)價(jià)方法，選擇運(yùn)動(dòng)總路程、平均速度和靜止時(shí)間作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果顯示，與模型組相比較，低劑量組和中劑量組沉香線香熏香后能夠減少小鼠運(yùn)動(dòng)總路程，且運(yùn)動(dòng)的平均速度同時(shí)下降，而高劑量組這兩個(gè)指標(biāo)改變不明顯，這與睡眠實(shí)驗(yàn)結(jié)果中高劑量組反而不能顯著延長(zhǎng)睡眠時(shí)間相一致，可能與有效物質(zhì)成分代謝轉(zhuǎn)化或高劑量的反作用有關(guān)，均需做進(jìn)一步研究；低劑量組、中劑量組和高劑量組均可增加小鼠曠場(chǎng)中靜止時(shí)間，根據(jù)文獻(xiàn)研究報(bào)道[15]，自主活動(dòng)能力的降低可以說(shuō)明沉香線香熏香后對(duì)氯苯丙氨酸造模的失眠小鼠睡眠有一定的改善作用。之前已有文獻(xiàn)報(bào)道采用沉香提取物灌胃，可以降低小鼠自主活動(dòng)頻率以及延長(zhǎng)睡眠時(shí)間[12]，綜上表明無(wú)論是采用熏香還是沉香提取物灌胃均能夠降低小鼠的自主活動(dòng)。

5-HT 可影響“睡眠-覺(jué)醒”的節(jié)律過(guò)程，是與睡眠功能密切相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)之一，抑制5-HT 的合成或者破壞5-HT 能神經(jīng)元均能導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)不同程度的失眠行為[34-35]。通過(guò)給予動(dòng)物腹腔注射PCPA，從而阻礙動(dòng)物機(jī)體內(nèi)5-HT 生成，進(jìn)而達(dá)到睡眠剝奪的目的[36]。本研究發(fā)現(xiàn)與模型組比較，熏點(diǎn)沉香線香后，能夠升高失眠模型小鼠5-HT 遞質(zhì)含量，表明沉香線香熏點(diǎn)吸入改善小鼠失眠癥狀的作用機(jī)制，可能與其具有調(diào)節(jié)腦內(nèi)5-HT 遞質(zhì)的作用有關(guān)。但是隨著熏香劑量的增加，5-HT 含量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，是否說(shuō)明沉香熏香具有雙向調(diào)節(jié)作用，需要進(jìn)一步研究。

神經(jīng)生理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究表明，大腦的興奮-抑制功能存在著平衡關(guān)系，其對(duì)睡眠狀態(tài)有一定的影響[37-38]，谷氨酸脫羧酶可以輔助使得機(jī)體內(nèi)興奮型的神經(jīng)遞質(zhì)Glu 可以轉(zhuǎn)化為抑制型的神經(jīng)遞質(zhì)GABA，因此GABA 與Glu 之間的平衡是否穩(wěn)定，對(duì)失眠質(zhì)量提升有很大的關(guān)系[39]。熏點(diǎn)沉香線香后可同時(shí)提高小鼠腦組織中興奮型神經(jīng)遞質(zhì)Glu 和抑制型神經(jīng)遞質(zhì)GABA的量，從而整體上使得GABA/Glu 平衡值增加，可以推斷出熏點(diǎn)沉香線香助睡眠的機(jī)制有可能與調(diào)節(jié)Glu和GABA 有關(guān)，這與報(bào)道的沉香氣體吸入給藥后，可以促進(jìn)小鼠睡眠，改善小鼠失眠狀態(tài)，作用機(jī)理有可能是通過(guò)下調(diào)Glu 的水平，或上調(diào)GABA 的水平，進(jìn)而最終使得Glu/GABA 比值整體下調(diào)有關(guān)[9]的說(shuō)法相一致。而降低的Glu 是否轉(zhuǎn)化為GABA 則需要后期深入研究。在睡眠-覺(jué)醒的周期調(diào)控中，AD 遞質(zhì)會(huì)跟隨著神經(jīng)元活動(dòng)而快速分泌，文獻(xiàn)研究表明[40]谷氨酸能神經(jīng)元能引起腺苷的分泌，腺苷水平的高低變化可以起到調(diào)控睡眠的作用。本研究表明，與模型組相比較，熏點(diǎn)沉香線香后可顯著提高腺苷的水平，這也可能是沉香熏香助睡眠的作用機(jī)制之一。

谷氨酰胺（Gln）在谷氨酰胺酶的作用下轉(zhuǎn)化為Glu，而Glu 是影響調(diào)節(jié)睡眠的重要中樞神經(jīng)遞質(zhì)之一[26]，而VGluT1是谷氨酸能神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的主要蛋白之一，其表達(dá)水平的高低決定了體內(nèi)組織中谷氨酸水平的高低，因此課題組選擇影響Glu 興奮傳遞及轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的GluR1和VGluT1水平進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)熏點(diǎn)沉香后能顯著提高腦組織中GluR1及VGluT1水平，表明它們可能通過(guò)間接調(diào)控Glu/GABA 的平衡發(fā)揮促睡眠作用。

綜上所述，在一定劑量下熏點(diǎn)吸入沉香線香，可以改善失眠模型小鼠的睡眠指標(biāo)，減少失眠模型小鼠自主活動(dòng)并增加其靜止的時(shí)間，對(duì)其腦內(nèi)與睡眠相關(guān)的如5-HT等神經(jīng)遞質(zhì)有相應(yīng)的調(diào)節(jié)作用，對(duì)與Glu相關(guān)的GluR1 及VGluT1 相關(guān)蛋白的表達(dá)也有一定的影響?；谝陨辖Y(jié)果可以得出，沉香線香燃燒熏香后具有助睡眠的作用，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)腦內(nèi)5-HT遞質(zhì)含量、調(diào)控GABA-Glu 分泌平衡以及Glu 合成代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)，提示沉香熏香吸入后通過(guò)“多通路、多靶點(diǎn)、多成分”發(fā)揮助睡眠的作用。但是長(zhǎng)時(shí)間大劑量熏點(diǎn)沉香線香是否會(huì)產(chǎn)生反向調(diào)節(jié)作用需要做進(jìn)一步研究。沉香熏香改善睡眠的療法目前在臨床上已有小范圍的推廣應(yīng)用[11]，本研究結(jié)果可為以后沉香熏香在臨床上治療失眠癥的推廣以及沉香大健康產(chǎn)品的優(yōu)化升級(jí)提供重要的依據(jù)和借鑒。