郭 虹 馬孝武 祁 冉

肝癌屬于肝臟惡性腫瘤，根據(jù)其特點可分為兩類，一類是繼發(fā)性，另一類是原發(fā)性[1]。原發(fā)性肝癌(primary liver cancer，PLC)在我國每年死亡人數(shù)大概有三十多萬，占全球原發(fā)性肝癌死亡人數(shù)的半數(shù)以上，而且其5年生存率不足十分之一，是病死率極高的惡性腫瘤[2]。由于PLC早期無明顯的特征，確診時大部分已發(fā)展至中晚期，影響預后[3]。因此，早期診斷對于PLC的早期治療及預后改善意義重大。甲胎蛋白是廣泛用于腫瘤診斷的標志物，而甲胎蛋白異質(zhì)體L3(alpha fetoprotein-L3，AFP-L3)為甲胎蛋白的異質(zhì)體，具有更高的靈敏度和特異度。2005年英國學者首先發(fā)現(xiàn)高爾基體糖蛋白73(Golgi Protein 73，GP-73)與PLC具有很大關(guān)聯(lián)，在Block隨后的研究報道中發(fā)現(xiàn)GP-73對于甲胎蛋白低濃度及陰性患者有很好的實用性[4]。因此，AFP-L3和GP-73有可能成為PLC早期診斷的標志物。乙型肝炎病毒DNA(hepatitis B virus DNA，HBV-DNA)是導致PLC的主要誘因，與PLC的惡化程度有關(guān)[5]。分析AFP-L3和GP-73與HBV-DNA載量和肝功能的關(guān)系，有助于評估PLC疾病的進展。本研究探討AFP-L3和GP-73在PLC早期診斷中的應(yīng)用及其與乙肝病毒DNA(HBV-DNA)載量、肝功能的關(guān)系，旨在為臨床治療PLC提供診斷和評估參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院于2018年6月至2020年4月收治的PLC患者94例為PLC組。納入標準：①經(jīng)病理及組織學檢查確診為PLC；②年齡>18周歲。排除標準：①合并心腎肺等臟器功能不全患者；②合并全身慢性疾病、免疫缺陷和其他惡性腫瘤患者；③精神類疾病患者；④合并其他類型肝臟疾病患者；⑤接受過化療治療患者；⑥有肝臟手術(shù)史患者。另取94例同期健康體檢者為健康組。其中PLC組男性56例，女性38例；年齡30～73歲，平均(49.26±8.64)歲；病程4～17個月，平均(11.58±2.13)個月。健康組男性49例，女性45例；年齡31～73歲，平均(49.43±8.79)歲。兩組患者的基礎(chǔ)資料差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

采集入院后兩組的空腹靜脈血，分離血清。①使用羅氏化學發(fā)光法(試劑盒購自羅氏公司)測定兩組的AFP-L3水平；酶聯(lián)免疫吸附法(試劑盒購自上海科華生物工程股份有限公司)測定GP-73水平。②使用熒光定量PCR擴增儀(西安天隆科技有限公司)測定PLC組的HBV-DNA水平。DNA高載量組，HBV-DNA水平104～108copy/mL；DNA低載量組，103～104copy/mL；DNA陰性組，<103copy/mL[6]。③使用全自動生化分析儀(美國伯樂公司)測定兩組的谷氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)和總膽紅素(total bilirubin，TBIL)水平。

1.3 觀察指標

①兩組AFP-L3和GP-73水平比較；②AFP-L3和GP-73在PLC診斷中的效能評價；③不同HBV-DNA水平受試者AFP-L3和GP-73水平比較；④兩組肝功能指標比較；⑤AFP-L3和GP-73水平與肝功能指標的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 兩組AFP-L3和GP-73水平比較

PLC組AFP-L3和GP-73水平高于健康組(P<0.05),見表1。

表1 兩組AFP-L3和GP-73水平比較

2.2 AFP-L3和GP-73在PLC診斷中的效能評價

AFP-L3診斷PLC的AUC為0.750，GP-73診斷PLC的AUC為0.899，兩者聯(lián)合診斷PLC的AUC為0.935，高于單獨診斷(P<0.05)，見圖1、表2。

表2 AFP-L3和GP-73單獨及聯(lián)合診斷在PLC中的效能

圖1 AFP-L3和GP-73單獨及聯(lián)合診斷在PLC中的ROC曲線

2.3 不同HBV-DNA載量受試者AFP-L3和GP-73水平比較

DNA高載量組AFP-L3和GP-73水平高于低載量組(P<0.05)；DNA低載量組AFP-L3和GP-73水平高于陰性組(P<0.05)。見表3。

表3 不同HBV-DNA載量受試者AFP-L3和GP-73水平比較

2.4 兩組肝功能指標比較

PLC組ALT、AST和TBIL水平高于健康組(P<0.05)。見表4。

表4 AFP-L3水平與肝功能指標的相關(guān)性

2.5 AFP-L3水平與肝功能指標的相關(guān)性

AFP-L3與ALT和AST呈正相關(guān)(P<0.05)，與TBIL無關(guān)(P>0.05)，見表5。

表5 AFP-L3水平與肝功能指標的相關(guān)性

2.6 GP-73水平與肝功能指標的相關(guān)性

GP-73與ALT、AST和TBIL均呈正相關(guān)(P<0.05)，見表6。

表6 GP-73水平與肝功能指標的相關(guān)性

3 討論

PLC是全球范圍的惡性腫瘤，尤其在亞、非、歐等地區(qū)患病人數(shù)較多，我國也是PLC的多發(fā)地區(qū)，每年因肝癌死亡的人數(shù)在惡性腫瘤中占有很高比重[7]。早期PLC主要通過磁共振、超聲檢查等影像學檢測，可以準確定位，對患者皮膚損害小，而且使用簡便，但是它對肝癌的靈敏度不高，會存在不可忽略的誤差[8-9]。甲胎蛋白是在臨床應(yīng)用較多的血清學標志物，對早期的PLC靈敏度為40%～60%，不滿足精確診斷的要求，而且在肝硬化、慢性肝炎等肝疾病中，水平也會很高，容易造成誤診[10]。因此，需要尋找更為合適的指標用于PLC的早期診斷。

AFP-L3不會受到甲胎蛋白含量的干擾，也不會因患者性別和年齡的差異而含量不同，靈敏度和特異性比甲胎蛋白更高，在甲胎蛋白陰性肝癌患者中，靈敏度也有40%，特異度達到80%以上，診斷疾病的優(yōu)點較甲胎蛋白更明顯[11-12]。本研究結(jié)果顯示，PLC組AFP-L3高于健康組，與楊永昌等[13]研究結(jié)果一致，提示AFP-L3與疾病發(fā)生有關(guān)；AFP-L3診斷PLC的AUC為0.750，提示AFP-L3具有診斷價值，可用于PLC早期診斷。周銳峰等[14]通過比較乙肝病毒DNA載量與PLC腫瘤體積倍增時間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)乙肝病毒DNA載量與早期PLC的疾病進展呈正相關(guān)。林曉淵[15]研究發(fā)現(xiàn)，隨著DNA載量的增加，PLC患者AFP-L3水平也升高，本研究結(jié)果與其一致。DNA高載量組AFP-L3水平高于低載量組，DNA低載量組AFP-L3水平高于陰性組，提示AFP-L3可以評估PLC的疾病進展。在PLC患者的肝癌組織中，進行乙肝病毒DNA的復制過程，引起連鎖反應(yīng)，致使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等肝細胞細胞器受到破壞，從而引起AFP-L3水平升高。隨著DNA載量的增加，AFP-L3水平呈上升趨勢，說明AFP-L3水平可以體現(xiàn)PLC患者肝功能損傷程度，進而與疾病的進展有關(guān)。方非[16]研究結(jié)果顯示，AFP與肝功能指標存在密切聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示，PLC組ALT、AST和TBIL水平高于健康組，說明ALT、AST和TBIL均與肝功能損傷程度正相關(guān)；AFP-L3與ALT和AST呈正相關(guān)，進一步提示AFP-L3可以評估PLC的疾病進展。

有近期研究報道，GP-73在正常肝臟組織中幾乎不表達，但是當肝臟出現(xiàn)炎癥、硬化和病變時，表達水平會顯著增高，在肝癌中的表達曲線甚至會出現(xiàn)峰值[17]。趙惠柳等[18]研究發(fā)現(xiàn)，GP-73在PLC患者中的表達水平顯著較健康人群更高，因此可將GP-73作為PLC早期診斷的血清標志物。本研究結(jié)果顯示，PLC組GP-73高于健康組，且GP-73診斷PLC的AUC為0.899，提示GP-73與疾病發(fā)生有關(guān)，且具有診斷價值，可用于PLC早期診斷。HBV-DNA、ALT、AST和TBIL均與肝臟損傷程度有關(guān)，分析AFP-L3、GP-73水平與HBV-DNA、ALT、AST和TBIL的關(guān)系，有助于對PLC疾病的惡化程度作出判斷，從而更好地對癥治療。結(jié)果顯示，DNA高載量組GP-73水平高于低載量組，DNA低載量組GP-73水平高于陰性組，且GP-73與ALT、AST和TBIL均呈正相關(guān)，提示GP-73可以間接反映PLC患者的肝功能損傷程度，能用來評估PLC的疾病進展。

為了進一步探討AFP-L3、GP-73和PLC疾病的關(guān)系，采用ROC曲線分析AFP-L3和GP-73單獨及聯(lián)合在PLC中的診斷效能。結(jié)果顯示，兩者聯(lián)合診斷的AUC高于單獨診斷，提示AFP-L3和GP-73兩者聯(lián)合診斷價值更高。王翠曉等[19]研究同樣發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測可以提高原發(fā)性肝癌的診斷效能，本研究結(jié)果與其基本一致。在單獨的AFP-L3檢測診斷時，由于AFP-L3分泌濃度不高或者病灶較小而無法檢測出現(xiàn)呈現(xiàn)假陰性，在乙肝病毒恰好停留在活動期時，AFP-L3有可能呈現(xiàn)假陽性。單獨的GP-73檢測時同樣會出現(xiàn)靈敏度不高的缺點，而血清AFP-L3和GP-73聯(lián)合檢測能夠優(yōu)勢互補，發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，提高診斷效能。

綜上所述，AFP-L3和GP-73均可用于PLC早期診斷，且兩者聯(lián)合診斷價值更高，血清AFP-L3和GP-73與HBV-DNA載量和肝功能密切相關(guān)，可以用來評估疾病的進展。