鮑 坤 張鐵濤 王曉旭 王凱英 徐 超 李光玉

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，長(zhǎng)春 130112；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，青島 266109)

共軛亞油酸(conjugated linoleic acid，CLA)是一組含有共軛雙鍵的十八碳二烯酸。CLA作為一種功能性添加劑，其在反芻動(dòng)物制品中的含量高低是衡量反芻動(dòng)物肉制品、乳制品、茸制品優(yōu)劣的重要指標(biāo)。研究表明，CLA可以提高哺乳期羔羊平均日增重、試驗(yàn)期總增重，改善血液生化指標(biāo)，有效促進(jìn)哺乳期羔羊的快速生長(zhǎng)[1]；改善奶山羊乳脂率和短、中鏈脂肪酸含量[2]；增加肉牛肌內(nèi)脂肪含量，減少皮下脂肪沉積[3]。

梅花鹿生產(chǎn)性能的高低主要通過鹿茸產(chǎn)量和品質(zhì)體現(xiàn)，產(chǎn)量高、品質(zhì)好的鹿茸被認(rèn)為生產(chǎn)性能優(yōu)良。鹿茸的生長(zhǎng)發(fā)育受多種因素的影響，除了與種類、年齡和個(gè)體發(fā)育情況有關(guān)外，還受營(yíng)養(yǎng)條件、氣候條件等外部環(huán)境條件的影響。目前，CLA作為功能性添加劑在茸鹿生產(chǎn)中未進(jìn)行過規(guī)?；瘧?yīng)用。因此，本試驗(yàn)旨在通過梅花鹿飼糧中添加不同水平CLA，研究其對(duì)瘤胃發(fā)酵參數(shù)和鹿茸生產(chǎn)性能的影響，為CLA在梅花鹿生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)設(shè)計(jì)

動(dòng)物試驗(yàn)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所左家茸鹿實(shí)驗(yàn)基地完成。采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇16頭平均體重為(40.25±2.38) kg的1歲雄性梅花鹿，隨機(jī)分為4組，每組4頭鹿，組間體重差異不顯著(P>0.05)。對(duì)照組(G0組)飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0.25%(G1組)、0.50%(G2組)和1.00%(G3組)的CLA。CLA純度為99.99%，主要成分為順-10，反-12-CLA。試驗(yàn)期80 d?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.2 樣品采集及指標(biāo)測(cè)定

1.2.1 瘤胃液采集及處理

在試驗(yàn)第50天，于早晨空腹時(shí)，每頭鹿均使用瘤胃管通過口腔抽取瘤胃液20 mL，分裝在凍存管中，做好記號(hào)后立即投入液氮中，將瘤胃液帶回實(shí)驗(yàn)室保存于-80 ℃低溫冰箱，用于測(cè)定瘤胃發(fā)酵參數(shù)。

1.2.2 鹿茸采集和生產(chǎn)性能測(cè)定

試驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)人員檢驗(yàn)鹿茸生長(zhǎng)成熟并達(dá)到收茸標(biāo)準(zhǔn)后，適時(shí)收取鮮鹿茸。精確測(cè)定鹿茸角基圍度(貼近額骨角柄中間部的圍度)、主干長(zhǎng)度(鹿茸根基部到茸尖端的自然長(zhǎng)度)、鮮重，并且準(zhǔn)確記錄每頭梅花鹿的鹿茸生長(zhǎng)天數(shù)，計(jì)算鮮鹿茸平均日增重：

鮮鹿茸平均日增重=鹿茸鮮重/生長(zhǎng)天數(shù)。

1.2.3 瘤胃發(fā)酵參數(shù)測(cè)定

采用PHS-3C型pH計(jì)進(jìn)行瘤胃pH測(cè)定；采用馮宗慈等[4]改進(jìn)的比色法測(cè)定瘤胃氨態(tài)氮(NH3-N)含量；參考李志鵬[5]的方法并采用安捷倫6890A氣相色譜儀測(cè)定瘤胃揮發(fā)性脂肪酸(VFA)含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SAS 9.4軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著者采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 CLA對(duì)梅花鹿瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

由表2可知，隨著飼糧CLA添加水平的增加，瘤胃pH逐漸降低；G2組和G3組瘤胃pH顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，G1組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。G2組和G3組瘤胃氨態(tài)氮含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，G1組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。G1組、G2組和G3組瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸、乙酸、異丁酸含量以及乙酸/丙酸顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，G1組、G2組和G3組之間差異不顯著(P>0.05)。

2.2 CLA對(duì)梅花鹿鹿茸生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，飼糧CLA添加水平對(duì)鹿茸角基圍度無顯著影響(P>0.05)。G2組鹿茸主干長(zhǎng)度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，G1組和G3組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。

由表4可知，G2組鹿茸鮮重顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，G1組和G3組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。飼糧CLA添加水平對(duì)鹿茸生長(zhǎng)天數(shù)無顯著影響(P>0.05)。G2組鮮鹿茸平均日增重顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，G1組和G3組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)；G2組鮮鹿茸平均日增重顯著高于G1組和G3組(P<0.05)。

3 討 論

3.1 CLA對(duì)梅花鹿瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

瘤胃是梅花鹿最重要的消化器官。飼料在瘤胃內(nèi)的發(fā)酵程度和發(fā)酵模式，主要取決于瘤胃pH、氨態(tài)氮和揮發(fā)性脂肪酸等參數(shù)，這些參數(shù)是反映瘤胃發(fā)酵狀況好壞的重要指標(biāo)。pH是反映瘤胃發(fā)酵情況的一項(xiàng)重要指標(biāo)。瘤胃pH的正常與否對(duì)梅花鹿的健康影響深遠(yuǎn)。瘤胃pH同時(shí)也受多種因素影響，如飼養(yǎng)水平[6]、飼糧能量情況[7]、飼糧精粗比情況[8]；此外，飼糧中添加油脂也會(huì)影響瘤胃pH[9]。除此之外，瘤胃pH還受到動(dòng)物的唾液分泌、采食速度以及瘤揮發(fā)性脂肪酸含量等多種復(fù)雜因素的影響。而揮發(fā)性脂肪酸含量和pH之間存在動(dòng)態(tài)影響的關(guān)系，瘤胃pH的波動(dòng)會(huì)影響揮發(fā)性脂肪酸產(chǎn)量以及其在瘤胃中的吸收狀況[10-11]。在正常情況下，梅花鹿瘤胃pH在5.6～7.5，呈弱酸性。本試驗(yàn)中，各組瘤胃pH均在此正常范圍內(nèi)。隨著飼糧CLA添加水平的增加，瘤胃pH逐漸降低，說明隨著飼糧CLA添加水平的增加和瘤胃微生物對(duì)飼糧發(fā)酵時(shí)間的推移，pH總體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。這與其他學(xué)者的研究結(jié)果相一致。Halima等[12]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加脂肪酸鈣鹽顯著降低了奶牛瘤胃pH。王喜樂[13]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加葵花籽油后，徐淮白山羊瘤胃pH無顯著變化，但有下降趨勢(shì)。毛文[14]向綿羊飼糧中添加不同水平CLA鈣鹽，測(cè)得綿羊瘤胃pH顯著低于未添加組，但比綿羊瘤胃正常值偏高，主要原因是取出瘤胃液后放入-20 ℃保存，24 h后檢測(cè)，此時(shí)的瘤胃發(fā)酵被抑制，導(dǎo)致比正常值偏高。

表2 CLA對(duì)梅花鹿瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

表3 CLA添加水平對(duì)鹿茸角基圍度和主干長(zhǎng)度的影響

表4 CLA對(duì)鹿茸鮮重、生長(zhǎng)天數(shù)和鮮鹿茸平均日增重的影響

瘤胃中氨態(tài)氮主要來源于飼糧中的蛋白質(zhì)、氨基酸和非蛋白氮化合物等含氮物質(zhì)的降解，同時(shí)也是瘤胃微生物合成菌體蛋白的主要氮源[15]，蛋白質(zhì)在瘤胃內(nèi)被瘤胃微生物分解和攝取利用的情況可以通過氨態(tài)氮含量來反映。瘤胃微生物生長(zhǎng)所需的發(fā)酵能可以通過發(fā)酵過程產(chǎn)生，氨態(tài)氮的消耗速率也會(huì)受到產(chǎn)生的發(fā)酵能的影響，氨態(tài)氮含量可以反映瘤胃內(nèi)氮源降解與微生物利用氨的能力。瘤胃微生物的繁殖及合成微生物蛋白的速率也受到氨態(tài)氮含量的影響。Thao等[16]認(rèn)為瘤胃氨態(tài)氮含量正常范圍是5.0～30.0 mg/dL，此范圍是瘤胃微生物生長(zhǎng)的耐受臨界范圍。呂小康[17]對(duì)20～60日齡山羊羔羊的研究表明，山羊羔羊微生物蛋白的合成受到抑制是由其瘤胃氨態(tài)氮含量降低引起的。Onetti等[18]研究認(rèn)為，在奶牛飼糧中添加動(dòng)物脂肪(脂和油脂)會(huì)減少原生動(dòng)物數(shù)量，導(dǎo)致瘤胃氨態(tài)氮含量降低。本試驗(yàn)中，各組氨態(tài)氮含量在正常水平內(nèi)，隨著飼糧CLA添加水平的提高，瘤胃氨態(tài)氮含量呈先上升后降低的趨勢(shì)，G2組和G3組瘤胃氨態(tài)氮含量顯著高于對(duì)照組，G3組瘤胃氨態(tài)氮含量最高。這說明飼糧添加CLA后，保護(hù)了瘤胃微生物免受損害，保證了瘤胃氨態(tài)氮能被正常的利用，使氨態(tài)氮含量保持在正常范圍內(nèi)。

揮發(fā)性脂肪酸是飼糧中的碳水化合物被瘤胃中的厭氧微生物降解后的產(chǎn)物，以能量形式被反芻動(dòng)物利用，乙酸、丙酸和丁酸含量約占揮發(fā)性脂肪酸總量的95%，是反芻動(dòng)物中最重要的揮發(fā)性脂肪酸，評(píng)價(jià)瘤胃發(fā)酵方式和發(fā)酵能力的直接指標(biāo)是三者的含量和三者之間的比例。劉永嘉等[19]報(bào)道，正常情況下，揮發(fā)性脂肪酸含量增加時(shí)，瘤胃pH會(huì)降低。本研究中，隨著飼糧CLA添加水平的提高，瘤胃pH以及乙酸、丁酸、總揮發(fā)性脂肪酸含量的變化趨勢(shì)一致，均呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)。由于各組飼糧結(jié)構(gòu)和精粗比一致，且鹿的采食狀況一致，由此推測(cè)產(chǎn)生此種現(xiàn)象可能與瘤胃微生物種類及數(shù)量有關(guān)。另據(jù)報(bào)道，瘤胃中揮發(fā)性脂肪酸含量增加會(huì)解離出更多的氫離子(H+)，致使pH降低，瘤胃內(nèi)低pH(正常范圍)更有利于揮發(fā)性脂肪酸在瘤胃上皮被吸收[20-23]。因此，瘤胃pH降低可促進(jìn)揮發(fā)性脂肪酸的吸收，進(jìn)而導(dǎo)致其瘤胃中含量降低，上述研究結(jié)論與本試驗(yàn)結(jié)果一致。由此我們推斷，飼糧結(jié)構(gòu)、精粗比一致的情況下，飼糧中添加CLA增強(qiáng)了梅花鹿瘤胃上皮對(duì)揮發(fā)性脂肪酸的吸收能力，進(jìn)而導(dǎo)致飼料消化率的提升[24]。此外，本研究中，各組之間的瘤胃丙酸含量差異不顯著，但G2組的瘤胃丙酸含量略高于其他組，同時(shí)G2組的瘤胃乙酸/丙酸顯著低于對(duì)照組，表明CLA添加水平為0.50%時(shí)，瘤胃發(fā)酵模式以丙酸型發(fā)酵為主。Ryle等[25]報(bào)道，當(dāng)動(dòng)物瘤胃進(jìn)行丙酸型發(fā)酵時(shí)，機(jī)體可以獲得更多的能量。而多項(xiàng)研究也表明，當(dāng)瘤胃發(fā)酵模式轉(zhuǎn)變?yōu)楸崮Ｊ綍r(shí)，飼料轉(zhuǎn)化效率和機(jī)體能量代謝可以有效地被提高，進(jìn)而促使幼齡反芻動(dòng)物在早期獲得更大的體重[26-28]。綜合以上研究結(jié)果我們認(rèn)為，當(dāng)梅花鹿飼糧中CLA添加水平為0.50%時(shí)，梅花鹿瘤胃內(nèi)以丙酸發(fā)酵為主，瘤胃供能效率提高，進(jìn)而促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育。

3.2 CLA對(duì)鹿茸生產(chǎn)性能的影響

梅花鹿的生產(chǎn)性能主要通過鹿茸產(chǎn)量和品質(zhì)體現(xiàn)，產(chǎn)量高、品質(zhì)好的鹿茸被認(rèn)為生產(chǎn)性能優(yōu)良。角基是梅花鹿重要的器官，也是鹿茸生長(zhǎng)的基礎(chǔ)，角基圍度大小直接影響著鹿茸的產(chǎn)量和大小。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧CLA添加水平對(duì)鹿茸角基圍度無顯著影響，梅花鹿平均角基圍度左側(cè)為(11.95±0.88) cm，右側(cè)為(12.33±0.92) cm。由于我們采集的鹿茸是梅花鹿初角茸(毛桃)，鹿茸并未分叉，只有主干而無眉枝，所以僅僅測(cè)量了鹿茸主干長(zhǎng)度。飼糧中添加CLA后鹿茸主干長(zhǎng)度有所增加，當(dāng)CLA添加水平為0.5%時(shí)，鹿茸主干長(zhǎng)度達(dá)到最大，且與對(duì)照組差異顯著。在鹿茸生產(chǎn)性能上，也表現(xiàn)出了相似的結(jié)果，飼糧中添加CLA后，鹿茸鮮重、鮮鹿茸平均日增重有所增加，當(dāng)CLA添加水平為0.5%時(shí)，鹿茸鮮重、鮮鹿茸平均日增重顯著高于對(duì)照組。在前期試驗(yàn)中，Bao等[29]在飼糧中添加不同水平CLA，結(jié)果表明飼糧中添加CLA可以顯著增加梅花鹿的平均日增重，當(dāng)CLA添加水平為0.5%時(shí)，平均日增重達(dá)到最高。而據(jù)報(bào)道，鹿茸的重量和質(zhì)量直接受到雄性鹿個(gè)體體重的影響。通常情況下，生產(chǎn)較大重量鹿茸的雄性鹿只往往個(gè)體重量也大。由此可見，飼糧中添加CLA提高了梅花鹿體重，梅花鹿體重增加致使其鹿茸生產(chǎn)性能亦相應(yīng)提高。

4 結(jié) 論

飼糧中添加CLA可以改變梅花鹿瘤胃發(fā)酵模式，提高瘤胃供能效率，促進(jìn)鹿茸生長(zhǎng)。本試驗(yàn)條件下，梅花鹿飼糧CLA適宜添加水平為0.50%。