董 濤，孫陳康，馬兆成，竇同心，高慧君，易干軍*

（1廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南亞熱帶果樹生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省熱帶亞熱帶果樹研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510640；2華中農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝林學(xué)學(xué)院/園藝植物生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北武漢 430070）

0 引言

【研究意義】香蕉是一種常見的水果，同時(shí)也是重要的糧食作物，其氣味芬芳、甘甜爽口、肉軟滑膩，深受人們喜愛（Pino and Febles，2013）。前人研究表明，香蕉果實(shí)中富含血清素、色氨酸、左旋多巴、兒茶酚胺等多種單胺類及其前體物質(zhì)（Monoamines and their precursors，MAPs），具有抗氧化、抗抑郁等多種藥用和保健功能，有極高的研究與應(yīng)用價(jià)值（Volkow et al.，2012；洪佳敏等，2016；Singh et al.，2016；Szeitz and Bandiera，2018；Zhao et al.，2019）。因此，建立一種特異、準(zhǔn)確、快速檢測香蕉果實(shí)MAPs的方法，明確香蕉果實(shí)發(fā)育過程中MAPs各組分的含量變化規(guī)律，對深入研究其在果實(shí)不同發(fā)育階段的積累特點(diǎn)與形成代謝機(jī)制具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】MAPs包括單胺類物質(zhì)血清素（Serotonin，SERO）、多巴胺（Dopamine，DA）、去甲腎上腺素（Norepineph‐rine，NE）、腎上腺素（Adrenaline），以及其前體物質(zhì)色氨酸（Tryptophan，Trp）、色胺（Tryptamine，TRM）、5-羥色氨酸（5-hydroxy-tryptophan，5-HTP）、酪氨酸（Tyrosine，Tyr）、酪胺（Tyramine，TYRA）、左旋多巴（Levodopa，L-dopa）等（Hornykiewicz，2010；Mauro et al.，2013；Zhang et al.，2019；Hu et al.，2020）。以往文獻(xiàn)中關(guān)于香蕉果實(shí)中MAPs含量檢測的研究不多。1958年，香蕉果肉和果皮中被檢測到DA、SERO、NE和5-HTP，這是首次在香蕉中檢測到MAPs的存在（Anderson et al.，1958；Waalkes et al.，1958）。Kanazawa和Sakakibara（2000）對催熟期間Cavendish香蕉果實(shí)的DA、L-dopa、NE和抗壞血酸等多種具有抗氧化活性的化合物進(jìn)行分離，同時(shí)對抗氧化物質(zhì)進(jìn)行定量，發(fā)現(xiàn)了一種抗氧化活性很強(qiáng)的水溶性物質(zhì)DA，果肉中DA含量達(dá)2.5~10 mg/100 g。González-Montelongo等（2010）研究表明，用各種溶劑純?nèi)芤夯蚱渌芤航嵯憬镀?，提取物中能鑒定出DA和Ldopa，且不同的溶劑浸提能獲得不同的DA和L-dopa提取率。SERO及其前體物質(zhì)Trp和TRM存在于多種果蔬中，日本研究人員對38種常見果蔬中SERO、Trp和TRM含量進(jìn)行定量分析，結(jié)果顯示，香蕉、獼猴桃、鳳梨、鱷梨、番茄和土豆中SERO和Trp含量較其他果蔬高（Islam et al.，2016）。核桃也含有較豐富的Trp和SERO（Schr?der et al.，1999）。Borges等（2019）挑選了20個香牙蕉和大蕉品種進(jìn)行催熟處理，選擇3個催熟時(shí)期（綠熟期、黃熟期和完熟期）進(jìn)行DA、L-dopa、TYRA和SERO等8種生物胺含量的檢測，結(jié)果表明DA、L-dopa、TYRA和SERO含量在果實(shí)催熟過程中呈下降趨勢，同時(shí)研究不同處理工序?qū)麑?shí)中生物活性胺含量的影響，發(fā)現(xiàn)帶皮水煮后煮食蕉Pelipita果肉中DA、NE、精胺和亞精胺含量均有所提升?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，國內(nèi)外有關(guān)香蕉果實(shí)發(fā)育過程中MAPs含量變化規(guī)律的研究未見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以目前國內(nèi)主栽的巴西香蕉（AAAcv.Baxi）、粉雜1號粉蕉（ABB group，F(xiàn)enza 1）和東莞大蕉（ABB group，Dongguan Dajiao）為研究對象，建立一種特異、準(zhǔn)確、快速測定香蕉果實(shí)MAPs的方法，利用該方法系統(tǒng)地探討香蕉果實(shí)發(fā)育過程中MAPs的積累和變化規(guī)律，以期為進(jìn)一步研究其合成與代謝機(jī)制提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為巴西香蕉、粉雜1號粉蕉和東莞大蕉3個栽培品種發(fā)育過程中的香蕉果實(shí)，種植于廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所增城實(shí)驗(yàn)基地，果園生長環(huán)境條件和水肥管理均一致。選取生長健壯且長勢一致、無病蟲害的3個香蕉品種植株各30株。使用的所有試劑和藥品均為色譜級，NE、DA、L-dopa、TYRA、Tyr、SERO、TRM和Trp標(biāo)準(zhǔn)品購自廣州康龍生物科技有限公司，超純水、三氟乙酸和甲醇用于配制流動相。主要儀器設(shè)備包括高效液相色譜儀（Agilent 1290，美國安捷倫科技有限公司）和光電二極管列陣檢測器（DAD-3000，上海伍豐科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 取樣方法 試驗(yàn)材料于2020年4月15日—7月3日采集。香蕉蕉果斷蕾后，每隔15 d進(jìn)行一次取樣，共采集5個時(shí)期的樣品，分別為斷蕾后15、30、45、60和75 d。其中，斷蕾后75 d取樣時(shí)間根據(jù)不同品種香蕉果實(shí)發(fā)育情況進(jìn)行調(diào)整，以果實(shí)成熟度達(dá)八成熟為標(biāo)準(zhǔn)。巴西香蕉和粉雜1號粉蕉斷蕾后75 d采收時(shí)間分別為蕉果斷蕾后的75和78 d，果指飽滿度約為八成（巴西香蕉果實(shí)直徑為3.37 cm或圍長100 mm、粉雜1號粉蕉直徑為3.93 cm或圍長為130 mm）（黎源，2014）。由于東莞大蕉采收標(biāo)準(zhǔn)未見報(bào)道，因此參照巴西香蕉和粉雜1號粉蕉采收時(shí)間與方法自行確立，經(jīng)5次采樣統(tǒng)計(jì)分析得出（自上而下取第二把蕉果中間位置，左右排開連續(xù)取7根果指進(jìn)行測量統(tǒng)計(jì)），果實(shí)飽滿度為八成熟時(shí)，直徑為3.96 cm或圍長為138 mm。選擇樹體健壯、生長正常的果樹取果，選取每條蕉的第二把作為試驗(yàn)樣品，同時(shí)采摘3株植株上面的果實(shí)，作為3個生物學(xué)重復(fù)。

1.2.2 樣品制備 用自來水沖洗果實(shí)，以清除碎屑或其他雜質(zhì)。去除果尖和果柄，切取果指中間部分，沸水中靜置10 s，使多酚氧化酶失活（Jiménez and García-Carmona，1999）。剝皮，皮肉分離，切片后立即液氮速凍，存放于-80 ℃冰箱中備用。將待測果皮和果肉放入冷凍干燥機(jī)去除水分，得到的干燥樣品用研磨機(jī)研磨成粉；分別取1 g香蕉果肉或果皮凍干粉，加入20%甲醇5 mL和0.1%三氟乙酸水溶液5 mL，用渦旋儀振蕩15 s，重復(fù)3次，放入4 ℃冰箱冷藏過夜；3000 r/min離心30 min，取3 mL上清液氮吹濃縮至1 mL，12000 r/min離心5 min，0.22 μm濾膜過濾，置于上樣瓶，同一品種重復(fù)提取3次，放入4 ℃冰箱待上樣檢測。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備 精密稱取NE、DA、L-do‐pa、TYRA、Tyr、SERO、TRM和Trp標(biāo)準(zhǔn)品各5 mg，加入20%甲醇水溶液5 mL，振蕩搖勻至完全溶解，制成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。0.22 μm濾膜過濾，置于棕色瓶，放入4 ℃冰箱待上樣檢測。

1.2.4 反向高效液相色譜—紫外檢測（RP-HPLCUV）條件 所用色譜柱為C色譜柱（Eclipse Plus 95? Ccolumn，4.6×250 mm，5 μm，Agilent）。甲醇為流動相A，0.1%三氟乙酸水溶液為流動相B，pH 3.1。使用梯度剖面對待分離化合物進(jìn)行洗脫分離：0~14 min，線性梯度5%~30% A，95%~70% B，柱溫28 ℃、流速1.0 mL/min。每個樣品的總運(yùn)行時(shí)間為30 min，進(jìn)樣量5 μL，洗脫條件如表1所示。所有樣品檢測均進(jìn)行3個重復(fù)。

1.2.5 MAPs定量分析統(tǒng)計(jì) 香蕉樣品色譜圖中目標(biāo)物質(zhì)峰峰面積，根據(jù)每個目標(biāo)化合物的線性回歸方程計(jì)算樣品溶液濃度。

1.2.6 方法的適應(yīng)性驗(yàn)證 驗(yàn)證參數(shù)包括特異性、準(zhǔn)確性、精確性、檢測限和定量限等。特異性：配制濃度為50.0 μg/mL的各標(biāo)準(zhǔn)化合物溶液，分別加入待測樣品中，和相同份數(shù)但未加標(biāo)的樣品一起進(jìn)行檢測分析，以確認(rèn)每種峰的同一性，以此確定本檢測方法在香蕉樣品檢測中的特異性。準(zhǔn)確性：用加標(biāo)回收率驗(yàn)證檢測方法的準(zhǔn)確性，通過分析5個重復(fù)的加標(biāo)樣品確定方法的準(zhǔn)確度。精確性：日內(nèi)重復(fù)性和日間重復(fù)性檢驗(yàn)方法的精確性，在1 d 3個時(shí)間段和在3 d內(nèi)對5個重復(fù)樣品進(jìn)行檢測，分別計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。檢測限（LOD）：信噪比為3時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)化合物樣品濃度，即峰高是基線噪聲3倍高度時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)化合物樣品濃度為LOD。定量限（LOQ）=LOD×10/3。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

利用SISVAR（V1.2）對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和Tukey Test（<0.05）均值比較檢驗(yàn)（Ferreira，2011），以Excel 2007制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 香蕉果實(shí)中MAPs檢測方法的建立

利用本研究建立的RP-HPLC-UV法，可以準(zhǔn)確、快速地測定香蕉果肉和果皮中NE、DA、L-dopa、TYRA、Tyr、SERO、TRM 和Trp 等8 種MAPs 含 量。MAPs紫外吸收波長光譜（圖1）顯示，在210~350 nm波長范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)物質(zhì)峰校準(zhǔn)，通過比較保留時(shí)間和最大吸收波長鑒定每個化合物物質(zhì)峰。TYRA和Tyr最大吸收波長為276 nm，SERO最大吸收波長為278 nm，TRM和Trp最大吸收波長為280 nm，NE、DA和L-dopa最大吸收波長為282 nm。從樣品色譜圖（圖2）可看出，8種MAPs均成功分離，基線平穩(wěn)無漂移，峰型對稱且良好，無重疊峰、駝峰、前沿和拖尾現(xiàn)象，保留時(shí)間穩(wěn)定。

香蕉果實(shí)8種MAPs定量檢測方法的適用性驗(yàn)證參數(shù)如表2所示。校準(zhǔn)曲線的線性判定系數(shù)均高于0.999000，表明濃度與信號面積之間存在高度相關(guān)性。因此，校準(zhǔn)曲線的線性方程適用于香蕉中單胺類及其前體物質(zhì)的定量分析，線性范圍為1.0~16.0 μg/mL。方法的準(zhǔn)確度通過加標(biāo)樣品中分析物的回收率進(jìn)行評估，范圍為95.3%~106.1%，說明該方法具有較高的準(zhǔn)確性。日內(nèi)精密度范圍為0.37%~0.82%，日間精密度范圍為0.35%~0.83%，表明該方法同時(shí)具有較高的精準(zhǔn)性。檢測限為0.0012~0.0016 mg/100 g，定量限為0.0040~0.0053 mg/100 g，顯示該方法具有很好的靈敏度。8種定量檢測的MAPs在色譜柱中被完全分離開，且峰型良好，無重疊峰，色譜圖基線平穩(wěn)無起伏，待檢測物質(zhì)在14 min內(nèi)全部完成分離。

2.2 NE和DA含量的變化

香蕉果實(shí)發(fā)育過程中，巴西香蕉中NE含量先升后降，果肉和果皮中含量均在斷蕾后30 d達(dá)峰值，而東莞大蕉和粉雜1號果實(shí)中NE含量隨果實(shí)發(fā)育變化不明顯（圖3-A和圖3-C）。3個品種果皮中，巴西香蕉的NE含量最高（35.52~62.18 mg/100 g），東莞大蕉次之（5.82~9.29 mg/100 g），粉雜1號最少（1.33~2.05 mg/100 g）；3個品種果肉中也呈現(xiàn)類似規(guī)律，巴西香蕉的NE含量為3.17~22.14 mg/100 g，東莞大蕉為1.27~2.07 mg/100 g，粉雜1號為0.91~1.33 mg/100 g。3個品種果皮中NE含量均高于果肉。

DA與NE的含量變化趨勢基本一致。巴西香蕉中DA含量呈先升后降的變化趨勢，果肉和果皮中均在斷蕾后30 d達(dá)峰值，含量分別為239.81和1906.54 mg/100 g，斷蕾后75 d達(dá)最低值（7.08和793.44 mg/100 g），東莞大蕉果肉中DA含量隨果實(shí)發(fā)育逐漸降低（4.80~23.67 mg/100 g），而粉雜1號果肉中DA含量隨果實(shí)發(fā)育變化不明顯（4.47~6.07 mg/100 g）（圖3-B和圖3-D）。3個品種果皮中DA含量均高于果肉，且與NE變化規(guī)律類似，巴西香蕉果皮中DA含量最高（793.44~1906.54 mg/100 g），東莞大蕉次之（378.92~631.63 mg/100 g），粉雜1號最低（103.52~167.81 mg/100 g）。

2.3 L-dopa和SERO含量的變化

在果實(shí)發(fā)育過程中，巴西香蕉果肉中L-dopa含量先升后降，在斷蕾后30 d達(dá)峰值（4.02 mg/100 g），而果皮中L-dopa含量整體呈上升趨勢（圖4-A和圖4-C）。東莞大蕉果肉和果皮中L-dopa含量變化規(guī)律基本一致，呈先降后升的變化趨勢。粉雜1號果肉中L-dopa含量呈下降趨勢，果皮中含量呈逐漸上升趨勢。3個品種果皮中L-dopa含量均高于果肉。粉雜1號果皮中L-dopa含量（2.08~3.29 mg/100 g）則低于巴西香蕉（2.91~7.35 mg/100 g）和東莞大蕉（4.95~7.81 mg/100 g）。

在果實(shí)發(fā)育過程中，巴西香蕉果肉中SERO含量先升后降，在斷蕾后30 d達(dá)峰值（26.95 mg/100 g），果皮中含量則呈緩慢上升趨勢。東莞大蕉果肉中SERO含量隨著果實(shí)的發(fā)育不斷降低，果皮中含量呈先升后降的變化趨勢，在斷蕾后60 d達(dá)峰值（73.31 mg/100 g）。粉雜1號果肉中SERO含量呈下降趨勢，果皮中的含量與巴西香蕉果皮中變化趨勢基本一致。東莞大蕉和粉雜1號果皮中SERO含量明顯高于果肉（圖4-B和圖4-D）。

2.4 Tyr和TYRA含量的變化

由圖5可知，Tyr和TYRA含量在3個品種的果肉和果皮中均呈現(xiàn)出類似的變化規(guī)律。果肉中，巴西香蕉的Tyr和TYRA含量隨著果實(shí)發(fā)育急劇升高，在斷蕾后30 d達(dá)峰值（43.74和118.29 mg/100 g），之后迅速降低，Tyr含量在斷蕾后45 d達(dá)最低值（1.14 mg/100 g），TYRA含量在斷蕾后75 d達(dá)最低值（12.58 mg/100 g）；東莞大蕉和粉雜1號中的含量則變化不明顯（圖5-A和圖5-B）。果皮中，3個品種Tyr和TYRA含量整體呈下降趨勢，東莞大蕉果皮中Tyr含量高于巴西香蕉和粉雜1號；TYRA含量則在巴西香蕉中最高（128.41~374.94 mg/100 g），東莞大蕉次之（19.28~110.33 mg/100 g），粉雜1號最低（4.82~9.59 mg/100 g）（圖5-C和圖5-D）。

2.5 Trp和TRM含量的變化

由圖6-A和圖6-B可知，Trp和TRM含量在3個香蕉品種的果肉中表現(xiàn)出類似的變化趨勢，巴西香蕉果肉中Trp和TRM含量均在斷蕾后30 d達(dá)最高值（46.41和5.33 mg/100 g），而后急劇降低，Trp含量在斷蕾后45 d達(dá)最低值（0.90 mg/100 g），TRM含量在斷蕾后75 d達(dá)最低值（1.04 mg/100 g）；東莞大蕉和粉雜1號果肉中的Trp和TRM含量隨果實(shí)發(fā)育變化不明顯。巴西香蕉和東莞大蕉果皮中Trp含量在果實(shí)發(fā)育過程中無明顯變化，粉雜1號果皮中則有先升后降的變化過程；3個品種中，東莞大蕉果皮Trp含量最高，其次是粉雜1號，巴西香蕉最少（圖6-C）。3個品種果皮中，TRM含量隨果實(shí)發(fā)育整體變化不明顯，粉雜1號的含量明顯低于巴西香蕉和東莞大蕉（圖6-D）。

3 討論

MAPs的檢測方法主要包括薄層色譜法（TLC）、放射免疫分析法（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（Enzymelinked immunosorbent assay）和高效液相色譜法（HPLC）。其中，HPLC檢測準(zhǔn)確度高、靈敏度高、分析成本相對較低、操作簡便，配合不同類型檢測器，能進(jìn)行多種類MAPs的檢測，包括DA、NE和L-dopa等化合物和其他多胺類物質(zhì)（Islam et al.，2016）。近年來，有研究利用微芯片電泳紫外熒光技術(shù)檢測香蕉中的DA、SERO、Trp和Tyr等天然化合物含量（Ohla et al.，2011），但其檢測成本高，不利于大量檢測。液相或氣相色譜連接不同檢測器進(jìn)行定性定量分析仍是目前測定植物中MAPs的最常用方法。HPLC-UV相較高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用（HPLCMS）一次檢測物質(zhì)種類較少，但價(jià)格便宜，產(chǎn)業(yè)應(yīng)用價(jià)值更大。本研究利用RP-HPLC-UV建立了香蕉中NE、DA、L-dopa、TYRA、Tyr、SERO、TRM和Trp等代謝物的檢測體系，可以準(zhǔn)確、快速地測定不同香蕉組織中8種MAPs含量，且操作方便，成本較低。

González-Montelongo等（2010）研究香蕉果皮抗氧化成分的最佳提取條件時(shí)發(fā)現(xiàn)，甲醇水溶液更有利于提取香蕉果實(shí)中的DA，而100%異丙醇更有利于提取L-dopa。本研究采用20%甲醇和0.1%三氟乙酸水溶液對香蕉果實(shí)MAPs物質(zhì)進(jìn)行提取，結(jié)果表明，8種化合物可以被提取出來。其中，果皮樣品中檢測到DA含量最高達(dá)1906.54 mg/100 g，遠(yuǎn)高于Kanazawa和Sakakibara（2000）檢測到的最高值1290 mg/100 g，表明本研究的提取條件非常適用于香蕉果實(shí)中DA的定量檢測。但本研究中檢測到的TYRA、TRM和L-dopa等含量較低，說明上述物質(zhì)可能更適合利用HPLC-MS等精密度更高的檢測技術(shù)進(jìn)行測定分析。因此，本研究所用提取條件更有利于香蕉果實(shí)中DA的提取，而其他種類MAPs的最佳提取條件需進(jìn)一步摸索。

目前，國內(nèi)外對香蕉等水果中MAPs含量的檢測分析有一些研究，但尚未見香蕉果實(shí)發(fā)育過程中MAPs含量檢測的相關(guān)報(bào)道。Kanazawa和Ashida（1998a，1998b）研究發(fā)現(xiàn)，香蕉皮中含有強(qiáng)抗氧化活性化合物DA，其抗氧化活性與維生素C相當(dāng)，認(rèn)為DA能幫助增強(qiáng)人體消化道清除脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的能力。本研究結(jié)果表明，3個香蕉品種果肉中均含有DA，但其含量明顯低于果皮，與前人研究結(jié)果（Borges et al.，2019）基本一致。Borges等（2019）推薦消費(fèi)者食用帶皮水煮后的香蕉果肉，因水煮后的香蕉皮中DA會轉(zhuǎn)移到果肉中，使果肉中DA和SERO含量均有所上升。除了DA外，本研究的3個香蕉品種果皮中NE、L-dopa、SERO和TYRA含量也明顯高于果肉；DA、NE、L-dopa和TYRA均位于香蕉果實(shí)多巴胺代謝通路上，L-dopa和TYRA是合成DA和NE的前體物質(zhì)，上述結(jié)果表明在香蕉果皮中可能存在著更為活躍的多巴胺合成代謝過程。Kanazawa和Sakakibara（2000）研究發(fā)現(xiàn)卡文迪許香蕉果皮中DA含量為865~1290 mg/100 g，本研究結(jié)果與其基本一致，但果肉中DA含量為0.72~10 mg/100 g，遠(yuǎn)低于本研究結(jié)果（7.08~239.81 mg/100 g）。Borges等（2019）檢測了20個不同香蕉品種果實(shí)中DA含量的變化情況，其中鮮食蕉DA含量最高的品種為Yangambi Km5，其果肉中DA含量為26.5~38.1 mg/100 g，果皮中DA含量最高的鮮食蕉為Ouroda Mata，含量為76.4~305.5 mg/100 g，均低于本研究結(jié)果。造成研究結(jié)果差異的原因，一方面是因?yàn)槠贩N、檢測方法和種植區(qū)域不同，另外一個主要原因可能是研究對象所處的發(fā)育時(shí)期不同。本研究結(jié)果表明，巴西香蕉的DA含量隨著果實(shí)發(fā)育有快速升高的過程，峰值出現(xiàn)在斷蕾后30 d前后（果肉239.81 mg/100 g 、果皮1906.54 mg/100 g），之后果實(shí)中DA含量持續(xù)下降，果實(shí)成熟時(shí)達(dá)到最低值（果肉7.08 mg/100 g、果皮793.44 mg/100 g）。Borges等（2019）、Kanazawa和Sakakibara（2000）的研究材料均在香蕉果實(shí)成熟時(shí)采集，可能是造成其研究結(jié)果明顯低于本研究結(jié)果的主要原因。

不同香蕉品種MAPs的含量有明顯差異。斷蕾后15~30 d，巴西香蕉果肉中NE、DA、TYRA、Tyr、TRM和Trp含量均快速上升，L-dopa和SERO含量也有緩慢上升的趨勢，之后，上述物質(zhì)含量呈下降趨勢。在巴西香蕉果實(shí)整個發(fā)育過程中，MAPs含量變化極大，含量相差2倍（TRM）~50倍（Trp）不等。東莞大蕉果肉中僅有SERO含量明顯降低，DA含量緩慢下降，NE、L-dopa、Tyr、TYRA和TRM含量的變化不明顯。粉雜1號MAPs含量相對較少，且在整個果實(shí)發(fā)育過程中大部分MAPs含量變化不明顯。查詢KEGG數(shù)據(jù)庫（https://www.kegg.jp/）表明，上述8種MAPs均為Tyr和Trp代謝通路上的化合物，其含量變化與苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的合成及代謝通路（Mus00400）緊密有關(guān)。因此，推測在巴西香蕉果實(shí)發(fā)育成熟過程中，可能在斷蕾后30 d之前的某個時(shí)間段，某些或某個調(diào)控果實(shí)MAPs合成代謝的基因表達(dá)水平發(fā)生顯著改變，從而導(dǎo)致Mus00400代謝通路上包括MAPs在內(nèi)的化合物含量發(fā)生變化，而東莞大蕉和粉雜1號中不存在上述基因表達(dá)水平顯著改變的過程；品種間產(chǎn)生上述差異的原因可能與品種的基因型有直接關(guān)系，巴西香蕉基因型為AAA，而粉雜1號粉蕉和東莞大蕉基因型均為ABB。因此，后續(xù)可根據(jù)上述特點(diǎn)，研究香蕉果實(shí)斷蕾30 d前后與MAPs合成和代謝相關(guān)基因的表達(dá)情況，為下一步解析香蕉果實(shí)MAPs代謝調(diào)控機(jī)制打下基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

利用RP-HPLC-UV建立了一種測定香蕉果實(shí)中MAPs含量的方法，可以準(zhǔn)確、靈敏、快速地測定香蕉果肉和果皮中NE、DA、L-dopa、TYRA、Tyr、SERO、TRM和Trp等8種MAPs物質(zhì)的含量。通過對3個香蕉品種不同發(fā)育階段的果實(shí)MAPs含量進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)巴西香蕉果實(shí)發(fā)育過程中MAPs含量變化明顯區(qū)別于東莞大蕉和粉雜1號粉蕉。本研究結(jié)果可為下一步利用基因組數(shù)據(jù)篩選不同基因型的差異表達(dá)基因，并進(jìn)一步闡明MAPs的合成代謝機(jī)理提供參考。