邢 媛 鮑 寧

年齡相關(guān)性白內(nèi)障(ARC)是我國(guó)45歲以上人群發(fā)生視力障礙和可逆性失明的重要原因[1]。雖然手術(shù)干預(yù)是最有效的手段，但是一系列并發(fā)癥和手術(shù)需求急劇增長(zhǎng)給社會(huì)醫(yī)療帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)，使得尋求預(yù)防和治療ARC的新方法成為亟待解決的重點(diǎn)問(wèn)題[2]。氧化應(yīng)激誘導(dǎo)晶狀體上皮細(xì)胞(LECs)的通透性及蛋白構(gòu)象發(fā)生改變，從而導(dǎo)致晶狀體混濁，被認(rèn)為是引起ARC的早期事件[3]?；诖藱C(jī)制，尋找潛在的治療靶點(diǎn)成為臨床研究的熱點(diǎn)。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的快速發(fā)展，環(huán)狀RNA(circRNA)作為各種疾病的重要調(diào)節(jié)因子，其作用越來(lái)越受到關(guān)注[4]。circRNA富含miRNA反應(yīng)元件，可以與目標(biāo)基因通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)來(lái)約束彼此共享的miRNA，從而上調(diào)目標(biāo)基因表達(dá)水平[5]。因此，作為具有調(diào)控功能的非編碼RNA，circRNA能拮抗microRNA(miRNA)，從而參與宿主基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控[6-7]。深入探索基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，如circRNA/miRNA/mRNA，使我們對(duì)ARC的發(fā)展有了更深入的了解[8-10]。故本研究基于單純ARC患者的晶狀體前囊膜組織轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)，選擇差異性表達(dá)最典型的circRNA，探究其在抗人LECs氧化損傷過(guò)程中的潛在機(jī)制，以期為ARC的發(fā)病機(jī)制研究及臨床治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 臨床標(biāo)本采集晶狀體前囊膜組織樣本分別取自3例捐贈(zèng)眼球[供者年齡50～64(48.5±2.9)歲，排除眼部疾病，依據(jù)白內(nèi)障LOCS III分級(jí)，晶狀體混濁度為1～2級(jí)]和行超聲乳化白內(nèi)障吸除術(shù)的3例單純ARC患者[患者年齡45～70(50.2±3.7)歲，無(wú)其他眼部疾病，依據(jù)白內(nèi)障LOCS III分級(jí)，晶狀體混濁度為4～6級(jí)]，分別作為對(duì)照組和ARC組。對(duì)照組在捐贈(zèng)者死后8 h內(nèi)由我課題組成員采集患者晶狀體前囊膜組織，ARC組晶狀體前囊膜組織樣本則是由同一位經(jīng)驗(yàn)豐富的眼科醫(yī)生在ARC患者的白內(nèi)障手術(shù)中連續(xù)環(huán)形撕囊時(shí)獲得。1個(gè)樣本含有的RNA不足以完成circRNA測(cè)序和qRT-PCR分析，因此，需將3例樣本放在一起以獲得足夠的RNA。所收集受試者的年齡、性別(全部為男性)相匹配。每位參與者都提供了書(shū)面同意資料，經(jīng)安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)后用于涉及人體的組織學(xué)研究和生物信息學(xué)分析。

1.2 主要材料TRIzol試劑(美國(guó)Life Technologies公司)；HiSeq PE 聚類(lèi)試劑盒v4 cBot(美國(guó)Illumina公司)；PrimeScriptTMRT逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒(日本Takara Bio公司)；雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒(美國(guó)Promega公司)；DMEM培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司)；轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000(美國(guó)Invitrogen公司)；人永生化LECs細(xì)胞系(HLE-B3)購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。NanoDrop 2000C超微量分光光度計(jì)(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)；LightCycler 480II實(shí)時(shí) PCR系統(tǒng)(瑞士Roche公司)。

1.3 方法

1.3.1 RNA提取及轉(zhuǎn)錄組分析按照說(shuō)明使用 TRIzol 試劑處理晶狀體前囊膜組織。總 RNA 濃度通過(guò) NanoDrop儀測(cè)定，D260/D280的比率為1.8～2.1為 RNA 純度的符合標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳上 28 S rRNA和 18 S rRNA條帶的形態(tài)檢測(cè)RNA的完整性，構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)。去除總 RNA 中的 rRNA，將純化的 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。利用HiSeq PE 聚類(lèi)試劑盒v4 cBot進(jìn)行聚類(lèi)分析后，在HiSeq 2500平臺(tái)上測(cè)序，產(chǎn)生約1億個(gè)讀碼。并利用STAR軟件將其定位至人類(lèi)參考基因組(UCSC hg19)中。使用DCC軟件和轉(zhuǎn)錄組GTF文件對(duì)circRNA進(jìn)行識(shí)別。根據(jù)各組織circRNA表達(dá)水平繪制circRNA的差異表達(dá)基因熱圖。

1.3.2 qRT-PCR檢測(cè)TRIzol提取兩組受試者晶狀體前囊膜組織總RNA，瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證提取RNA的完整性。取等量(500 ng)總RNA按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行cDNA合成，用Oligo (dt)和隨機(jī)引物反向轉(zhuǎn)錄circRNA和mRNA，用特異性的莖環(huán)引物反向轉(zhuǎn)錄miRNA。使用SYBR檢測(cè)試劑盒在LightCycler 480II實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)上進(jìn)行PCR反應(yīng)。將GAPDH或小分子U6作為內(nèi)源性對(duì)照。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 50 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)。每個(gè)基因設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.3 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)為了進(jìn)一步研究circZNF292下游靶點(diǎn)和調(diào)控通路，利用靶區(qū)預(yù)測(cè)算法(miRwalk 3.0)預(yù)測(cè)circZNF292與miRNA的相互作用。用PCR擴(kuò)增circZNF292的片段，將PCR產(chǎn)物克隆至緊靠熒光素酶基因序列下游的psicHECK-2載體中，構(gòu)建含有miR-23b-3p突變種子序列的circZNF292的psicHECK-2。所有結(jié)構(gòu)均經(jīng)DNA測(cè)序驗(yàn)證。將HLE-B3細(xì)胞接種至96孔板中，然后與100 ng構(gòu)建物共轉(zhuǎn)染48 h，使用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)熒光素酶活性。同樣的方法驗(yàn)證miR-23b-3p和SIRT1的靶向結(jié)合關(guān)系。

1.3.4 細(xì)胞培養(yǎng)和分組處理將HLE-B3細(xì)胞培養(yǎng)于含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將HLE-B3細(xì)胞分為空白對(duì)照組、NC siRNA組、circZNF292 siRNA組、ZNF292 siRNA組、circZNF292+ZNF292 siRNA組、NC inhibitor組、miR-23b inhibitor組、NC mimics組、miR-23b mimics組、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor組?？瞻讓?duì)照組不做任何特殊處理；其余各組分別用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將陰性對(duì)照序列、circZNF292 siRNA(50 nmol·L-1)、線性ZNF292 siRNA(50 nmol·L-1)、circZNF292和線性ZNF292 siRNA(均為50 nmol·L-1)、陰性對(duì)照抑制劑序列、miR-23b-3p抑制劑(100 nmol·L-1)、陰性對(duì)照模擬序列、miR-23b-3p模擬劑(50 nmol·L-1)、circZNF292 siRNA和miR-23b-3p抑制劑(均為50 nmol·L-1)用轉(zhuǎn)染試劑Lipo2000轉(zhuǎn)染至HLE-B3細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48 h后，檢測(cè)HLE-B3功能和基因表達(dá)。

1.3.5 氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)收集各組HLE-B3細(xì)胞，用細(xì)胞裂解液裂解后取上清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的含量。用2’，7’一二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)探針檢測(cè)HLE-B3細(xì)胞內(nèi)源性活性氧(ROS)熒光強(qiáng)度，具體為：將HLE-B3細(xì)胞接種于96孔板，分組處理48 h后，加入熒光探針DCFH-DA，在37 ℃培養(yǎng)箱中孵育20 min，洗滌后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)525 nm)。

1.3.6 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力將HLE-B3細(xì)胞接種于96孔板(每孔1×103個(gè))，分組處理48 h后，加入MTT試劑(5 g·L-1)，37 ℃反應(yīng)4 h，去除培養(yǎng)基后加入100 mmol·L-1二甲基亞砜終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀于490 nm處測(cè)量光密度。

1.3.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡收集各組HLE-B3細(xì)胞懸浮于500 μL的1×結(jié)合緩沖液中，加入5 μL Annexin V-異硫氰酸熒光素(V-FITC)和5 μL碘化丙啶(PI)，室溫下黑暗培養(yǎng)15 min。用A60-Micro流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡情況。

1.3.8 Western blot法檢測(cè)SIRT蛋白表達(dá)收集各組HLE-B3細(xì)胞，在含有苯基甲烷磺酰氟的培養(yǎng)液中4 ℃反應(yīng)30 min，用BCA試劑盒對(duì)樣本蛋白進(jìn)行定量。蛋白質(zhì)用120 g·L-1聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，然后轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上。用體積分?jǐn)?shù)5%脫脂乳緩沖液封閉，阻斷非特異性蛋白與膜的結(jié)合。然后與一抗SIRT1(11000)在4 ℃孵育12 h，與二抗孵育2 h，ECL試劑盒顯影。

2 結(jié)果

2.1 circRNA的差異基因在所有晶狀體前囊膜組織中，共檢測(cè)到21 659個(gè)可能的circRNA(ARC組17 038個(gè)和對(duì)照組11 380個(gè))。circRNA的長(zhǎng)度分布中位數(shù)為560 nt。設(shè)定的倍數(shù)變化>2.0，鑒定469個(gè)下調(diào)circRNA和1231個(gè)上調(diào)circRNA(圖1A),然后通過(guò)熱圖進(jìn)行層次聚類(lèi)分析展示差異表達(dá)的circRNA(圖1B)，得到前10位下調(diào)和上調(diào)最明顯的circRNA。經(jīng)qRT-PCR檢測(cè)，其中7個(gè)circRNA在對(duì)照組和ARC組晶狀體前囊膜組織中有明顯差異表達(dá)(圖1C)。通過(guò)計(jì)算機(jī)分析和文獻(xiàn)研究，確定了一個(gè)豐富而高度保守的基因circZNF292。

圖1 對(duì)照組和ARC組晶狀體前囊膜組織中差異表達(dá)的circRNA比較分析 A:火山圖，紅點(diǎn)代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異表達(dá)；B:circRNA差異倍數(shù)前10位的差異基因熱圖；C:qRT-PCR驗(yàn)證10個(gè)差異性表達(dá)最明顯的circRNA在對(duì)照組和ARC組晶狀體前囊膜組織中的表達(dá)情況(與對(duì)照組相比，aP<0.05)。

2.2 qRT-PCR驗(yàn)證circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1在晶狀體前囊膜組織中的表達(dá)使用TargetScan 和 StarBase 在線軟件預(yù)測(cè) miRNA 的 mRNA 靶標(biāo)?；谇捌诠ぷ骰A(chǔ)選擇氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因分析。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，circZNF292和SIRT1 mRNA在ARC組晶狀體前囊膜組織中均呈低表達(dá)(均為P<0.05)，而miR-23b-3p則呈高表達(dá)(P<0.05)(圖2)。經(jīng)雙變量Pearson相關(guān)分析，circZNF292與miR-23b-3p表達(dá)、miR-23b-3p與SIRT1 mRNA表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.935，-0.951，均為P<0.05)。

圖2 qRT-PCR檢測(cè)各基因在晶狀體前囊膜組織中的表達(dá)

2.3 circZNF292與miR-23b-3p、miR-23b-3p與SIRT1靶向關(guān)系雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果顯示，circZNF292與miR-23b-3p、miR-23b-3p與SIRT1均具有結(jié)合性(圖3)。

圖3 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)circZNF292與miR-23b-3p、miR-23b-3p與SIRT1靶向關(guān)系 A：circZNF292與miR-23b-3p的靶向關(guān)系；B：miR-23b-3p與SIRT1的靶向關(guān)系；C：雙熒光素酶報(bào)告分析。

2.4 沉默circZNF292而非線性ZNF292介導(dǎo)了HLE-B3細(xì)胞存活力降低circZNF292位于ZNF292宿主基因第二和第四個(gè)外顯子之間。circZNF292 siRNA組HLE-B3細(xì)胞中circRNA表達(dá)水平較NC siRNA組降低(0.35±0.06vs.1.00±0.07;t=23.041，P<0.001)，circZNF292+ZNF292 siRNA組circZNF292相對(duì)表達(dá)量也降低至0.32±0.05，但并不影響線性ZNF292的表達(dá)(0.96±0.13vs.1.00±0.09;t=0.935，P=0.359)。MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，NC siRNA組細(xì)胞D490為0.871±0.078，circZNF292 siRNA組細(xì)胞D490則降低至0.492±0.065(t=10.561，P<0.001)；而ZNF292 siRNA組細(xì)胞D490(0.859±0.084)與NC siRNA組相比幾乎一致(t=0.296，P=0.772)。此外，敲低circZNF292和線性ZNF292后，HLE-B3細(xì)胞D490則降低至0.503±0.058(t=10.706，P<0.001)，且與circZNF292 siRNA組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.357，P=0.726)。說(shuō)明下調(diào)circZNF292表達(dá)而非線性ZNF292表達(dá)顯著降低了HLE-B3細(xì)胞活力，因此在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，選擇性敲低circZNF292。

2.5 敲低circZNF292對(duì)H2O2誘導(dǎo)的HLE-B3細(xì)胞中ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量的影響NC siRNA組和空白對(duì)照組HLE-B3細(xì)胞中ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05)。應(yīng)用H2O2刺激后，與NC siRNA組相比，NC siRNA組+H2O2HLE-B3細(xì)胞中ROS、MDA含量均明顯升高(均為P<0.05)，SOD、GSH-Px含量均明顯降低(均為P<0.05)；而與NC siRNA組+H2O2相比，circZNF292 siRNA組+H2O2HLE-B3細(xì)胞中ROS、MDA含量則進(jìn)一步升高(均為P<0.05)，SOD、GSH-Px含量則進(jìn)一步降低(均為P<0.05)(表1)。

表1 敲低circZNF292對(duì)H2O2誘導(dǎo)的HLE-B3細(xì)胞中ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量的影響

2.6 circZNF292/miR-23b-3p/SIRT1軸參與了HLE-B3細(xì)胞功能的調(diào)控與空白對(duì)照組相比，NC siRNA組、NC inhibitor組、NC mimics組HLE-B3細(xì)胞中SIRT1蛋白表達(dá)幾乎一致(均為P>0.05)。與NC siRNA組相比，circZNF292 siRNA組HLE-B3細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)；與NC inhibitor組相比，miR-23b inhibitor組HLE-B3細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)；與NC mimics組相比，miR-23b mimics組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)；與circZNF292 siRNA組相比，circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)降低被逆轉(zhuǎn)(P<0.05)(圖4)。

圖4 Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá) A：空白對(duì)照組；B：NC siRNA組；C：circZNF292 siRNA組；D：NC inhibitor組；E：miR-23b inhibitor組；F：NC mimics組；G：miR-23b mimics組；H：circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor組。

NC siRNA組和空白對(duì)照組細(xì)胞活力(D490：0.86±0.04vs.0.87±0.06；t=0.392，P=0.701)、凋亡率[(6.71±1.79)%vs.(7.18±2.30)%；t=0.456，P=0.655]差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)H2O2刺激后，與NC siRNA組相比，NC siRNA組+H2O2HLE-B3細(xì)胞D490降低至0.34±0.02(t=23.698，P<0.001)，凋亡率增加至(38.95±3.48)%(t=21.541，P<0.001);與NC siRNA組+H2O2相比，circZNF292 siRNA組+H2O2HLE-B3細(xì)胞D490進(jìn)一步降低至0.24±0.01(t=39.867，P<0.001)，凋亡率進(jìn)一步增加至(60.08±7.31)%(t=45.782，P<0.001)；與NC inhibitor組相比，miR-23b inhibitor組HLE-B3細(xì)胞活力增加(D490：0.54±0.05vs.0.35±0.03；t=9.216，P<0.001)，凋亡率降低[(18.94±2.30)%vs.(40.11±4.98)%；t=10.921，P<0.001]；circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor組細(xì)胞活力(D490：0.43±0.07vs.0.24±0.01，t=7.600，P<0.001)和凋亡率[(38.95±4.46)%vs.(60.08±7.31)%；t=6.979，P<0.001]較circZNF292 siRNA組均被逆轉(zhuǎn)。

3 討論

晶狀體是人眼最重要的屈光介質(zhì)之一，正常生理狀態(tài)下為透明、無(wú)血管的組織；然而多種風(fēng)險(xiǎn)因素，如暴露于紫外線、吸煙、衰老、代謝紊亂、營(yíng)養(yǎng)不良等都會(huì)導(dǎo)致LECs發(fā)生氧化應(yīng)激損傷[11-12]。從分子學(xué)角度分析，氧化應(yīng)激可誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)核酸、脂類(lèi)、晶狀體蛋白質(zhì)和多糖的過(guò)氧化，激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和轉(zhuǎn)錄因子，導(dǎo)致眼晶狀體混濁，這被認(rèn)為是ARC發(fā)病的早期事件[9,13-15]。最近的研究表明，circRNA在白內(nèi)障中廣泛表達(dá)并對(duì)ARC的發(fā)展起一定作用[16-17]，但circRNA在氧化應(yīng)激中的作用仍不清楚，其可能通過(guò)靶向miRNA/mRNA通路影響LECs的凋亡[18-19]。因此，對(duì)circRNA/miRNA/mRNA網(wǎng)絡(luò)的研究對(duì)于開(kāi)發(fā)預(yù)防或治療ARC的藥物具有重要的臨床意義。

本研究利用二代測(cè)序技術(shù)詳細(xì)檢測(cè)了ARC患眼晶狀體中的circRNA表達(dá)譜，篩選得到circZNF292在ARC患者晶狀體前囊膜組織中顯著下調(diào)。circZNF292位于ZNF292宿主基因第二和第四個(gè)外顯子之間，在不同細(xì)胞系和組織中高度保守。為了確定是circZNF292還是線性ZNF292在體外調(diào)節(jié)HLE-B3細(xì)胞的功能，我們采用了三個(gè)小干擾RNA(siRNA)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：circZNF292 siRNA是直接針對(duì)circZNF292的反剪接序列，ZNF292 siRNA則直接針對(duì)線性ZNF292的序列，以及針對(duì)線性和circRNA共享的外顯子序列設(shè)計(jì)的siRNA。結(jié)果顯示，沉默circZNF292而非線性ZNF292能夠顯著抑制HLE-B3細(xì)胞活力。長(zhǎng)期以來(lái)，氧化應(yīng)激一直被認(rèn)為是ARC的一個(gè)主要誘發(fā)因素。氧化應(yīng)激增加了LECs的凋亡，而敲除circZNF292則進(jìn)一步增加了細(xì)胞凋亡率，并降低了細(xì)胞活性，這意味著晶狀體組織中，circZNF292低表達(dá)介導(dǎo)的LECs功能障礙可能是促進(jìn)ARC形成和進(jìn)展的主要因素之一。

此外，通過(guò)一個(gè)包括mRNA、miRNA和蛋白質(zhì)的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，circRNA已經(jīng)成為有前途的基因表達(dá)調(diào)節(jié)因子。在以往的研究中，circZNF292被證實(shí)可吸附多種miRNA，其中包括miR-23b-3p。本研究我們也證實(shí)，敲除circZNF292能顯著提高miR-23b-5p的表達(dá)水平。據(jù)報(bào)道，miR-23b-3p能夠通過(guò)調(diào)節(jié)SIRT1依賴(lài)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)高葡萄糖誘導(dǎo)的LECs代謝記憶，進(jìn)而促進(jìn)糖尿病視網(wǎng)膜病變[20]；此外miR-23b-3p可以通過(guò)靶向Sprouty2促進(jìn)卵磷脂的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化[21]。本研究我們發(fā)現(xiàn)，在晶狀體前膜囊組織中，miR-23b-3p表達(dá)與SIRT1呈負(fù)相關(guān)，而且雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果也支持circZNF292可作為miR-23b-3p的分子海綿直接與 miR-23b-3p結(jié)合，減輕miR-23b-3p對(duì)下游靶基因SIRT1的抑制作用。

綜上，我們通過(guò)對(duì)ARC患者晶狀體前囊膜組織中circRNA的差異表達(dá)分析和功能預(yù)測(cè)，篩選出與miR-23b-3p表達(dá)相關(guān)的基因circZNF292，而circZNF292則可通過(guò)miR-23b-3p/SIRT1軸來(lái)調(diào)節(jié)人LECs的氧化應(yīng)激損傷，被證實(shí)在ARC發(fā)病機(jī)制中具有潛在的抗氧化作用。然而，我們的臨床樣本只是基于透明和混濁晶狀體前囊膜的circRNA表達(dá)譜分析。circZNF292在不同類(lèi)型白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制中的具體作用尚不清楚，需要在各種白內(nèi)障和不同程度氧化損傷模型中使用與年齡匹配的人類(lèi)晶狀體進(jìn)一步研究circZNF292變化與ARC形成之間的關(guān)系。