聶 新，唐東昕

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550002；2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550001)

現(xiàn)代社會(huì)人們不健康的生活方式越來(lái)越多，癌癥的發(fā)生率也高居不下，據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)2021年最新公布的數(shù)據(jù)顯示[1-2]，預(yù)計(jì)2020年全球新增結(jié)直腸癌患者近193.16萬(wàn)人，死亡約93.52萬(wàn)人，死亡率高居癌癥死亡率的第二位。盡管目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)通過(guò)手術(shù)、放化療及靶向治療等手段干預(yù)結(jié)腸癌取得了一定的臨床療效，但治療引起的毒副作用常給患者的生活質(zhì)量及治療信心帶來(lái)消極影響。隨著惡性腫瘤個(gè)體化綜合治療的逐步推進(jìn)與深入發(fā)展，中醫(yī)藥在配合放化療時(shí)的減毒增效作用，以及對(duì)腫瘤患者的臨床癥狀、生活質(zhì)量及生存期等多方面的改善作用逐漸得到了廣泛認(rèn)可[3]，但其復(fù)雜的分子機(jī)制仍處于進(jìn)一步探索當(dāng)中。

葛根散原為張從正創(chuàng)制的解酒毒之方，記載于《儒門(mén)事親》，由葛根、葛花、甘草、貫眾、砂仁組成，具有清熱解毒、行氣化濕、醒脾解酒的功效[4]。研究表明，葛根散能有效抑制結(jié)腸腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)其凋亡，并能改善荷瘤小鼠的生存質(zhì)量[5]；葛根散方中葛根素、槲皮素等多種成分已被證實(shí)具有抗腫瘤的功效[6-7]，然而中藥復(fù)方治療惡性腫瘤具有多種組分、靶點(diǎn)、通路互作的特點(diǎn)，故本研究將應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法來(lái)預(yù)測(cè)葛根散治療結(jié)腸癌的潛在分子網(wǎng)絡(luò)機(jī)制，以期為今后的藥理及臨床研究提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 葛根散有效成分及靶點(diǎn)篩選

分別以“葛根、葛花、甘草、砂仁、貫眾”為關(guān)鍵詞在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中(https：//tcmspw.com/tcmsp.php)檢索葛根散的有效成分，設(shè)定篩選條件為：口服生物利用率(Oralbioavail ability，OB)≥20%，類(lèi)藥性(Drug-likeness，DL)≥0.1，并結(jié)合文獻(xiàn)資料對(duì)葛根散的有效成分進(jìn)行補(bǔ)充。應(yīng)用PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)檢索葛根散有效成分對(duì)應(yīng)的SMILES號(hào)，并將其導(dǎo)入Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.swisstargetprediction.ch/)以預(yù)測(cè)成分相應(yīng)靶點(diǎn)，設(shè)定Probability≥0.7[8]，所得靶點(diǎn)與TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中有效成分對(duì)應(yīng)的“Related Target”版塊所示靶點(diǎn)合并去重，最后運(yùn)用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.uniprot.org/)將獲得的靶標(biāo)蛋白名稱(chēng)轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的基因Symbol。

1.2 結(jié)腸癌相關(guān)靶點(diǎn)篩選

以“Colon Cancer”為關(guān)鍵詞，“Relevance Score≥10”為篩選條件[9]，在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.genecards.org/)檢索結(jié)腸癌相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 葛根散抗結(jié)腸癌潛在作用靶點(diǎn)篩選

將葛根散靶點(diǎn)與結(jié)腸癌靶點(diǎn)導(dǎo)入Venn在線(xiàn)平臺(tái)(Calculate and draw custom Venn diagrams，http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)繪制韋恩圖，以獲取兩者的交集靶點(diǎn)——即葛根散抗結(jié)腸癌的潛在作用靶點(diǎn)。

1.4 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選

運(yùn)用String數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.string-db.org/)對(duì)葛根散抗結(jié)腸癌潛在作用靶點(diǎn)進(jìn)行蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI Network)分析，設(shè)置“Organism=Homo sapiens”“High confidence(0.700)”并隱藏離散的蛋白節(jié)點(diǎn)；利用Cytoscape 3.7.1軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行拓?fù)浞治霾⒖梢暬?，依?jù)拓?fù)浞治鏊玫墓?jié)點(diǎn)度值(Degree)、間距中心度(Betweenness Centrality，BC)以及緊密中心度(Closeness Centrality，CC)篩選出葛根散治療結(jié)腸癌的核心靶點(diǎn)。

1.5 葛根散抗結(jié)腸癌核心靶點(diǎn)GO及KEGG富集分析

運(yùn)用Metascape平臺(tái)(http：//metascape.org/)對(duì)葛根散治療結(jié)腸癌的核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO及KEGG富集分析，設(shè)置“PValue<0.01”；運(yùn)用Bioinformatics平臺(tái)(http：//www.bioinformatics.com.cn/)繪制GO及KEGG富集分析氣泡圖。

1.6 網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建

利用Cytoscape 3.7.1軟件繪制“成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，并依據(jù)度值篩選出葛根散的主要作用成分。

1.7 化合物-靶點(diǎn)分子對(duì)接

運(yùn)用PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)檢索葛根散主要作用成分的2D結(jié)構(gòu)，使用ChemBioOffice軟件將其轉(zhuǎn)換為3D結(jié)構(gòu)并保存為Mol2格式；在RCSB PDB數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www1.rcsb.org/)檢索葛根散治療結(jié)腸癌核心靶點(diǎn)的蛋白結(jié)構(gòu)，導(dǎo)入Pymol軟件去除水分子并分離蛋白及原始配體，運(yùn)用Autodock Tool軟件將化合物、蛋白及原始配體均轉(zhuǎn)化為pdbqt格式，最后運(yùn)用Autodock Vina進(jìn)行分子對(duì)接，運(yùn)用Pymol進(jìn)行對(duì)接可視化。

2 結(jié)果

2.1 葛根散有效成分及相關(guān)靶點(diǎn)

通過(guò)檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)補(bǔ)充后[10-16]共篩選出活性成分216種，其中葛根12種、葛花41種、砂仁28種、貫眾9種、甘草126種，剔除重復(fù)部分后得到葛根散活性成分190種。將TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)及Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到的相關(guān)靶點(diǎn)合并去重后共得到葛根散成分靶點(diǎn)425個(gè)。

2.2 葛根散治療結(jié)腸癌潛在作用靶點(diǎn)

根據(jù)關(guān)鍵詞及篩選條件在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)共檢索出結(jié)腸癌相關(guān)靶點(diǎn)1 556個(gè)，將其與葛根散成分靶點(diǎn)一同導(dǎo)入Venn在線(xiàn)平臺(tái)繪制韋恩圖(圖1)，得到交集靶點(diǎn)——即葛根散治療結(jié)腸癌的潛在作用靶點(diǎn)227個(gè)。

圖1 葛根散-結(jié)腸癌交集靶點(diǎn)韋恩圖

2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)分析及核心靶點(diǎn)篩選

應(yīng)用String數(shù)據(jù)庫(kù)及Cytoscape 3.7.1軟件分析葛根散治療結(jié)腸癌的潛在作用靶點(diǎn)并可視化(圖2)；圖中共有224個(gè)節(jié)點(diǎn)，依據(jù)各節(jié)點(diǎn)Degree值對(duì)其大小及顏色進(jìn)行調(diào)整，節(jié)點(diǎn)越大、顏色越深則表示相應(yīng)Degree值越高，在整個(gè)網(wǎng)絡(luò)中的作用越重要。依據(jù)拓?fù)浞治鼋Y(jié)果，以節(jié)點(diǎn)Degree>2倍Degree中位數(shù)(34)及BC、CC大于各自中位數(shù)(BC：0.00113829，CC：0.444666445)為標(biāo)準(zhǔn)，篩選出TP53、AKT1、IL-6、INS、MAPK1等共43個(gè)核心靶點(diǎn)(表1)，這些靶點(diǎn)可能在葛根散抗結(jié)腸癌過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

圖2 葛根散-結(jié)腸癌交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖

表1 葛根散抗結(jié)腸癌核心靶點(diǎn)拓?fù)鋮?shù)

2.4 核心靶點(diǎn)GO及KEGG富集分析

將葛根散治療結(jié)腸癌的核心靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape平臺(tái)進(jìn)行GO及KEGG富集分析。GO功能注釋及富集分析結(jié)果共涉及1 637條條目，包括膜筏、膜微結(jié)構(gòu)域、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合物、黏著斑、常染色質(zhì)等48項(xiàng)細(xì)胞組分條目，轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、激酶結(jié)合、蛋白激酶結(jié)合等81項(xiàng)分子功能條目，以及調(diào)控DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性、生長(zhǎng)因子的應(yīng)答、細(xì)胞遷移的正調(diào)控等1 508項(xiàng)生物學(xué)過(guò)程條目。分別篩選出細(xì)胞組分、分子功能、生物學(xué)過(guò)程3項(xiàng)中P值最小的前20項(xiàng)條目制作氣泡圖(見(jiàn)圖3、圖4、圖5)，圖中縱向軸為對(duì)各條目的描述，橫向軸為log(Pvalue)值，氣泡的顏色及面積分別對(duì)應(yīng)P值與富集到的靶點(diǎn)信息(Count)；條目的log(Pvalue)值越大，對(duì)應(yīng)的P值則越小，氣泡顏色偏紅；氣泡面積越大，則該條目富集到的靶點(diǎn)信息越多。

圖3 細(xì)胞組分氣泡圖

圖4 分子功能氣泡圖

圖5 生物學(xué)過(guò)程氣泡圖

核心靶點(diǎn)KEGG信號(hào)通路分析共富集到140條信號(hào)通路，主要涉及癌癥通路(Pathways in cancer)、癌癥相關(guān)蛋白聚糖通路(Proteoglycans in cancer)、膀胱癌通路(Bladder cancer)、前列腺癌通路(Prostate cancer)、胰腺癌通路(Pancreatic cancer)、FoxO信號(hào)通路(FoxO signaling pathway)、結(jié)直腸癌通路(Colorectal cancer)等腫瘤信號(hào)通路，TNF信號(hào)通路(TNF signaling pathway)、IL-17信號(hào)通路(IL-17 signaling pathway)、Toll樣受體信號(hào)通路(Toll-like receptor signaling pathway)等炎癥相關(guān)通路以及與內(nèi)分泌、心血管、感染性疾病有關(guān)的多種類(lèi)別信號(hào)通路。依據(jù)信號(hào)通路P值由小到大選取前20條制作氣泡圖(圖6)，圖中縱向軸為信號(hào)通路釋義，橫向軸為通路相應(yīng)的-log(pvalue)值；信號(hào)通路的-log(pvalue)值越大，則相應(yīng)P值越小，氣泡顏色偏紅；氣泡面積越大，則該通路富集到的靶點(diǎn)信息越多。

圖6 KEGG信號(hào)通路氣泡圖

2.5 “成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖的繪制

運(yùn)用Cytoscape 3.7.1軟件制作“成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖(圖7)，左側(cè)網(wǎng)絡(luò)圖以葛根散中5味中藥為中心節(jié)點(diǎn)，綠色節(jié)點(diǎn)為中藥間共有成分，黃色節(jié)點(diǎn)為葛根特有成分，橘色節(jié)點(diǎn)為葛花特有成分，粉色節(jié)點(diǎn)為貫眾特有成分，淺紫色節(jié)點(diǎn)為砂仁特有成分，藍(lán)色節(jié)點(diǎn)為甘草特有成分，右側(cè)網(wǎng)絡(luò)圖中圓形節(jié)點(diǎn)為葛根散抗結(jié)腸癌核心靶點(diǎn)，方形節(jié)點(diǎn)為P值最小的前20條KEGG信號(hào)通路。對(duì)該網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行拓?fù)浞治?，按Degree值由大到小的葛根散成分節(jié)點(diǎn)依次為槲皮素(Quercetin)、金雀異黃素(Genistein)、葛根素(Puerarin)、山柰酚(Kaempferol)、大豆苷元(Daidzein)，這些可能是葛根散治療結(jié)腸癌的主要成分。見(jiàn)表2、圖8。

圖7 “成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖

表2 葛根散抗結(jié)腸癌主要成分

圖8 葛根散核心成分結(jié)構(gòu)圖

2.6 分子對(duì)接結(jié)果

將葛根散治療結(jié)腸癌的主要成分槲皮素、金雀異黃素、葛根素分別與作用核心靶點(diǎn)TP53、AKT1、IL-6、INS、MAPK1進(jìn)行對(duì)接。研究發(fā)現(xiàn)，配體與受體對(duì)接結(jié)合能(Affinity)小于-5.0kcal/mol則提示二者具有較好的結(jié)合活性[17]；分子對(duì)接結(jié)果顯示，槲皮素、金雀異黃素、葛根素與各靶蛋白對(duì)接后結(jié)合能均≤-5.0kcal/mol，其中各成分與AKT1(PDB ID：3O96)的結(jié)合活性更佳。結(jié)果見(jiàn)表3、圖9。

表3 分子對(duì)接結(jié)合能

圖9 分子對(duì)接示意圖

3 討論

結(jié)直腸癌癥狀與中醫(yī)古籍所述“腸蕈”“鎖肛痔”等疾病的癥狀類(lèi)似，故可將其歸屬于該范疇。劉尚義教授將結(jié)直腸癌的中醫(yī)病因病機(jī)歸納為先天不足、脾腎兩虛，加之飲食失節(jié)、情志失調(diào)、久居濕地等，而致脾虛失運(yùn)、濕熱內(nèi)生、蘊(yùn)結(jié)成毒、濕熱毒邪搏結(jié)于大腸[18]。其他醫(yī)家亦有各自的見(jiàn)解，一般認(rèn)為結(jié)直腸癌病因病機(jī)與正氣虛弱、飲食不當(dāng)所致脾胃受損、濕熱瘀毒蘊(yùn)結(jié)大腸有關(guān)[19]。葛根散出自張從正所著《儒門(mén)事親》，原為治療酒傷所致諸癥的常用方劑，具有清熱解毒、行氣化濕之效[4]。國(guó)醫(yī)大師劉尚義教授以葛根散為基礎(chǔ)方加減創(chuàng)制了具有養(yǎng)陰散結(jié)、活血消癥功效的蟾靈膏[20]，用于治療各類(lèi)良、惡性腫瘤。根據(jù)臨床研究顯示，蟾靈膏能改善氣滯血瘀型腸癌患者的臨床癥狀，提高患者生活質(zhì)量[21]；不過(guò)目前有關(guān)葛根散治療結(jié)腸癌的有效成分、靶點(diǎn)及機(jī)制還不十分明確，故本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步探討。

本研究PPI網(wǎng)絡(luò)圖中共有224個(gè)節(jié)點(diǎn)，經(jīng)拓?fù)浞治龊Y選出葛根散治療結(jié)腸癌核心靶點(diǎn)43個(gè)，依據(jù)節(jié)點(diǎn)Degree值由大到小排名靠前的核心靶點(diǎn)依次為腫瘤蛋白p53(Tumor protein p53，TP53)、蛋白激酶B-α(Protein kinase B alpha，AKT1)、白介素-6(Interleukin-6，IL-6)、胰島素(Insulin，INS)、絲裂原活化蛋白激酶1(Mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1)等。腫瘤蛋白p53(TP53)是由抑癌基因p53編碼的一種DNA序列特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子[22]，參與轉(zhuǎn)錄、DNA重組與修復(fù)、細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞增殖與凋亡及血管生成等多個(gè)生物學(xué)進(jìn)程[23]，對(duì)防止腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要意義，約有60%的結(jié)直腸癌患者會(huì)出現(xiàn)p53基因突變[24]，從而失去對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、分化等過(guò)程的抑制作用。蛋白激酶B-α(AKT1)作為介導(dǎo)PI3K/AKT信號(hào)通路中關(guān)鍵的一員[9]，是其上游調(diào)節(jié)因子PI3K主要的效應(yīng)對(duì)象[25]，活化后的AKT1與細(xì)胞的增殖、凋亡、周期調(diào)控以及機(jī)體葡萄糖代謝等多種生物學(xué)過(guò)程密切相關(guān)[26]；AKT1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯升高[9]，且升高程度與腫瘤的體積、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否呈正相關(guān)[27]。白介素-6(IL-6)是由單核巨噬細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌的，能參與免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞增殖與分化調(diào)控等過(guò)程的多效炎癥細(xì)胞因子，IL-6的失調(diào)控可能導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生[28]，其促進(jìn)增殖及抑制凋亡的作用主要由STAT3介導(dǎo)，STAT3作為IL-6的下游效應(yīng)因子，可通過(guò)上調(diào)cyclin D、PCNA、Bcl-xL、Bcl-2等基因及蛋白的表達(dá)來(lái)抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖[29]；研究顯示，IL-6的高表達(dá)還能通過(guò)IL-6/STAT3信號(hào)通路引起結(jié)腸癌HCT-116/5-FU細(xì)胞耐藥[30]；同時(shí)IL-6對(duì)調(diào)控腫瘤炎性微環(huán)境也具有重要作用。此外，結(jié)腸癌患者血清的IL-6水平顯著升高[31]，故可考慮將其作為判斷結(jié)腸癌預(yù)后的指標(biāo)之一[32-33]。胰島素(Insulin)對(duì)PI3K/AKT、FoxO、MAPK等信號(hào)通路均能起到調(diào)控作用，從而影響腫瘤的進(jìn)展[34-35]。研究證實(shí)，胰島素通過(guò)上調(diào)ACAT1表達(dá)促進(jìn)了結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖與遷移[36]。絲裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)是調(diào)控細(xì)胞增殖與分化的關(guān)鍵因子，研究證明，下調(diào)MAPK1的表達(dá)可抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、凋亡與侵襲[37]。

網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鲲@示，槲皮素、金雀異黃素、葛根素、山柰酚及大豆苷元可能是葛根散抗結(jié)腸癌主要成分；槲皮素是一類(lèi)天然黃酮醇類(lèi)化合物。研究顯示，槲皮素通過(guò)可調(diào)控p53、Caspase-3、Bax、Bcl-2、CDK、MMP-9等多種基因及蛋白的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)抗腫瘤效應(yīng)[38-40]，且能通過(guò)下調(diào)P-糖蛋白(P-gp)的表達(dá)降低細(xì)胞的外排作用，來(lái)逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥，同時(shí)在聯(lián)合放化療時(shí)有較好的協(xié)同作用[41-42]。金雀異黃素、葛根素、大豆苷元為葛根與葛花共有活性成分；金雀異黃素具有十分廣泛的抗腫瘤特性，除了對(duì)細(xì)胞凋亡、增殖及遷移的影響以外[43]，還可促使LC3I轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)C3II，從而誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生自噬[44]，并能特異性抑制增殖狀態(tài)下的血管內(nèi)皮細(xì)胞，通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF、EGF、TGF-α、PDGF等來(lái)抑制血管生成，是十分安全且有效的血管生成抑制劑。同時(shí)，金雀異黃素還可通過(guò)抑制酪氨酸蛋白激酶(PTK)、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II(Topo II)、胰島素樣生長(zhǎng)因子I(IGF-1)等多種酶及生長(zhǎng)因子的活性來(lái)起到抗腫瘤的作用[45]。異黃酮類(lèi)化合物的主要成分葛根素[46]，同大豆苷元、山柰酚一樣具有明確的抗腫瘤效應(yīng)[6，45，47，48]。

GO分析結(jié)果顯示，葛根散治療結(jié)腸癌核心靶點(diǎn)所涉及的生物學(xué)過(guò)程主要富集在DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性的調(diào)控、對(duì)生長(zhǎng)因子的應(yīng)答、細(xì)胞遷移的正向調(diào)控、血管生成等方面。KEGG分析表明，葛根散對(duì)結(jié)腸癌的治療作用主要是通過(guò)調(diào)控癌癥通路、癌癥蛋白多糖通路、TNF信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、結(jié)直腸癌通路等多信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。白介素-17作為十分重要的促炎因子，可通過(guò)激活NF-κB、MAPK信號(hào)通路，上調(diào)IL-6、TNF、COX-2等多種因子表達(dá)來(lái)促進(jìn)腫瘤相關(guān)炎癥反應(yīng)[49]。在腫瘤中，F(xiàn)oxO信號(hào)通路與其上游的PI3K/AKT信號(hào)通路關(guān)系最為密切，F(xiàn)oxO轉(zhuǎn)錄因子激活后可通過(guò)阻滯細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞凋亡等方式發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)[50]，但被PI3K激活后的AKT可使FoxO磷酸化并降解，從而引起腫瘤進(jìn)展。Toll樣受體信號(hào)通路的異常激活與結(jié)直腸癌的發(fā)生亦密切相關(guān)，其作用機(jī)制之一可能與腸道菌群-Toll樣受體信號(hào)通路-炎性反應(yīng)以及腫瘤級(jí)聯(lián)反應(yīng)有關(guān)[51]，此外，KEGG信號(hào)通路還涉及內(nèi)分泌、心血管、感染性疾病等多種機(jī)制通路，提示葛根散可能對(duì)該類(lèi)疾病同樣具有治療作用。

綜上，葛根散治療結(jié)腸癌是通過(guò)多組分、多靶點(diǎn)、多通路、多機(jī)制的協(xié)同作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的，其發(fā)揮作用的主要成分可能為槲皮素、金雀異黃素、葛根素、山柰酚及大豆苷元，涉及的靶點(diǎn)主要有TP53、AKT1、IL-6、INS、MAPK1，并通過(guò)調(diào)節(jié)癌癥通路、癌癥蛋白多糖通路、FoxO信號(hào)通路等腫瘤通路及TNF信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路等炎癥通路多途徑發(fā)揮抗結(jié)腸癌作用，且葛根散主要成分與作用核心靶點(diǎn)間有較好的結(jié)合活性。結(jié)果表明葛根散治療結(jié)腸癌除了發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖等作用外[5]，還能夠起到調(diào)控腫瘤炎癥微環(huán)境的作用。腫瘤炎性微環(huán)境是導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、耐藥的重要原因之一，機(jī)體在感受濕熱之邪時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)并發(fā)生炎癥反應(yīng)，且“濕熱蘊(yùn)毒”的病機(jī)過(guò)程與炎-癌轉(zhuǎn)化的進(jìn)程具有一定的相似性且關(guān)系密切[52]，故結(jié)腸癌發(fā)生的病理過(guò)程與其中醫(yī)病機(jī)高度相符；加之葛根散具有清熱解毒、行氣化濕之效，故可推測(cè)葛根散對(duì)治療結(jié)腸癌有較好的療效，但由于本研究?jī)H對(duì)篩選出來(lái)的葛根散治療結(jié)腸癌的核心作用靶點(diǎn)進(jìn)行了網(wǎng)絡(luò)分析，故在探究其作用機(jī)制上還存在一定的局限性，還需要對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步探索，并給予實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，以更好地挖掘葛根散的臨床作用。