姜翠霞，胡長(zhǎng)勝，魏海燕，王憲舉，唐一國(guó)，丁路明,2*

(1.蘭州大學(xué) 草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/蘭州大學(xué) 生態(tài)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.青海大學(xué) 青海省高寒草地適應(yīng)性管理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧 810016;3. 四川康巴情生態(tài)農(nóng)牧科技集團(tuán)有限公司，四川 成都 610213)

牦牛是青藏高原地區(qū)主要的家畜，是牧區(qū)牧民重要的生產(chǎn)生活資料。牦牛適應(yīng)高寒缺氧的極端環(huán)境條件，主要分布于青海、西藏、四川、甘肅、新疆、云南等省份。西藏自治區(qū)有近462×10頭牦牛，居民生活所需40%的奶以及50%的肉均來(lái)自牦牛。牦牛乳肉等產(chǎn)品以綠色、天然著稱，在當(dāng)前和將來(lái)養(yǎng)殖模式下，探索植物源性飼料添加劑以提高牦牛健康水平、減少獸藥的使用是維系高品質(zhì)牦牛畜產(chǎn)品的必由之路。研究表明，飼糧中添加黃芪多糖、大豆異黃酮以及葛根提取物等中草藥成分能夠顯著提高母豬以及荷斯坦奶牛的泌乳量和乳品質(zhì)，但以泌乳牦牛為試驗(yàn)對(duì)象的此類研究還鮮有報(bào)道。

黃芪()為豆科植物，以根入藥，具有藥物性和營(yíng)養(yǎng)性雙重功效，富含多糖、黃酮、皂苷等多種功能性成分，能夠提高動(dòng)物機(jī)體免疫能力，增強(qiáng)動(dòng)物對(duì)疾病的抵抗力。當(dāng)歸()為傘形科藥用植物，以根入藥，富含揮發(fā)油、有機(jī)酸、多糖、香豆素、黃酮以及維生素和微量元素等，具有補(bǔ)血、調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)燥通便之功效。

本試驗(yàn)通過(guò)給泌乳牦牛補(bǔ)飼黃芪和當(dāng)歸，分析其對(duì)營(yíng)養(yǎng)代謝、血液生理生化指標(biāo)和乳品質(zhì)的影響，以期提高牦牛營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝與利用，提高其免疫能力和抗氧化能力，并起到改善乳品質(zhì)的效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)于2019年7月17日至9月30日在西藏那曲羌塘牧業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司的牧場(chǎng)開(kāi)展(N31 °44 ′, E92 °03 ′)，平均海拔4 680 m，試驗(yàn)期間最高氣溫16 ℃，最低氣溫0 ℃。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選取體重、年齡、產(chǎn)犢時(shí)間基本一致、健康狀況良好的當(dāng)年泌乳牦牛24頭(3～4胎次)，白天自由放牧，傍晚歸牧后飼喂精補(bǔ)料和中藥粉，將試驗(yàn)牛隨機(jī)分為中藥組(ZY)和對(duì)照組(CK)，每組12頭。黃芪和當(dāng)歸干燥根購(gòu)自甘肅省隴西縣藥材交易市場(chǎng)，為2018年收獲藥材，洗凈烘干后粉碎過(guò)1 mm篩網(wǎng)。黃芪和當(dāng)歸粉的比例為2.5∶1，按照每頭牦牛日采食干物質(zhì)量(5 kg/d)的7%添加，即每天添加飼喂混合中藥粉350 g。為了便于牦牛采食補(bǔ)飼中藥，將中藥與精補(bǔ)料(200 g)混合后飼喂，對(duì)照組僅飼喂精補(bǔ)料，不添加黃芪當(dāng)歸粉。試驗(yàn)期為83 d，預(yù)試期15 d，正試期68 d。

1.3 試驗(yàn)飼糧及中藥

精補(bǔ)料、黃芪粉和當(dāng)歸粉的營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。采用高效液相色譜法和比色法測(cè)得黃芪粉中黃芪多糖含量為125.80 mg/g DM，黃酮含量為12.34 mg/g DM，甲苷含量為87.00 mg/g DM；當(dāng)歸粉中當(dāng)歸多糖含量為97.23 mg/g DM，阿魏酸含量為1.43 mg/g DM，藁本內(nèi)酯含量為14.60 mg/g DM。

表1 補(bǔ)飼料組成及其營(yíng)養(yǎng)成分(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.4 樣品采集

試驗(yàn)正試期開(kāi)始設(shè)為第1天，分別在第1、15、30、46、68天晨飼前采集牦牛乳100 mL，分裝于50 mL離心管中，-20 ℃貯存；采集試驗(yàn)牛頸靜脈血液10 mL分別置于2個(gè)5 mL不含抗凝劑的真空采血管中，立即帶回西藏那曲國(guó)家農(nóng)業(yè)科技示范園區(qū)實(shí)驗(yàn)室，4 ℃、3 000 r/min離心15 min，用2 mL一次性膠頭滴管采集上層血清，分裝于1.2 mL離心管中-80 ℃貯存。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 精補(bǔ)料和中藥營(yíng)養(yǎng)成分分析 參照王憲舉等方法測(cè)定精補(bǔ)料和中藥營(yíng)養(yǎng)成分;使用全自動(dòng)纖維分析儀(ANKOM，2000i)測(cè)定中性洗滌纖維(Neutral Detergent Fiber, NDF)和酸性洗滌纖維(Acid detergent fiber, ADF)含量；使用全自動(dòng)凱氏定氮儀(Hanon, JK-9830)測(cè)定粗蛋白質(zhì)(Crude Protein, CP)含量；采用550 ℃高溫灼燒法測(cè)定粗灰分(Ash)含量；粗脂肪(Ether Extract, EE)用脂肪測(cè)定儀(Hanon, SOX500)測(cè)定。

1.5.2 牛乳營(yíng)養(yǎng)成分和免疫指標(biāo)測(cè)定 乳樣送至北京奶牛中心乳品質(zhì)檢測(cè)站采用乳成分體細(xì)胞數(shù)聯(lián)機(jī)測(cè)定儀(YQ1-55)進(jìn)行乳蛋白(Milk protein)、乳脂肪(Milk fat)、乳糖(Milk lactose)、尿素氮(Milk urea nitrogen)和體細(xì)胞數(shù)(Somatic cell count)測(cè)定，其中第46天樣品在送樣運(yùn)輸過(guò)程中損壞，因此未對(duì)該時(shí)期牛乳營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行檢測(cè)。乳鐵蛋白(Lactoferrin)和分泌型免疫球蛋白A(sIgA)2個(gè)免疫指標(biāo)委托北京華英生物技術(shù)研究所采用酶標(biāo)分析儀(華衛(wèi)德朗DR-200BS)測(cè)定。

1.5.3 血清生化、免疫和抗氧化指標(biāo)測(cè)定 血清生化指標(biāo)總蛋白(Total protein, TP)、白蛋白(Albumin, ALB)、尿素氮(Urea nitrogen, UN)、葡萄糖(Glucose, GLU)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、總膽固醇(Total cholesterol, TCh)、肌酐(Creatinine, CREA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-pyruvic Transaminase, ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic oxaloacetic Transaminase, AST)委托北京華英生物技術(shù)研究所采用全自動(dòng)生化分析儀(邁瑞B(yǎng)S420，深圳)測(cè)定。

血清免疫指標(biāo)免疫球蛋白A(Immunoglobulin A, IgA)、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M, IgM)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G, IgG)、一氧化氮(NO)、白細(xì)胞介素-2(Interleukin-2, IL-2)、白細(xì)胞介素-6(Interleukin-4, IL-6)、γ-干擾素(Interferon-γ, IFN-γ)和腫瘤壞死因子α(Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α)委托北京華英生物技術(shù)研究所進(jìn)行測(cè)定，其中IgA、IgM、IgG采用全自動(dòng)生化分析儀(邁瑞B(yǎng)S420，深圳)測(cè)定，其他指標(biāo)采用酶標(biāo)儀(華衛(wèi)德朗DR-200BS，無(wú)錫)測(cè)定。

血清抗氧化指標(biāo)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase, GSH-Px)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)用試劑盒(南京建成生物工程研究所)進(jìn)行測(cè)定。

生長(zhǎng)激素(Growth hormone, GH)采用牛生長(zhǎng)激素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所)測(cè)定。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2010進(jìn)行初步整理，用SPSS 25.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本檢驗(yàn)分析對(duì)照組和中藥組間的顯著性差異，對(duì)于4次采集樣品的時(shí)間效應(yīng)數(shù)據(jù)分析采用SAS 21.0進(jìn)行線性和二次回歸分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 牦牛血清生化指標(biāo)

飼喂中藥黃芪和當(dāng)歸在試驗(yàn)第68天顯著降低了泌乳牦牛血清肌酐含量(<0.05)，對(duì)其他血清生化指標(biāo)沒(méi)有顯著影響(>0.05)(表2)。隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，中藥組和對(duì)照組牦牛血清總蛋白、葡萄糖，白蛋白以及血清尿素氮含量呈顯著線性和二次方下降趨勢(shì)(<0.05)。而兩組牦牛血清肌酐、甘油三酯和谷草轉(zhuǎn)氨酶含量以及對(duì)照組總膽固醇、中藥組尿素氮僅呈現(xiàn)顯著的二次方變化趨勢(shì)(<0.05)，肌酐和尿素氮先降低后升高，甘油三酯、谷草轉(zhuǎn)氨酶和總膽固醇先升高后降低。

表2 添加黃芪當(dāng)歸粉對(duì)泌乳牦牛血清生化指標(biāo)的影響

2.2 牦牛血清免疫指標(biāo)

總體來(lái)看，飼喂中藥黃芪和當(dāng)歸顯著提高了泌乳牦牛血清IgA、IgM、IgG水平(<0.05)，尤其是IgM和IgG在前3個(gè)取樣期處理組均顯著高于對(duì)照組(<0.05)(表3)。在試驗(yàn)第46天和第68天，IgA含量中藥組顯著高于對(duì)照組(<0.05)，而在前2次取樣期兩組沒(méi)有顯著差異(>0.05)。隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，兩組牦牛血清IgA、IgM、IgG水平呈現(xiàn)下降趨勢(shì)(<0.05)，但時(shí)間和處理交互作用影響不顯著。在試驗(yàn)前3個(gè)取樣時(shí)期，中藥組牦牛血清NO含量均顯著高于對(duì)照組(<0.05)，兩組牦牛血清NO隨飼喂時(shí)間呈顯著降低趨勢(shì)，且具有顯著的時(shí)間和處理交互作用(<0.05)。兩組牦牛INF-γ、TNF-α、IL-2、IL-6均隨飼喂時(shí)間呈升高趨勢(shì)，且INF-γ和IL-2具有顯著的時(shí)間和處理交互作用(<0.05)。INF-γ含量在試驗(yàn)第15天中藥組顯著低于對(duì)照組，而在第30天和68天中藥組顯著高于對(duì)照組(<0.05)。第68天中藥組IL-2水平顯著高于對(duì)照組(<0.05)。

表3 添加黃芪當(dāng)歸粉對(duì)泌乳牦牛血清免疫指標(biāo)的影響

2.3 牦牛血清生長(zhǎng)激素和抗氧化指標(biāo)

中藥飼喂組牦牛血清GH，GSH-Px含量均顯著高于對(duì)照組(<0.05)，血清SOD含量顯著高于對(duì)照組(<0.05)，而MDA含量顯著低于對(duì)照組(<0.05)(表4)。對(duì)照組和中藥組牦牛血清SOD含量在飼喂后期(第68天)低于前期(第15天)(<0.05)。

表4 添加黃芪當(dāng)歸粉對(duì)泌乳牦牛血清生長(zhǎng)激素和抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 牦牛乳營(yíng)養(yǎng)成分和免疫指標(biāo)

飼喂中藥黃芪和當(dāng)歸在整個(gè)試驗(yàn)期顯著提高了牦牛乳蛋白和乳糖含量，第68天中藥組乳脂肪含量顯著高于對(duì)照組(<0.05)(表5)。在第15天中藥組牦牛乳體細(xì)胞數(shù)顯著低于對(duì)照組(<0.05)。第15、68天中藥組尿素氮含量顯著降低(<0.05)。整個(gè)試驗(yàn)期間，中藥組牦牛乳鐵蛋白含量顯著高于對(duì)照組(<0.01)。隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，牛乳中脂肪、乳蛋白、乳鐵蛋白、分泌性免疫球蛋白A含量呈現(xiàn)線性增加(<0.05)，而乳糖含量呈線性下降(<0.01)。

表5 添加黃芪當(dāng)歸粉對(duì)泌乳牦牛牛乳營(yíng)養(yǎng)成分和免疫指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 飼喂黃芪當(dāng)歸對(duì)泌乳牦牛血清生化指標(biāo)的影響

血清TP、ALB、GLU、BUN、CREA含量反映動(dòng)物機(jī)體蛋白質(zhì)消化代謝以及氮利用的情況，也可反映腎臟和肝臟的健康水平。血清TP一定程度上反映了日糧中蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)水平及消化吸收狀況，當(dāng)體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成作用增強(qiáng)時(shí)，氮沉積增加，血液中TP含量升高。而ALB在氮代謝障礙時(shí)可作為氮源為組織提供營(yíng)養(yǎng)，血清中的總蛋白、白蛋白與動(dòng)物機(jī)體蛋白質(zhì)、脂肪、氨基酸代謝聯(lián)系密切。血清TP和ALB含量升高表明動(dòng)物機(jī)體代謝旺盛，蛋白質(zhì)和脂肪吸收增強(qiáng)。當(dāng)飼糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不平衡，家畜采食量降低，能量攝入不足時(shí)，會(huì)導(dǎo)致血清TP含量下降。在本研究中，對(duì)照組和中藥組牦牛血清TP和ALB含量沒(méi)有差異，但都隨飼喂時(shí)間呈降低趨勢(shì)，表明隨著持續(xù)放牧以及牧草生長(zhǎng)的減緩和停止，牧草生物量、粗蛋白含量降低，纖維含量升高，草地可利用氮營(yíng)養(yǎng)逐漸降低，牦牛體內(nèi)的蛋白質(zhì)合成與代謝減弱。研究發(fā)現(xiàn)青草期時(shí)藏系綿羊血清中白蛋白和球蛋白含量均顯著高于枯草期。

血清TG和TCh是動(dòng)物體內(nèi)脂肪代謝的中間產(chǎn)物，能直接反映機(jī)體對(duì)脂肪消化利用的情況，當(dāng)脂類消化吸收不良時(shí)，血清TG含量下降。在本試驗(yàn)中血清TG測(cè)定結(jié)果表明中藥添加有促進(jìn)脂肪代謝的作用。研究發(fā)現(xiàn)在育肥豬日糧中添加中草藥能夠顯著提高肌肉粗脂肪含量，但隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，TG和TCh均呈先升高后降低的趨勢(shì)(中藥添加組TCh沒(méi)有變化)，其主要原因是由于隨牧草生長(zhǎng)，在生長(zhǎng)旺盛期(8月份)粗脂肪含量最高，隨后降低，牦牛攝入的脂肪量受飼草脂肪含量變化影響。

肌酐是由肌肉中磷酸肌酸的非酶促反應(yīng)生成，受家畜體重、肌肉含量及生理期影響，受飼料影響非常小。血清肌酐含量升高，其原因可能是由于腎臟受到一定程度的損傷，不能充分排出體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)物。本試驗(yàn)結(jié)果顯示在中藥黃芪當(dāng)歸飼喂后期(第68天)中藥組牦牛血清肌酐含量低于對(duì)照組，表明中藥飼喂一定時(shí)間后對(duì)牦牛腎臟的功能和健康具有有益作用。而隨著飼喂時(shí)間肌酐表現(xiàn)的先降低后升高的趨勢(shì)表明在牧草生長(zhǎng)旺盛期(8月份)，較高的草地牧草生物量和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值降低了牦牛腎臟負(fù)擔(dān)，增強(qiáng)了其排出蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)物的能力。尿素氮是機(jī)體蛋白質(zhì)代謝過(guò)程的主要終端產(chǎn)物，是反應(yīng)反芻動(dòng)物蛋白質(zhì)代謝的重要指標(biāo)。尿素氮與體內(nèi)氮沉積和蛋白質(zhì)利用率呈負(fù)相關(guān)，尿素氮低說(shuō)明動(dòng)物可有效利用飼糧中氮、蛋白質(zhì)或氨基酸，而尿素氮高則表明較多蛋白質(zhì)被氧化分解，降低了利用效率。此外，飼糧中高含氮水平也會(huì)導(dǎo)致血清尿素氮的升高。由于隨著牧草的生長(zhǎng)發(fā)育以及家畜的持續(xù)采食，牧草生長(zhǎng)后期其產(chǎn)量和品質(zhì)下降，導(dǎo)致機(jī)體合成蛋白質(zhì)的效率降低，因此本試驗(yàn)中牦牛血清尿素氮呈先下降后升高的趨勢(shì)。而中藥飼喂組由于黃芪、當(dāng)歸富含粗蛋白質(zhì)，添加后提高了飼草中氮的水平，賈存輝等的研究表明飼喂高蛋白含量的棉籽殼增加了馬鹿血清尿素氮含量。此外，研究發(fā)現(xiàn)牦牛具有低氮高效利用的適應(yīng)性能力，經(jīng)歷一段對(duì)低氮營(yíng)養(yǎng)適應(yīng)的時(shí)間后，其氮利用效率得到提高，這也是試驗(yàn)后期兩組牦牛表現(xiàn)出血清尿素氮水平升高的原因。

血清GLU對(duì)機(jī)體組織器官生理功能的維持極其重要，是機(jī)體能量的主要來(lái)源，GLU含量不僅能夠反映動(dòng)物對(duì)碳水化合物的吸收能力，同時(shí)能夠反映機(jī)體所處的生理狀態(tài)，是動(dòng)物自身對(duì)GLU吸收、代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)平衡的反映。當(dāng)血液中GLU水平較高時(shí)會(huì)刺激血液INS水平升高，INS促進(jìn)GLU合成糖原。本試驗(yàn)中兩組牦牛血清GLU水平均隨飼喂時(shí)間呈現(xiàn)線性下降的趨勢(shì)，這與血清TP、ALB的變化趨勢(shì)一致，都是由于隨牧草生長(zhǎng)進(jìn)入枯黃期牦牛攝入營(yíng)養(yǎng)水平下降所導(dǎo)致的。

血清ALT和AST是評(píng)價(jià)肝臟健康狀況的重要指標(biāo)，當(dāng)動(dòng)物肝細(xì)胞受到脅迫或損傷時(shí)，細(xì)胞膜通透性增加，導(dǎo)致轉(zhuǎn)氨酶由細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外，進(jìn)入血液引起血液轉(zhuǎn)氨酶濃度升高。但轉(zhuǎn)氨酶升高也不都是由于肝臟受損引起的，一些炎癥，營(yíng)養(yǎng)變化(例如高能、高蛋白)等也會(huì)導(dǎo)致血液轉(zhuǎn)氨酶升高。本試驗(yàn)兩組牦牛血清ALT和AST水平均無(wú)差異，表明中藥添加飼喂牦牛和正常放牧相比沒(méi)有對(duì)其肝臟造成不良影響。本試驗(yàn)牦牛血清ALT和AST含量分別為34.67～44.69 U/L、54.08～79.88 U/L，與范小紅等研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)中所有牦牛血清AST含量隨飼喂時(shí)間先升高后降低，其含量升高時(shí)期是牧草生長(zhǎng)旺盛期(8月中旬到下旬)，也是牦牛的發(fā)情季節(jié)，引起AST含量升高的原因需要做進(jìn)一步研究。

3.2 飼喂黃芪當(dāng)歸對(duì)泌乳牦牛血清免疫指標(biāo)的影響

免疫球蛋白反應(yīng)機(jī)體的免疫能力。IgG在體液免疫中占據(jù)重要作用，半衰期長(zhǎng)，在血清中含量最高，對(duì)病菌、病毒具有較強(qiáng)的抵御作用，IgA具有吞噬作用，IgM是初次免疫抗體。本試驗(yàn)中藥組血清IgG、IgA、IgM含量均顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明飼喂黃芪當(dāng)歸能夠提高泌乳牦牛免疫力水平。何正義研究表明飼喂中草藥能夠提高育肥豬血清IgG、IgA、IgM的水平。中藥黃芪當(dāng)歸提高機(jī)體免疫能力的主要原因是由于富含黃芪多糖和當(dāng)歸多糖，能夠激活分泌巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞、NK細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞。飼喂68 d后兩組泌乳牦牛血清IgM含量差異顯著性消失，說(shuō)明黃芪當(dāng)歸在提高牦牛機(jī)體血清IgM含量的功效在試驗(yàn)初期效果明顯，隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，效應(yīng)減弱。NO也是一種重要的雙向免疫調(diào)節(jié)分子，在一定范圍內(nèi)NO的含量與免疫力呈正比，但當(dāng)超過(guò)適宜范圍會(huì)損傷自身組織。研究表明含多糖類中草藥能夠誘導(dǎo)上調(diào)巨噬細(xì)胞中NO合成酶mRNA的表達(dá)，增加NO的分泌，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體免疫力。本試驗(yàn)飼喂牦牛當(dāng)歸黃芪后血清NO濃度提高，說(shuō)明黃芪和當(dāng)歸多糖提高了巨噬細(xì)胞中NO相關(guān)調(diào)控基因的表達(dá)，增強(qiáng)了牦牛免疫力。本試驗(yàn)中隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，牦牛機(jī)體免疫球蛋白水平以及NO水平降低，其主要原因是受飼草產(chǎn)量、質(zhì)量的下降，以及氣溫逐漸降低的影響。

IFN-γ的生物學(xué)功能是免疫調(diào)節(jié)，誘導(dǎo)多種抗原提呈細(xì)胞表達(dá)，可活化單核、巨噬細(xì)胞并增強(qiáng)溶菌酶活性，分泌白介素、TNF-α等。IL-6可由TNF-α誘導(dǎo)分泌，TNF-α和IL-6可激活吞噬細(xì)胞進(jìn)而殺滅病原體，也是細(xì)胞級(jí)聯(lián)反應(yīng)的起始因子。IL-2主要由CD4+Th1細(xì)胞分泌，促進(jìn)IFN、TNF等細(xì)胞因子分泌，可提高機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫功能，同時(shí)參與炎癥或自身免疫反應(yīng)，IL-2水平的高低直接反應(yīng)機(jī)體的免疫功能。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼喂中藥對(duì)牦牛血清TNF-α和IL-6含量無(wú)顯著影響，INF-γ和IL-2水平在試驗(yàn)后期才表現(xiàn)出顯著增加，說(shuō)明飼喂黃芪當(dāng)歸能夠提高牦牛機(jī)體細(xì)胞和體液免疫能力，但細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的免疫增強(qiáng)效果需要飼喂一段時(shí)間后才能顯現(xiàn)。黃芪的免疫作用與其所含多糖類和皂苷類有關(guān)，黃芪多糖對(duì)機(jī)體免疫具有調(diào)節(jié)作用，能夠抑制細(xì)菌脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的豬崽腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)IL-1和TNF-α的表達(dá)。本試驗(yàn)中兩組牦牛血清IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6水平均隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，結(jié)合牦牛乳中體細(xì)胞數(shù)隨著泌乳時(shí)期的延長(zhǎng)呈增加趨勢(shì)，說(shuō)明牦牛機(jī)體處于免疫應(yīng)激狀態(tài)，可能是由于氣溫降低，加之采食攝入養(yǎng)分的下降，而牦牛犢采食量增加，導(dǎo)致乳房炎癥的發(fā)生。

3.3 黃芪當(dāng)歸對(duì)牦牛血清生長(zhǎng)激素和抗氧化指標(biāo)的影響

泌乳功能受催乳素、雌二醇和生長(zhǎng)激素(GH)等泌乳相關(guān)激素調(diào)控，GH通過(guò)促進(jìn)乳腺組織的發(fā)育促進(jìn)泌乳。本試驗(yàn)飼喂黃芪當(dāng)歸粉顯著提高了GH水平，說(shuō)明中藥中有效成分可以促進(jìn)機(jī)體合成GH，進(jìn)而刺激乳腺細(xì)胞的發(fā)育，提高泌乳量。SOD和GSH-Px是體內(nèi)重要的抗氧化酶，可以清除體內(nèi)的O-，避免生物膜脂過(guò)氧化，繼而損傷細(xì)胞及膜蛋白結(jié)構(gòu)等。SOD能將O-轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫，然后在GSH-Px的作用下生成水，MDA是自由基對(duì)不飽和脂肪酸引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化作用分解終產(chǎn)物，可反映機(jī)體過(guò)氧化程度。黃芪、當(dāng)歸中含有多糖、黃酮類、多酚類、皂苷類、揮發(fā)性酸等功能性物質(zhì)，其中黃酮類物質(zhì)可以有效捕捉和清除O-，多酚類可作為氫供體，也具有清除O-的能力。本試驗(yàn)結(jié)果顯示飼喂黃芪當(dāng)歸提升了牦牛血清SOD、GSH-Px含量，降低了MDA含量，說(shuō)明黃芪當(dāng)歸能夠提高牦牛機(jī)體抗氧化能力。

3.4 黃芪當(dāng)歸對(duì)牦牛乳成分和乳免疫指標(biāo)的影響

母乳是犢牛能量和蛋白質(zhì)的直接來(lái)源，母乳成分變化會(huì)直接影響犢牛的生長(zhǎng)發(fā)育。黃芪多糖可以通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)激素水平來(lái)影響產(chǎn)奶量，乳脂肪含量的差異是由年齡、營(yíng)養(yǎng)狀況、飼養(yǎng)管理、胎次、能量平衡及乳房健康狀況等因素造成的。本試驗(yàn)中藥組牦牛乳脂肪、乳蛋白和乳糖含量高于對(duì)照組，說(shuō)明黃芪當(dāng)歸中富含的多糖類等有效成分能夠促進(jìn)乳腺細(xì)胞合成分泌乳清蛋白，改善牦牛營(yíng)養(yǎng)狀況，提高牛乳乳脂率、乳糖和乳蛋白含量，進(jìn)而提高牦牛乳品質(zhì)。吳德峰等研究表明中草藥添加劑能夠顯著提高試驗(yàn)牛乳蛋白含量。隨著飼喂時(shí)間的推移，牦牛乳脂肪和蛋白含量呈增加趨勢(shì)，而乳糖含量下降，其主要原因是受泌乳家畜生理狀態(tài)和飼草營(yíng)養(yǎng)成分的影響。研究發(fā)現(xiàn)金川牦牛在6-9月份泌乳期內(nèi)乳脂肪含量呈上升趨勢(shì)，麥洼牦牛9月份乳脂肪顯著高于7月份，牧草有效中性洗滌纖維(NDF)能夠促進(jìn)乳脂肪的合成。牧草生長(zhǎng)后期NDF含量增加，是促進(jìn)牦牛乳脂肪含量升高的原因之一。研究發(fā)現(xiàn)乳糖含量的變化與乳蛋白和乳脂肪含量呈相反的趨勢(shì)，乳糖含量的變化主要受飼草中可溶性糖分含量變化的影響，高能飼料飼喂會(huì)升高乳糖含量。隨著飼喂時(shí)間的推移飼草逐漸停止生長(zhǎng)，可溶性糖分含量下降，導(dǎo)致牦牛乳糖含量的降低。

體細(xì)胞數(shù)是牛乳房健康水平的標(biāo)志，體細(xì)胞數(shù)與乳腺健康息息相關(guān)，體細(xì)胞數(shù)高表明乳房處于亞健康狀況，乳房炎的發(fā)病率高。本試驗(yàn)第15天中藥組牦牛乳體細(xì)胞數(shù)顯著低于對(duì)照組，其他采樣期中藥組牦牛乳體細(xì)胞數(shù)在數(shù)值上也低于對(duì)照組(差異不顯著)，中藥組每毫升牛乳中所含體細(xì)胞數(shù)為9.5×10～29.2×10個(gè)，對(duì)照組為24.8×10～34.7×10個(gè)，均在標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)。該結(jié)果說(shuō)明中藥黃芪、當(dāng)歸飼喂對(duì)牦牛乳房健康，牦牛乳品質(zhì)具有提升作用，其主要原因是中藥多糖、皂苷等活性成分提高了牦牛的免疫力，進(jìn)而減少隱性乳房炎的發(fā)生。隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，所有牦牛乳中體細(xì)胞數(shù)含量上升，主要原因是氣溫降低、牧草品質(zhì)下降導(dǎo)致牦牛免疫力下降，有可能導(dǎo)致隱性乳房炎發(fā)病率增加。

乳MUN含量直接反映血液尿素含量，可提示飼料蛋白利用水平。國(guó)內(nèi)外研究表明，影響MUN變化的因素可分為營(yíng)養(yǎng)性因素和非營(yíng)養(yǎng)性因素，其中營(yíng)養(yǎng)性因素包括能量水平、蛋白質(zhì)水平、蛋白降解率和能氮平衡等；非營(yíng)養(yǎng)性因素包括牛的品種、泌乳時(shí)間等，其中飼糧中的能量水平是導(dǎo)致MUN變化的重要因素，當(dāng)飼糧中碳水化合物的含量不足，瘤胃中的氮不能及時(shí)被瘤胃微生物利用時(shí)，氨就會(huì)進(jìn)入血液，導(dǎo)致BUN含量增加，進(jìn)而引起MUN含量增加。中藥組泌乳牦牛比對(duì)照組降低了MUN水平，表明中藥有利于瘤胃能氮平衡，提高氮的利用效率。但隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，中藥組和對(duì)照組牦牛乳MUN水平均升高，其原因主要是牧草生長(zhǎng)后期能量水平降低導(dǎo)致瘤胃中氨不能被微生物及時(shí)利用進(jìn)入血液所致。此外，Konjacic等研究表明泌乳中期MUN含量高于泌乳初期和末期。本試驗(yàn)牦牛乳采樣期為7-9月份，屬于牦牛泌乳中期。正常牛乳中MUN含量范圍為10～16 mg/dL，本試驗(yàn)中藥組牦牛乳MUN含量為12.13～15.30 mg/dL，在正常范圍之內(nèi)，而對(duì)照組牛乳MUN含量為16.05～26.85 mg/dL，比正常范圍偏高。當(dāng)牛乳中MUN含量高于19 mg/dL時(shí)，其母牛子宮環(huán)境不利用胚胎著床，降低受胎率。飼喂黃芪當(dāng)歸降低了牦牛乳MUN水平，側(cè)面反映對(duì)牦牛繁殖也具有提升改進(jìn)作用。

乳鐵蛋白在哺乳動(dòng)物中廣泛分布，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生理活性。黃芪當(dāng)歸飼喂提升了牦牛乳中乳鐵蛋白的含量，表明其對(duì)牦牛乳功能性品質(zhì)提高的重要作用，其提升機(jī)制與免疫提升具有相關(guān)性，可能是通過(guò)提高嗜中性粒細(xì)胞的活性進(jìn)而提升乳鐵蛋白的分泌量。本試驗(yàn)中牦牛乳乳鐵蛋白均隨飼喂時(shí)間呈升高趨勢(shì)，這是受不同泌乳階段的影響，研究發(fā)現(xiàn)乳鐵蛋白含量隨泌乳期的延長(zhǎng)而升高。雖然中藥飼喂并沒(méi)有顯著提高牦牛乳中sIgA含量，但隨飼喂時(shí)間中藥組和對(duì)照牦牛乳sIgA含量均呈升高趨勢(shì)。sIgA在黏膜防御中起重要作用，對(duì)維持黏膜表面菌群平衡及減少其它抗原引起的局部過(guò)敏反應(yīng)有重要意義。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼喂中藥黃芪當(dāng)歸具有調(diào)節(jié)泌乳牦牛營(yíng)養(yǎng)代謝、提高免疫能力和抗氧化性能的功效，并且能夠緩解氣溫降低、牧草營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)下降對(duì)牦牛造成的應(yīng)激。飼喂黃芪和當(dāng)歸提高了牦牛乳中脂肪、蛋白和乳糖含量，降低乳中體細(xì)胞數(shù)、提升乳鐵蛋白含量。本試驗(yàn)推薦的黃芪和當(dāng)歸飼喂比例為2.5∶1，添加量為日干物質(zhì)采食量的7%。