陶勝康，段紹恒，覃世保，谷 雨，莫華永

（廣西壯族自治區(qū)環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究院，廣西 南寧 530022）

綠化帶是城市園林綠地系統(tǒng)的重要組成部分，也是城市文明的重要標(biāo)志之一，其植株多以灌木、花卉、喬木類植物為主，這些種類植株在種植、生長過程中，為保持整齊、美觀等需要定期進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，即修剪、除雜草等[1,2]。除草劑是指可使雜草徹底地或有選擇地發(fā)生枯死的藥劑，又稱除莠劑，是用以消滅或抑制植物生長的一類物質(zhì)，利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺是最為常用的幾種除草劑[3,4]。在綠化帶噴灑除草劑時(shí)，大部分的除草劑殘留在空氣和土壤中，尤其在土壤中殘留較多[5]。因此，針對(duì)常用的幾種除草劑監(jiān)測其在綠化帶土壤中的殘留，具有重要的意義。

現(xiàn)階段，關(guān)于綠化帶土壤中多環(huán)芳烴污染和重金屬污染的研究較多，但關(guān)于土壤中常用的幾種除草劑多殘留同時(shí)測定的研究較少[6-8]。實(shí)驗(yàn)建立了液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜法檢測綠化帶土壤中微量除草劑（利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺）殘留，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，此方法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度好等特點(diǎn)，適用于綠化帶土壤中極微量除草劑殘留的檢測。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器設(shè)備

XEVO TQ-S Micro型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Waters公司）；E-916型快速溶劑萃取儀（瑞士步琦公司）；HSE-12B型固相萃取儀（天津恒奧科技有限公司）；SQP型電子天平（雙量程：十萬分之一/萬分之一，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；HGC-12A型氮吹儀（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；TGL16M型高速冷凍離心機(jī)（湖南長沙湘智儀器有限公司）；H2O-Ⅱ-1-TOC-T型超純水機(jī)（德國Sartorius公司）。

1.2 試劑及耗材

甲酸、甲醇、乙腈，均為HPLC級(jí)，美國默克試劑有限公司；乙酸銨（AR上海化學(xué)試劑廠）；實(shí)驗(yàn)用水為純化水，自制。

溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：利谷隆溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號(hào)GBW（E）082000，相對(duì)不確定度1.8%，標(biāo)準(zhǔn)值100.0μg·mL-1）、草甘膦溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號(hào)GBW（E）081571，相對(duì)不確定度2.0%，標(biāo)準(zhǔn)值100.0μg·mL-1）、百草枯溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號(hào)GBW（E）083463，相對(duì)不確定度2.0%，標(biāo)準(zhǔn)值100.0μg·mL-1）、氟樂靈溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號(hào)GBW（E）083066，相對(duì)不確定度2.0%，標(biāo)準(zhǔn)值100.0μg·mL-1）、乙草胺溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號(hào)GBW（E）080871，相對(duì)不確定度2.0%，標(biāo)準(zhǔn)值100.0μg·mL-1），中國計(jì)量科學(xué)研究院。

1.3 樣品處理

稱取10.0g上述土壤樣品，置于加速溶劑萃取池中，加硅藻土約10.0g，混合均勻，按下述條件進(jìn)行提取：甲醇∶乙腈（V∶V=1∶2）；加熱時(shí)間：8min；萃取溫度：85℃，萃取壓力：8.5kPa；提取時(shí)間：10min；循環(huán)次數(shù)：4次，沖洗體積：70%；N2吹掃：2min。

取HLB固相萃取小柱凈化（規(guī)格500mg/6mL），分別用9mL甲醇、9mL乙腈和9mL正己烷活化，活化完畢后，設(shè)定程序，取上述提取液，上固相萃取儀，以10mL·min-1的流速，過固相萃取柱，最后用12mL甲醇洗脫，收集洗脫液；洗脫液氮吹至近干（控制水浴溫度：45℃），加丙酮1mL定容，渦旋混勻，0.22μm濾膜濾過，即得。

1.4 儀器條件

1.4.1 質(zhì)譜條件 離子源：ESI+（電噴霧離子源）；噴霧電壓：4550V；離子源溫度：420℃；離子傳輸管溫度：430℃；氣簾氣壓力：23Psi；輔助氣壓力：68Psi；監(jiān)測方式：MRM（多反應(yīng)監(jiān)測模式）；碰撞氣：高純N2（純度≥99.999%）。

1.4.2 色譜條件 色譜柱：Venusil XBP C18（規(guī)格：150×2.1mm,2.5μm）；流速：0.5mL·min-1；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)相A：0.1%甲酸，流動(dòng)相B：甲醇；洗脫模式：梯度洗脫。梯度時(shí)間表見表1。

表1 梯度時(shí)間表Tab.1 Gradient schedule

2 結(jié)果與討論

2.1 固相萃取柱選擇

固相萃取法常用的萃取柱填料類型有：C18萃取柱、NH2萃取柱和HLB萃取柱等，選擇適合的萃取柱類型，對(duì)提高待測除草劑檢測準(zhǔn)確度和靈敏度有重要的作用。利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺這5種除草劑極性偏強(qiáng)，C18萃取柱因填料為十八烷基硅烷，屬非極性填料，因此，C18固相萃取柱適用性較差。實(shí)驗(yàn)取利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺加標(biāo)濃度均為0.1μg·mL-1的加標(biāo)樣，分別選擇NH2萃取柱和HLB萃取柱作為富集、凈化小柱，保持1.3.3樣品前處理?xiàng)l件不變，考察這兩種不同填料類型小柱，對(duì)檢測準(zhǔn)確性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，選擇HLB萃取柱對(duì)試驗(yàn)具有最佳的準(zhǔn)確性，兩種填粒小柱比較結(jié)果見表2。

表2 兩種填料小柱比較結(jié)果Tab.2 Comparison results of two kinds of packed columns

2.2 多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）方法的建立

多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）方法條件見表3。

表3 MRM方法條件Tab.3 MRM method conditions

取利谷隆溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，準(zhǔn)確移取1.0mL，置于100mL棕色容量瓶內(nèi)，加甲醇定容至刻度，混勻；再準(zhǔn)確移取上述溶液1.0mL，置于10mL棕色容量瓶內(nèi)，加甲醇定容至刻度，混勻，制備每1.0mL溶液中含利谷隆100ng·mL-1的測試液；同法配制草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺測試液。分別取上述測試液，通過全掃描模式（Q1 SCAN），得到上述待測除草劑對(duì)應(yīng)的母離子；再通過產(chǎn)物離子掃描（Prduct SCAN）模式，得到各母離子對(duì)應(yīng)的產(chǎn)物離子；最后選擇響應(yīng)較強(qiáng)的兩個(gè)產(chǎn)物離子，分別作為定量離子和定性離子，對(duì)選擇的離子對(duì)進(jìn)行碰撞電壓（CE）和去簇電壓（DP）的優(yōu)化，建立上述5種待測除草劑的多反應(yīng)監(jiān)測，即MRM方法。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、曲線范圍及檢測限

分別取1.3.1利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺儲(chǔ)備液，分別精密移取適量，加甲醇制備每1mL溶液含利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺分別為0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、2.5μg的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，采用1.4色譜和質(zhì)譜條件分別進(jìn)樣，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；以樣品0.005μg·mL-1計(jì)算檢測限，以接近檢測限濃度的樣品計(jì)算檢測限，結(jié)果見表4，譜圖見圖1。

表4 標(biāo)準(zhǔn)曲線、曲線范圍及檢測限Tab.4 Standard curve,curve range and detection limit

圖1 典型譜圖Fig.1 Typical spectrum

2.4 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

取空白基質(zhì)土壤樣品，按1.3.3前處理方法，在取樣后，分別加入1.3.1利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺儲(chǔ)備液適量，制備含利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺加標(biāo)終點(diǎn)濃度分別為0.005、0.05和2.5μg·mL-1的溶液，每個(gè)濃度點(diǎn)加標(biāo)溶液平行制備5份；采用1.4色譜和質(zhì)譜條件分別進(jìn)樣，計(jì)算3水平加標(biāo)回收率，見表5。

由表5可知，5種除草劑的平均加標(biāo)回收率均在87.2%~101.5%之間，方法準(zhǔn)確度滿足測試要求。

表5 加標(biāo)回收率結(jié)果（%）Tab.5 Results of spiked recovery

2.5 方法精密度試驗(yàn)

取空白基質(zhì)土壤樣品，按1.3.3前處理方法，在取樣后，分別加入1.3.1利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺儲(chǔ)備液適量，制備含利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺加標(biāo)終點(diǎn)濃度為0.05μg·mL-1的溶液，平行制備6份；采用1.4色譜和質(zhì)譜條件分別進(jìn)樣，根據(jù)檢測結(jié)果計(jì)算精密度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，即RSD。結(jié)果利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺精密度RSD分別為3.2%、2.1%、2.8%、3.0%和4.1%，表明方法精密度良好。

3 結(jié)論

本文建立了采用固相萃取法將綠化帶土壤中的利谷隆、草甘膦、百草枯、氟樂靈、乙草胺5種除草劑進(jìn)行富集、凈化和洗脫，液相色譜質(zhì)譜法進(jìn)行定量、定性檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，此方法操作簡單，具有靈敏度高、檢測準(zhǔn)確度好等特點(diǎn)，適用于綠化帶土壤中除草劑微量殘留的分析。