梁桂麗 ，李燦美 ，邢成鋒 ，董運(yùn)龍 ，王 娟 ，雷 梓 ，繆應(yīng)雷 ，蘭丹鳳

（1）昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，云南省消化系統(tǒng)疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心，云南 昆明 650032;2）大理白族自治州人民醫(yī)院腫瘤科，云南 大理 671000;3）昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;4）病理科，云南 昆明 650032）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種主要累及結(jié)腸的慢性特發(fā)性腸道炎癥性疾病，是炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD） 的主要類型，以反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉和粘液膿血便為常見的臨床癥狀，可導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥，增加腸癌風(fēng)險(xiǎn)甚至威脅生命[1]。全世界將近500 萬(wàn)人受IBD 困擾，既往IBD 在歐美國(guó)家多見，亞非國(guó)家少見，近些年來(lái)IBD 的發(fā)病率較前明顯升高，尤其在發(fā)展中國(guó)家[2]。盡管IBD 的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為它是由多種因素相互作用所致，與遺傳易感者在環(huán)境、精神因素作用和腸道菌群的參與下免疫應(yīng)答失調(diào)有關(guān)[3]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)鳥苷酸環(huán)化酶C（guanylate cyclase C，GCC）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)腸上皮屏障功能和腸道炎癥的發(fā)生。GC-C 是一種主要表達(dá)于腸上皮細(xì)胞的跨膜受體，其內(nèi)源性配體是鳥苷蛋白（guanylin，Gn）和尿鳥苷素（uroguanylin，Ugn），亦表達(dá)于胃腸道上皮細(xì)胞[4]。當(dāng)配體（Gn/Ugn）與GC-C 結(jié)合后，刺激細(xì)胞內(nèi)三磷酸鳥苷（GTP）轉(zhuǎn)換為環(huán)磷酸鳥苷（cGMP），cGMP 水平增高可促進(jìn)氯離子分泌，抑制鈉離子吸收，導(dǎo)致水和離子分泌至腸腔，參與維持細(xì)胞內(nèi)外正常的離子濃度和腸道水電解質(zhì)平衡[5]。

本課題前期研究發(fā)現(xiàn)，活化的GC-C 信號(hào)通路可保護(hù)腸上皮細(xì)胞與腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的腸黏膜免疫屏障，GC-C 配體可能成為UC 潛在的治療靶點(diǎn)[6]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸炎小鼠在注射Gn 過(guò)表達(dá)慢病毒載體后精神、進(jìn)食及活動(dòng)好轉(zhuǎn)，腸道通透性降低，稀便、粘液血便和結(jié)腸組織炎癥明顯減輕，外周血炎癥相關(guān)因子水平顯著降低[7]。然 而，GC-C 基因敲除（GC-C-/-）小鼠在DSS 誘導(dǎo)下腸道炎癥反應(yīng)的變化尚不清楚。因此，本研究運(yùn)用GC-C-/-小鼠，探索其在化學(xué)物質(zhì)作用下與野生型小鼠相比腸道炎癥損傷的差異，為尋求IBD 新的治療策略提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和主要試劑

6～8 周齡的GC-C 基因敲除（GC-C-/-）小鼠和野生型（WT）小鼠，體重18～22g，雄性，在江蘇集萃藥康生物科技有限公司完成GC-C 基因敲除小鼠的構(gòu)建和鑒定實(shí)驗(yàn)（許可證號(hào)：SCXK（蘇）2018-0008，動(dòng)物批號(hào)：GFW01202003804）。GCC-/-小鼠制作和鑒定策略見圖1。GC-C-/-小鼠構(gòu)建：根據(jù)NCBI 編號(hào)選取轉(zhuǎn)錄本201（ENSMUST000 00032338.9）進(jìn)行基因編輯。用CRISPR/Cas9 系統(tǒng)制作GC-C 基因敲除小鼠。把轉(zhuǎn)錄得到的sgRNA和cas9 混合并調(diào)整注射濃度，用顯微注射儀將其注射入Balb/c 小鼠受精卵中，將1-3 外顯子確定為切割位點(diǎn)，然后將受精卵移植到Balb/c 偽孕雌性小鼠的子宮內(nèi)，等待F0 代出生。GC-C-/-小鼠鑒定：剪取尾組織，用酚氯仿法直接提取DNA，在靶區(qū)域內(nèi)設(shè)計(jì)合成引物并鑒定，選取PCR 陽(yáng)性樣品進(jìn)行測(cè)序，引物購(gòu)買自生工生物工程（上海）股份有限公司，鑒定凝膠電泳圖如圖2。右旋糖酐硫酸酯鈉（DSS），批號(hào)：S3045，貨號(hào)：160110，由MP Biomedicals 生物醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)。GCC（#HQP008552）引物由廣州復(fù)能公司（GeneCopoeia）合成?？贵wrabbit polyclonal anti-GC-C（Abcam，貨號(hào)：ab225864），稀釋度：1∶1 000；通用二抗anti-rabbit IgG（CST，貨號(hào)：7074），稀釋度：1∶2 000。

圖1 GC-C 基因敲除小鼠制作和鑒定策略圖Fig.1 The production and identification strategy of GC-C knockout mice

圖2 GC-C 基因敲除小鼠鑒定電泳圖Fig.2 The identification electrophoretogram of GC-C knockout mice

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

將48 只小鼠隨機(jī)分組，12 只/組，共4 組。具體分組及實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程如下：（1）WT 小鼠對(duì)照組（Control）和GC-C-/-小鼠對(duì)照組（GC-C-/-）：均予以正常自由飲水、正常飼養(yǎng)；（2）WT 小鼠結(jié)腸炎組（WT+DSS）和GC-C-/-小鼠結(jié)腸炎組（GC-C-/-+DSS）：把DSS 混溶于蒸餾水并按配比調(diào)制成3%（W/V）的水溶液，小鼠每日自由飲用，共7 d，均不需另予飲水。本實(shí)驗(yàn)已通過(guò)昆明醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。

1.3 疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分

從實(shí)驗(yàn)第 1 日起，每日稱量小鼠體重，觀察大便性狀如有無(wú)稀便，有無(wú)潛血（聯(lián)苯胺法測(cè)定）及肉眼血便并進(jìn)行DAI 評(píng)分（評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1）[8]。DAI 評(píng)分=（體重評(píng)分+大便性狀評(píng)分+出血評(píng)分）/3。

表1 DAI 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 DAI scoring criteria

1.4 實(shí)驗(yàn)組織取材

實(shí)驗(yàn)第8 日，稱量小鼠體重并收集糞便樣本后，使用10%水合氯醛2 mL 腹腔內(nèi)注射進(jìn)行小鼠麻醉，在麻醉狀態(tài)下通過(guò)摘眼球法處死小鼠。收集小鼠外周血，常溫放置1 h，4 000 r/min 離心10 min 獲取血清。開腹后及時(shí)、準(zhǔn)確地分離并測(cè)量小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度并觀察其糞便外觀、腸道大體形態(tài)特征以及有無(wú)粘連、狹窄等情況。游離并仔細(xì)截取小鼠全側(cè)結(jié)腸，在冰生理鹽水中沿腸系膜緣處縱行切開腸腔，使腸粘膜得以充分暴露，輕輕刮除腸腔內(nèi)成型糞便并進(jìn)行清洗。將剪切成長(zhǎng)度1 cm 的多段結(jié)腸組織部分于4%多聚甲醛中固定，部分用于刮取以收集腸粘液，部分剝?nèi)∧c粘膜并置于-80 ℃凍存。

1.5 結(jié)腸組織GC-C 表達(dá)的檢測(cè)

采用qRT-PCR 和Western blot 方法檢測(cè)小鼠腸粘膜組織GC-C 的表達(dá)。參照RNA Simple Total RNA kit 試劑盒（天根生物公司）使用說(shuō)明書的實(shí)驗(yàn)步驟，提取組織總RNA。使用Fermentas 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成第一鏈cDNA 并依照Fermentas SYBR Green 熒光定量檢測(cè)法試劑盒說(shuō)明書上的步驟與要求進(jìn)行熒光相對(duì)定量指標(biāo)的檢測(cè)，采用2-ΔΔCt方法分析樣品GC-C mRNA 的相對(duì)表達(dá)量。此外，按照試劑盒產(chǎn)品使用技術(shù)指導(dǎo)與說(shuō)明書的要求和方法步驟，快速進(jìn)行組織總蛋白的提取與純化并準(zhǔn)確的測(cè)定蛋白濃度。每孔加入等量蛋白進(jìn)行電泳分離后均勻轉(zhuǎn)至硝基纖維素膜上，用牛血清白蛋白封閉，與稀釋的一抗孵育過(guò)夜，次日清晨再與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育。最后再以β-actin 為內(nèi)參計(jì)算目的條帶與β-actin 灰度比值。

1.6 結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分

制備石蠟切片，將石蠟切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟、水化后，蒸餾水反復(fù)洗滌約5 min。經(jīng)蘇木熒光素染色法染色16 min，自來(lái)水中反復(fù)洗沖以去蠟表面浮色。用1%濃度的稀鹽酸酒精水溶液（濃鹽酸1 mL 加入99 mL 的75%無(wú)水乙醇中配制）反復(fù)分化約2 s 后立即以自來(lái)水重復(fù)洗滌返藍(lán)。室溫下伊紅染色后沉淀15 s，自來(lái)水終止顯色并進(jìn)行梯度酒精脫水各10 min。經(jīng)對(duì)硝基二甲苯乙醇透明溶液沉淀30 min 干燥處理后再用中性樹膠封片，在普通的光學(xué)顯微鏡條件下進(jìn)行觀察并記錄拍照。請(qǐng)病理科醫(yī)師使用普通光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)腸組織的炎癥損傷情況，并進(jìn)行組織學(xué)炎癥評(píng)分[8]，見表2。

表2 組織病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Tab.2 Histopathological scoring criteria

1.7 外周血清和腸黏液中炎癥相關(guān)因子的檢測(cè)

運(yùn)用ELISA 方法檢測(cè)外周血清和腸黏液中IL-8 和TNF-a 的水平。根據(jù)試劑使用和操作指導(dǎo)說(shuō)明書上提供的實(shí)驗(yàn)操作方法和步驟配制標(biāo)準(zhǔn)液并在標(biāo)準(zhǔn)品孔各加入不同濃度的50 μL 標(biāo)準(zhǔn)液，而各待測(cè)樣品孔則分別先后添加40 μL 標(biāo)準(zhǔn)樣本液和10 μL 的待測(cè)樣本液。除空白孔外，每孔加100 μL 酶標(biāo)液后覆板貼置于37 ℃孵育1 h，隨即棄去余液并迅速甩干。每孔按照先后順序依次緩慢均勻滴加顯色劑A、B 各50 μL，輕輕震蕩混勻后置于37 ℃避光處顯色15 min，后每孔再加終止液50 μL 以保證完全終止顯色反應(yīng)。以空白孔調(diào)零，在反應(yīng)過(guò)程完全終止后15 min 內(nèi)用酶標(biāo)儀在450 nm 波長(zhǎng)段依次測(cè)量出每個(gè)樣品的光密度（OD 值）。使用ELISAca1c 軟件進(jìn)行計(jì)算和分析即可得到標(biāo)準(zhǔn)品濃度和OD 值之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程，根據(jù)所求得的回歸方程即可算出待測(cè)樣本中IL-8 和TNF-α 的含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析。所有實(shí)驗(yàn)均平行測(cè)定3 份，并至少重復(fù)3 次。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。2 組間均數(shù)比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較用單因素方差分析ANOVA 檢驗(yàn)，兩兩比較用q檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取值0.05（α=0.05），P＜ 0.05 提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠DAI 評(píng)分的比較

實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠活動(dòng)、反應(yīng)、覓食及排便正常，體重增加，所有小鼠均存活。結(jié)腸炎組的部分小鼠從實(shí)驗(yàn)第2 天開始出現(xiàn)腹瀉，始見少量黃色稀便，后逐漸加重，甚至可見黏液血便，期間小鼠有四肢懶動(dòng)，喜扎堆，進(jìn)食速度減慢、量少，體重下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)WT 小鼠結(jié)腸炎組死亡1 只，GC-C-/-小鼠結(jié)腸炎組死亡2 只。與對(duì)照組相比，結(jié)腸炎組DAI 評(píng)分均明顯升高（P＜ 0.05）。其中，GC-C-/-小鼠結(jié)腸炎組DAI 評(píng)分較WT 小鼠結(jié)腸炎組明顯升高（P＜ 0.05，圖3A）。通過(guò)小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度測(cè)量結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，結(jié)腸炎組小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度明顯下降（P＜ 0.05）。GC-C-/-小鼠結(jié)腸炎組較WT 小鼠結(jié)腸炎組結(jié)腸長(zhǎng)度亦明顯下降（P＜ 0.05，圖3B）。

2.2 結(jié)腸組織GC-C 的表達(dá)

運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，WT 小鼠結(jié)腸炎組腸粘膜組織GC-C mRNA 相對(duì)表達(dá)量WT 小鼠對(duì)照組顯著降低（P＜ 0.05），而GC-C-/-小鼠對(duì)照組和GC-C-/-小鼠結(jié)腸炎組腸粘膜組織均無(wú)GC-C 表達(dá)（圖3C）。Western blot 檢測(cè)結(jié)果與qRT-PCR 檢測(cè)結(jié)果一致（圖3D）。

圖3 各組小鼠DAI 評(píng)分、結(jié)腸長(zhǎng)度和GC-C 表達(dá)的比較Fig.3 The comparison of DAI scores，colon length and GC-C expression of mice in each group

2.3 各組小鼠結(jié)腸大體形態(tài)和長(zhǎng)度的比較

肉眼直接觀察上述對(duì)照組實(shí)驗(yàn)小鼠的結(jié)腸外觀及腸粘膜組織大體結(jié)構(gòu)形態(tài)，可見腹腔內(nèi)組織器官結(jié)構(gòu)的生理解剖位置及形態(tài)正常，腸與周圍組織臟器之間無(wú)黏連，腸粘膜光滑呈淡粉色，無(wú)增厚、糜爛、潰瘍等。WT 小鼠結(jié)腸炎組腹腔內(nèi)腸與周圍組織臟器間輕度黏連，腸壁增厚，腸粘膜表面充血水腫，部分組織表面有淺表性糜爛，未見潰瘍。GC-C-/-小鼠結(jié)腸炎組較嚴(yán)重，腹腔內(nèi)腸與周圍組織臟器間黏連明顯，病變腸段充血增厚，管腔狹小，漿膜面彌漫性充血水腫，腸粘膜表面見大量糜爛，部分腸粘膜可見明顯潰瘍，見圖4。

圖4 各組小鼠結(jié)腸大體形態(tài)的改變Fig.4 The changes of colonic general morphology in each group

2.4 結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分

通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察可見，對(duì)照組實(shí)驗(yàn)小鼠結(jié)腸組織中各層結(jié)構(gòu)清晰，上皮細(xì)胞層的排列規(guī)則且整齊，杯狀細(xì)胞數(shù)量豐富且排列規(guī)整，腸腺規(guī)則，腺體結(jié)構(gòu)未見異常，固有層可見毛細(xì)血管網(wǎng)和少量的散布在周圍的淋巴細(xì)胞。WT 小鼠結(jié)腸炎組腸粘膜層的部分組織結(jié)構(gòu)缺失，杯狀細(xì)胞數(shù)量減少，僅存部分腺體結(jié)構(gòu)，粘膜固有層可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。GC-C-/-小鼠結(jié)腸炎組腸粘膜層出現(xiàn)大量組織缺失，杯狀細(xì)胞明顯減少，固有層內(nèi)見大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，見圖5。通過(guò)對(duì)各組小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分比較發(fā)現(xiàn)，GC-C-/-小鼠結(jié)腸炎組的組織病理學(xué)評(píng)分較WT 小鼠結(jié)腸炎組顯著升高（P＜ 0.05），見圖5E。

圖5 各組小鼠結(jié)腸組織HE 染色圖片（X10）和病理學(xué)評(píng)分的比較Fig.5 The comparison of HE staining picture（X10） and pathological score of colonic tissue in each group

2.5 各組小鼠外周血清和腸黏液中炎癥因子水平的比較

運(yùn)用ELISA 方法檢測(cè)各組小鼠外周血清和腸黏液中IL-8 和TNF-α 的水平。研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，結(jié)腸炎組小鼠外周血清IL-8 和血TNF-α 水平均明顯增高（P＜ 0.05）。其中，GCC-/-小鼠結(jié)腸炎組較WT 小鼠結(jié)腸炎組血清IL-8（圖6A）和TNF-α（圖6B）的表達(dá)水平亦明顯增高（P＜ 0.05）。各組小鼠腸黏液中IL-8（圖6C）和TNF-α（圖6D）水平的變化與外周血清一致。

圖6 各組小鼠外周血和腸黏液IL-8、TNF-α 水平的比較Fig.6 The comparison of IL-8 and TNF-ɑ in the peripheral blood and intestinal mucus of mice in each group

3 討論

IBD 由于病程長(zhǎng)、復(fù)發(fā)率高，可引起多種臨床表現(xiàn)和并發(fā)癥，其治療仍面臨著巨大的挑戰(zhàn)。常見的IBD 治療藥物包括5-氨基水楊酸、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、抗TNF-α 和抗整合素等生物制劑、抗生素等[9]。但這些藥物對(duì)部分患者療效仍欠佳，可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)嚴(yán)重的副作用，甚至需要行結(jié)腸切除手術(shù)，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。隨著一系列基礎(chǔ)研究的開展，出現(xiàn)了許多新的IBD 治療方法，包括干細(xì)胞移植、糞菌移植和某些特殊的飲食治療等[10-11]。然而，糞菌移植在成人IBD 患者中療效有限，接受度差，干細(xì)胞移植目前也面臨很多技術(shù)和倫理問(wèn)題。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，GC-C 信號(hào)通路參與保護(hù)腸粘膜屏障，具有抗炎、促分化、抑制腸上皮細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生、減輕內(nèi)臟痛覺(jué)、維持腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)等作用[12]。內(nèi)源性肽Gn/Ugn 通過(guò)激活腸上皮細(xì)胞頂端表達(dá)的GC-C 而發(fā)揮作用，Gn/Ugn 與GC-C 結(jié)合后可提高細(xì)胞內(nèi)cGMP 水平，然后通過(guò)一系列下游的的信號(hào)反應(yīng)使液體分泌至腸腔，GC-C 的內(nèi)源性配體發(fā)揮“流動(dòng)性感受器”的作用，維持腸道內(nèi)水電解質(zhì)平衡及腸黏膜最佳的水合作用[4]。

本研究發(fā)現(xiàn)，與野生型（WT）小鼠相比，GCC-/-小鼠在DSS 作用下DAI 評(píng)分、結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分、外周血和腸粘液中炎癥因子IL-8 和TNFα 水平均明顯升高，表明GC-C-/-小鼠在化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)下腸道炎癥性損傷更嚴(yán)重。結(jié)合本課題前期的研究發(fā)現(xiàn)，UC 患者腸黏膜組織中GC-C、Gn、Ugn 的表達(dá)下調(diào)，并與患者的疾病活動(dòng)度呈負(fù)相關(guān)[13]。經(jīng)轉(zhuǎn)染GC-C shRNA 干擾載體的Caco-2細(xì)胞在IL-1β 的刺激下，單層細(xì)胞的通透性、炎癥因子IL-8 和TNF-α 的水平升高，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白claudin-1 和ZO-1 的水平下降更為明顯[14]。經(jīng)注射Gn 過(guò)表達(dá)慢病毒載體的結(jié)腸炎小鼠腸道通透性降低，結(jié)腸組織炎癥損傷亦明顯減輕[7]。以上均提示GC-C 信號(hào)通路可能在腸道炎癥的發(fā)生發(fā)展中起保護(hù)性作用。與本研究結(jié)果一致，Harml-Laws E 等[15]研究發(fā)現(xiàn)，與GCC+/+小鼠相比，經(jīng)腹腔內(nèi)注射LPS（Lipopolysaccharide，脂多糖）后GC-C-/-小鼠結(jié)腸組織的促炎基因表達(dá)增加，自發(fā)性結(jié)腸炎病情加重，提示GC-C 缺乏可能導(dǎo)致嚴(yán)重的腸道炎癥反應(yīng)。然而，關(guān)于GC-C 在腸道炎癥免疫失調(diào)中的作用及機(jī)制研究尚存在一定的爭(zhēng)議。Fiskerstrand T 等[16]研究報(bào)道GC-C 信號(hào)的增加可能擾亂了正常的腸粘膜功能，進(jìn)一步促進(jìn)腸道炎癥的發(fā)生。因此，GCC 信號(hào)通路可能在腸道炎癥的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮不同的作用，只有在生理水平上的配體激活GC-C才能發(fā)揮腸粘膜保護(hù)作用，GC-C 信號(hào)通路的失活和過(guò)度激活都會(huì)破壞腸粘膜的內(nèi)穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致一系列腸道疾病如IBD 的易感性[17]。

IBD 的發(fā)病與腸粘膜屏障功能受到破壞密切相關(guān)，GC-C 信號(hào)通路可通過(guò)保護(hù)腸黏膜屏障而維持腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)[4]。既往的研究報(bào)道，IBD 炎癥早期GC-C 信號(hào)通路失調(diào)可導(dǎo)致腸粘膜屏障功能受損，可能會(huì)加速疾病的進(jìn)展[18]。腸粘膜屏障由腸上皮細(xì)胞間的緊密連接蛋白作用于腸上皮形成，調(diào)節(jié)腸粘膜的通透性并調(diào)控粘膜下層及以下的通路。既往研究發(fā)現(xiàn)GC-C 可通過(guò)調(diào)節(jié)AKT 依賴的腸上皮屏障完整性而保護(hù)腸粘膜，對(duì)抗結(jié)腸炎和結(jié)腸腫瘤的發(fā)生[19]。Han X 等[20]研究發(fā)現(xiàn)GC-C-/-小鼠和Ugn-/-小鼠的腸道通透性較野生型小鼠高，GC-C-/-小鼠腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白的表達(dá)降低，易發(fā)生LPS 誘導(dǎo)的腸道炎癥損傷，而激活GC-C 后腸上皮通透性降低，緊密連接蛋白的表達(dá)上調(diào)。此外，Li P 等[21]研究發(fā)現(xiàn)GC-C 信號(hào)通路失活可引起腸杯狀細(xì)胞數(shù)量減少，導(dǎo)致腸道表面的黏液蛋白和三葉因子分泌減少，而黏液蛋白和三葉因子是腸上皮屏障的重要成分。

綜上所述，本研究表明GC-C 基因敲除小鼠在化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)下腸道炎癥性損傷加重，進(jìn)一步支持GC-C 信號(hào)通路在腸道炎癥損傷和腸上皮屏障功能中可能發(fā)揮保護(hù)性作用，GC-C 信號(hào)通路可能參與了UC 的發(fā)生與發(fā)展。然而，GC-C 信號(hào)通路的過(guò)度激活可導(dǎo)致過(guò)多的水分進(jìn)入腸腔而發(fā)生腹瀉，未來(lái)仍需進(jìn)一步研究探索GC-C 在IBD等腸道疾病中的作用及機(jī)制。